in vitro maturation and in vitro fertilization of sheep oocytes

7
Review In vitro maturation and in vitro fertilization of sheep oocytes N.A. Wani * Faculty of Veterinary Sciences and Animal Husbandry, S.K. University of Agricultural Sciences and Technology, P.O. Box 953, G.P.O. Srinagar 190001, India Accepted 13 September 2001 Abstract The paper reviews procedures for in vitro maturation IVM) and in vitro fertilization IVF) of oocytes in sheep. Different methods for the collection of oocytes from live or dead donors have been reviewed. The role of gonadotrophic hormones, serum, follicular cells, follicular ¯uid and culture media in the IVM of oocytes are also discussed. In vitro capacitation of the spermatozoa collected from rams or epididymus of slaughtered/dead males and the fertilization of oocytes in vitro and the culture of the embryos produced is also reviewed and discussed. # 2002 Elsevier Science B.V. All rights reserved. Keywords: In vitro maturation; In vitro fertilization; Sheep; Oocyte 1. Introduction In the initial efforts on sheep in vitro fertilization IVF), oocytes used were collected from the ewes after ovulation Thiabault and Dauzier, 1961). It was fol- lowed by the maturation of follicular oocytes in vitro and their transfer to already inseminated ewes Crosby et al., 1971). Moor and Trounson 1977) attempted to increase the number of activated follicular oocytes through follicular tissue culture. In their study, one-third of the oocytes cleaved. The oocytes were then matured in vitro and fertilized in vitro using in vitro capaci- tated spermatozoa Dahlhausen et al., 1980). Thus the mature oocytes for IVF are collected from preovulated follicles/ovulated oocytes, in which case oocyte matura- tion has already occurred in vivo. Alternatively, imma- ture oocytes are collected from immature follicles, in which case oocytes are matured in vitro Wani et al., 2000). A considerable work has been carried on IVF of ovine oocytes matured either in vivo Bondioli and Wright, 1980; Cognie et al., 1991) or in vitro Staig- miller and Moor, 1984; Wani, 1996; Wani et al., 2000). The present review is written with the aim to discuss different methods for the collection of oocytes from live or slaughtered donors, the role of gonadotrophic hor- mones, serum, follicular cells, follicular ¯uid and cul- ture media in the in vitro maturation IVM) of oocytes, in vitro capacitation of the spermatozoa, IVF of oocytes and the culture of the embryos produced. 2. Collection of oocytes The number of high quality oocytes harvested from the ovary is an important consideration in the in vitro Small Ruminant Research 44 2002) 89±95 * Present address: Embryo Biotechnology Laboratory, Depart- ment of Animal Reproduction, Gynaecology and Obstetrics, College of Veterinary Science, G.B. Pant University of Agriculture and Technology, Pantnagar 263145, India. Tel.: 91-5944-33067; fax: 91-5944-33473. E-mail address: [email protected] N.A. Wani). 0921-4488/02/$ ± see front matter # 2002 Elsevier Science B.V. All rights reserved. PII:S0921-448802)00020-2

Upload: na-wani

Post on 18-Sep-2016

224 views

Category:

Documents


4 download

TRANSCRIPT

Page 1: In vitro maturation and in vitro fertilization of sheep oocytes

������

�� ��� ��� ���� ��� �� ��� ������������ ����� �����

���� �����

������� � ���� ���� �� ����� ��� �� ��� ���������� ���� �� ���� �� � ��� �������� �� ����� ��� �����������

���� �! "#$� %����� �� ����� &"'''&� (�� �

�������� �� �������� !!�

��������

"�� ���� ������ ���� �� � �� ��� ��� ���� #�$%& ��� �� ��� ����������� #�$'& � ����� �� ������ (�������

������ � ��� �������� � ����� �� ���� ���� ��� ���� ���� �������� "�� �� � )�������� �����* �� �*

����� �� �����* ����� �� + �� ��� � �� � ����� �� ��� �$% � ����� �� ��� ���� ����� �� ��� ����������� � ���

�������� �������� �� ��� �������� � � ��� )�����,���� ����� ��� ��� ����������� � ����� �� ��� ��� ���

� �� � � ��� ����� �� ��� �� ��� ������� ��� ���� ����� � !! -������ ������� .�$� ��� �)��� �������

