guia de practicas de uroanalisis

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Laboratorio Clínico PAULINA ARROLLO PERÉZ INSTITUTO SUPERIOR DANIEL ALCIDES CARRION LABORATORIO CLINICO GUIA DE PRACTICAS DE UROANALISIS 2011

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Page 1: Guia de Practicas de Uroanalisis

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

INSTITUTO SUPERIOR DANIEL ALCIDES CARRION

LABORATORIO CLINICO

GUIA DE PRACTICAS DE

UROANALISIS

2011

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

PRACTICA 1

EXAMEN FISICO DE LA ORINA

PROPOacuteSITO

Por medio de la observacioacuten directa de la muestra de orina determinar el color y el

aspecto de eacutesta lo cual puede sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras

enfermedades que esteacuten en diferente localizacioacuten pero que sus manifestaciones

secundarias son a nivel del rintildeoacuten

MUESTRA REQUERIDA

30 mL de orina Preferible la primera de la mantildeana 10 mL de orina en muestra de

nintildeos

MATERIALES

- Frascos plaacutesticos transparente de boca ancha con capacidad de 30 mL

- Bolsa pediaacutetrica recolectora de orina

- Papel toalla

- Marcador de vidrio

- Guantes descartables

PROCEDIMIENTO

- Verificar que el frasco esteacute bien identificado y completamente tapado

- Agitar en forma circular sobre la mesa de trabajo

- Observar color y aspecto

- Anotar lo observado

FUENTES DE ERROR

- Frascos sucios

- Toma de muestra inadecuada

- Muestras medicamentosas

- Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten (no mayor

de 2 horas)

FORMA DE REPORTE

Valores de referencia

COLOR Amarillo

ASPECTO Transparente limpia

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

63 E PRACTICA 2

EXAMEN QUIMICO DE LA ORINA

XAMEN QUIacuteMICO DE ORINAPROPOacuteSITO

Determinar las sustancias quiacutemicas presentes en una muestra de orina asiacute como

su densidad y

pH a traveacutes de las zonas de reaccioacuten presentes en una tira reactiva

MUESTRA REQUERIDA

30 ml de orina Preferible la primera de la mantildeana 10mL de orina en muestra de

nintildeos

MATERIALES Y REACTIVOS

- Frascos plaacutesticos transparente de boca ancha con capacidad de 30 mL

- Bolsa pediaacutetrica recolectora de orina

- Tubos coacutenicos con capacidad de 15 ml

- Gradilla para tubos

- Papel toalla

- Marcador de vidrio

- Guantes descartables

- Tiras reactivas para orina

PROCEDIMIENTO

- Identificar el tubo coacutenico

- Agitar la muestra de orina en forma circular sobre la mesa de trabajo

- Verter la orina en el tubo coacutenico

- Introducir la tira reactiva en la orina

- Eliminar el exceso de orina colocando la tira sobre un papel absorbente

- Esperar el tiempo recomendado por el fabricante para su lectura

- Anotar los resultados

Los cambios de color que aparecen despueacutes de dos oacute maacutes minutos carecen de

importancia diagnoacutestica

FUENTES DE ERROR

- Muestras medicamentosas

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

- Frascos y tubos mal lavados

- Tiras reactivas de mala calidad o vencidas

- Cortar las tiras reactivas

- Leer las tiras reactivas despueacutes del tiempo indicado por el fabricante

FORMA DE REPORTE

pH de 5 a 9

DENSIDAD de 1000 a 1030

LEUCOCITOS 0 a 500 Leucocitos por μl

NITRITOS Positivo oacute Negativo

PROTEIacuteNA 0 a 1000 mg por dL

GLUCOSA 0 - 1000 mg por dL

CUERPOS CETOacuteNICOS de una cruz a tres cruces

UROBILINOacuteGENO de lt1 a 12 mg por dL

BILIRRUBINA de una cruz a tres cruces

SANGREHEMOGLOBINA de 0 a 250 eritrocitos por μL

Siempre que en la tira reactiva no se observe un cambio de color se reportaraacute

como negativo

Valores de referencia

pH de 5 a 6

DENSIDAD de 1005 a 1010

LEUCOCITOS 0 Leucocitos por μl

NITRITOS Negativo

PROTEIacuteNA 0 mg por dL

GLUCOSA 0 mg por dL

CUERPOS CETOacuteNICOS Negativo

UROBILINOacuteGENO lt1 mg por dL

BILIRRUBINA Negativa

SANGRE 0 eritrocitos por μL

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

DETERMINACION DE PROTEINURIA

AacuteCIDO SULFOSALICIacuteLICO

Esta teacutecnica se basa en la utilizacioacuten de aacutecido sulfosaliciacutelico cuya propiedad es

precipitar proteiacutenas en ausencia de calor Para esta prueba se usa el reactivo de

Exton en cuya composicioacuten se encuentra dicho aacutecido

Reactivo de Exton

Disolver 88g de sulfato de sodio en 600 ml de agua destilada con ayuda de calor

Enfriar Luego agregar 50 g de aacutecido sulfosaliciacutelico y diluir a 1000 ml

Procedimiento

1-Centrifugar una aliacutecuota de orina y luego utilizar el liacutequido sobrenadante

liacutempido

2- En un tubo de ensayo colocar voluacutemenes iguales del sobrenadante y del

reactivo de Exton Mezclar por inversioacuten y apreciar la turbidez

Interpretar de acuerdo a las siguientes pautas

Negativo No existe turbidez

Trazas Turbidez visible sobre fondo negro

1(+) Se observa turbidez pero no es granular

2(++) Se observa turbidez y es granular

3(+++) La turbidez es considerable y existe aglutinacioacuten

4(++++) Nubosidad densa con masas aglutinadas de gran tamantildeo

El procedimiento de Exton es maacutes sensible que el meacutetodo de las tiras reactivas

Pueden observarse falsos positivos en los tratamientos con tolbutamina penicilina

sulfamidas y despueacutes de la administracioacuten de sustancias de contraste radioloacutegico

Asimismo las orinas muy alcalinas suelen dar resultados negativos falsos

PRUEBA DEL ACIDO ACETICO Y CALOR

Se basa en la precipitacioacuten de proteiacutenas llevando el pH de la orina al valor del

punto isoeleacutectrico al agregar el aacutecido aceacutetico Tambieacuten el calor torna a las

proteiacutenas insolubles provocando su coagulacioacuten

Procedimiento

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

1- Centrifugar 10 ml de orina y luego separar el sobrenadante a un tubo de

ensayo El tubo debe estar lleno en las 23 partes

2-Hervir la parte superior del tubo por 2 minutos a la llama ( El tubo debe ser

sostenido formando un aacutengulo sobre la llama y apuntando en direccioacuten opuestas al

cuerpo) Si aparece turbidez puede deberse a la presencia de proteiacutenas fosfatos

y carbonatos

3- Agregar 3 a 5 gotas de aacutecido aceacutetico al 5 o 10 y volver a hervir la parte

superior del tubo a la llama El aacutecido disolveraacute los fosfatos o carbonatos que

puede ser la causa de la turbidez Ademaacutes disminuye el pH llevaacutendolo maacutes

proacuteximo al punto isoeleacutectrico de las proteiacutenas y en consecuencia eacutestas precipitan

aumentando la turbidez

4- Los resultados seraacute dados con la misma escala del reactivo de Exton

Esta teacutecnica detecta albuacuteminas globulinas mucoproteiacutenas e incluso las proteiacutenas

de Bence Jones La hemoglobina y la mioglobina no precipitan con este meacutetodo

La tolbutamida dosis elevadas de penicilina y sustancias de contraste radioloacutegico

pueden resultados positivos falsos Orinas muy alcalinas y orinas muy diluidas

pueden dar resultados negativos falsos

DETERMINACION DE GLUCOSURIA

TECNICA DE BENEDICT

Tiene como fundamento la reduccioacuten del ioacuten cuacuteprico color azul a cuproso que da

un precipitado rojo ladrillo en presencia de glucosa en caliente y en medio alcalino

fuerte

Reactivo

Sulfato de cobre 173 g

Citrato de sodio o de potasio 173g

Cristales de carbonato de sodio 200g

O carbonato de sodio anhiacutedro 100g

Agua destilada para completar 1000ml

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Disolver el citrato y el carbonato en 700ml de agua con ayuda de calor Filtrar y

disolver con el sulfato de cobre en aprox 100ml de agua caliente y vertirlo en la

solucioacuten de citrato-carbonato revolviendo Dejar que se enfriacutee antes de diluir hasta

completar los 1000 ml con agua

Procedimiento

1-Colocar 5ml del reactivo de Benedict en un tubo de ensayo

2- Agregar 8 gotas de orina Mezclar por inversioacuten

3- Llevar el tubo con la mezcla preparada a bantildeo Mariacutea durante 5 minutos o

calentar a la llama hasta su ebullicioacuten durante 1 a 2 minutos

4- Dejar que se enfriacutee lentamente

Se informa de acuerdo a las pautas correspondientes

Negativa Color azul claro puede formarse un precipitado azul

Trazas Color verde azulado

1(+) Color verde precipitado verde o amarillo

2(++) Color amarillo a verde precipitado amarillo

3(+++) Color amarillo-anaranjado precipitado amarillo-anaranjado

4 (++++) Color amarillo-rojizoprecipitado rojo ladrillo o rojo

Este procedimiento es sensible y de puede detectar hasta concentraciones de

002 Dosis aumentadas de penicilina estreptomicina salicilatos

oxitetraciclinas polivinilpirrolidona dextraacuten y el aacutecido p-aminosaliciacutelico dan

reacciones positivos falsos Los conservadores con formalina y formaldehiacutedo

pueden dar lugar tambieacuten a falsos positivos

INVESTIGACION DE CUERPOS CETONICOS

REACCION DE ROTHERA

Es una teacutecnica que usa nitroprusiano y permite la formacioacuten de un anillo Permite

la determinacioacuten del aacutecido diaceacuteticoacetona no permite la deteccioacuten del aacutecido B-

hidroxibutiacuterico

Reactivos

1) Reactivo de Rothera compuesta por 75 g de nitroprusiato de sodio y

200mg de sulfato de amonio

2) Hidroacutexido de amonio concentrado

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Procedimiento

1) En un tubo de ensayo agregar 1g de reactivo de Rothera con 5 ml de orina

Mezclar por inversioacuten

2) Luego agregar 1ml de hidroacutexido de amonio concentrado

3) Si la prueba es positiva se forma un anillo rojo a puacuterpura en el tiempo de

112 minuto en el punto de contacto

Dar los resultados seguacuten la siguiente pauta

Negativa No se forma el anillo o la formacioacuten de un anillo marroacuten

Trazas La formacioacuten de un anillo puacuterpura o de color rosado

2(+) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro estrecho limitado

4 (++++) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro extenso

DETECCION DE SANGRE EN ORINA (SANGRE OCULTA)

PRUEBA DE BENCIDINA

Reactivo A

Solucioacuten de Bencidina al 1 en aacutecido aceacutetico al 50

Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes

Procedimiento

En un tubo o sobre un papel filtro( en este caso ldquomancharrdquo el papel con la muestra

en estudio)

2 ndash 4 gotas de bencidina

Agregar 2 ndash 4 gotas de peroacutexido de hidroacutegeno (agua oxigenada)

Interpretacioacuten

Si existe sangre se formaraacute un halo verde azulado

Negativo halo marroacuten

Reactivo B

Solucioacuten de Piramidoacuten al 5 en aacutecido aceacutetico al 50

Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes

La solucioacuten de piramidoacuten puede ser preparada sin aacutecido aceacutetico por lo tanto el

orden de uso es piramidoacuten acido aceacutetico agua oxigenada Resultado

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DETERMINACION DE BILIRRUBINA Y UROBILINOGENO

REACCION DEL YODO DE SMITH (BILIRRUBINAS)

En un tubo de ensayo colocar 5ml de orina aacutecida y cubrirla con 2ml de una

solucioacuten de yodo al 07 en alcohopl etiacutelico al 95 La presencia de un anillo de

color verde esmeralda en la interfase de ambos liacutequidos indica la presencia de

bilirrubina

La deteccioacuten de urobilinoacutegeno en orina tambieacuten indican un problema hepaacutetico Uno

de los problemas importantes en la deteccioacuten de urobilinoacutegeno

REACCION CUANTITATIVA DE EHRLICH

Reactivo de Ehrlich

p-dimetilanminobenzaldehiacutedo 10g

HCl concentrado 75ml

Agua destilada 75ml

Procedimiento

1- Colocar 10ml de orina en un tubo de ensayo recieacuten emitida

2- Agregar 1ml del reactivo de Ehrlich

3- Dejar en reposo durante 5 minutos

La presencia urobilinoacutegeno determina que la solucioacuten cambie de color niveles

altos y dan un color rojo cereza

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

E PRACTICA 3

DEPURACION DE CREATININACREATININA Generalidad

La creatinina es una sustancia que deriva del metabolismo muscular

(muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina y representa el

subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina es independiente

de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es proporcional dentro

de ciertos liacutemites a la masa muscular Se libera de los glomeacuterulos y no

es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales puede ser excretada

especialmente cuando se aumenta la concentracioacuten hemaacutetica El

aumento de la creatinina en el suero empieza a ser evidente cuando el

filtrado glomerular es por debajo de 60 ml por minuto

Indicaciones

La determinacioacuten de la cratinina es utilizada en el diagnoacutestico de las

enfermedades renales agudas o croacutenicas y tambieacuten para el monitoreo

de la diaacutelisis renal El aumento de la creatinina es un iacutendice de la

insuficiencia glomerular en cuanto eacutesta es eliminada por filtracioacuten

glomerular Mientras la uremia en la sangre puede ser controlada a

traveacutes de una oportuna dieta la creatinina se correlaciona casi

exclusivamente a la eficiencia de la filtracioacuten glomerular La creatinina

representa el iacutendice maacutes fiel de la insuficiencia renal

Preparacioacuten del paciente

Ayuno

Modalidad de la toma de muestra

Ninguna particularidad

Transporte

Transportar a temperatura ambiente

Conservacioacuten

Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede

conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y

6 meses en congelacioacuten

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Centrifugacioacuten

Poner el tubo de ensayo en la centriacutefuga de modo balanceado poner el

reloj 5 minutos y centrifugar por 3000 rpm Verificar la idoneidad del

suero o plasma ictericia presencia de coaacutegulos filamentos de fibrina

turbidez Sentildealar eventualmente en el resultado la no idoneidad de la

muestra

Metoacutedicas de determinacioacuten

Meacutetodo cineacutetico enzimaacutetico

El meacutetodo enzimaacutetico colorimeacutetrico consiste en la medida del color

desarrollado con el reactivo de Jaffe antes y despueacutes de una reaccioacuten

con la enzima especiacutefica la creatincinasa esta enzima transforma la

creatinina en creatina con medida final a 340 nm de la creatina

Meacutetodo colorimeacutetrico y procedimiento analiacutetico

Ademaacutes de la determinacioacuten de la creatinina con una teacutecnica de punto

final maacutes frecuentemente se utiliza una teacutecnica cineacutetica en la cual la

creatinina en medio alcalino reacciona con picrato produciendo un

complejo coloreado rojo-naranja la diferencia de absorcioacuten durante el

tiempo de conversioacuten es directamente proporcional a la concentracioacuten

de creatinina en la muestra

Creatinina + aacutecido piacutecrico mdashmdashmdashgt creatinina picrato (complejo)

Materiales

1048664 Guantes descartables no esteacuteriles

1048664 Tubos de ensayo 13 x 100 mm

1048664 Puntas de pipeta 10-100 ul

1048664 1048664 Puntas de pipeta 100-1000 ul

1048664 1048664 Centriacutefuga

1048664 Espectrofotoacutemetro

1048664 Bantildeo Mariacutea

1048664 Reloj marcador

1048664 Pipetas automaacuteticas 10-100 ul

1048664 Pipetas automaacuteticas 100-1000 ul

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Procedimiento

Seguir las instrucciones de la casa comercial

Control de Calidad

Se deberaacuten usar sueros control normal y patoloacutegico en las mismas

condiciones que las muestras

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

La metoacutedica es especiacutefica para la creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el meacutetodo Jaffe es necesario corregir el valor de

