hein hustinx laborleiter immunhämatologie, blutspendedienst srk bern
DESCRIPTION
Hein Hustinx Laborleiter Immunhämatologie, Blutspendedienst SRK Bern Nationales Referenzlabor Blutspende SRK Schweiz. Die Bedeutung des Nationalen Referenzlabors für die Immunhämatologie (IH). Hein Hustinx Responsable laboratoire d’immunohématologie, - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013
Hein HustinxLaborleiter Immunhämatologie, Blutspendedienst SRK
Bern Nationales Referenzlabor Blutspende SRK Schweiz
Die Bedeutung des Nationalen Referenzlabors für die Immunhämatologie (IH)
1
HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013
Hein HustinxResponsable laboratoire d’immunohématologie,
Service de transfusion sanguine CRS Berne Laboratoire de référence national Transfusion CRS
Suisse
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence nationalpour l’immunohématologie (IH)
2
HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013 3
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
La question se pose de savoir si ce thème demande une réponse philosophique ou pas. Ou, comme on le dit souvent, faut-il « en avoir ou pas »?
Est-ce que l’on a vraiment besoin d’un laboratoire de référence national? Le fait que le STS Berne soit actuellement le laboratoire de référence national du STS CRS Suisse n’est pas pertinent.
L’immunohématologie (IH) ne représente qu’une toute petite partie du domaine des spécialités médicales et la véritable complexité de l’IH ne devient généralement apparente que chez les patients avec des maladies allo-immunes ou auto-immunes ou des constellations de groupes sanguins rares.
Je vais tenter de vous présenter cette complexité à l’aide des prochains transparents.
HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013 4
Comme vous le savez, l’IH est la somme de plusieurs activités
Directives detransfusion sanguine
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013 5
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
Le service de transfusion sanguine STS CRS Suisse a défini le cahier des charges suivant :
1. Laboratoire de confirmation
• Analyses/consultations : toute l’année, 24h sur 24 Traitement immédiat des urgences
• Dépistage des antigènes des groupes sanguins rares d’après les dernières avancées scientifiques (p. ex. par analyse biologique moléculaire)
• Collaboration étroite avec les autres laboratoires de référence
• Eventuellement, membre de SCARF : programme d’échange!
2. Contrôle de qualité
• Organisation de contrôles externes (essais collaboratifs)
HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH (suite)
3. Banque du sang pour les produits sanguins spéciaux
• Approvisionnement de la Suisse en produits sanguins avec des constellations rares d’antigènes
• Tenue de la liste nationale des donneurs avec des groupes sanguins-groupes d’antigènes rares
4. Consultations et formation continue
• Conseils pour l’interprétation de résultats
• Formation continue
• Direction du groupe de travail immunohématologie du STS CRS Suisse
• Y compris l’accréditation et une «peer-review» par des experts étrangers
HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013 7
Le diagramme sur le prochain transparent vous montre comment nous assumons ces « charges »
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013 8
Die Bedeutung des Nationalen Referenzlabors für die IH
Eine Kopiermaschine brauchen wir auch, aber das war nicht gemeint
HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013 9
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
Nous avons bien besoin d‘une photocopieuse, mais ce n’est pas ce que nous voulions dire
HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013 10
Connectéau monde entier
InterneLivraison de
cellules de testSwissmedic
CSLBioRad
Dépistage AGdes donneurs
R&D PCRSéquençage des groupes sanguins
IndustrieLivraison CE
BioRad, Medion
Génotypage
Génotypage RhD foetal
Laboratoire de référence
ABO à Lund, SuèdeCoopération Paris /
Mannheim / Vienne
Collaboration aux workshops internationaux
OMSLaboratoire
de référence de Bristol
Echange mondial SCARF
Sérothèque avec >2000
groupes sanguins rares + sérothèque
avec antigènes rares
Centre d‘essaiscollaboratifs
Groupes de travail DGTI
Exposés dans toute la
Suisse
Développement de nouvelles techniques
Revue de la littérature
Formation continue
AccréditationPeer review
Laboratoire de référence INTS
T. Peyrard
Diagnostic moléculaire,donneurs et
patients
Formation apprentis
Club Anticorps
PublicationsAffichesExposés
Formation continue
Hôpital de l‘Ile
Consultationsdans toute la
Suisse
Rapports bilingues
D / F
Urgences et permanencecas spéciauxSTS CRS CH
Echantillons étrangers
p.ex. d‘Italie
Elucidation pour labos
privés
Urgences et permanence
pour le canton
de Berne y compris
problèmes à l‘Hôpital de
l‘Ile
Approvisionnement en sang rare:
Suisse, étranger
KryobloedbankAmsterdam