���)����* �� ��� ��� ����/ �� ��� �����������/ �����/ 0����

� ���� ������

�� ��� ������� ����� � ����� �� ��� �����������

#�$'&* ����� ��� ��� �������� �� ��� ���� ����

� ����� #"����� �� ��� (� ���* �12�&� �� ��� ��3

���� �� ��� ��� ���� � ����� �� ����� �� ���

��� ���� ������ � ������ ����������� ���� #4���

�� ���* �15�&� % ��� " ��� #�155& ��������� �

������� ��� � ��� � ��������� ����� �� �����

�� )� ����� �� ���� � � �� �� �� ���� �� ��* ��3����

� ��� ����� �������� "�� ����� ��� ���� ��� ��

�� ��� ��� ��������� �� ��� ���) �� ��� ������3

����� �������� #(����� ��� �� ���* �16!&� "� � ���

��� � ����� � �$' �� �������� �� ��� �����

��������,� ����� �����* �� ����� ���� ���� ��� �3

��� ��� ������ �� �� �� ���� ������������* ����3

� � ����� �� �������� �� ����� � ��������* ��

����� ���� ����� �� ��� �� �� ��� #���� �� ���*

!!!&� � ���������� �7 ��� ���� ����� � �$' �

���� ����� ��� �� ����� �� ��� #.����� ���

��)��* �16!/ 4)��� �� ���* �11�& �� ��� #����)3

����� ��� %* �168/ ����* �112/ ���� �� ���* !!!&�

"�� ������ ����� �� ������ ���� ��� ��� � ���� ��

�������� ������ � ��� �������� � ����� �� ����

��� )����� ���* ��� �� � )�������� �3

����* �� �* ����� �� �����* ����� �� + �� ��� � �3

� � ����� �� ��� �� ��� ��� ���� #�$%& � �����*

�� ��� ����������� � ��� ��������* �$' � �����

��� ��� � �� � � ��� ����� �� ����

� ���������� �� �������

"�� � ��� � ��)� 9 ����� ����� �������� ��

��� ��� �� �� ������� ���������� �� ��� �� ���

����� � ������ ������� 88 # !! & 61:1;

� <����� ������= -��� .�������)� >�����* (����3

���� � ������ ���� ����* ?������)� ��� 0��������*

4���)� � $������� �������* ?�.� <��� @�������� � �)�� �� �

��� "�����)�* <�����)� 2��8;* ������ "���= �1�3;1883��!25/

��A= �1�3;1883��85��

+,�� � �������* ��������B������������ #���� ����&�

!1 �38866,! ,C : ��� ��� ����� � !! -������ ������� .�$� ��� �)��� �������

<��= � ! 1 � 3 8 8 6 6 # ! & ! ! ! ! 3

Page 2: In vitro maturation and in vitro fertilization of sheep oocytes

�� ���� � ������ 0����� � �$' �� ��������

�� �� � ��� ������) � ���= ��� ��� ��� ��

���� � �����* ��� � �������� ����� ���� � ��3

��� ����� � ��� ������ �������� � ���� ��

������ ��������

"�� �� ������� )������� ��� � ��� �� ����

� ������� ������ ����� ��� ���� � ����� �

������ �)��� 0����� � ��� )����� ������� �� ���

�������� ��� ��� �� ����� � �� � ����� �����

� ��)� ����� �� ���� � ����� �� )� �$%:

�$' #�)���� �� ���* �11;&� "�� ����� ������� ��

��� )��� � �� �� � )�� � ��� ������ �� �

������ �� ��� ( ������ �������� � ��� �� ���

�� �!:�; �4 #< )� �� ���* �11�&* ! �4 #�����7 �� ���*

�11 &* �� �" #����� �� ���* �118/ ���� �� ���* !!!&

���� � ��� ���������� ������ � ���� ��� �����

"�� ���� ������� ������� �������� � ����� ���

��������) � ����� ��� ����� �� �: #< )� �� ���*

�11�& � �:8 � #���� �� ���* �111& ���� � ��� ����3

������ ������ � ���� ��� ����� .���� ����� ��

������� ���� � �� � �� 8: ; �4 #D��) �� ���*

�11!& ��� � 6 � �� ! �4 #?�� ��� > * �11!&*

���� � ��� ��)��E���� ������ � ��� ��� ���� ���

����������� � ������ ������ "�� �)� � ������

��� �� ���� ��� ������ � ��� � ��� ��� 9 ����� �

����� �������� #���� �� ���* �111&* ��� ��� �

��� ���� ��� ����������� ������)� #03.���

�� ���* �115&� F����* � )���� � ��� � �$%

����� ������ � ���������� �� �� �� ����� ��3

���* ������ � ���� �� ������ "��� ��* �����*

� ��������� �� ��)����� ���� ������� #03.���

�� ���* �115&� "�� �� � � �)� ���� ��� ��

���� ������ �)��� ���� ���������� ����3

���� � ���������� )������ )��� �� ��� ������� ����3

���7 ��� ��� �� �� ���) ��� )������� �������

#�����) �� ���* �115&� ����� �������) ��� �����

�� ��� � �� ��������� � � �������� ��� �����) ���

� �� � ����� ���� �:;G �� � � ������ ��� H��

<��� ���� �������) #(��� �� ���* �162&�

�� ��� ��� �� ����� �� ������� ����� ��

� )���� ��������� ������9 �� #.��������

�� ���* �112&� "���� ������ �� �A������� ��� ���

� ��� � ����� ������ �� ��� �� �����

#<����� �� ���* �118&� �� ��� ����* ����� �� ���������

��� ������� � ��� ����� � ���� ����� ��

����� ��� � ����� ������) #����� �� ���* �11 &

��� �������� #����� �� ���* �118/ ���� �� ���*

!!!& �� ������� ������ � ���� �����

�� ������ F����* �� ��� ���� ���� ���� ��� � ��� �

� ���� ����� � ���� �� �� �6 )� )� ��������

������ �� �� ��E����� ���� ��� ������) �����* �� ���

����� ����� �� ��� �� �����I�� �* �������)