03 mgdl para lograr valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias maacutes significativas son

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Algunos antibioacuteticos como las cefalosporinas pueden dar valores

falsamente elevados

Valor de referencia

Hombres Hasta 13 mgdl

Mujeres Hasta 11 mgdl

Neonatos o nintildeos Hasta 07 mgdl

Criterios de validacioacuten

Confrontar paraacutemetros de funcionalidad renal (urea potasio proteiacutenas

densidad urinaria)

Confrontar paraacutemetros de equilibrio electroliacuteticos (sodio potasio cloro)

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de

embarazo

Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)

DEPURACION DE CREATININA

Generalidad

La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la

filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del

metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina

y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina

es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es

proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera

desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales

puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la

concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero

empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de

60 ml por minuto

La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un

determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la

concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la

creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina

en un minuto de tiempo)

C= U x VP (mlmin)

donde

C= aclaramiento

U= concentracioacuten de creatinina en la orina

V= volumen de la orina eliminada

P= concentracioacuten de creatinina en el plasma

Indicaciones

La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el

valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la

creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de

funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la

urea

El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la

enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico

obstruccioacuten de la viacutea renal)

Preparacioacuten del paciente

Ayuno

Modalidad de la toma de muestra

A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento

Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco

de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un

estabilizante si es necesario

Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente

a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la

orina

b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas

c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda

la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC

Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada

inmediatamente al laboratorio

B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma

de muestra de sangre

Transporte

La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de

sangre a temperatura ambiente

Conservacioacuten

Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede

conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y

6 meses en congelacioacuten

Conservar las orinas a 2-4degC

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Verificacioacuten de la muestra

Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto

Metoacutedica de determinacioacuten

Cu x Vmin

Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash

Ps

donde

Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl

Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl

Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)

Procedimiento analiacutetico

Ver metoacutedica de la creatinina

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el

meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr

valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias significativas se deben

Para las orinas

Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)

Mala recoleccioacuten de orina

Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos

Para la sangre

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Valor de referencia

ge70mlmin

PRACTICA 4

EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO

PROPOacuteSITO

Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares

cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin

de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten

en diferente localizacioacuten

MUESTRA REQUERIDA

15 mL de orina

MATERIALES

- Tubos coacutenicos de 15 mL

- Laacuteminas portaobjetos

- Laminillas cubreobjetos

- Marcador para vidrio

- Gradillas para tubos

- Guantes descartables

EQUIPO

- Reloj marcador

- Centriacutefuga

- Microscopio

PROCEDIMIENTO

- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm

- Descartar el liacutequido sobrenadante

- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto

- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del

sedimento

- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x

- Anotar lo observado

FUENTES DE ERROR

- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios

- Desecacioacuten del sedimento urinario

-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten

microscoacutepica

- Uso excesivo de luz

- Centrifugacioacuten inadecuada

FORMA DE REPORTE

CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas

moderadas o abundantes

GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros

hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos

Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo

FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes

CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de

calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de

amonio leucina cistina y tirosina

Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes

LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes

PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis

huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces

BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes

solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo

Valores de referencia

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas

CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse

GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse

LEUCOCITOS 0-5 por campo

CILINDROS No deben observarse

FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse

CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a

moderada cantidad

LEVADURAS No deben observarse

PARAacuteSITOS No deben observarse

BACTERIAS Escasas o no presentes

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

PRACTICA 6

UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO

Condiciones generales

La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta

razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber

sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su

procesamiento

Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin

sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten

incorrecta o demora en la siembra

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO

Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos

a) Guantes de laacutetex esteacuteriles

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo

ser de 4rdquo x 4rdquo

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina

Procedimiento

a) Mantener la privacidad de la paciente

b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la

muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos

humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas

maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea

expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes

f) Descartar la gasa

g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el

procedimiento con otra gasa

h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca

i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar

Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio

j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la

superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente

Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones

Materiales

a) Guantes de laacutetex

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra

Procedimiento

a) Mantener la privacidad del paciente

b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra

hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten

Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande

con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra

gasa

g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca

h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten

directamente en un recipiente (orina para descartar)

i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del

chorro medio

j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio

SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA

Objetivo

Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina

Campo de aplicacioacuten

Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de

infecciones del tracto urinario

Materiales y equipos

a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL

b) Estufa de 35 ndash 37 degC

c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar

d) Guantes de laacutetex

e) Contenedor de material contaminado

f) Pinza esteacuteril

g) Propipeta o pipetor automaacutetico

h) Medios de cultivo

ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)

ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)

Procedimiento

a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por

cultivo

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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del

mechero Bunsen

c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a

temperatura ambiente Rotular las placas

d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola

en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa

e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del

frasco en el mechero Bunsen

f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y

sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra

g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra

hacia delante y hacia atraacutes

h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos

perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa

i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey

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Lectura

a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar

incubar hasta las 48 horas

b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se

multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL

Interpretacioacuten

a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es

la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen

b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el

procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente

c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la

muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra

d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL

pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias

polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos

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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se

informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En

pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a

pocas colonias

IDENTIFICACION BACTERIANA

Lectura de cultivos en agar Mac Conkey

ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde

entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente

rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas

de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm

ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color

rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide

ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color

rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae

Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales

PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados

erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de

hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Utilizacioacuten de hidratos de carbono

ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)

Abreviatura (A)

ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura (A)

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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

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Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 2: Guia de Practicas de Uroanalisis

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PRACTICA 1

EXAMEN FISICO DE LA ORINA

PROPOacuteSITO

Por medio de la observacioacuten directa de la muestra de orina determinar el color y el

aspecto de eacutesta lo cual puede sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras

enfermedades que esteacuten en diferente localizacioacuten pero que sus manifestaciones

secundarias son a nivel del rintildeoacuten

MUESTRA REQUERIDA

30 mL de orina Preferible la primera de la mantildeana 10 mL de orina en muestra de

nintildeos

MATERIALES

- Frascos plaacutesticos transparente de boca ancha con capacidad de 30 mL

- Bolsa pediaacutetrica recolectora de orina

- Papel toalla

- Marcador de vidrio

- Guantes descartables

PROCEDIMIENTO

- Verificar que el frasco esteacute bien identificado y completamente tapado

- Agitar en forma circular sobre la mesa de trabajo

- Observar color y aspecto

- Anotar lo observado

FUENTES DE ERROR

- Frascos sucios

- Toma de muestra inadecuada

- Muestras medicamentosas

- Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten (no mayor

de 2 horas)

FORMA DE REPORTE

Valores de referencia

COLOR Amarillo

ASPECTO Transparente limpia

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63 E PRACTICA 2

EXAMEN QUIMICO DE LA ORINA

XAMEN QUIacuteMICO DE ORINAPROPOacuteSITO

Determinar las sustancias quiacutemicas presentes en una muestra de orina asiacute como

su densidad y

pH a traveacutes de las zonas de reaccioacuten presentes en una tira reactiva

MUESTRA REQUERIDA

30 ml de orina Preferible la primera de la mantildeana 10mL de orina en muestra de

nintildeos

MATERIALES Y REACTIVOS

- Frascos plaacutesticos transparente de boca ancha con capacidad de 30 mL

- Bolsa pediaacutetrica recolectora de orina

- Tubos coacutenicos con capacidad de 15 ml

- Gradilla para tubos

- Papel toalla

- Marcador de vidrio

- Guantes descartables

- Tiras reactivas para orina

PROCEDIMIENTO

- Identificar el tubo coacutenico

- Agitar la muestra de orina en forma circular sobre la mesa de trabajo

- Verter la orina en el tubo coacutenico

- Introducir la tira reactiva en la orina

- Eliminar el exceso de orina colocando la tira sobre un papel absorbente

- Esperar el tiempo recomendado por el fabricante para su lectura

- Anotar los resultados

Los cambios de color que aparecen despueacutes de dos oacute maacutes minutos carecen de

importancia diagnoacutestica

FUENTES DE ERROR

- Muestras medicamentosas

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- Frascos y tubos mal lavados

- Tiras reactivas de mala calidad o vencidas

- Cortar las tiras reactivas

- Leer las tiras reactivas despueacutes del tiempo indicado por el fabricante

FORMA DE REPORTE

pH de 5 a 9

DENSIDAD de 1000 a 1030

LEUCOCITOS 0 a 500 Leucocitos por μl

NITRITOS Positivo oacute Negativo

PROTEIacuteNA 0 a 1000 mg por dL

GLUCOSA 0 - 1000 mg por dL

CUERPOS CETOacuteNICOS de una cruz a tres cruces

UROBILINOacuteGENO de lt1 a 12 mg por dL

BILIRRUBINA de una cruz a tres cruces

SANGREHEMOGLOBINA de 0 a 250 eritrocitos por μL

Siempre que en la tira reactiva no se observe un cambio de color se reportaraacute

como negativo

Valores de referencia

pH de 5 a 6

DENSIDAD de 1005 a 1010

LEUCOCITOS 0 Leucocitos por μl

NITRITOS Negativo

PROTEIacuteNA 0 mg por dL

GLUCOSA 0 mg por dL

CUERPOS CETOacuteNICOS Negativo

UROBILINOacuteGENO lt1 mg por dL

BILIRRUBINA Negativa

SANGRE 0 eritrocitos por μL

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DETERMINACION DE PROTEINURIA

AacuteCIDO SULFOSALICIacuteLICO

Esta teacutecnica se basa en la utilizacioacuten de aacutecido sulfosaliciacutelico cuya propiedad es

precipitar proteiacutenas en ausencia de calor Para esta prueba se usa el reactivo de

Exton en cuya composicioacuten se encuentra dicho aacutecido

Reactivo de Exton

Disolver 88g de sulfato de sodio en 600 ml de agua destilada con ayuda de calor

Enfriar Luego agregar 50 g de aacutecido sulfosaliciacutelico y diluir a 1000 ml

Procedimiento

1-Centrifugar una aliacutecuota de orina y luego utilizar el liacutequido sobrenadante

liacutempido

2- En un tubo de ensayo colocar voluacutemenes iguales del sobrenadante y del

reactivo de Exton Mezclar por inversioacuten y apreciar la turbidez

Interpretar de acuerdo a las siguientes pautas

Negativo No existe turbidez

Trazas Turbidez visible sobre fondo negro

1(+) Se observa turbidez pero no es granular

2(++) Se observa turbidez y es granular

3(+++) La turbidez es considerable y existe aglutinacioacuten

4(++++) Nubosidad densa con masas aglutinadas de gran tamantildeo

El procedimiento de Exton es maacutes sensible que el meacutetodo de las tiras reactivas

Pueden observarse falsos positivos en los tratamientos con tolbutamina penicilina

sulfamidas y despueacutes de la administracioacuten de sustancias de contraste radioloacutegico

Asimismo las orinas muy alcalinas suelen dar resultados negativos falsos

PRUEBA DEL ACIDO ACETICO Y CALOR

Se basa en la precipitacioacuten de proteiacutenas llevando el pH de la orina al valor del

punto isoeleacutectrico al agregar el aacutecido aceacutetico Tambieacuten el calor torna a las

proteiacutenas insolubles provocando su coagulacioacuten

Procedimiento

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

1- Centrifugar 10 ml de orina y luego separar el sobrenadante a un tubo de

ensayo El tubo debe estar lleno en las 23 partes

2-Hervir la parte superior del tubo por 2 minutos a la llama ( El tubo debe ser

sostenido formando un aacutengulo sobre la llama y apuntando en direccioacuten opuestas al

cuerpo) Si aparece turbidez puede deberse a la presencia de proteiacutenas fosfatos

y carbonatos

3- Agregar 3 a 5 gotas de aacutecido aceacutetico al 5 o 10 y volver a hervir la parte

superior del tubo a la llama El aacutecido disolveraacute los fosfatos o carbonatos que

puede ser la causa de la turbidez Ademaacutes disminuye el pH llevaacutendolo maacutes

proacuteximo al punto isoeleacutectrico de las proteiacutenas y en consecuencia eacutestas precipitan

aumentando la turbidez

4- Los resultados seraacute dados con la misma escala del reactivo de Exton

Esta teacutecnica detecta albuacuteminas globulinas mucoproteiacutenas e incluso las proteiacutenas

de Bence Jones La hemoglobina y la mioglobina no precipitan con este meacutetodo

La tolbutamida dosis elevadas de penicilina y sustancias de contraste radioloacutegico

pueden resultados positivos falsos Orinas muy alcalinas y orinas muy diluidas

pueden dar resultados negativos falsos

DETERMINACION DE GLUCOSURIA

TECNICA DE BENEDICT

Tiene como fundamento la reduccioacuten del ioacuten cuacuteprico color azul a cuproso que da

un precipitado rojo ladrillo en presencia de glucosa en caliente y en medio alcalino

fuerte

Reactivo

Sulfato de cobre 173 g

Citrato de sodio o de potasio 173g

Cristales de carbonato de sodio 200g

O carbonato de sodio anhiacutedro 100g

Agua destilada para completar 1000ml

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Disolver el citrato y el carbonato en 700ml de agua con ayuda de calor Filtrar y

disolver con el sulfato de cobre en aprox 100ml de agua caliente y vertirlo en la

solucioacuten de citrato-carbonato revolviendo Dejar que se enfriacutee antes de diluir hasta

completar los 1000 ml con agua

Procedimiento

1-Colocar 5ml del reactivo de Benedict en un tubo de ensayo

2- Agregar 8 gotas de orina Mezclar por inversioacuten

3- Llevar el tubo con la mezcla preparada a bantildeo Mariacutea durante 5 minutos o

calentar a la llama hasta su ebullicioacuten durante 1 a 2 minutos

4- Dejar que se enfriacutee lentamente

Se informa de acuerdo a las pautas correspondientes

Negativa Color azul claro puede formarse un precipitado azul

Trazas Color verde azulado

1(+) Color verde precipitado verde o amarillo

2(++) Color amarillo a verde precipitado amarillo

3(+++) Color amarillo-anaranjado precipitado amarillo-anaranjado

4 (++++) Color amarillo-rojizoprecipitado rojo ladrillo o rojo

Este procedimiento es sensible y de puede detectar hasta concentraciones de

002 Dosis aumentadas de penicilina estreptomicina salicilatos

oxitetraciclinas polivinilpirrolidona dextraacuten y el aacutecido p-aminosaliciacutelico dan

reacciones positivos falsos Los conservadores con formalina y formaldehiacutedo

pueden dar lugar tambieacuten a falsos positivos

INVESTIGACION DE CUERPOS CETONICOS

REACCION DE ROTHERA

Es una teacutecnica que usa nitroprusiano y permite la formacioacuten de un anillo Permite

la determinacioacuten del aacutecido diaceacuteticoacetona no permite la deteccioacuten del aacutecido B-

hidroxibutiacuterico

Reactivos

1) Reactivo de Rothera compuesta por 75 g de nitroprusiato de sodio y

200mg de sulfato de amonio

2) Hidroacutexido de amonio concentrado

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Procedimiento

1) En un tubo de ensayo agregar 1g de reactivo de Rothera con 5 ml de orina

Mezclar por inversioacuten

2) Luego agregar 1ml de hidroacutexido de amonio concentrado

3) Si la prueba es positiva se forma un anillo rojo a puacuterpura en el tiempo de

112 minuto en el punto de contacto

Dar los resultados seguacuten la siguiente pauta

Negativa No se forma el anillo o la formacioacuten de un anillo marroacuten

Trazas La formacioacuten de un anillo puacuterpura o de color rosado

2(+) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro estrecho limitado

4 (++++) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro extenso

DETECCION DE SANGRE EN ORINA (SANGRE OCULTA)