Recommandations(Patients)Directives
(Sérologie des donneurs)
Groupe de travail Immunohématologie
STS CRS CH
Groupe de travail ISBT Rare Blood
Gestion fichier
Donneurs rares
CH/D/A
ImmunohématologieSTS CRS Berne SA
Laboratoire de référence national Suisse
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013 11
Die Bedeutung des Nationalen Referenzlabors für die IH
ImmunhämatologieBSD SRK Bern AG
NationalesReferenzlabor CH
Intern
ArbeitsgruppeImmunhämatologie
BSD SRK CH
AK Klub
Notfälle/PikettSpezielle FälleBSD SRK CH
Notfälle/PikettVersorgung Kanton
Berninklusive
Problemfälle Inselspital
Weiterbildung Insel
F+E PCRSequenzierungBlutgruppen
VorträgeCH weit
InternationalProben aus z.B
Italien
W.H.O Referenzlabor
Bristol
Austausch SCARFweltweit
PublikationenPoster
Abstracts
Arbeitsgruppen DGTI
Versorgung mit
seltenem Blut:
SchweizAusland
Abklärungen Privatlabors
Beratung CH weit
FührungRare Donor File
CH/D/A
Ringversuchs-zentrum
AG-Typisieren von Spendern
Ausbildung Praktikanten
KryoblutbankAmsterdam
Referenzlabor ABO
in Lund SchwedenZusammenarbeit Paris /
Mannheim / Wien
IndustrieLieferung EK
BioRad/Medion
Entwicklung neuer Techniken
Empfehlungen (Patienten)Richtlinien
(Spenderserologie)
Literaturstudium
Mehrsprachige Berichterstattung
D/F
WeiterbildungAkkreditiert Peer reviewMitarbeit
internationale Workshops
Weltweit vernetzt
Serothek mit >2000 seltenen
Blutgruppenproben + Serothek mit
seltenen Antiseren
Lieferung Testzellen Swissmedic
CSLBoRAd
Arbeitsgruppe ISBT
Rare blood
Referenzlabor INTS
T. Peyrard
Molekulare DiagnostikPatienten wie Spender
Genotypisierung
Foetale RHD Genotypisierung
HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013 12
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
Publications du domaine de l’immunohématologie 2012/2013 :
Exposés :
• High-throughput blood group genotyping (HTBGG) shows an unexpected high frequency of FY*X.P. Gowland, S. Lejon Crottet, C. Henny, F. Still, C. Niederhauser, S.
Fontana and H. Hustinx
• Mixed field agglutination in weak D type 31: no Rh complex alteration except for diminished Band3.J. Reif, H. Hustinx, EM. Dauber, GF. Körmöczi
• Novel KEL heterozygous mutations associated with apparent lack of Kell antigens KEL1 and KEL2 in two patients.V. Karamatic Crew, N Thornton, N Burton, H Hustinx, G Daniels
• A long PCR system for the investigation of difficult Rhesus variants.J. Aeschlimann, P. Gowland, J. Graber, H. Hustinx, S. Fontana and C.
Niederhauser
HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
Publications:
• A novel Bweak hybrid allele lacks three enhancer repeats but generates normal AB0 transcript levels.
B. Thuresson, B. Hosseini-Maaf, AK. Hult, H. Hustinx, M Alan Chester, ML Olsson. • Grosses Engagement der biomedizinischen Analytikerinnen.
H. Hustinx, UE. Nydegger • Monozyten-Monolayer-Assay.
S. Gugger
• DGTI-register seltene Blutspender.H. Hustinx, I. von Zabern
• Serologic and molecular investigations of DAR1 (weak D Type 4.2), DAR1.2, DAR1.3, DAR2 (DARE), and DARA Sofia Lejon Crottet, Lonneke Haer-Wigman, Peter Gowland, Stefano Fontana, Christoph Niederhauser and Hein Hustinx Première publication en ligne: 31 JUILLET 2013!
• P1/P2 genotyping of known and novel null alleles in the P1PK and GLOB histo-blood group systems Julia S. Westman, Åsa Hellberg, Thierry Peyrard, Hein Hustinx, Britt Thuresson and
Martin L. OlssonPremière publication en ligne: 8 AOÛT 2013!
HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013 14
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
A mon avis, nous assumons bien nos « charges ». L’envoi, année après année, de demandes d’analyses complexes, de clarifications de groupes sanguins problématiques, etc. a enrichi notre expérience et permet aujourd’hui de résoudre les cas difficiles et d’apporter les bonnes réponses aux questions de nos clients. Il est très important de noter qu’il s’agit d’un travail d’équipe et que sans cette collaboration, beaucoup de choses n’auraient pas été possibles.
Je voudrais également mentionner brièvement le Groupe de travail IH du Service de transfusion sanguine Suisse (cela fait aussi partie du cahier des charges). Si la Conférence des Directeurs de STS Suisse les approuve, les nouvelles recommandations pour les patients pourront être publiées le 1er janvier 2014. Nous, c’est à dire un groupe d’experts (STS, hôpitaux), nous avons travaillé pendant près de deux ans au remaniement de ces directives. Sans un vrai travail d’équipe, cela n’aurait pas été possible.
Je voudrais également présenter un cas qui met clairement en évidence la signification du laboratoire de référence national.
HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013 15
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
Une urgence le jour de l’Ascension 2013, 11:30hSuspicion d’anticorps publics?
* M 7/1
M 7/2
M 7/3
M 7/4
M 7/5
M 7/6
M 7/7
M 7/8
SZ I SZ II SZ3
SZ 4
Eig.