�� ��� ������E����� � ����� #���� �� ���* �111&�

������ ���� � ����� ������� �� ��� ��

�������� ������9 �� ���� ���� ������ �� )���

#%)�� �� ���* �11 / <����� �� ���* �118& ��� �����

#����� �� ���* �11 / ���� �� ���* �111&� < ��� � � ���

����� � ���� �� � �������� ������* �� ���� ���

��������* �� �� ��E����� � ��� ����� �

����� �� ��� ������ ����� � ��� ����� �����*

����� �� �������� ��� �� ����� ������� � ��� ��))�

������ �������� ������ �!G �� )� 9 �����

�����* ������ � ��� � ��� ��) ������) �

��� ��� #����* �112&�

"�� ������� � �������� ����� �� � �����������

���� ���� �� �� � ��)� � ��� � ��������� �))� ��

������� � �$% ��� �$'� "�� ����� ���� � ��)�

������� �� �� � �� ��� ���������� �� ��)�� ����

#���� �� ���* �11 &� ��� �� ����� �� ��)�

�������� #J; ��& ��� � �� ��� ���� ����� ��

������ # :; ��& �������� #4��� �� ���* �11;&� %��

�������� �7��) ���� ����� ������ ��� ����� �

��� ���� �� � ������ ������ � ���� � ������� ��

>������� ��� '��� #�151&� "�� ����� �� ������E�� ��

)�* ��� ��� � � ��� ����� � ��� � � � � ����

����� ��� ���������� ������������� �� ��� ������

�� � ��� ���� #���� �� ���* �111* !!!&� "��

� ���� � 9 ����� ���� )���� �� ����� ���� �����

�� � � ; � �� ��)� �� 1 #F��7 ��� ����* �118&�

� � ����� ����������

$�&� -��� � ���������.� � ��������

"�� ���� � ���� ��� ���� �� ��� ���� ���

���* �� ������� ������� �������) ��� ������3

����3����� �A��* ��� ���� � ����� �������

�) ����* ����� ����� �� ����� �� ������ .� ���3

� ���) )��������� ��� ������ � ��� � �� �

���� � ��� �� � �� ��) �������� �� ������ ���� ��

����* �������� ���� ���� ���� �� ��� ������� �$%

������� � ����� ��� ��� ������� ��� ���� ���� ��

�) ���� ���������� #% ��� " ���* �155&�

"�� ������� � �A)�� � )�������� �3

���� � ��� � �� � ���� � �� ����� � �������

1! /��� 0�� 1 ����� -�� ���� -������� 22 34''45 6"7"#

Page 3: In vitro maturation and in vitro fertilization of sheep oocytes

���* ��� � ��� � ����� ������) ���������3��*

��� ��� ����� ���� ����� � ������ ����� #?����

��� %* �11�&� % ��� " ��� #�155& ����3

������ ���)�� ���� '�F # �),��& ��� >F #� �),��&

������������ � �� ����� � �� ��������) ���� ����

��� ���� �� ���� F����* � ������ ��� �����

�� ��� � ��� � ����� ��������) � �����������

>��� ��)�� ����������� � >F #�! �),��& ���

��� ��� �� ������� � 8:�!G �� ��������� �����3

����� ��� ������� #4��� �� ���* �16�&� 0�����

���� ���� ��� ���������3�� ���)� �� ��� ������� �

)�������� � ������������ �� ����� � ��

�� ������ ���� ���� � ���������� ���� )���3

������ �� ��� ����� #?���� ��� %* �11�&� "��

������� � )��������� ��� � �� � �� ���������

� ��� �$% � ����� �������� �� ����� #>����

�� ���* �115&�

(������� � ��� � �A)�� � )�������� �3

����* ��7� '�F* >F* � ��� ����� ��� )����3

���� #�%?&* ��)���� ��� �� � )��������

#<%�?& F4? ��� ������� ���� ���� ��� ��

����� � ���� ���� ��� ���� #"���� �&� F�3

���* ��� ������� � ����� �� ����� ���������* ��

��� �7�� � �� � ��)��E���� ��������� �� ���

� ��� � ����� ������) ���������3��* �����

����) ���������� �� ������� ������� � �A3

)�� � )�������� ����� #����� �� ���* �11 /

03.��� �� ���* �118&�

$�4� -��� � ��� ����� �����

"�� ��� ���� � ��������� ����� �� ��+ �����

�� ��� � �����* ���� � ����� �� ������ �� ���

�������� "�� ������� ����� �� �� ��� ���� ������

��)���� ��� � ������ ��� ���* ����� ���� ���

���� ��� ���� �������� ������� ������ ���

�� ���������� "�� ���������� ������� ��� ����

��� ������� �� ������ �� � � � � ���� �������*

����� �������� ��� H�� <��� ���� ��� ����� �

�� � ����� �������� �� ��� ������� �������

��� ������ ����� ��� ��� ����� '���� �� ����� ��

����� � ����� � ������ � ��� ���� ��� ���)�

�� ��� )�� ��� ������ �� �� �� 7��� ���� ���

������ ��������� �� ��� �9 ��� � ��� ����3

������ � ������ ���� �����* � �������� ��� ������

���������� ��� �� � ��� ����� ���� ��

���� � ������ ��* ��� ����� �� ����� ��� �� ��

���� ������ ��)���� � ��� ��������� � ������ �� �3

� �� ������ #0��� ��� %* �16 & ��� ��� �3

��� �����E� ������ #4��� �� ���* �16�&� "��

���� ����� ��)���� �9 ��� � ��� ���� ��� ����

����� � ��) ��� E�� 2:6 � ���� ��� ��������� �

��� ������ ����� ��� �� ������ ���7�� �� ��

�� )�� ������������ ����������� �� ��� ����

�����

"�� ������� � � � � � ����� ��� ���� ����3

������ � �� ������� � ��� ���������� ���

��� ���� � ���� ������ ?�� ��� ����� ����

� ���� � �) ���� �� � ��) ��� ��� ���� � ��

����* ����� ��������� ������ � ��) ��� � ���9 ���

������)� #< )� �� ���* �11�&� "�� 9 ����� � ���� ��

����������� � ����) ��� ���� �� ��� ���� ������3

��� � ��� ������� � ������� ��� ������3� ���)� ��

���� ?�� ����� ��������� � ���� �� � � 3

� � ����� )��� )� �� ��� �� � �� � #<����� �� ���*

�118&� ��� �7�� ���� ������� ���� ����� �����

��� �� ��� �� �� ��� �� ��� ������� � ����� ��

����� #����� �� ���* �11 &� ( ��) ��� ��� ���� �

�����* ��� ��)���� �� ����� ����� ��� �� ������

��������� � ��� )�� ��� ����� ��� '�F � )�����

���� �������� #K�� L� �� ���* �11 &�

$�$� -��� � � ����� ��.�� � �����

$�� � ��� �� ��� �� ����� � ����������

-������ �� � �� � ���� ������ �� ;2 �4 �

�! ���* ��� ����� � ���������� �������� �����*

� �� �� ���������� .������ ����) � � ������ ��� �*

�� � � � �� ��� ����� � ����) ��� ���� ����

���� ��� ���� ������ ��� ������� ��� ���� � ���

H�� �������) ���� ��� ���� �� �������� �� ���

����� �� ����������

@� ���� ����� �� �* ����� ���� �� �* � ���

�� � �� ��� � � �������� � �� � ����� � �� ���

�� ���� #"���� &� 4�����)� ���� ��� ����� � ��

��)�� �� ���� ���� �� � � ���������� ���� �

"���� �

F���� ��� � �$% � ����� �����

� �� � �A)�� � ���� ��������

'�F ��� >F ����)����� ��� % #�168&/

4)��� �� ��� #�11�&

�%? ?���� ��� % #�11�&/

���� �� ��� # !!!&

<%�? % �������� �� ��� #�16�&

F4? ��� ������� ��)�� �� ��� #�11!&

/��� 0�� 1 ����� -�� ���� -������� 22 34''45 6"7"# 1�

Page 4: In vitro maturation and in vitro fertilization of sheep oocytes

������ � ���� � ������� ���� ����� ���� �� �

#��)�� �� ���* �11!&� �� ��� ��� ������ ���� ���

)������ � ��� � ����� ������ ���������3��

���)� �� � ���� � � ���������� ���� �� � ��7��

� ��� �2 � ��� � �����* ������ � �� � ��7��

� ��� ���� � ��� ��� � ����� ��� ��)�����

#% �������� �� ���* �16�&� "����� �� ��� #�11 &*

�����* � �� � ��� �� � � �� �� ��������� ��

� � �������� � �� ���� ����� ���� � �� �* ����

����� �� � �������

$�2� -��� � ��� ����� 8� �

'���� �� + �� ������� � �������� �������� � ���

�$% � ������ <���� ����� �� + �� �������� ���

��� ���� � �����* �� #"������ �� ���* �152& ���

� �� ����� #(��� ��� -���)* �168&� .����

����� �� + �� �������� ��� ��� ���� � ������

����� ��� � ��� ����� �� + �� �������� ������

�� �� ����� #4��� �� ���* �16�&* �����) ��� )�����

�������� ������ � ����� �� + ��� "��� ��������

��� �����* �� � ����� �� >������� ��� '���

#�16!&�

��� �7�� ���� ����� � ����E���� ������ �

���) � ����� �� + �� �� ��� � �� � ����� ��

� ���� #4�� �� ���* �11�&� �� ����� �� ��� ���� ����

���� ��� ���) � �� ���� �� �����) � ����3

� �� + �� �A�� � ���� ���� ������ � ��� �$% �

����� #� � �� ���* �118&�

� ����� ������������

%�������� �������� ���) � ����� � ��3

�������� ��� ���������� ����)�� �� � ��������3

���* ������ ������������ �������� ���� � �����

�� ��� ������ ��� ����� ���� � ��� ���� ����

����) ���� � �������� ��� H�� <��� ����� 4�������3

��� ������� ��� ����� � ���� �����) �������

��9 ��� � ��) ���������� ������ � ��) �A�� �

� ������� ������ ��� �������� �������� �� ����)