PRUEBA DE BENCIDINA

Reactivo A

Solucioacuten de Bencidina al 1 en aacutecido aceacutetico al 50

Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes

Procedimiento

En un tubo o sobre un papel filtro( en este caso ldquomancharrdquo el papel con la muestra

en estudio)

2 ndash 4 gotas de bencidina

Agregar 2 ndash 4 gotas de peroacutexido de hidroacutegeno (agua oxigenada)

Interpretacioacuten

Si existe sangre se formaraacute un halo verde azulado

Negativo halo marroacuten

Reactivo B

Solucioacuten de Piramidoacuten al 5 en aacutecido aceacutetico al 50

Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes

La solucioacuten de piramidoacuten puede ser preparada sin aacutecido aceacutetico por lo tanto el

orden de uso es piramidoacuten acido aceacutetico agua oxigenada Resultado

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

DETERMINACION DE BILIRRUBINA Y UROBILINOGENO

REACCION DEL YODO DE SMITH (BILIRRUBINAS)

En un tubo de ensayo colocar 5ml de orina aacutecida y cubrirla con 2ml de una

solucioacuten de yodo al 07 en alcohopl etiacutelico al 95 La presencia de un anillo de

color verde esmeralda en la interfase de ambos liacutequidos indica la presencia de

bilirrubina

La deteccioacuten de urobilinoacutegeno en orina tambieacuten indican un problema hepaacutetico Uno

de los problemas importantes en la deteccioacuten de urobilinoacutegeno

REACCION CUANTITATIVA DE EHRLICH

Reactivo de Ehrlich

p-dimetilanminobenzaldehiacutedo 10g

HCl concentrado 75ml

Agua destilada 75ml

Procedimiento

1- Colocar 10ml de orina en un tubo de ensayo recieacuten emitida

2- Agregar 1ml del reactivo de Ehrlich

3- Dejar en reposo durante 5 minutos

La presencia urobilinoacutegeno determina que la solucioacuten cambie de color niveles

altos y dan un color rojo cereza

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E PRACTICA 3

DEPURACION DE CREATININACREATININA Generalidad

La creatinina es una sustancia que deriva del metabolismo muscular

(muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina y representa el

subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina es independiente

de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es proporcional dentro

de ciertos liacutemites a la masa muscular Se libera de los glomeacuterulos y no

es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales puede ser excretada

especialmente cuando se aumenta la concentracioacuten hemaacutetica El

aumento de la creatinina en el suero empieza a ser evidente cuando el

filtrado glomerular es por debajo de 60 ml por minuto

Indicaciones

La determinacioacuten de la cratinina es utilizada en el diagnoacutestico de las

enfermedades renales agudas o croacutenicas y tambieacuten para el monitoreo

de la diaacutelisis renal El aumento de la creatinina es un iacutendice de la

insuficiencia glomerular en cuanto eacutesta es eliminada por filtracioacuten

glomerular Mientras la uremia en la sangre puede ser controlada a

traveacutes de una oportuna dieta la creatinina se correlaciona casi

exclusivamente a la eficiencia de la filtracioacuten glomerular La creatinina

representa el iacutendice maacutes fiel de la insuficiencia renal

Preparacioacuten del paciente

Ayuno

Modalidad de la toma de muestra

Ninguna particularidad

Transporte

Transportar a temperatura ambiente

Conservacioacuten

Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede

conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y

6 meses en congelacioacuten

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Centrifugacioacuten

Poner el tubo de ensayo en la centriacutefuga de modo balanceado poner el

reloj 5 minutos y centrifugar por 3000 rpm Verificar la idoneidad del

suero o plasma ictericia presencia de coaacutegulos filamentos de fibrina

turbidez Sentildealar eventualmente en el resultado la no idoneidad de la

muestra

Metoacutedicas de determinacioacuten

Meacutetodo cineacutetico enzimaacutetico

El meacutetodo enzimaacutetico colorimeacutetrico consiste en la medida del color

desarrollado con el reactivo de Jaffe antes y despueacutes de una reaccioacuten

con la enzima especiacutefica la creatincinasa esta enzima transforma la

creatinina en creatina con medida final a 340 nm de la creatina

Meacutetodo colorimeacutetrico y procedimiento analiacutetico

Ademaacutes de la determinacioacuten de la creatinina con una teacutecnica de punto

final maacutes frecuentemente se utiliza una teacutecnica cineacutetica en la cual la

creatinina en medio alcalino reacciona con picrato produciendo un

complejo coloreado rojo-naranja la diferencia de absorcioacuten durante el

tiempo de conversioacuten es directamente proporcional a la concentracioacuten

de creatinina en la muestra

Creatinina + aacutecido piacutecrico mdashmdashmdashgt creatinina picrato (complejo)

Materiales

1048664 Guantes descartables no esteacuteriles

1048664 Tubos de ensayo 13 x 100 mm

1048664 Puntas de pipeta 10-100 ul

1048664 1048664 Puntas de pipeta 100-1000 ul

1048664 1048664 Centriacutefuga

1048664 Espectrofotoacutemetro

1048664 Bantildeo Mariacutea

1048664 Reloj marcador

1048664 Pipetas automaacuteticas 10-100 ul

1048664 Pipetas automaacuteticas 100-1000 ul

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Procedimiento

Seguir las instrucciones de la casa comercial

Control de Calidad

Se deberaacuten usar sueros control normal y patoloacutegico en las mismas

condiciones que las muestras

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

La metoacutedica es especiacutefica para la creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el meacutetodo Jaffe es necesario corregir el valor de

03 mgdl para lograr valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias maacutes significativas son

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Algunos antibioacuteticos como las cefalosporinas pueden dar valores

falsamente elevados

Valor de referencia

Hombres Hasta 13 mgdl

Mujeres Hasta 11 mgdl

Neonatos o nintildeos Hasta 07 mgdl

Criterios de validacioacuten

Confrontar paraacutemetros de funcionalidad renal (urea potasio proteiacutenas

densidad urinaria)

Confrontar paraacutemetros de equilibrio electroliacuteticos (sodio potasio cloro)

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Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de

embarazo

Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)

DEPURACION DE CREATININA

Generalidad

La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la

filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del

metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina

y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina

es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es

proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera

desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales

puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la

concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero

empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de

60 ml por minuto

La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un

determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la

concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la

creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina

en un minuto de tiempo)

C= U x VP (mlmin)

donde

C= aclaramiento

U= concentracioacuten de creatinina en la orina

V= volumen de la orina eliminada

P= concentracioacuten de creatinina en el plasma

Indicaciones

La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el

valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la

creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la

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creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de

funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la

urea

El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la

enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico

obstruccioacuten de la viacutea renal)

Preparacioacuten del paciente

Ayuno

Modalidad de la toma de muestra

A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento

Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco

de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un

estabilizante si es necesario

Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente

a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la

orina

b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas

c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda

la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC

Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada

inmediatamente al laboratorio

B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma

de muestra de sangre

Transporte

La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de

sangre a temperatura ambiente

Conservacioacuten

Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede

conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y

6 meses en congelacioacuten

Conservar las orinas a 2-4degC

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Verificacioacuten de la muestra

Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto

Metoacutedica de determinacioacuten

Cu x Vmin

Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash

Ps

donde

Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl

Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl

Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)

Procedimiento analiacutetico

Ver metoacutedica de la creatinina

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el

meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr

valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias significativas se deben

Para las orinas

Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)

Mala recoleccioacuten de orina

Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos

Para la sangre

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Valor de referencia

ge70mlmin

PRACTICA 4

EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO

PROPOacuteSITO

Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares

cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin

de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten

en diferente localizacioacuten

MUESTRA REQUERIDA

15 mL de orina

MATERIALES

- Tubos coacutenicos de 15 mL

- Laacuteminas portaobjetos

- Laminillas cubreobjetos

- Marcador para vidrio

- Gradillas para tubos

- Guantes descartables

EQUIPO

- Reloj marcador

- Centriacutefuga

- Microscopio

PROCEDIMIENTO

- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm

- Descartar el liacutequido sobrenadante

- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano

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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto

- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del

sedimento

- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x

- Anotar lo observado

FUENTES DE ERROR

- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios

- Desecacioacuten del sedimento urinario

-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten

microscoacutepica

- Uso excesivo de luz

- Centrifugacioacuten inadecuada

FORMA DE REPORTE

CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas

moderadas o abundantes

GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros

hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos

Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo

FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes

CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de

calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de

amonio leucina cistina y tirosina

Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes

LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes

PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis

huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces

BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes

solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo

Valores de referencia

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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas

CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse

GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse

LEUCOCITOS 0-5 por campo

CILINDROS No deben observarse

FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse

CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a

moderada cantidad

LEVADURAS No deben observarse

PARAacuteSITOS No deben observarse

BACTERIAS Escasas o no presentes

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PRACTICA 6

UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO

Condiciones generales

La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta

razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber

sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su

procesamiento

Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin

sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten

incorrecta o demora en la siembra

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO

Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos

a) Guantes de laacutetex esteacuteriles

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo

ser de 4rdquo x 4rdquo

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina

Procedimiento

a) Mantener la privacidad de la paciente

b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la

muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos

humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas

maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea

expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes

f) Descartar la gasa

g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el

procedimiento con otra gasa

h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca

i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar

Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio

j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la

superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente

Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones

Materiales

a) Guantes de laacutetex

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra

Procedimiento

a) Mantener la privacidad del paciente

b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra

hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten

Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande

con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa

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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra

gasa

g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca

h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten

directamente en un recipiente (orina para descartar)

i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del

chorro medio

j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio

SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA

Objetivo

Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina

Campo de aplicacioacuten

Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de

infecciones del tracto urinario

Materiales y equipos

a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL

b) Estufa de 35 ndash 37 degC

c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar

d) Guantes de laacutetex

e) Contenedor de material contaminado

f) Pinza esteacuteril

g) Propipeta o pipetor automaacutetico

h) Medios de cultivo

ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)

ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)

Procedimiento

a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por

cultivo

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del

mechero Bunsen

c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a

temperatura ambiente Rotular las placas

d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola

en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa

e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del

frasco en el mechero Bunsen

f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y

sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra

g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra

hacia delante y hacia atraacutes

h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos

perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa

i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Lectura

a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar

incubar hasta las 48 horas

b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se

multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL

Interpretacioacuten

a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es

la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen

b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el

procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente

c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la

muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra

d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL

pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias

polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se

informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En

pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a

pocas colonias

IDENTIFICACION BACTERIANA

Lectura de cultivos en agar Mac Conkey

ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde

entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente

rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas

de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm

ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color

rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide

ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color

rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae

Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales

PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados

erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de

hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Utilizacioacuten de hidratos de carbono

ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)

Abreviatura (A)

ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura (A)

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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

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Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
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63 E PRACTICA 2

EXAMEN QUIMICO DE LA ORINA

XAMEN QUIacuteMICO DE ORINAPROPOacuteSITO

Determinar las sustancias quiacutemicas presentes en una muestra de orina asiacute como

su densidad y

pH a traveacutes de las zonas de reaccioacuten presentes en una tira reactiva

MUESTRA REQUERIDA

30 ml de orina Preferible la primera de la mantildeana 10mL de orina en muestra de

nintildeos

MATERIALES Y REACTIVOS

- Frascos plaacutesticos transparente de boca ancha con capacidad de 30 mL

- Bolsa pediaacutetrica recolectora de orina

- Tubos coacutenicos con capacidad de 15 ml

- Gradilla para tubos

- Papel toalla

- Marcador de vidrio

- Guantes descartables

- Tiras reactivas para orina

PROCEDIMIENTO

- Identificar el tubo coacutenico

- Agitar la muestra de orina en forma circular sobre la mesa de trabajo

- Verter la orina en el tubo coacutenico

- Introducir la tira reactiva en la orina

- Eliminar el exceso de orina colocando la tira sobre un papel absorbente

- Esperar el tiempo recomendado por el fabricante para su lectura

- Anotar los resultados

Los cambios de color que aparecen despueacutes de dos oacute maacutes minutos carecen de

importancia diagnoacutestica

FUENTES DE ERROR

- Muestras medicamentosas

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- Frascos y tubos mal lavados

- Tiras reactivas de mala calidad o vencidas

- Cortar las tiras reactivas

- Leer las tiras reactivas despueacutes del tiempo indicado por el fabricante

FORMA DE REPORTE

pH de 5 a 9

DENSIDAD de 1000 a 1030

LEUCOCITOS 0 a 500 Leucocitos por μl

NITRITOS Positivo oacute Negativo

PROTEIacuteNA 0 a 1000 mg por dL

GLUCOSA 0 - 1000 mg por dL

CUERPOS CETOacuteNICOS de una cruz a tres cruces

UROBILINOacuteGENO de lt1 a 12 mg por dL

BILIRRUBINA de una cruz a tres cruces

SANGREHEMOGLOBINA de 0 a 250 eritrocitos por μL

Siempre que en la tira reactiva no se observe un cambio de color se reportaraacute

como negativo

Valores de referencia

pH de 5 a 6

DENSIDAD de 1005 a 1010

LEUCOCITOS 0 Leucocitos por μl

NITRITOS Negativo

PROTEIacuteNA 0 mg por dL

GLUCOSA 0 mg por dL

CUERPOS CETOacuteNICOS Negativo

UROBILINOacuteGENO lt1 mg por dL

BILIRRUBINA Negativa

SANGRE 0 eritrocitos por μL

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DETERMINACION DE PROTEINURIA

AacuteCIDO SULFOSALICIacuteLICO

Esta teacutecnica se basa en la utilizacioacuten de aacutecido sulfosaliciacutelico cuya propiedad es

precipitar proteiacutenas en ausencia de calor Para esta prueba se usa el reactivo de

Exton en cuya composicioacuten se encuentra dicho aacutecido

Reactivo de Exton

Disolver 88g de sulfato de sodio en 600 ml de agua destilada con ayuda de calor

Enfriar Luego agregar 50 g de aacutecido sulfosaliciacutelico y diluir a 1000 ml

Procedimiento

1-Centrifugar una aliacutecuota de orina y luego utilizar el liacutequido sobrenadante

liacutempido

2- En un tubo de ensayo colocar voluacutemenes iguales del sobrenadante y del

reactivo de Exton Mezclar por inversioacuten y apreciar la turbidez

Interpretar de acuerdo a las siguientes pautas

Negativo No existe turbidez

Trazas Turbidez visible sobre fondo negro

1(+) Se observa turbidez pero no es granular

2(++) Se observa turbidez y es granular

3(+++) La turbidez es considerable y existe aglutinacioacuten

4(++++) Nubosidad densa con masas aglutinadas de gran tamantildeo

El procedimiento de Exton es maacutes sensible que el meacutetodo de las tiras reactivas

Pueden observarse falsos positivos en los tratamientos con tolbutamina penicilina

sulfamidas y despueacutes de la administracioacuten de sustancias de contraste radioloacutegico