N10 ++ ++ ++ ++’
N20 (+) (+) (+) (+)C37 - (±) - ± - (±) (+) - -P37 ++ ++ ++ ++’ ++ ++ +++ ++
TAD polyvalent : négatif IgG: négatifGroupe sanguin : A RhD positif
*Evaluation avec le panel maison (les érythrocytes-test proviennent toujours des mêmes donneurs. Les dons sont conservés dans de l’azote liquide)
HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013
A1 A2 B O Eig. NG fr. Sp.N20 (±) (±) +++’ (+) - (±) +/-N10 + +’ +++’ (++) - (±) +’N37* + + (++
+)+
Résultat de l’échantillon reçu : TC des segments livrés : 2 sur 4 légèrement positifs
Evaluation des résultats• Exclusion d’anticorps contre les substances de la solution
stabilisante• Exclusion d’anti-I (mais pas HI), car notre propre contrôle est
négatif.• Exclusion d’anti-HI, car les tests A1 sont positifs.
*si l’on soupçonne la présence d’anticorps actifs à froid, on placera les échantillons, qui avaient été analysés à une température de 10°C, pendant 20-30 minutes à 37°C. Résultat attendu : un résultat négatif ou presque négatif.
Autres analyses:
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013 17
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
Suite à ces observations, nous nous sommes posé la question: Ac IgM/IgG; quels anticorps sont prévisibles contre un antigène de haute fréquence? En Suisse, les plus probables sont les anti-P ou anti-Vel.
Normalement, en présence d’un anti-P, toutes les cellules sont « uniformément » positives. Par contre, lors d’un test indirect à l’anti-globuline (TIA) et surtout avec notre mosaïque maison, un anti-Vel donnera des réactions positives d’intensité variable qui sont généralement renforcées dans la papaïne. S’agit-il d’un anti-Vel? Cinq tests érythrocytaires Vel négatifs ont montré des résultats négatifs lors d’un TIA. Dans ce cas, nous avons donc pu dépister l’antigène Vel (heureusement TAD négatif) : antigène Vel négatif!
Quelle leçon pouvons-nous tirer de ce cas? (Il peut servir à évaluer les processus internes et peut éventuellement être utilisé pour une formation interne).• Entretemps, nous savons que notre cellule test M7//7 est fortement Vel positive! • Si les réactions à un ID/TIA sont faiblement positives, il faut d’abord identifier le
problème (anti-stabi, phénomène ID, froid), avant de procéder par élimination avec le TIA.
• Sans élucidation précise des causes, les essais dans les tubes TIA peuvent donner de faux résultats négatifs parce que les anticorps IgM se dissolvent la plupart du temps lors du lavage des érythrocytes testés (survenu aux Pays-Bas, hémolyse intravasculaire).
HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013 18
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
• Depuis mars 2013, le code génétique du gène Vel est connu.• Chez les patients Vel négatifs, le gène SMIM1 montre une délétion
17 nt sur l’exon 3 • Storry et al. , Nature Genetics (2013), 45 (5)• Cvejic et al., Nature Genetics (2013), 45 (5)• Ballif et al (Thierry Peyrard!)., EMBO Mol Med (2013) 5
SMIM1 :• protéine transmembranaire de la membrane érythrocytaire• 78 acides aminés divisés en 4 exons • Vel négatif : une délétion de 17 nt sur l’exon 3
HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013 19
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
1 2 3 4
1: Contrôle Vel positif2: Contrôle Vel négatif 3: Contrôle Vel hétérozygote4: Patient (Vel négatif)
Vel négVel pos
Referenz: Storry JR et al., Nat. Gene. (2013) 45, 524-545 , 50, 2106-2116
En tant que laboratoire de référence, nous avons rapidement développé un SSP-PCR
(aide en cas de questions difficiles, contrôle de donneurs Vel négatif) Size Marker
HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013 20
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
Vous savez probablement que le sang Vel négatif est extrêmement rare. Suivant les pays et les tests, son incidence est de 1:2000 à 1:4000.Si jamais cette patiente a besoin d‘une transfusion, où trouverons-nous du sang approprié?
Pendant les derniers vingt ans, le laboratoire de référence national a, d’un côté, effectué des dépistages sérologiques Vel (la dernière fois 2010-2012 sur env. 40’000 donneurs). D’un autre côté, il a créé une banque de données avec tous les donneurs rares connus.
Cette banque de données est remise à jour 3 fois par an.
L’accès à ces données est sécurisé par un mot de passe et elles peuvent être consultées par tous les Services de transfusion sanguine de Suisse.
Entretemps, les Services de transfusion sanguine allemands et autrichiens participent également à cette banque de données. «DGTI Register seltene Spender»
HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013 21
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013 22
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013 23
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
HHU/Swisstransfusion/ 05.9.2013 24
L’utilité et l’importance du laboratoire de référence national pour l’IH
Merci vielmals für Ihre Kooperation
Merci beaucoup pour votre coopération
Grazie mille per la Sua collaborazione
Thank you very much for your cooperation