�� �������� ������� ����������� � ����� �� ��

��� ������) � ��� �������� ���� ��� �����

�� ����� � ��������� ������������ ������) ���3

����� �� � ��)� ���� ���� � �� ��� � ��)��E����

������� �� ����� ������ �� ��� ��������� �

����)� �� ��� ���� ������� �� � �� ���� ���

�A�� � � ����� � � ��)� ���� ����)�� ���� �� "���

����)� �+���� �� �������� �������� ���* ����� ��

������ � �� �������� A�)�� ���7�* 7��� � ��

�� ���� ���)��) ����������� �� ���� F���������3

��� � �� �������� �� ������ � ��) �� ���

��� ������ "�� ��������� � ������������� ��������

�� ��� ���� � ��� ����� �������� ��� �� ��� ��9 ���

�� ��������� ����� ����� ��� ��)���� ����� �

������ ������ ��������� "�� ���� �������

� ��� � �� � ���� � ��+ ����� ���� �������* ����3

�������* ������ ����)��� ��� ��� ���� ������� �

�������� ��� ����� "�� ��������� � �������������

������� �� ���������� �� �� ��+ A � �������� �� F�

�� ���) �� ������� �� �������� �� �F #<���� �� ���*

�161&� "�� �F � ��� ���� � ������� ��� �������� �

� �������� ������ ��* ���� ���) ��� ������ �������� �

��� ���� ������� ��� �A������ ������ �������

������ ������� %�� �$' ���� �� �� ����� ��

����� � ������� � �F � 5�8 ��� 6�!�

F��� � ���� �))� ������� � �������� �� ��3

������ � �� � ������ � ���� ������������ (������3

��� � ���� �� �))� ������ �� ������ � ��� ���� �

������������ �������� ���� ��������� � ��) �� ���

��� ����� �� ����� � �� ��������� ���� � )����

� ��� � ���� ����) �))� ������� �����A��

#"����� ��� 4 ������* �16;&� <���� �� �� �����3

���� ������� � ��� ����� ��� � �� ��� ��������3

��� � ��������� ������� � !G � ����� �� �

����� �� � ��� ��� #8 �),��& ���� ���� ����� �

�� ��� � ������ ��� �� ��� ����������� ����� � �����

�������� #����* �112/ ���� �� ���* !!!&�

F����� �� ��� � �� ��� ����������� � �����3

���� �� �� ����� )����� ���������� �� ������ ���

����� �$' �������� F����� ���� ����� ��� ��������3

��� ��� �� ������) ��� ��E������ � ���� ����3

������� �� ����� #4A ��� ������* �11 &� F�����

��������� ����� � ���� ��� ����� � �� �� ���

���� ���7� � ����� � #<���� �� ���* �161&� ���

�������� �� ���) ������ �� ��� ����������� ���3

� � ���� ����� ������� ������)� ���� � ���� 5!G

"����

(������� ��� ��� � �� ��� ���� �� �� �����

� �� � �� � ��������

����� �� � 4)��� �� ��� #�11�&/ % �������� �� ��� #�16�&

'���� ���� �� � ��)�� �� ��� #�11!&/ ���� #�112&/ ���� �� ���

# !!!&

F ��� �� � "����� �� ��� #�11 &

1 /��� 0�� 1 ����� -�� ���� -������� 22 34''45 6"7"#

Page 5: In vitro maturation and in vitro fertilization of sheep oocytes

#����� �� ���* �118&� 4������� �������� ���, �3

��)� ���� ������� �� ������� ��� ���� ����)��3

������� ���� ������ �� ��� ����������� �� ������ #����

��� 0)���* �166&� F����* �������� �������� ���

����������� ��� ������� ���� ���� �� ��������

�� ����� #4A ��� ������* �11 & ��� )��� #4A �� ���*

�118&�

�������� �9 �� �A������ �� ��� � ������3

����� ��� ������ �A������ ��� �� #'��� �� ���*

�11�&� <������� ���������) ���� ��� ��� ���� ���

� ������ ��� � ��� ����������� ��� ��� �����

������ �� ��� � �� #���)7� �� ���* �11 & ��� � ��

�������� #<�7� ��� F )�* �11!&� F�)��� �����

���� �� �������� �� ��� ���� ��� �� �����

�������� �� ��� ����3 � ������9 � #�����7 �� ���*

�11 / ����� �� ���* �118/ ���� �� ���* !!!& �����

)������ #03.��� �� ���* �118&� -��������� �����3

��� ���� ���� � ������ ��� ��� �� ��� )�����

���* ���� � � ���� ���� �����* � �$' � �����

����� #����* �112/ ���� �� ���* !!!&� ��* �� ���

���� ��������� ������* �� ��� ���� ������ ����

��������� ���� � ��� ��� ������ �))� �� �����3

����� �������� ��� �� ����� � �� �� ! ��� 8 �

���3���� ��� #?��� �� ���* �118&�

� � ����� ������������� �� ������ �������

� ������ � �$%:�$' ������� � ��� �������� �

��� ���� ��� ���� ��� ���� ������������ "��

���� � ���� �)) ���������* ���� � �������* ���3

���� � ��� ���� ���������� ���� ������� ���

�� � ������ � ������������ ������ � �� � ����3

���� � ��� �����* ����� ���� � ����� �������

��7� ����� ��� )���* �� � � �� � ����� ���������

���� �������)� �� ��)�� ��� ����� ��� ����� � ��

���� ���� � � ����� ���� ������ � ����������

����� ����� �� ������ � �� �� �� � �����

��������) ����� �� � #% �������� �� ���* �16�&*

.�� #?���� �� ���* �118&* � ��� �� � #���7�

�� ���* �11 & ����� ���� �� � #����* �112&�

?� ��� �� ��� � �� � ���� � �� ����E���� � ���

���������� � ��� ��)�� �� ���� 0���� ��)���*

�����* ���� ���� �������� �� ���� � ��������)