Asimismo las orinas muy alcalinas suelen dar resultados negativos falsos

PRUEBA DEL ACIDO ACETICO Y CALOR

Se basa en la precipitacioacuten de proteiacutenas llevando el pH de la orina al valor del

punto isoeleacutectrico al agregar el aacutecido aceacutetico Tambieacuten el calor torna a las

proteiacutenas insolubles provocando su coagulacioacuten

Procedimiento

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1- Centrifugar 10 ml de orina y luego separar el sobrenadante a un tubo de

ensayo El tubo debe estar lleno en las 23 partes

2-Hervir la parte superior del tubo por 2 minutos a la llama ( El tubo debe ser

sostenido formando un aacutengulo sobre la llama y apuntando en direccioacuten opuestas al

cuerpo) Si aparece turbidez puede deberse a la presencia de proteiacutenas fosfatos

y carbonatos

3- Agregar 3 a 5 gotas de aacutecido aceacutetico al 5 o 10 y volver a hervir la parte

superior del tubo a la llama El aacutecido disolveraacute los fosfatos o carbonatos que

puede ser la causa de la turbidez Ademaacutes disminuye el pH llevaacutendolo maacutes

proacuteximo al punto isoeleacutectrico de las proteiacutenas y en consecuencia eacutestas precipitan

aumentando la turbidez

4- Los resultados seraacute dados con la misma escala del reactivo de Exton

Esta teacutecnica detecta albuacuteminas globulinas mucoproteiacutenas e incluso las proteiacutenas

de Bence Jones La hemoglobina y la mioglobina no precipitan con este meacutetodo

La tolbutamida dosis elevadas de penicilina y sustancias de contraste radioloacutegico

pueden resultados positivos falsos Orinas muy alcalinas y orinas muy diluidas

pueden dar resultados negativos falsos

DETERMINACION DE GLUCOSURIA

TECNICA DE BENEDICT

Tiene como fundamento la reduccioacuten del ioacuten cuacuteprico color azul a cuproso que da

un precipitado rojo ladrillo en presencia de glucosa en caliente y en medio alcalino

fuerte

Reactivo

Sulfato de cobre 173 g

Citrato de sodio o de potasio 173g

Cristales de carbonato de sodio 200g

O carbonato de sodio anhiacutedro 100g

Agua destilada para completar 1000ml

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Disolver el citrato y el carbonato en 700ml de agua con ayuda de calor Filtrar y

disolver con el sulfato de cobre en aprox 100ml de agua caliente y vertirlo en la

solucioacuten de citrato-carbonato revolviendo Dejar que se enfriacutee antes de diluir hasta

completar los 1000 ml con agua

Procedimiento

1-Colocar 5ml del reactivo de Benedict en un tubo de ensayo

2- Agregar 8 gotas de orina Mezclar por inversioacuten

3- Llevar el tubo con la mezcla preparada a bantildeo Mariacutea durante 5 minutos o

calentar a la llama hasta su ebullicioacuten durante 1 a 2 minutos

4- Dejar que se enfriacutee lentamente

Se informa de acuerdo a las pautas correspondientes

Negativa Color azul claro puede formarse un precipitado azul

Trazas Color verde azulado

1(+) Color verde precipitado verde o amarillo

2(++) Color amarillo a verde precipitado amarillo

3(+++) Color amarillo-anaranjado precipitado amarillo-anaranjado

4 (++++) Color amarillo-rojizoprecipitado rojo ladrillo o rojo

Este procedimiento es sensible y de puede detectar hasta concentraciones de

002 Dosis aumentadas de penicilina estreptomicina salicilatos

oxitetraciclinas polivinilpirrolidona dextraacuten y el aacutecido p-aminosaliciacutelico dan

reacciones positivos falsos Los conservadores con formalina y formaldehiacutedo

pueden dar lugar tambieacuten a falsos positivos

INVESTIGACION DE CUERPOS CETONICOS

REACCION DE ROTHERA

Es una teacutecnica que usa nitroprusiano y permite la formacioacuten de un anillo Permite

la determinacioacuten del aacutecido diaceacuteticoacetona no permite la deteccioacuten del aacutecido B-

hidroxibutiacuterico

Reactivos

1) Reactivo de Rothera compuesta por 75 g de nitroprusiato de sodio y

200mg de sulfato de amonio

2) Hidroacutexido de amonio concentrado

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Procedimiento

1) En un tubo de ensayo agregar 1g de reactivo de Rothera con 5 ml de orina

Mezclar por inversioacuten

2) Luego agregar 1ml de hidroacutexido de amonio concentrado

3) Si la prueba es positiva se forma un anillo rojo a puacuterpura en el tiempo de

112 minuto en el punto de contacto

Dar los resultados seguacuten la siguiente pauta

Negativa No se forma el anillo o la formacioacuten de un anillo marroacuten

Trazas La formacioacuten de un anillo puacuterpura o de color rosado

2(+) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro estrecho limitado

4 (++++) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro extenso

DETECCION DE SANGRE EN ORINA (SANGRE OCULTA)

PRUEBA DE BENCIDINA

Reactivo A

Solucioacuten de Bencidina al 1 en aacutecido aceacutetico al 50

Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes

Procedimiento

En un tubo o sobre un papel filtro( en este caso ldquomancharrdquo el papel con la muestra

en estudio)

2 ndash 4 gotas de bencidina

Agregar 2 ndash 4 gotas de peroacutexido de hidroacutegeno (agua oxigenada)

Interpretacioacuten

Si existe sangre se formaraacute un halo verde azulado

Negativo halo marroacuten

Reactivo B

Solucioacuten de Piramidoacuten al 5 en aacutecido aceacutetico al 50

Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes

La solucioacuten de piramidoacuten puede ser preparada sin aacutecido aceacutetico por lo tanto el

orden de uso es piramidoacuten acido aceacutetico agua oxigenada Resultado

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DETERMINACION DE BILIRRUBINA Y UROBILINOGENO

REACCION DEL YODO DE SMITH (BILIRRUBINAS)

En un tubo de ensayo colocar 5ml de orina aacutecida y cubrirla con 2ml de una

solucioacuten de yodo al 07 en alcohopl etiacutelico al 95 La presencia de un anillo de

color verde esmeralda en la interfase de ambos liacutequidos indica la presencia de

bilirrubina

La deteccioacuten de urobilinoacutegeno en orina tambieacuten indican un problema hepaacutetico Uno

de los problemas importantes en la deteccioacuten de urobilinoacutegeno

REACCION CUANTITATIVA DE EHRLICH

Reactivo de Ehrlich

p-dimetilanminobenzaldehiacutedo 10g

HCl concentrado 75ml

Agua destilada 75ml

Procedimiento

1- Colocar 10ml de orina en un tubo de ensayo recieacuten emitida

2- Agregar 1ml del reactivo de Ehrlich

3- Dejar en reposo durante 5 minutos

La presencia urobilinoacutegeno determina que la solucioacuten cambie de color niveles

altos y dan un color rojo cereza

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E PRACTICA 3

DEPURACION DE CREATININACREATININA Generalidad

La creatinina es una sustancia que deriva del metabolismo muscular

(muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina y representa el

subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina es independiente

de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es proporcional dentro

de ciertos liacutemites a la masa muscular Se libera de los glomeacuterulos y no

es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales puede ser excretada

especialmente cuando se aumenta la concentracioacuten hemaacutetica El

aumento de la creatinina en el suero empieza a ser evidente cuando el

filtrado glomerular es por debajo de 60 ml por minuto

Indicaciones

La determinacioacuten de la cratinina es utilizada en el diagnoacutestico de las

enfermedades renales agudas o croacutenicas y tambieacuten para el monitoreo

de la diaacutelisis renal El aumento de la creatinina es un iacutendice de la

insuficiencia glomerular en cuanto eacutesta es eliminada por filtracioacuten

glomerular Mientras la uremia en la sangre puede ser controlada a

traveacutes de una oportuna dieta la creatinina se correlaciona casi

exclusivamente a la eficiencia de la filtracioacuten glomerular La creatinina

representa el iacutendice maacutes fiel de la insuficiencia renal

Preparacioacuten del paciente

Ayuno

Modalidad de la toma de muestra

Ninguna particularidad

Transporte

Transportar a temperatura ambiente

Conservacioacuten

Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede

conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y

6 meses en congelacioacuten

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Centrifugacioacuten

Poner el tubo de ensayo en la centriacutefuga de modo balanceado poner el

reloj 5 minutos y centrifugar por 3000 rpm Verificar la idoneidad del

suero o plasma ictericia presencia de coaacutegulos filamentos de fibrina

turbidez Sentildealar eventualmente en el resultado la no idoneidad de la

muestra

Metoacutedicas de determinacioacuten

Meacutetodo cineacutetico enzimaacutetico

El meacutetodo enzimaacutetico colorimeacutetrico consiste en la medida del color

desarrollado con el reactivo de Jaffe antes y despueacutes de una reaccioacuten

con la enzima especiacutefica la creatincinasa esta enzima transforma la

creatinina en creatina con medida final a 340 nm de la creatina

Meacutetodo colorimeacutetrico y procedimiento analiacutetico

Ademaacutes de la determinacioacuten de la creatinina con una teacutecnica de punto

final maacutes frecuentemente se utiliza una teacutecnica cineacutetica en la cual la

creatinina en medio alcalino reacciona con picrato produciendo un

complejo coloreado rojo-naranja la diferencia de absorcioacuten durante el

tiempo de conversioacuten es directamente proporcional a la concentracioacuten

de creatinina en la muestra

Creatinina + aacutecido piacutecrico mdashmdashmdashgt creatinina picrato (complejo)

Materiales

1048664 Guantes descartables no esteacuteriles

1048664 Tubos de ensayo 13 x 100 mm

1048664 Puntas de pipeta 10-100 ul

1048664 1048664 Puntas de pipeta 100-1000 ul

1048664 1048664 Centriacutefuga

1048664 Espectrofotoacutemetro

1048664 Bantildeo Mariacutea

1048664 Reloj marcador

1048664 Pipetas automaacuteticas 10-100 ul

1048664 Pipetas automaacuteticas 100-1000 ul

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Procedimiento

Seguir las instrucciones de la casa comercial

Control de Calidad

Se deberaacuten usar sueros control normal y patoloacutegico en las mismas

condiciones que las muestras

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

La metoacutedica es especiacutefica para la creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el meacutetodo Jaffe es necesario corregir el valor de

03 mgdl para lograr valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias maacutes significativas son

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Algunos antibioacuteticos como las cefalosporinas pueden dar valores

falsamente elevados

Valor de referencia

Hombres Hasta 13 mgdl

Mujeres Hasta 11 mgdl

Neonatos o nintildeos Hasta 07 mgdl

Criterios de validacioacuten

Confrontar paraacutemetros de funcionalidad renal (urea potasio proteiacutenas

densidad urinaria)

Confrontar paraacutemetros de equilibrio electroliacuteticos (sodio potasio cloro)

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Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de

embarazo

Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)

DEPURACION DE CREATININA

Generalidad

La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la

filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del

metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina

y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina

es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es

proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera

desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales

puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la

concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero

empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de

60 ml por minuto

La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un

determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la

concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la

creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina

en un minuto de tiempo)

C= U x VP (mlmin)

donde

C= aclaramiento

U= concentracioacuten de creatinina en la orina

V= volumen de la orina eliminada

P= concentracioacuten de creatinina en el plasma

Indicaciones

La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el

valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la

creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la

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creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de

funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la

urea

El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la

enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico

obstruccioacuten de la viacutea renal)

Preparacioacuten del paciente

Ayuno

Modalidad de la toma de muestra

A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento

Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco

de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un

estabilizante si es necesario

Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente

a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la

orina

b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas

c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda

la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC

Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada

inmediatamente al laboratorio

B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma

de muestra de sangre

Transporte

La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de

sangre a temperatura ambiente

Conservacioacuten

Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede

conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y

6 meses en congelacioacuten

Conservar las orinas a 2-4degC

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Verificacioacuten de la muestra

Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto

Metoacutedica de determinacioacuten

Cu x Vmin

Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash

Ps

donde

Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl

Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl

Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)

Procedimiento analiacutetico

Ver metoacutedica de la creatinina

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el

meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr

valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias significativas se deben

Para las orinas

Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)

Mala recoleccioacuten de orina

Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos

Para la sangre

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Valor de referencia

ge70mlmin

PRACTICA 4

EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO

PROPOacuteSITO

Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares

cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin

de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten

en diferente localizacioacuten

MUESTRA REQUERIDA

15 mL de orina

MATERIALES

- Tubos coacutenicos de 15 mL

- Laacuteminas portaobjetos

- Laminillas cubreobjetos

- Marcador para vidrio

- Gradillas para tubos

- Guantes descartables

EQUIPO

- Reloj marcador

- Centriacutefuga

- Microscopio

PROCEDIMIENTO

- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm

- Descartar el liacutequido sobrenadante

- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano

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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto

- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del

sedimento

- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x

- Anotar lo observado

FUENTES DE ERROR

- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios

- Desecacioacuten del sedimento urinario

-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten

microscoacutepica

- Uso excesivo de luz

- Centrifugacioacuten inadecuada

FORMA DE REPORTE

CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas

moderadas o abundantes

GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros

hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos

Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo

FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes

CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de

calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de

amonio leucina cistina y tirosina

Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes

LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes

PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis

huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces

BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes

solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo

Valores de referencia

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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas

CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse

GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse

LEUCOCITOS 0-5 por campo

CILINDROS No deben observarse

FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse

CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a

moderada cantidad

LEVADURAS No deben observarse

PARAacuteSITOS No deben observarse

BACTERIAS Escasas o no presentes

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PRACTICA 6

UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO

Condiciones generales

La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta

razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber

sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su

procesamiento

Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin

sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten

incorrecta o demora en la siembra

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO

Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos

a) Guantes de laacutetex esteacuteriles

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo

ser de 4rdquo x 4rdquo

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina

Procedimiento

a) Mantener la privacidad de la paciente

b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la

muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos

humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas

maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea

expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes

f) Descartar la gasa

g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el

procedimiento con otra gasa

h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca

i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar

Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio

j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la

superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente

Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones

Materiales

a) Guantes de laacutetex

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra

Procedimiento

a) Mantener la privacidad del paciente

b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra

hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten

Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande

con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa

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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra

gasa

g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca

h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten

directamente en un recipiente (orina para descartar)

i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del

chorro medio

j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio

SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA

Objetivo

Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina

Campo de aplicacioacuten

Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de

infecciones del tracto urinario

Materiales y equipos

a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL

b) Estufa de 35 ndash 37 degC

c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar

d) Guantes de laacutetex

e) Contenedor de material contaminado

f) Pinza esteacuteril

g) Propipeta o pipetor automaacutetico

h) Medios de cultivo

ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)

ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)

Procedimiento

a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por

cultivo

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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del

mechero Bunsen

c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a

temperatura ambiente Rotular las placas

d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola

en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa

e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del

frasco en el mechero Bunsen

f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y

sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra

g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra

hacia delante y hacia atraacutes

h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos

perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa

i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey

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Lectura

a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar

incubar hasta las 48 horas

b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se

multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL

Interpretacioacuten

a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es

la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen

b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el

procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente

c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la

muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra

d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL

pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias

polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos

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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se

informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En

pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a

pocas colonias

IDENTIFICACION BACTERIANA

Lectura de cultivos en agar Mac Conkey

ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde

entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente

rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas

de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm

ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color

rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide

ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color

rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae

Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales

PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados

erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de

hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Utilizacioacuten de hidratos de carbono

ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)

Abreviatura (A)

ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura (A)

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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

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Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 4: Guia de Practicas de Uroanalisis

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- Frascos y tubos mal lavados

- Tiras reactivas de mala calidad o vencidas

- Cortar las tiras reactivas

- Leer las tiras reactivas despueacutes del tiempo indicado por el fabricante

FORMA DE REPORTE

pH de 5 a 9

DENSIDAD de 1000 a 1030

LEUCOCITOS 0 a 500 Leucocitos por μl

NITRITOS Positivo oacute Negativo

PROTEIacuteNA 0 a 1000 mg por dL

GLUCOSA 0 - 1000 mg por dL

CUERPOS CETOacuteNICOS de una cruz a tres cruces

UROBILINOacuteGENO de lt1 a 12 mg por dL

BILIRRUBINA de una cruz a tres cruces

SANGREHEMOGLOBINA de 0 a 250 eritrocitos por μL

Siempre que en la tira reactiva no se observe un cambio de color se reportaraacute

como negativo

Valores de referencia

pH de 5 a 6

DENSIDAD de 1005 a 1010

LEUCOCITOS 0 Leucocitos por μl

NITRITOS Negativo

PROTEIacuteNA 0 mg por dL

GLUCOSA 0 mg por dL

CUERPOS CETOacuteNICOS Negativo

UROBILINOacuteGENO lt1 mg por dL

BILIRRUBINA Negativa

SANGRE 0 eritrocitos por μL

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DETERMINACION DE PROTEINURIA