������� ���, �� ���� ���� � )� ���� � �������3

��� � ��� �% ������� �� ����E���� �� ���� ��)��

� �� � ����� ������ � ��� �����������

#���7� �� ���* �11 &�

(������� ����� ���� ���� ��� � � �� � � �����

����� #"���� �&� ���� ��� � �����E� ���� ����� ��

��� � �� � ���� � ����������� ���� �����������

F����* ��� ����E���� ������� ������� ���� ��� � �3

��� � ���)� ��� � �� �* ���� �� � ��� ��������� �

��� ���� ����� �� ��� ����� �� ���) ��)��E����

������ � ����� �� "�� ����� � �������� ���������

���������� ��� ������)� #?���� �� ���* �118&�

4 �� ��) ����� ����� �� ) ��* ������ �

� �� ��) ���� ������� ����* �� ��� �� �������� ����3

����� ������ �����) ���� ����� ����� �� ��

�����* ����� ���� ���� ������)� �� ��� #?����

�� ���* �118&� %�� ���� � �� �� �� ����� �

���) ��� ������ � .����� #�12�& ���� ������ �

���� � ��� ����E� �� �� � �� � ������� "�� ��

����� ��� � �� � ����� � ��������) �������� ���

��� ���� � ���)������� �� ��� ���� ����������

���� ����� � �� �� �� ��� ��� � ���� � ���

����E� �� ��)���� �� ���� ����� � �� �� ��

����� ���� � �� #���7� �� ���* �11 &� "�� �A��

����������� � ��� �� �� ���������� �� ���������

�A������) ��� �� ���� � ������ �� ����

"�� � �� � � ���� ���� ����� ��E�������

�� )� ��� 63���� ���)� ��� ���� ������� �� ���

�3� �� � � ����� � ��� ������� � ��� ����

����� #?����E ��� %* �165& ��� ����������

�������� #��A�� ��� <����* �166&� 43� �� � �

����� ����� ������ ���� ���������� ��� ����3

��)� �� ��� #����� �� ���* �118&�

� ����������

�$% ��� �$' ��� )��� �������� � ��� )�������

� � ��)� � ��� � ����� � ������ ��� �

��� ���������� � ��� ��� ������)���� -��� ���)�

"���� �

(������� ����� ��� � �� ��� ����������� � ����� �� �����

%���� ��� ��������

"4%3�11 �����7 �� ��� #�11 &/ ���� #�112&/

���� �� ��� # !!!&

F���3'�! ���� #�112&

F���3'� ���� #�112&

%������ ���7��� ���� � 4)��� �� ��� #�11�&/ < )� �� ���

#�11�&

��������� ��� ���� �� �� � � �� ��� #�118&

"���� ���� � ����� �� ��� #�118&

/��� 0�� 1 ����� -�� ���� -������� 22 34''45 6"7"# 1�

Page 6: In vitro maturation and in vitro fertilization of sheep oocytes

����� �� �9 ��� � ��� �� ���� � �����*

����)�����* ��A�� ����� ��� � ��� ���)���� �

)������ �������� � ������ �A���� �� �������* ����������

�� �����* � ����� ������ � ��)�� ���������� ���

� ��� �� ���� � ����)���� ������)�� ������� ��

����� ���� �9 ��� ��)� � ��� � ������ � ��*

����� �� ���E� �� � �����* ���� �� � ����� ���

����������� ����� �� �������� �������� ���� � ���

������� "�� �� ��� ����� � ���� ��� ����*

���� ����������� ��� �$' ��� ��� � ����������

���� ���� ���������� "�� ������9 � � �$' ���

���) ���������� �� ��� ��������� � �� �������*

7�����) �� ���� ����* )������ � �� �� ������� ��

������� ���� ���� � � ���� ���� ������ @�� ������*

�$' ������9 � ��� ��� � �� ����� ���� � ��� � ����

� �� � ��� � ����� �� ��� ���� ������� ��

� �� ������ ��� ���� ���������� � ��� ����� ���

���� �� ���� ������9 ���

����������

�)����* K�<�* �����* "�* ��A���* 4�* �����* ��* �11;�

4���)� � E�� ������ ������ � ������ ����� ��� ��

�� ���� ������ M� ����� ���� 2;* 6;: 66�

����* "�* >�������3� ����)�* %�>�* '���* ��>�* �11 � 4������

� ���� ������� ���� ���� � ��� ���� �� ����� ������

.��� ����� 82 #� ���� �&* 2��

�����)* (�"�* K���* <�M�* -��* 4���* �115� �������� ��

�� ���� � ����� �� ��� �� L ������ ��� ��� �����

����� �� ��� ���� ��� ����* ��� ����� '����� (��� 1*

���:��1�

.��������* F�* ' � �* 4�4�* %���* (�?�* <����* F�* (� %���*

(�?�* �112� �� ��� �� ���� � ����� ����� ���)

��������� ����� ���������� "���)���)� 8;* 5!5:5�5�

.�����* K���* ��)�� M�* ����* �16!� ��+ ���� � � �� � �����

� �� ��� ����������� � ���� � ��� ������ M� ����� ���� ;�*

22!:225�

.�����* ��>�* �12�� � ����� � �� ��� � �������� � � �� ��

�� �� ���� � ���������� -A�� 4��� ���� � * !;: !6�

4��* K�D�* K* M�M�* 4��* (�F�* F��* ��D�* D�* "�K�* �11��

<�)����� ���� �� ��� ����������� � � ��� ����� �� �����

�������� �� ��3���� ����� ������* ���� � �� � �� ��� ���

���� ������ �� � �� ���� �)��� '����� ������ ;;* �!1:

����

4���* ��* F������L* "�* %�)� ���* 4�* �� �* ?�* (� ��* -�*

�16�� �� ��� ��������� � �� ���� ������ �� � ���

����� �� + �� ������� ���� ?������� ��* �;;:�28�

4)���* D�* ? ���* D�* ? ����* 4�* < ���* ��* 4���* ��* �11��

�� ��� ����������� � ����� ����� ��� �� �� ����

"���)���)� �;* �1�:8!!�

4A* M�'�* ������* '�* �11 � @�� � � � ������ ���� ���������

����� �� ������ ��= <������)� � ��� N$�� ��� �� %�����) �

��� 4������ ������ � ������ <� ����� 4������* !:

0�����

4A* M�'�* �����* M�* ������* '�* ����� %���* ��* �118� ����������

� ���������) ������� � )�� �������� �� �� ��� �����������

� ������ ��� ����� ������ ������ "���)���)� 8�* �2 �:

�2 1�

4���* "�'�* ����* <�0�%�* ?��* ��* �15�� 4 �� � ���

����������� � ����� ����� �����= �������� � ����

��������� �� ����� �������� � ��� ����� ��� ��� M� �)���

���� 52* �51�

4���* ��%�* 0���* M�4�* %* ��%�* �16�� '������ ����

�) ����� � ����� ��������� ��� ������������ ���������

�� ����� ������ M� ����� '����� 2 * ;5;:;6 �

4���* ��* ����� ���* %�* ( ��* %�<�* �11;� (�����������

��������� � )�� ����� �� �������� � �������� ����

����)��� ������) ��� ����* ����������� ��� � �� � ��

���� M� ����� '����� �!�* 1�: 16�

(����� ���* ��(�* (����* .�>�* > ����7* "�%�* �16!� �� ���

��� ���� � ��� ����� ���� ����� ��� ���������

��� � ����������� ��� ������)�� "���)���)� ��* 1�

#�������&�

(���* ��%�* -���)* M�M�* �168� 4����� �������� ����������

��� ����� ����� �� + �� ��� ����)��������� � ������� � ��

���� ��� ����� -������)� ��8* �5:8�6�

(���* ��%�* ������* ��4�* -���)* M�M�* �162� �� � ���������

��� �������������� � � �� ����� ��� �� �� ��� ��

��������) �������) � ��� ��� ���� ����� ?����� ���� �;*

��;:� �

'���* >���* @��* ?�* ������* ��* �11�� ��� �9 ���) ����������

�� ���� ����������� ��� ������ �A������ �� � ��

��������� M� ����� '����� 15* ;�1:;81�

?����* 4�* %* ��%�* �11�� ?�������� �9 ������ � ��� ��

��� ��� ���� � ����� ����� ��� ���� � ���9 ���

������� ����������� "���)���)� �;* �!6�:�!1��

?����E* '�* %* ��%�* �165� ���� ����� � ���� �������

���������� �� ����� �� �3� �� � ���� ��� ���� ����������

������ M� ����� '����� 6�* �: 6�

?���* M�* �) ��* %�* <����* ��* �118� <�����)���� �������3

������ � ���������� �������� �� ���3���� ����

"���)���)� 8�* !��

?����* (�K�* >���* %�* ������* ��* .���* <���* �118� -�������

���� � ������)� ��� ���������� � ����� ��)��� � �� �� �

��� ��������� ���)� �� ��� �� ��� ������� � �� � ��� ������

�����= ���� �����* �������� ��� � �� ��) ����� �� ) ��

���� ���� ����������* �������� ��� � �� ��) ����� ��

) �� ���� ���� ����������� .��� ����� ;!* �1!:8!!�

?��* ��* > * K�F�* �11!� <� ���� � ����� �� ��� ��� ���

������ � �������7 �� ����� "���)���)� ��* 55:65�

F��7* F���* ����* ��M�* �118� ������ ������ � ����� ����������

�� �� ��� �� ��� ������ �= �������� � ����� ���

��)���� "���)���)� 8�* �;5�:�;6��

K�� L�* '�* K �* %�* ?�* K�* %�����* %�* "���) ���* %�*

"����)�* "�* �11 � "�� �� � )�� ��� ��� ����� ����

���������� �� ���� ��� ����� .��� ����� 82 #� ���� �&*

�;8 #�������&�

>����* ��* .)���* >�* 4�����* <�* >���* ?�* �������* ��* �115�

%����� �)����� ��� ������������ ��������� � �����

18 /��� 0�� 1 ����� -�� ���� -������� 22 34''45 6"7"#

Page 7: In vitro maturation and in vitro fertilization of sheep oocytes

�������� �� L ������ ��� �� �� ����� M� ����� '����� �!1*

5�:56�

>�������* >�* '���* ��>�* �151� 4������������ � ����� ����� ��

����� ��� ���� ������� � ��� � �� ���� M� ����� ���� 86*

52:62�

>�������* >�* '���* ��>�* �16!� -����� � ����� ��� �����

����� �� + �� ��� )�� ��� ����� � ��� ���� � ����� ��

���� .��� ����� �* 211:5!8�

%)��* "�* %����* ��* <���* %�M�* <����* %�"�* �11 � -�����

� ����� � ����� � ��� � ��� ��� ���� � �����

������� � �$%� M� ����� '����� 1* ; #�������&�

%* ��%�* " ���* ��0�* �155� F���� ��� ����� �� �����

��������) ��� ���� � ����� ����� ��� �� �� ��� ��� ����

� ���9 ��� ������������ ��������� M� ����� '����� 81* �!�:

�!1�

% ��������* ��%�* (����7��* ��* �����7�* .���* (��������3

��* ����* �16�� -����� � ����� �� � ������� �� ��������

���)�� � ��� � ����� � ��� ��� ���� � ����� �� ������

��������� ���������3�7������3�� 73K�����7�3��3�����3

.��)�����7��� 8* 25:5! #�������&�

����* K�* 0)���* 0�* �166� ����)����� ������� � �������� ���

������ � �� ��� ����������� � ������ ����� ��� �� ��

� �� �� "���)���)� �!* 5��:58��

03.���* M�K�* �����* ��>�* %�A����* ��%�4�* -����* ?�* �118�

F���� �9 ������ � �� ��� ��� ���� � ����� ������

"���)���)� 8�* 22 #�������&�

03.���* M�K�* 4���* ��>�* ������* K���* %�A����* ��%�4�* -����*

?�* �115� �� ��� ��� �� ��� ������������ �������� �

����� �� ��� ����� ��� �� �� ������ "���)���)� 85*

�8��:�88��

0���* M�4�* %* ��%�* �16 � 4��� ���������� ��� �����

��������� �� ��������� ������ M� -A�� H�� !* � ;:� 1�

<�7�* M�-�* F )�* ����* �11!� -������ � �������� ���������) ����

� ��� ������� ��� ����� ������ �� ����� ���������

"���)���)� �8* 1!�:1� �

<����* M�M�* � �73�����* M�>�* '���* ��>�* �161� 4���������� �

����� ���� �� ������= �������� ������ � )� ��� ��� ��

� �������� �� �F� .��� ����� 8�* 26�:211�

<�����* 4�F�* "���* ��%�* M���* ��K�* �118� -����� � ��� �����

� )�� ����� � �� ��� ��� ���� ��� �� ��� ������������

"���)���)� 8 * ��5:� ;�

< )�* <���* ' 7 �* D�* "����* F���* "�����* M�?�* �11��

(����������� ������� � �� ��� ��� �� ����� �����

�������� � ��) ��� �� ������) ����� ��� ��������� �� ���

���� ���� �� ������ "���)���)� �2* 55�:556�

��A�� M�* 4�-�* <����* ��%�* �166� 43� �� � � ���� �))�

���� ��� ���� ����� ��� ���������� ��������� "���)���)�

1* �65:�15�

���)7�* K�* ����7���* %�* "�����* K�* ������ * "�* �11 � -����� �

�������� ���������) ���� � � �� ���� � ������ M� �������

����� ?����� 1* 885:8;��

��)��* .�* � ����* H�* N��A���* N�* D�����* <�* F�)� * 4�*

N���* >�* O��)���* F�* O��* ��* �11!� �� ��� ���������� �

���� ����� ��� �� ��� ��������� �� ��� ��� ������) ����

���� ������� M��� M� ����� ����� �2* 8�

�����7* "�* ' �7�* M�* ?��* ��* �11 � <�)����� ��� ���� ��� ������

� ����� ����� �)������ �� ������ ����� �����

��� �� ��� ��������� �� ���� "���)���)� �6* 581:

5;2�

����)�����* ����* %* ��%�* �168� -����� � ������� ����� � ���

��� ���� ��� ������������ ��������� � ���� �����

��� �� ����� ��� �������� ?����� ���� 1* �: 1�

� �* '�M�* F��* <�* �����* .�* �����7* ��'�* �118� -����� � �����

��� � ��� ����� �� + �� � ��� ��� ���� � ����� ����� ��

���� "���)���)� 8�* 16�:166�

"����� ��* 4�* (� ���* >�* �12�� ������� ��� �������� �� ��

��� ������ �� ��� �� >* � � �� ��������� ���� .��� �����

.������ .������ �* 55 #�������&�

"�����* M�?�-�* 4 ������* M�%�* �16;� "�� ������ � ������)

��� ����� � ������������ � ��� ����� ������ � ��

�������� �� ���� ����� ����� ���� 1* 5;:62�

"�����* M�?�-�* ������* ��4�* < )�* <���* "����* F���* �11 �

�� ��� ���������� � ���� ����� ����� �� � ��� ��

���� � � ���������� ���� � ��� �� � ������ ���� �����

�� � � ��� �� � ��� ���� ����� ����� ���� 1* 2�:26�

"������* ��* <������* ��F�* 4������)* 4�<�* �152� ��������� �

���� ��� ���� �� ����� ����� �� + ��= ������ �������3

������ � ��� �������� .��� ����� �8* ;��:;�2�

�����* F�* %��)���* <�* ?��* ��* �11 � �� ��� ��� ����

#�$%& � ����� ����� �� ������ M� ����� '����� 1* ;

#�������&�

���7�* ��K�* F���* "�%�* �����7* ��'�* �11 � �� ��� � �� � �

����� ����� ���� � �3� �� �= � ����� ��� ������������

"���)���)� �5* ���:� 2�

����* ����* �112� �� $�� %�� ���� ��� �� $�� '���������� �

0���� 0������ %�$���� "�����* ��K� @�������� � �)�� �� ��

�������� ��� "�����)�* ����)�* M��� ��� K�����* ������

����* ����* ����* ?�%�* K���* %�H�* ����9 �* %���* �111� -�����

� �������� ����� � ��� ����� � ����� � �$%:�$'

���� �� �� ������ ����� � �� ���� �8* 5�:52�

����* ����* ����* ?�%�* K���* %�H�* ����� ���* ��* !!!� -�����

� ���� ��������) ������9 � � �� ��� ��� ���� ��� ��

��� ����������� �� ������ ����� � �� ���� �2* 2�:25�

�����* ��M�* �����* <�F�* �����* (�* ���7�* ��K�* �����)*

(�"�* �����7* ��'�* �118� <� ����������� ���������� � ��

��� ��� �� ��� �� ��� ��������� ���� ��)���= �������

������� �3� �� �� � ��� ���� ���������� ���� �������

��� � �� � ��� �� A�)�� ��������� .��� ����� ;!*

5�;:5 8�

D��)* ����* > * K�F�* ?��* ��* �11!� �� ��� ����������� ��� ��

��� � �� � � ����� ����� �� ���� ������ "���3

)���)� ��* �; #�������&�

/��� 0�� 1 ����� -�� ���� -������� 22 34''45 6"7"# 1;