AacuteCIDO SULFOSALICIacuteLICO

Esta teacutecnica se basa en la utilizacioacuten de aacutecido sulfosaliciacutelico cuya propiedad es

precipitar proteiacutenas en ausencia de calor Para esta prueba se usa el reactivo de

Exton en cuya composicioacuten se encuentra dicho aacutecido

Reactivo de Exton

Disolver 88g de sulfato de sodio en 600 ml de agua destilada con ayuda de calor

Enfriar Luego agregar 50 g de aacutecido sulfosaliciacutelico y diluir a 1000 ml

Procedimiento

1-Centrifugar una aliacutecuota de orina y luego utilizar el liacutequido sobrenadante

liacutempido

2- En un tubo de ensayo colocar voluacutemenes iguales del sobrenadante y del

reactivo de Exton Mezclar por inversioacuten y apreciar la turbidez

Interpretar de acuerdo a las siguientes pautas

Negativo No existe turbidez

Trazas Turbidez visible sobre fondo negro

1(+) Se observa turbidez pero no es granular

2(++) Se observa turbidez y es granular

3(+++) La turbidez es considerable y existe aglutinacioacuten

4(++++) Nubosidad densa con masas aglutinadas de gran tamantildeo

El procedimiento de Exton es maacutes sensible que el meacutetodo de las tiras reactivas

Pueden observarse falsos positivos en los tratamientos con tolbutamina penicilina

sulfamidas y despueacutes de la administracioacuten de sustancias de contraste radioloacutegico

Asimismo las orinas muy alcalinas suelen dar resultados negativos falsos

PRUEBA DEL ACIDO ACETICO Y CALOR

Se basa en la precipitacioacuten de proteiacutenas llevando el pH de la orina al valor del

punto isoeleacutectrico al agregar el aacutecido aceacutetico Tambieacuten el calor torna a las

proteiacutenas insolubles provocando su coagulacioacuten

Procedimiento

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1- Centrifugar 10 ml de orina y luego separar el sobrenadante a un tubo de

ensayo El tubo debe estar lleno en las 23 partes

2-Hervir la parte superior del tubo por 2 minutos a la llama ( El tubo debe ser

sostenido formando un aacutengulo sobre la llama y apuntando en direccioacuten opuestas al

cuerpo) Si aparece turbidez puede deberse a la presencia de proteiacutenas fosfatos

y carbonatos

3- Agregar 3 a 5 gotas de aacutecido aceacutetico al 5 o 10 y volver a hervir la parte

superior del tubo a la llama El aacutecido disolveraacute los fosfatos o carbonatos que

puede ser la causa de la turbidez Ademaacutes disminuye el pH llevaacutendolo maacutes

proacuteximo al punto isoeleacutectrico de las proteiacutenas y en consecuencia eacutestas precipitan

aumentando la turbidez

4- Los resultados seraacute dados con la misma escala del reactivo de Exton

Esta teacutecnica detecta albuacuteminas globulinas mucoproteiacutenas e incluso las proteiacutenas

de Bence Jones La hemoglobina y la mioglobina no precipitan con este meacutetodo

La tolbutamida dosis elevadas de penicilina y sustancias de contraste radioloacutegico

pueden resultados positivos falsos Orinas muy alcalinas y orinas muy diluidas

pueden dar resultados negativos falsos

DETERMINACION DE GLUCOSURIA

TECNICA DE BENEDICT

Tiene como fundamento la reduccioacuten del ioacuten cuacuteprico color azul a cuproso que da

un precipitado rojo ladrillo en presencia de glucosa en caliente y en medio alcalino

fuerte

Reactivo

Sulfato de cobre 173 g

Citrato de sodio o de potasio 173g

Cristales de carbonato de sodio 200g

O carbonato de sodio anhiacutedro 100g

Agua destilada para completar 1000ml

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Disolver el citrato y el carbonato en 700ml de agua con ayuda de calor Filtrar y

disolver con el sulfato de cobre en aprox 100ml de agua caliente y vertirlo en la

solucioacuten de citrato-carbonato revolviendo Dejar que se enfriacutee antes de diluir hasta

completar los 1000 ml con agua

Procedimiento

1-Colocar 5ml del reactivo de Benedict en un tubo de ensayo

2- Agregar 8 gotas de orina Mezclar por inversioacuten

3- Llevar el tubo con la mezcla preparada a bantildeo Mariacutea durante 5 minutos o

calentar a la llama hasta su ebullicioacuten durante 1 a 2 minutos

4- Dejar que se enfriacutee lentamente

Se informa de acuerdo a las pautas correspondientes

Negativa Color azul claro puede formarse un precipitado azul

Trazas Color verde azulado

1(+) Color verde precipitado verde o amarillo

2(++) Color amarillo a verde precipitado amarillo

3(+++) Color amarillo-anaranjado precipitado amarillo-anaranjado

4 (++++) Color amarillo-rojizoprecipitado rojo ladrillo o rojo

Este procedimiento es sensible y de puede detectar hasta concentraciones de

002 Dosis aumentadas de penicilina estreptomicina salicilatos

oxitetraciclinas polivinilpirrolidona dextraacuten y el aacutecido p-aminosaliciacutelico dan

reacciones positivos falsos Los conservadores con formalina y formaldehiacutedo

pueden dar lugar tambieacuten a falsos positivos

INVESTIGACION DE CUERPOS CETONICOS

REACCION DE ROTHERA

Es una teacutecnica que usa nitroprusiano y permite la formacioacuten de un anillo Permite

la determinacioacuten del aacutecido diaceacuteticoacetona no permite la deteccioacuten del aacutecido B-

hidroxibutiacuterico

Reactivos

1) Reactivo de Rothera compuesta por 75 g de nitroprusiato de sodio y

200mg de sulfato de amonio

2) Hidroacutexido de amonio concentrado

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Procedimiento

1) En un tubo de ensayo agregar 1g de reactivo de Rothera con 5 ml de orina

Mezclar por inversioacuten

2) Luego agregar 1ml de hidroacutexido de amonio concentrado

3) Si la prueba es positiva se forma un anillo rojo a puacuterpura en el tiempo de

112 minuto en el punto de contacto

Dar los resultados seguacuten la siguiente pauta

Negativa No se forma el anillo o la formacioacuten de un anillo marroacuten

Trazas La formacioacuten de un anillo puacuterpura o de color rosado

2(+) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro estrecho limitado

4 (++++) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro extenso

DETECCION DE SANGRE EN ORINA (SANGRE OCULTA)

PRUEBA DE BENCIDINA

Reactivo A

Solucioacuten de Bencidina al 1 en aacutecido aceacutetico al 50

Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes

Procedimiento

En un tubo o sobre un papel filtro( en este caso ldquomancharrdquo el papel con la muestra

en estudio)

2 ndash 4 gotas de bencidina

Agregar 2 ndash 4 gotas de peroacutexido de hidroacutegeno (agua oxigenada)

Interpretacioacuten

Si existe sangre se formaraacute un halo verde azulado

Negativo halo marroacuten

Reactivo B

Solucioacuten de Piramidoacuten al 5 en aacutecido aceacutetico al 50

Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes

La solucioacuten de piramidoacuten puede ser preparada sin aacutecido aceacutetico por lo tanto el

orden de uso es piramidoacuten acido aceacutetico agua oxigenada Resultado

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DETERMINACION DE BILIRRUBINA Y UROBILINOGENO

REACCION DEL YODO DE SMITH (BILIRRUBINAS)

En un tubo de ensayo colocar 5ml de orina aacutecida y cubrirla con 2ml de una

solucioacuten de yodo al 07 en alcohopl etiacutelico al 95 La presencia de un anillo de

color verde esmeralda en la interfase de ambos liacutequidos indica la presencia de

bilirrubina

La deteccioacuten de urobilinoacutegeno en orina tambieacuten indican un problema hepaacutetico Uno

de los problemas importantes en la deteccioacuten de urobilinoacutegeno

REACCION CUANTITATIVA DE EHRLICH

Reactivo de Ehrlich

p-dimetilanminobenzaldehiacutedo 10g

HCl concentrado 75ml

Agua destilada 75ml

Procedimiento

1- Colocar 10ml de orina en un tubo de ensayo recieacuten emitida

2- Agregar 1ml del reactivo de Ehrlich

3- Dejar en reposo durante 5 minutos

La presencia urobilinoacutegeno determina que la solucioacuten cambie de color niveles

altos y dan un color rojo cereza

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E PRACTICA 3

DEPURACION DE CREATININACREATININA Generalidad

La creatinina es una sustancia que deriva del metabolismo muscular

(muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina y representa el

subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina es independiente

de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es proporcional dentro

de ciertos liacutemites a la masa muscular Se libera de los glomeacuterulos y no

es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales puede ser excretada

especialmente cuando se aumenta la concentracioacuten hemaacutetica El

aumento de la creatinina en el suero empieza a ser evidente cuando el

filtrado glomerular es por debajo de 60 ml por minuto

Indicaciones

La determinacioacuten de la cratinina es utilizada en el diagnoacutestico de las

enfermedades renales agudas o croacutenicas y tambieacuten para el monitoreo

de la diaacutelisis renal El aumento de la creatinina es un iacutendice de la

insuficiencia glomerular en cuanto eacutesta es eliminada por filtracioacuten

glomerular Mientras la uremia en la sangre puede ser controlada a

traveacutes de una oportuna dieta la creatinina se correlaciona casi

exclusivamente a la eficiencia de la filtracioacuten glomerular La creatinina

representa el iacutendice maacutes fiel de la insuficiencia renal

Preparacioacuten del paciente

Ayuno

Modalidad de la toma de muestra

Ninguna particularidad

Transporte

Transportar a temperatura ambiente

Conservacioacuten

Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede

conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y

6 meses en congelacioacuten

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Centrifugacioacuten

Poner el tubo de ensayo en la centriacutefuga de modo balanceado poner el

reloj 5 minutos y centrifugar por 3000 rpm Verificar la idoneidad del

suero o plasma ictericia presencia de coaacutegulos filamentos de fibrina

turbidez Sentildealar eventualmente en el resultado la no idoneidad de la

muestra

Metoacutedicas de determinacioacuten

Meacutetodo cineacutetico enzimaacutetico

El meacutetodo enzimaacutetico colorimeacutetrico consiste en la medida del color

desarrollado con el reactivo de Jaffe antes y despueacutes de una reaccioacuten

con la enzima especiacutefica la creatincinasa esta enzima transforma la

creatinina en creatina con medida final a 340 nm de la creatina

Meacutetodo colorimeacutetrico y procedimiento analiacutetico

Ademaacutes de la determinacioacuten de la creatinina con una teacutecnica de punto

final maacutes frecuentemente se utiliza una teacutecnica cineacutetica en la cual la

creatinina en medio alcalino reacciona con picrato produciendo un

complejo coloreado rojo-naranja la diferencia de absorcioacuten durante el

tiempo de conversioacuten es directamente proporcional a la concentracioacuten

de creatinina en la muestra

Creatinina + aacutecido piacutecrico mdashmdashmdashgt creatinina picrato (complejo)

Materiales

1048664 Guantes descartables no esteacuteriles

1048664 Tubos de ensayo 13 x 100 mm

1048664 Puntas de pipeta 10-100 ul

1048664 1048664 Puntas de pipeta 100-1000 ul

1048664 1048664 Centriacutefuga

1048664 Espectrofotoacutemetro

1048664 Bantildeo Mariacutea

1048664 Reloj marcador

1048664 Pipetas automaacuteticas 10-100 ul

1048664 Pipetas automaacuteticas 100-1000 ul

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Procedimiento

Seguir las instrucciones de la casa comercial

Control de Calidad

Se deberaacuten usar sueros control normal y patoloacutegico en las mismas

condiciones que las muestras

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

La metoacutedica es especiacutefica para la creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el meacutetodo Jaffe es necesario corregir el valor de

03 mgdl para lograr valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias maacutes significativas son

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Algunos antibioacuteticos como las cefalosporinas pueden dar valores

falsamente elevados

Valor de referencia

Hombres Hasta 13 mgdl

Mujeres Hasta 11 mgdl

Neonatos o nintildeos Hasta 07 mgdl

Criterios de validacioacuten

Confrontar paraacutemetros de funcionalidad renal (urea potasio proteiacutenas

densidad urinaria)

Confrontar paraacutemetros de equilibrio electroliacuteticos (sodio potasio cloro)

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Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de

embarazo

Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)

DEPURACION DE CREATININA

Generalidad

La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la

filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del

metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina

y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina

es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es

proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera

desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales

puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la

concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero

empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de

60 ml por minuto

La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un

determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la

concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la

creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina

en un minuto de tiempo)

C= U x VP (mlmin)

donde

C= aclaramiento

U= concentracioacuten de creatinina en la orina

V= volumen de la orina eliminada

P= concentracioacuten de creatinina en el plasma

Indicaciones

La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el

valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la

creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la

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creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de

funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la

urea

El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la

enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico

obstruccioacuten de la viacutea renal)

Preparacioacuten del paciente

Ayuno

Modalidad de la toma de muestra

A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento

Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco

de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un

estabilizante si es necesario

Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente

a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la

orina

b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas

c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda

la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC

Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada

inmediatamente al laboratorio

B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma

de muestra de sangre

Transporte

La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de

sangre a temperatura ambiente

Conservacioacuten

Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede

conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y

6 meses en congelacioacuten

Conservar las orinas a 2-4degC

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Verificacioacuten de la muestra

Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto

Metoacutedica de determinacioacuten

Cu x Vmin

Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash

Ps

donde

Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl

Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl

Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)

Procedimiento analiacutetico

Ver metoacutedica de la creatinina

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el

meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr

valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias significativas se deben

Para las orinas

Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)

Mala recoleccioacuten de orina

Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos

Para la sangre

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Valor de referencia

ge70mlmin

PRACTICA 4

EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO

PROPOacuteSITO

Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares

cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin

de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten

en diferente localizacioacuten

MUESTRA REQUERIDA

15 mL de orina

MATERIALES

- Tubos coacutenicos de 15 mL

- Laacuteminas portaobjetos

- Laminillas cubreobjetos

- Marcador para vidrio

- Gradillas para tubos

- Guantes descartables

EQUIPO

- Reloj marcador

- Centriacutefuga

- Microscopio

PROCEDIMIENTO

- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm

- Descartar el liacutequido sobrenadante

- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano

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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto

- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del

sedimento

- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x

- Anotar lo observado

FUENTES DE ERROR

- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios

- Desecacioacuten del sedimento urinario

-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten

microscoacutepica

- Uso excesivo de luz

- Centrifugacioacuten inadecuada

FORMA DE REPORTE

CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas

moderadas o abundantes

GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros

hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos

Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo

FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes

CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de

calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de

amonio leucina cistina y tirosina

Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes

LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes

PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis

huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces

BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes

solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo

Valores de referencia

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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas

CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse

GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse

LEUCOCITOS 0-5 por campo

CILINDROS No deben observarse

FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse

CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a

moderada cantidad

LEVADURAS No deben observarse

PARAacuteSITOS No deben observarse

BACTERIAS Escasas o no presentes

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PRACTICA 6

UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO

Condiciones generales

La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta

razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber

sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su

procesamiento

Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin

sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten

incorrecta o demora en la siembra

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO

Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos

a) Guantes de laacutetex esteacuteriles

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo

ser de 4rdquo x 4rdquo

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina

Procedimiento

a) Mantener la privacidad de la paciente

b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la

muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos

humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas

maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea

expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes

f) Descartar la gasa

g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el

procedimiento con otra gasa

h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca

i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar

Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio

j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la

superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente

Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones

Materiales

a) Guantes de laacutetex

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra

Procedimiento

a) Mantener la privacidad del paciente

b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra

hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten

Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande

con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa

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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra

gasa

g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca

h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten

directamente en un recipiente (orina para descartar)

i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del

chorro medio

j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio

SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA

Objetivo

Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina

Campo de aplicacioacuten

Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de

infecciones del tracto urinario

Materiales y equipos

a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL

b) Estufa de 35 ndash 37 degC

c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar

d) Guantes de laacutetex

e) Contenedor de material contaminado

f) Pinza esteacuteril

g) Propipeta o pipetor automaacutetico

h) Medios de cultivo

ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)

ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)

Procedimiento

a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por

cultivo

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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del

mechero Bunsen

c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a

temperatura ambiente Rotular las placas

d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola

en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa

e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del

frasco en el mechero Bunsen

f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y

sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra

g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra

hacia delante y hacia atraacutes

h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos

perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa

i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey

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Lectura

a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar

incubar hasta las 48 horas

b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se

multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL

Interpretacioacuten

a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es

la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen

b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el

procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente

c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la

muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra

d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL

pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias

polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos

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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se

informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En

pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a

pocas colonias

IDENTIFICACION BACTERIANA

Lectura de cultivos en agar Mac Conkey

ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde

entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente

rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas

de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm

ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color

rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide

ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color

rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae

Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales

PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados

erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de

hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Utilizacioacuten de hidratos de carbono

ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)

Abreviatura (A)

ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura (A)

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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

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Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 5: Guia de Practicas de Uroanalisis

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

DETERMINACION DE PROTEINURIA

AacuteCIDO SULFOSALICIacuteLICO

Esta teacutecnica se basa en la utilizacioacuten de aacutecido sulfosaliciacutelico cuya propiedad es

precipitar proteiacutenas en ausencia de calor Para esta prueba se usa el reactivo de

Exton en cuya composicioacuten se encuentra dicho aacutecido

Reactivo de Exton

Disolver 88g de sulfato de sodio en 600 ml de agua destilada con ayuda de calor

Enfriar Luego agregar 50 g de aacutecido sulfosaliciacutelico y diluir a 1000 ml

Procedimiento

1-Centrifugar una aliacutecuota de orina y luego utilizar el liacutequido sobrenadante

liacutempido

2- En un tubo de ensayo colocar voluacutemenes iguales del sobrenadante y del

reactivo de Exton Mezclar por inversioacuten y apreciar la turbidez

Interpretar de acuerdo a las siguientes pautas

Negativo No existe turbidez

Trazas Turbidez visible sobre fondo negro

1(+) Se observa turbidez pero no es granular

2(++) Se observa turbidez y es granular

3(+++) La turbidez es considerable y existe aglutinacioacuten

4(++++) Nubosidad densa con masas aglutinadas de gran tamantildeo

El procedimiento de Exton es maacutes sensible que el meacutetodo de las tiras reactivas

Pueden observarse falsos positivos en los tratamientos con tolbutamina penicilina

sulfamidas y despueacutes de la administracioacuten de sustancias de contraste radioloacutegico

Asimismo las orinas muy alcalinas suelen dar resultados negativos falsos

PRUEBA DEL ACIDO ACETICO Y CALOR

Se basa en la precipitacioacuten de proteiacutenas llevando el pH de la orina al valor del

punto isoeleacutectrico al agregar el aacutecido aceacutetico Tambieacuten el calor torna a las

proteiacutenas insolubles provocando su coagulacioacuten

Procedimiento

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

1- Centrifugar 10 ml de orina y luego separar el sobrenadante a un tubo de

ensayo El tubo debe estar lleno en las 23 partes

2-Hervir la parte superior del tubo por 2 minutos a la llama ( El tubo debe ser

sostenido formando un aacutengulo sobre la llama y apuntando en direccioacuten opuestas al

cuerpo) Si aparece turbidez puede deberse a la presencia de proteiacutenas fosfatos

y carbonatos

3- Agregar 3 a 5 gotas de aacutecido aceacutetico al 5 o 10 y volver a hervir la parte

superior del tubo a la llama El aacutecido disolveraacute los fosfatos o carbonatos que

puede ser la causa de la turbidez Ademaacutes disminuye el pH llevaacutendolo maacutes

proacuteximo al punto isoeleacutectrico de las proteiacutenas y en consecuencia eacutestas precipitan

aumentando la turbidez

4- Los resultados seraacute dados con la misma escala del reactivo de Exton

Esta teacutecnica detecta albuacuteminas globulinas mucoproteiacutenas e incluso las proteiacutenas

de Bence Jones La hemoglobina y la mioglobina no precipitan con este meacutetodo

La tolbutamida dosis elevadas de penicilina y sustancias de contraste radioloacutegico

pueden resultados positivos falsos Orinas muy alcalinas y orinas muy diluidas

pueden dar resultados negativos falsos

DETERMINACION DE GLUCOSURIA

TECNICA DE BENEDICT

Tiene como fundamento la reduccioacuten del ioacuten cuacuteprico color azul a cuproso que da

un precipitado rojo ladrillo en presencia de glucosa en caliente y en medio alcalino

fuerte

Reactivo

Sulfato de cobre 173 g

Citrato de sodio o de potasio 173g

Cristales de carbonato de sodio 200g

O carbonato de sodio anhiacutedro 100g

Agua destilada para completar 1000ml

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Disolver el citrato y el carbonato en 700ml de agua con ayuda de calor Filtrar y

disolver con el sulfato de cobre en aprox 100ml de agua caliente y vertirlo en la

solucioacuten de citrato-carbonato revolviendo Dejar que se enfriacutee antes de diluir hasta

completar los 1000 ml con agua

Procedimiento

1-Colocar 5ml del reactivo de Benedict en un tubo de ensayo

2- Agregar 8 gotas de orina Mezclar por inversioacuten

3- Llevar el tubo con la mezcla preparada a bantildeo Mariacutea durante 5 minutos o

calentar a la llama hasta su ebullicioacuten durante 1 a 2 minutos

4- Dejar que se enfriacutee lentamente

Se informa de acuerdo a las pautas correspondientes

Negativa Color azul claro puede formarse un precipitado azul

Trazas Color verde azulado

1(+) Color verde precipitado verde o amarillo

2(++) Color amarillo a verde precipitado amarillo

3(+++) Color amarillo-anaranjado precipitado amarillo-anaranjado

4 (++++) Color amarillo-rojizoprecipitado rojo ladrillo o rojo

Este procedimiento es sensible y de puede detectar hasta concentraciones de

002 Dosis aumentadas de penicilina estreptomicina salicilatos

oxitetraciclinas polivinilpirrolidona dextraacuten y el aacutecido p-aminosaliciacutelico dan

reacciones positivos falsos Los conservadores con formalina y formaldehiacutedo

pueden dar lugar tambieacuten a falsos positivos

INVESTIGACION DE CUERPOS CETONICOS

REACCION DE ROTHERA

Es una teacutecnica que usa nitroprusiano y permite la formacioacuten de un anillo Permite

la determinacioacuten del aacutecido diaceacuteticoacetona no permite la deteccioacuten del aacutecido B-

hidroxibutiacuterico

Reactivos

1) Reactivo de Rothera compuesta por 75 g de nitroprusiato de sodio y

200mg de sulfato de amonio

2) Hidroacutexido de amonio concentrado

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Procedimiento

1) En un tubo de ensayo agregar 1g de reactivo de Rothera con 5 ml de orina

Mezclar por inversioacuten

2) Luego agregar 1ml de hidroacutexido de amonio concentrado

3) Si la prueba es positiva se forma un anillo rojo a puacuterpura en el tiempo de

112 minuto en el punto de contacto

Dar los resultados seguacuten la siguiente pauta

Negativa No se forma el anillo o la formacioacuten de un anillo marroacuten

Trazas La formacioacuten de un anillo puacuterpura o de color rosado

2(+) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro estrecho limitado

4 (++++) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro extenso

DETECCION DE SANGRE EN ORINA (SANGRE OCULTA)

PRUEBA DE BENCIDINA

Reactivo A

Solucioacuten de Bencidina al 1 en aacutecido aceacutetico al 50

Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes

Procedimiento

En un tubo o sobre un papel filtro( en este caso ldquomancharrdquo el papel con la muestra

en estudio)

2 ndash 4 gotas de bencidina

Agregar 2 ndash 4 gotas de peroacutexido de hidroacutegeno (agua oxigenada)

Interpretacioacuten

Si existe sangre se formaraacute un halo verde azulado

Negativo halo marroacuten

Reactivo B

Solucioacuten de Piramidoacuten al 5 en aacutecido aceacutetico al 50

Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes

La solucioacuten de piramidoacuten puede ser preparada sin aacutecido aceacutetico por lo tanto el

orden de uso es piramidoacuten acido aceacutetico agua oxigenada Resultado

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DETERMINACION DE BILIRRUBINA Y UROBILINOGENO

REACCION DEL YODO DE SMITH (BILIRRUBINAS)

En un tubo de ensayo colocar 5ml de orina aacutecida y cubrirla con 2ml de una

solucioacuten de yodo al 07 en alcohopl etiacutelico al 95 La presencia de un anillo de

color verde esmeralda en la interfase de ambos liacutequidos indica la presencia de

bilirrubina

La deteccioacuten de urobilinoacutegeno en orina tambieacuten indican un problema hepaacutetico Uno

de los problemas importantes en la deteccioacuten de urobilinoacutegeno

REACCION CUANTITATIVA DE EHRLICH

Reactivo de Ehrlich

p-dimetilanminobenzaldehiacutedo 10g

HCl concentrado 75ml

Agua destilada 75ml

Procedimiento

1- Colocar 10ml de orina en un tubo de ensayo recieacuten emitida

2- Agregar 1ml del reactivo de Ehrlich

3- Dejar en reposo durante 5 minutos

La presencia urobilinoacutegeno determina que la solucioacuten cambie de color niveles

altos y dan un color rojo cereza

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E PRACTICA 3

DEPURACION DE CREATININACREATININA Generalidad

La creatinina es una sustancia que deriva del metabolismo muscular

(muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina y representa el

subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina es independiente

de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es proporcional dentro

de ciertos liacutemites a la masa muscular Se libera de los glomeacuterulos y no

es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales puede ser excretada

especialmente cuando se aumenta la concentracioacuten hemaacutetica El

aumento de la creatinina en el suero empieza a ser evidente cuando el

filtrado glomerular es por debajo de 60 ml por minuto

Indicaciones

La determinacioacuten de la cratinina es utilizada en el diagnoacutestico de las

enfermedades renales agudas o croacutenicas y tambieacuten para el monitoreo

de la diaacutelisis renal El aumento de la creatinina es un iacutendice de la

insuficiencia glomerular en cuanto eacutesta es eliminada por filtracioacuten

glomerular Mientras la uremia en la sangre puede ser controlada a

traveacutes de una oportuna dieta la creatinina se correlaciona casi

exclusivamente a la eficiencia de la filtracioacuten glomerular La creatinina

representa el iacutendice maacutes fiel de la insuficiencia renal

Preparacioacuten del paciente

Ayuno

Modalidad de la toma de muestra

Ninguna particularidad

Transporte

Transportar a temperatura ambiente

Conservacioacuten

Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede

conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y

6 meses en congelacioacuten

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Centrifugacioacuten

Poner el tubo de ensayo en la centriacutefuga de modo balanceado poner el

reloj 5 minutos y centrifugar por 3000 rpm Verificar la idoneidad del

suero o plasma ictericia presencia de coaacutegulos filamentos de fibrina

turbidez Sentildealar eventualmente en el resultado la no idoneidad de la

muestra

Metoacutedicas de determinacioacuten

Meacutetodo cineacutetico enzimaacutetico

El meacutetodo enzimaacutetico colorimeacutetrico consiste en la medida del color

desarrollado con el reactivo de Jaffe antes y despueacutes de una reaccioacuten

con la enzima especiacutefica la creatincinasa esta enzima transforma la

creatinina en creatina con medida final a 340 nm de la creatina

Meacutetodo colorimeacutetrico y procedimiento analiacutetico

Ademaacutes de la determinacioacuten de la creatinina con una teacutecnica de punto

final maacutes frecuentemente se utiliza una teacutecnica cineacutetica en la cual la

creatinina en medio alcalino reacciona con picrato produciendo un

complejo coloreado rojo-naranja la diferencia de absorcioacuten durante el

tiempo de conversioacuten es directamente proporcional a la concentracioacuten

de creatinina en la muestra

Creatinina + aacutecido piacutecrico mdashmdashmdashgt creatinina picrato (complejo)

Materiales

1048664 Guantes descartables no esteacuteriles

1048664 Tubos de ensayo 13 x 100 mm

1048664 Puntas de pipeta 10-100 ul

1048664 1048664 Puntas de pipeta 100-1000 ul

1048664 1048664 Centriacutefuga

1048664 Espectrofotoacutemetro

1048664 Bantildeo Mariacutea

1048664 Reloj marcador

1048664 Pipetas automaacuteticas 10-100 ul

1048664 Pipetas automaacuteticas 100-1000 ul

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Procedimiento

Seguir las instrucciones de la casa comercial

Control de Calidad

Se deberaacuten usar sueros control normal y patoloacutegico en las mismas

condiciones que las muestras

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

La metoacutedica es especiacutefica para la creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el meacutetodo Jaffe es necesario corregir el valor de

03 mgdl para lograr valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias maacutes significativas son

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Algunos antibioacuteticos como las cefalosporinas pueden dar valores

falsamente elevados

Valor de referencia

Hombres Hasta 13 mgdl

Mujeres Hasta 11 mgdl

Neonatos o nintildeos Hasta 07 mgdl

Criterios de validacioacuten

Confrontar paraacutemetros de funcionalidad renal (urea potasio proteiacutenas

densidad urinaria)

Confrontar paraacutemetros de equilibrio electroliacuteticos (sodio potasio cloro)

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Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de

embarazo

Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)

DEPURACION DE CREATININA

Generalidad

La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la

filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del

metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina

y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina

es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es

proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera

desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales

puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la

concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero

empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de

60 ml por minuto

La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un

determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la

concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la

creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina

en un minuto de tiempo)

C= U x VP (mlmin)

donde

C= aclaramiento

U= concentracioacuten de creatinina en la orina

V= volumen de la orina eliminada

P= concentracioacuten de creatinina en el plasma

Indicaciones

La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el

valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la

creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la

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creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de

funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la

urea

El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la

enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico

obstruccioacuten de la viacutea renal)

Preparacioacuten del paciente

Ayuno

Modalidad de la toma de muestra

A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento

Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco

de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un

estabilizante si es necesario

Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente

a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la

orina

b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas

c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda

la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC

Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada

inmediatamente al laboratorio

B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma

de muestra de sangre

Transporte

La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de

sangre a temperatura ambiente

Conservacioacuten

Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede

conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y

6 meses en congelacioacuten

Conservar las orinas a 2-4degC

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Verificacioacuten de la muestra

Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto

Metoacutedica de determinacioacuten

Cu x Vmin

Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash

Ps

donde

Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl

Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl

Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)

Procedimiento analiacutetico

Ver metoacutedica de la creatinina

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el

meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr

valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias significativas se deben

Para las orinas

Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)

Mala recoleccioacuten de orina

Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos

Para la sangre

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Valor de referencia

ge70mlmin

PRACTICA 4

EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO

PROPOacuteSITO

Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares

cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin

de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten

en diferente localizacioacuten

MUESTRA REQUERIDA

15 mL de orina

MATERIALES

- Tubos coacutenicos de 15 mL

- Laacuteminas portaobjetos

- Laminillas cubreobjetos

- Marcador para vidrio

- Gradillas para tubos

- Guantes descartables

EQUIPO

- Reloj marcador

- Centriacutefuga

- Microscopio

PROCEDIMIENTO

- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm

- Descartar el liacutequido sobrenadante

- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano

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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto

- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del

sedimento

- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x

- Anotar lo observado

FUENTES DE ERROR

- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios

- Desecacioacuten del sedimento urinario

-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten

microscoacutepica

- Uso excesivo de luz

- Centrifugacioacuten inadecuada

FORMA DE REPORTE

CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas

moderadas o abundantes

GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros

hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos

Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo

FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes

CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de

calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de

amonio leucina cistina y tirosina

Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes

LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes

PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis

huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces

BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes

solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo

Valores de referencia

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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas

CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse

GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse

LEUCOCITOS 0-5 por campo

CILINDROS No deben observarse

FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse

CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a

moderada cantidad

LEVADURAS No deben observarse

PARAacuteSITOS No deben observarse

BACTERIAS Escasas o no presentes

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PRACTICA 6

UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO

Condiciones generales

La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta

razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber

sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su

procesamiento

Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin

sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten

incorrecta o demora en la siembra

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO

Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos

a) Guantes de laacutetex esteacuteriles

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo

ser de 4rdquo x 4rdquo

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina

Procedimiento

a) Mantener la privacidad de la paciente

b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la

muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos

humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas

maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea

expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes

f) Descartar la gasa

g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el

procedimiento con otra gasa

h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca

i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar

Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio

j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la

superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente

Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones

Materiales

a) Guantes de laacutetex

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra

Procedimiento

a) Mantener la privacidad del paciente

b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra

hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten

Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande

con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa

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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra

gasa

g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca

h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten

directamente en un recipiente (orina para descartar)

i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del

chorro medio

j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio

SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA

Objetivo

Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina

Campo de aplicacioacuten

Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de

infecciones del tracto urinario

Materiales y equipos

a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL

b) Estufa de 35 ndash 37 degC

c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar

d) Guantes de laacutetex

e) Contenedor de material contaminado

f) Pinza esteacuteril

g) Propipeta o pipetor automaacutetico

h) Medios de cultivo

ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)

ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)

Procedimiento

a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por

cultivo

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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del

mechero Bunsen

c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a

temperatura ambiente Rotular las placas

d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola

en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa

e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del

frasco en el mechero Bunsen

f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y

sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra

g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra

hacia delante y hacia atraacutes

h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos

perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa

i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey

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Lectura

a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar

incubar hasta las 48 horas

b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se

multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL

Interpretacioacuten

a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es

la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen

b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el

procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente

c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la

muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra

d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL

pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias

polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos

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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se

informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En

pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a

pocas colonias

IDENTIFICACION BACTERIANA

Lectura de cultivos en agar Mac Conkey

ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde

entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente

rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas

de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm

ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color

rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide

ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color

rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae

Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales

PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados

erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de

hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Utilizacioacuten de hidratos de carbono

ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)

Abreviatura (A)

ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura (A)

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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

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Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 6: Guia de Practicas de Uroanalisis

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1- Centrifugar 10 ml de orina y luego separar el sobrenadante a un tubo de

ensayo El tubo debe estar lleno en las 23 partes

2-Hervir la parte superior del tubo por 2 minutos a la llama ( El tubo debe ser

sostenido formando un aacutengulo sobre la llama y apuntando en direccioacuten opuestas al

cuerpo) Si aparece turbidez puede deberse a la presencia de proteiacutenas fosfatos

y carbonatos

3- Agregar 3 a 5 gotas de aacutecido aceacutetico al 5 o 10 y volver a hervir la parte

superior del tubo a la llama El aacutecido disolveraacute los fosfatos o carbonatos que

puede ser la causa de la turbidez Ademaacutes disminuye el pH llevaacutendolo maacutes

proacuteximo al punto isoeleacutectrico de las proteiacutenas y en consecuencia eacutestas precipitan

aumentando la turbidez

4- Los resultados seraacute dados con la misma escala del reactivo de Exton

Esta teacutecnica detecta albuacuteminas globulinas mucoproteiacutenas e incluso las proteiacutenas

de Bence Jones La hemoglobina y la mioglobina no precipitan con este meacutetodo

La tolbutamida dosis elevadas de penicilina y sustancias de contraste radioloacutegico

pueden resultados positivos falsos Orinas muy alcalinas y orinas muy diluidas

pueden dar resultados negativos falsos

DETERMINACION DE GLUCOSURIA

TECNICA DE BENEDICT

Tiene como fundamento la reduccioacuten del ioacuten cuacuteprico color azul a cuproso que da

un precipitado rojo ladrillo en presencia de glucosa en caliente y en medio alcalino

fuerte

Reactivo

Sulfato de cobre 173 g

Citrato de sodio o de potasio 173g

Cristales de carbonato de sodio 200g

O carbonato de sodio anhiacutedro 100g

Agua destilada para completar 1000ml

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Disolver el citrato y el carbonato en 700ml de agua con ayuda de calor Filtrar y

disolver con el sulfato de cobre en aprox 100ml de agua caliente y vertirlo en la

solucioacuten de citrato-carbonato revolviendo Dejar que se enfriacutee antes de diluir hasta

completar los 1000 ml con agua

Procedimiento

1-Colocar 5ml del reactivo de Benedict en un tubo de ensayo

2- Agregar 8 gotas de orina Mezclar por inversioacuten

3- Llevar el tubo con la mezcla preparada a bantildeo Mariacutea durante 5 minutos o

calentar a la llama hasta su ebullicioacuten durante 1 a 2 minutos

4- Dejar que se enfriacutee lentamente

Se informa de acuerdo a las pautas correspondientes

Negativa Color azul claro puede formarse un precipitado azul

Trazas Color verde azulado

1(+) Color verde precipitado verde o amarillo

2(++) Color amarillo a verde precipitado amarillo

3(+++) Color amarillo-anaranjado precipitado amarillo-anaranjado

4 (++++) Color amarillo-rojizoprecipitado rojo ladrillo o rojo

Este procedimiento es sensible y de puede detectar hasta concentraciones de

002 Dosis aumentadas de penicilina estreptomicina salicilatos

oxitetraciclinas polivinilpirrolidona dextraacuten y el aacutecido p-aminosaliciacutelico dan

reacciones positivos falsos Los conservadores con formalina y formaldehiacutedo

pueden dar lugar tambieacuten a falsos positivos

INVESTIGACION DE CUERPOS CETONICOS

REACCION DE ROTHERA

Es una teacutecnica que usa nitroprusiano y permite la formacioacuten de un anillo Permite

la determinacioacuten del aacutecido diaceacuteticoacetona no permite la deteccioacuten del aacutecido B-

hidroxibutiacuterico

Reactivos

1) Reactivo de Rothera compuesta por 75 g de nitroprusiato de sodio y

200mg de sulfato de amonio

2) Hidroacutexido de amonio concentrado

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Procedimiento

1) En un tubo de ensayo agregar 1g de reactivo de Rothera con 5 ml de orina

Mezclar por inversioacuten

2) Luego agregar 1ml de hidroacutexido de amonio concentrado

3) Si la prueba es positiva se forma un anillo rojo a puacuterpura en el tiempo de

112 minuto en el punto de contacto

Dar los resultados seguacuten la siguiente pauta

Negativa No se forma el anillo o la formacioacuten de un anillo marroacuten

Trazas La formacioacuten de un anillo puacuterpura o de color rosado

2(+) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro estrecho limitado

4 (++++) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro extenso

DETECCION DE SANGRE EN ORINA (SANGRE OCULTA)

PRUEBA DE BENCIDINA

Reactivo A

Solucioacuten de Bencidina al 1 en aacutecido aceacutetico al 50

Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes

Procedimiento

En un tubo o sobre un papel filtro( en este caso ldquomancharrdquo el papel con la muestra

en estudio)

2 ndash 4 gotas de bencidina

Agregar 2 ndash 4 gotas de peroacutexido de hidroacutegeno (agua oxigenada)

Interpretacioacuten

Si existe sangre se formaraacute un halo verde azulado

Negativo halo marroacuten

Reactivo B

Solucioacuten de Piramidoacuten al 5 en aacutecido aceacutetico al 50

Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes

La solucioacuten de piramidoacuten puede ser preparada sin aacutecido aceacutetico por lo tanto el

orden de uso es piramidoacuten acido aceacutetico agua oxigenada Resultado

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DETERMINACION DE BILIRRUBINA Y UROBILINOGENO

REACCION DEL YODO DE SMITH (BILIRRUBINAS)

En un tubo de ensayo colocar 5ml de orina aacutecida y cubrirla con 2ml de una

solucioacuten de yodo al 07 en alcohopl etiacutelico al 95 La presencia de un anillo de

color verde esmeralda en la interfase de ambos liacutequidos indica la presencia de

bilirrubina

La deteccioacuten de urobilinoacutegeno en orina tambieacuten indican un problema hepaacutetico Uno

de los problemas importantes en la deteccioacuten de urobilinoacutegeno

REACCION CUANTITATIVA DE EHRLICH

Reactivo de Ehrlich

p-dimetilanminobenzaldehiacutedo 10g

HCl concentrado 75ml

Agua destilada 75ml

Procedimiento

1- Colocar 10ml de orina en un tubo de ensayo recieacuten emitida

2- Agregar 1ml del reactivo de Ehrlich

3- Dejar en reposo durante 5 minutos

La presencia urobilinoacutegeno determina que la solucioacuten cambie de color niveles

altos y dan un color rojo cereza

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E PRACTICA 3

DEPURACION DE CREATININACREATININA Generalidad

La creatinina es una sustancia que deriva del metabolismo muscular

(muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina y representa el

subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina es independiente

de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es proporcional dentro

de ciertos liacutemites a la masa muscular Se libera de los glomeacuterulos y no

es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales puede ser excretada

especialmente cuando se aumenta la concentracioacuten hemaacutetica El

aumento de la creatinina en el suero empieza a ser evidente cuando el

filtrado glomerular es por debajo de 60 ml por minuto

Indicaciones

La determinacioacuten de la cratinina es utilizada en el diagnoacutestico de las

enfermedades renales agudas o croacutenicas y tambieacuten para el monitoreo

de la diaacutelisis renal El aumento de la creatinina es un iacutendice de la

insuficiencia glomerular en cuanto eacutesta es eliminada por filtracioacuten

glomerular Mientras la uremia en la sangre puede ser controlada a

traveacutes de una oportuna dieta la creatinina se correlaciona casi

exclusivamente a la eficiencia de la filtracioacuten glomerular La creatinina

representa el iacutendice maacutes fiel de la insuficiencia renal

Preparacioacuten del paciente

Ayuno

Modalidad de la toma de muestra

Ninguna particularidad

Transporte

Transportar a temperatura ambiente

Conservacioacuten

Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede

conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y

6 meses en congelacioacuten

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Centrifugacioacuten

Poner el tubo de ensayo en la centriacutefuga de modo balanceado poner el

reloj 5 minutos y centrifugar por 3000 rpm Verificar la idoneidad del

suero o plasma ictericia presencia de coaacutegulos filamentos de fibrina

turbidez Sentildealar eventualmente en el resultado la no idoneidad de la

muestra

Metoacutedicas de determinacioacuten

Meacutetodo cineacutetico enzimaacutetico

El meacutetodo enzimaacutetico colorimeacutetrico consiste en la medida del color

desarrollado con el reactivo de Jaffe antes y despueacutes de una reaccioacuten

con la enzima especiacutefica la creatincinasa esta enzima transforma la

creatinina en creatina con medida final a 340 nm de la creatina

Meacutetodo colorimeacutetrico y procedimiento analiacutetico

Ademaacutes de la determinacioacuten de la creatinina con una teacutecnica de punto

final maacutes frecuentemente se utiliza una teacutecnica cineacutetica en la cual la

creatinina en medio alcalino reacciona con picrato produciendo un

complejo coloreado rojo-naranja la diferencia de absorcioacuten durante el

tiempo de conversioacuten es directamente proporcional a la concentracioacuten

de creatinina en la muestra

Creatinina + aacutecido piacutecrico mdashmdashmdashgt creatinina picrato (complejo)

Materiales

1048664 Guantes descartables no esteacuteriles

1048664 Tubos de ensayo 13 x 100 mm

1048664 Puntas de pipeta 10-100 ul

1048664 1048664 Puntas de pipeta 100-1000 ul

1048664 1048664 Centriacutefuga

1048664 Espectrofotoacutemetro

1048664 Bantildeo Mariacutea

1048664 Reloj marcador

1048664 Pipetas automaacuteticas 10-100 ul

1048664 Pipetas automaacuteticas 100-1000 ul

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Procedimiento

Seguir las instrucciones de la casa comercial

Control de Calidad

Se deberaacuten usar sueros control normal y patoloacutegico en las mismas

condiciones que las muestras

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

La metoacutedica es especiacutefica para la creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el meacutetodo Jaffe es necesario corregir el valor de

03 mgdl para lograr valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias maacutes significativas son

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Algunos antibioacuteticos como las cefalosporinas pueden dar valores

falsamente elevados

Valor de referencia

Hombres Hasta 13 mgdl

Mujeres Hasta 11 mgdl

Neonatos o nintildeos Hasta 07 mgdl

Criterios de validacioacuten

Confrontar paraacutemetros de funcionalidad renal (urea potasio proteiacutenas

densidad urinaria)

Confrontar paraacutemetros de equilibrio electroliacuteticos (sodio potasio cloro)

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Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de

embarazo

Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)

DEPURACION DE CREATININA

Generalidad

La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la

filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del

metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina

y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina

es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es

proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera

desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales

puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la

concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero

empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de

60 ml por minuto

La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un

determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la

concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la

creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina

en un minuto de tiempo)

C= U x VP (mlmin)

donde

C= aclaramiento

U= concentracioacuten de creatinina en la orina

V= volumen de la orina eliminada

P= concentracioacuten de creatinina en el plasma

Indicaciones

La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el

valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la

creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la

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creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de

funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la

urea

El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la

enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico

obstruccioacuten de la viacutea renal)

Preparacioacuten del paciente

Ayuno

Modalidad de la toma de muestra

A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento

Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco

de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un

estabilizante si es necesario

Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente

a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la

orina

b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas

c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda

la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC

Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada

inmediatamente al laboratorio

B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma

de muestra de sangre

Transporte

La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de

sangre a temperatura ambiente

Conservacioacuten

Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede

conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y

6 meses en congelacioacuten

Conservar las orinas a 2-4degC

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Verificacioacuten de la muestra

Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto

Metoacutedica de determinacioacuten

Cu x Vmin

Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash

Ps

donde

Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl

Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl

Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)

Procedimiento analiacutetico

Ver metoacutedica de la creatinina

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el

meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr

valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias significativas se deben

Para las orinas

Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)

Mala recoleccioacuten de orina

Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos

Para la sangre

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Valor de referencia

ge70mlmin

PRACTICA 4

EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO

PROPOacuteSITO

Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares

cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin

de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten

en diferente localizacioacuten

MUESTRA REQUERIDA

15 mL de orina

MATERIALES

- Tubos coacutenicos de 15 mL

- Laacuteminas portaobjetos

- Laminillas cubreobjetos

- Marcador para vidrio

- Gradillas para tubos

- Guantes descartables

EQUIPO

- Reloj marcador

- Centriacutefuga

- Microscopio

PROCEDIMIENTO

- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm

- Descartar el liacutequido sobrenadante

- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano

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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto

- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del

sedimento

- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x

- Anotar lo observado

FUENTES DE ERROR

- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios

- Desecacioacuten del sedimento urinario

-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten

microscoacutepica

- Uso excesivo de luz

- Centrifugacioacuten inadecuada

FORMA DE REPORTE

CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas

moderadas o abundantes

GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros

hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos

Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo

FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes

CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de

calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de

amonio leucina cistina y tirosina

Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes

LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes

PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis

huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces

BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes

solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo

Valores de referencia

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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas

CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse

GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse

LEUCOCITOS 0-5 por campo

CILINDROS No deben observarse

FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse

CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a

moderada cantidad

LEVADURAS No deben observarse

PARAacuteSITOS No deben observarse

BACTERIAS Escasas o no presentes

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PRACTICA 6

UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO

Condiciones generales

La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta

razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber

sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su

procesamiento

Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin

sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten

incorrecta o demora en la siembra

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO

Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos

a) Guantes de laacutetex esteacuteriles

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo

ser de 4rdquo x 4rdquo

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina

Procedimiento

a) Mantener la privacidad de la paciente

b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la

muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos

humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas

maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea

expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes

f) Descartar la gasa

g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el

procedimiento con otra gasa

h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca

i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar

Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio

j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la

superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente

Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones

Materiales

a) Guantes de laacutetex

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra

Procedimiento

a) Mantener la privacidad del paciente

b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra

hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten

Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande

con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa

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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra

gasa

g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca

h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten

directamente en un recipiente (orina para descartar)

i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del

chorro medio

j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio

SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA

Objetivo

Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina

Campo de aplicacioacuten

Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de

infecciones del tracto urinario

Materiales y equipos

a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL

b) Estufa de 35 ndash 37 degC

c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar

d) Guantes de laacutetex

e) Contenedor de material contaminado

f) Pinza esteacuteril

g) Propipeta o pipetor automaacutetico

h) Medios de cultivo

ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)

ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)

Procedimiento

a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por

cultivo

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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del

mechero Bunsen

c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a

temperatura ambiente Rotular las placas

d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola

en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa

e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del

frasco en el mechero Bunsen

f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y

sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra

g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra

hacia delante y hacia atraacutes

h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos

perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa

i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey

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Lectura

a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar

incubar hasta las 48 horas

b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se

multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL

Interpretacioacuten

a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es

la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen

b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el

procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente

c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la

muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra

d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL

pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias

polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos

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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se

informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En

pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a

pocas colonias

IDENTIFICACION BACTERIANA

Lectura de cultivos en agar Mac Conkey

ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde

entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente

rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas

de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm

ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color

rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide

ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color

rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae

Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales

PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados

erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de

hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Utilizacioacuten de hidratos de carbono

ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)

Abreviatura (A)

ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura (A)

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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

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Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 7: Guia de Practicas de Uroanalisis

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Disolver el citrato y el carbonato en 700ml de agua con ayuda de calor Filtrar y

disolver con el sulfato de cobre en aprox 100ml de agua caliente y vertirlo en la

solucioacuten de citrato-carbonato revolviendo Dejar que se enfriacutee antes de diluir hasta

completar los 1000 ml con agua

Procedimiento

1-Colocar 5ml del reactivo de Benedict en un tubo de ensayo

2- Agregar 8 gotas de orina Mezclar por inversioacuten

3- Llevar el tubo con la mezcla preparada a bantildeo Mariacutea durante 5 minutos o

calentar a la llama hasta su ebullicioacuten durante 1 a 2 minutos

4- Dejar que se enfriacutee lentamente

Se informa de acuerdo a las pautas correspondientes

Negativa Color azul claro puede formarse un precipitado azul

Trazas Color verde azulado

1(+) Color verde precipitado verde o amarillo

2(++) Color amarillo a verde precipitado amarillo

3(+++) Color amarillo-anaranjado precipitado amarillo-anaranjado

4 (++++) Color amarillo-rojizoprecipitado rojo ladrillo o rojo

Este procedimiento es sensible y de puede detectar hasta concentraciones de

002 Dosis aumentadas de penicilina estreptomicina salicilatos

oxitetraciclinas polivinilpirrolidona dextraacuten y el aacutecido p-aminosaliciacutelico dan

reacciones positivos falsos Los conservadores con formalina y formaldehiacutedo

pueden dar lugar tambieacuten a falsos positivos

INVESTIGACION DE CUERPOS CETONICOS

REACCION DE ROTHERA

Es una teacutecnica que usa nitroprusiano y permite la formacioacuten de un anillo Permite

la determinacioacuten del aacutecido diaceacuteticoacetona no permite la deteccioacuten del aacutecido B-

hidroxibutiacuterico

Reactivos

1) Reactivo de Rothera compuesta por 75 g de nitroprusiato de sodio y

200mg de sulfato de amonio

2) Hidroacutexido de amonio concentrado

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Procedimiento

1) En un tubo de ensayo agregar 1g de reactivo de Rothera con 5 ml de orina

Mezclar por inversioacuten

2) Luego agregar 1ml de hidroacutexido de amonio concentrado

3) Si la prueba es positiva se forma un anillo rojo a puacuterpura en el tiempo de

112 minuto en el punto de contacto

Dar los resultados seguacuten la siguiente pauta

Negativa No se forma el anillo o la formacioacuten de un anillo marroacuten

Trazas La formacioacuten de un anillo puacuterpura o de color rosado

2(+) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro estrecho limitado

4 (++++) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro extenso

DETECCION DE SANGRE EN ORINA (SANGRE OCULTA)

PRUEBA DE BENCIDINA

Reactivo A

Solucioacuten de Bencidina al 1 en aacutecido aceacutetico al 50

Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes

Procedimiento

En un tubo o sobre un papel filtro( en este caso ldquomancharrdquo el papel con la muestra

en estudio)

2 ndash 4 gotas de bencidina

Agregar 2 ndash 4 gotas de peroacutexido de hidroacutegeno (agua oxigenada)

Interpretacioacuten

Si existe sangre se formaraacute un halo verde azulado

Negativo halo marroacuten

Reactivo B

Solucioacuten de Piramidoacuten al 5 en aacutecido aceacutetico al 50

Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes

La solucioacuten de piramidoacuten puede ser preparada sin aacutecido aceacutetico por lo tanto el

orden de uso es piramidoacuten acido aceacutetico agua oxigenada Resultado

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DETERMINACION DE BILIRRUBINA Y UROBILINOGENO

REACCION DEL YODO DE SMITH (BILIRRUBINAS)

En un tubo de ensayo colocar 5ml de orina aacutecida y cubrirla con 2ml de una

solucioacuten de yodo al 07 en alcohopl etiacutelico al 95 La presencia de un anillo de

color verde esmeralda en la interfase de ambos liacutequidos indica la presencia de

bilirrubina

La deteccioacuten de urobilinoacutegeno en orina tambieacuten indican un problema hepaacutetico Uno

de los problemas importantes en la deteccioacuten de urobilinoacutegeno

REACCION CUANTITATIVA DE EHRLICH

Reactivo de Ehrlich

p-dimetilanminobenzaldehiacutedo 10g

HCl concentrado 75ml

Agua destilada 75ml

Procedimiento

1- Colocar 10ml de orina en un tubo de ensayo recieacuten emitida

2- Agregar 1ml del reactivo de Ehrlich

3- Dejar en reposo durante 5 minutos

La presencia urobilinoacutegeno determina que la solucioacuten cambie de color niveles

altos y dan un color rojo cereza

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E PRACTICA 3

DEPURACION DE CREATININACREATININA Generalidad

La creatinina es una sustancia que deriva del metabolismo muscular

(muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina y representa el

subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina es independiente

de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es proporcional dentro

de ciertos liacutemites a la masa muscular Se libera de los glomeacuterulos y no

es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales puede ser excretada

especialmente cuando se aumenta la concentracioacuten hemaacutetica El

aumento de la creatinina en el suero empieza a ser evidente cuando el

filtrado glomerular es por debajo de 60 ml por minuto

Indicaciones

La determinacioacuten de la cratinina es utilizada en el diagnoacutestico de las

enfermedades renales agudas o croacutenicas y tambieacuten para el monitoreo

de la diaacutelisis renal El aumento de la creatinina es un iacutendice de la

insuficiencia glomerular en cuanto eacutesta es eliminada por filtracioacuten

glomerular Mientras la uremia en la sangre puede ser controlada a

traveacutes de una oportuna dieta la creatinina se correlaciona casi

exclusivamente a la eficiencia de la filtracioacuten glomerular La creatinina

representa el iacutendice maacutes fiel de la insuficiencia renal

Preparacioacuten del paciente

Ayuno

Modalidad de la toma de muestra

Ninguna particularidad

Transporte

Transportar a temperatura ambiente

Conservacioacuten

Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede

conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y

6 meses en congelacioacuten

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Centrifugacioacuten

Poner el tubo de ensayo en la centriacutefuga de modo balanceado poner el

reloj 5 minutos y centrifugar por 3000 rpm Verificar la idoneidad del

suero o plasma ictericia presencia de coaacutegulos filamentos de fibrina

turbidez Sentildealar eventualmente en el resultado la no idoneidad de la

muestra

Metoacutedicas de determinacioacuten

Meacutetodo cineacutetico enzimaacutetico

El meacutetodo enzimaacutetico colorimeacutetrico consiste en la medida del color

desarrollado con el reactivo de Jaffe antes y despueacutes de una reaccioacuten

con la enzima especiacutefica la creatincinasa esta enzima transforma la

creatinina en creatina con medida final a 340 nm de la creatina

Meacutetodo colorimeacutetrico y procedimiento analiacutetico

Ademaacutes de la determinacioacuten de la creatinina con una teacutecnica de punto

final maacutes frecuentemente se utiliza una teacutecnica cineacutetica en la cual la

creatinina en medio alcalino reacciona con picrato produciendo un

complejo coloreado rojo-naranja la diferencia de absorcioacuten durante el

tiempo de conversioacuten es directamente proporcional a la concentracioacuten

de creatinina en la muestra

Creatinina + aacutecido piacutecrico mdashmdashmdashgt creatinina picrato (complejo)

Materiales

1048664 Guantes descartables no esteacuteriles

1048664 Tubos de ensayo 13 x 100 mm

1048664 Puntas de pipeta 10-100 ul

1048664 1048664 Puntas de pipeta 100-1000 ul

1048664 1048664 Centriacutefuga

1048664 Espectrofotoacutemetro

1048664 Bantildeo Mariacutea

1048664 Reloj marcador

1048664 Pipetas automaacuteticas 10-100 ul

1048664 Pipetas automaacuteticas 100-1000 ul

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Procedimiento

Seguir las instrucciones de la casa comercial

Control de Calidad

Se deberaacuten usar sueros control normal y patoloacutegico en las mismas

condiciones que las muestras

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

La metoacutedica es especiacutefica para la creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el meacutetodo Jaffe es necesario corregir el valor de

03 mgdl para lograr valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias maacutes significativas son

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Algunos antibioacuteticos como las cefalosporinas pueden dar valores

falsamente elevados

Valor de referencia

Hombres Hasta 13 mgdl

Mujeres Hasta 11 mgdl

Neonatos o nintildeos Hasta 07 mgdl

Criterios de validacioacuten

Confrontar paraacutemetros de funcionalidad renal (urea potasio proteiacutenas

densidad urinaria)

Confrontar paraacutemetros de equilibrio electroliacuteticos (sodio potasio cloro)

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de

embarazo

Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)

DEPURACION DE CREATININA

Generalidad

La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la

filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del

metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina

y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina

es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es

proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera

desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales

puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la

concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero

empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de

60 ml por minuto

La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un

determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la

concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la

creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina

en un minuto de tiempo)

C= U x VP (mlmin)

donde

C= aclaramiento

U= concentracioacuten de creatinina en la orina

V= volumen de la orina eliminada

P= concentracioacuten de creatinina en el plasma

Indicaciones

La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el

valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la

creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la

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creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de

funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la

urea

El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la

enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico

obstruccioacuten de la viacutea renal)

Preparacioacuten del paciente

Ayuno

Modalidad de la toma de muestra

A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento

Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco

de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un

estabilizante si es necesario

Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente

a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la

orina

b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas

c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda

la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC

Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada

inmediatamente al laboratorio

B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma

de muestra de sangre

Transporte

La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de

sangre a temperatura ambiente

Conservacioacuten

Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede

conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y

6 meses en congelacioacuten

Conservar las orinas a 2-4degC

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Verificacioacuten de la muestra

Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto

Metoacutedica de determinacioacuten

Cu x Vmin

Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash

Ps

donde

Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl

Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl

Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)

Procedimiento analiacutetico

Ver metoacutedica de la creatinina

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el

meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr

valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias significativas se deben

Para las orinas

Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)

Mala recoleccioacuten de orina

Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos

Para la sangre

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Valor de referencia

ge70mlmin

PRACTICA 4

EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO

PROPOacuteSITO

Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares

cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin

de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten

en diferente localizacioacuten

MUESTRA REQUERIDA

15 mL de orina

MATERIALES

- Tubos coacutenicos de 15 mL

- Laacuteminas portaobjetos

- Laminillas cubreobjetos

- Marcador para vidrio

- Gradillas para tubos

- Guantes descartables

EQUIPO

- Reloj marcador

- Centriacutefuga

- Microscopio

PROCEDIMIENTO

- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm

- Descartar el liacutequido sobrenadante

- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto

- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del

sedimento

- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x

- Anotar lo observado

FUENTES DE ERROR

- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios

- Desecacioacuten del sedimento urinario

-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten

microscoacutepica

- Uso excesivo de luz

- Centrifugacioacuten inadecuada

FORMA DE REPORTE

CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas

moderadas o abundantes

GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros

hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos

Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo

FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes

CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de

calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de

amonio leucina cistina y tirosina

Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes

LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes

PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis

huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces

BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes

solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo

Valores de referencia

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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas

CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse

GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse

LEUCOCITOS 0-5 por campo

CILINDROS No deben observarse

FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse

CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a

moderada cantidad

LEVADURAS No deben observarse

PARAacuteSITOS No deben observarse

BACTERIAS Escasas o no presentes

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PRACTICA 6

UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO

Condiciones generales

La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta

razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber

sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su

procesamiento

Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin

sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten

incorrecta o demora en la siembra

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO

Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos

a) Guantes de laacutetex esteacuteriles

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo

ser de 4rdquo x 4rdquo

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina

Procedimiento

a) Mantener la privacidad de la paciente

b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la

muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos

humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas

maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea

expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes

f) Descartar la gasa

g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el

procedimiento con otra gasa

h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca

i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar

Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio

j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la

superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente

Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones

Materiales

a) Guantes de laacutetex

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra

Procedimiento

a) Mantener la privacidad del paciente

b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra

hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten

Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande

con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa

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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra

gasa

g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca

h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten

directamente en un recipiente (orina para descartar)

i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del

chorro medio

j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio

SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA

Objetivo

Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina

Campo de aplicacioacuten

Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de

infecciones del tracto urinario

Materiales y equipos

a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL

b) Estufa de 35 ndash 37 degC

c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar

d) Guantes de laacutetex

e) Contenedor de material contaminado

f) Pinza esteacuteril

g) Propipeta o pipetor automaacutetico

h) Medios de cultivo

ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)

ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)

Procedimiento

a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por

cultivo

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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del

mechero Bunsen

c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a

temperatura ambiente Rotular las placas

d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola

en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa

e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del

frasco en el mechero Bunsen

f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y

sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra

g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra

hacia delante y hacia atraacutes

h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos

perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa

i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey

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Lectura

a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar

incubar hasta las 48 horas

b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se

multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL

Interpretacioacuten

a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es

la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen

b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el

procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente

c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la

muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra

d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL

pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias

polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos

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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se

informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En

pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a

pocas colonias

IDENTIFICACION BACTERIANA

Lectura de cultivos en agar Mac Conkey

ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde

entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente

rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas

de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm

ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color

rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide

ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color

rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae

Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales

PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados

erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de

hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Utilizacioacuten de hidratos de carbono

ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)

Abreviatura (A)

ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura (A)

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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

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Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
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Procedimiento

1) En un tubo de ensayo agregar 1g de reactivo de Rothera con 5 ml de orina

Mezclar por inversioacuten

2) Luego agregar 1ml de hidroacutexido de amonio concentrado

3) Si la prueba es positiva se forma un anillo rojo a puacuterpura en el tiempo de

112 minuto en el punto de contacto

Dar los resultados seguacuten la siguiente pauta

Negativa No se forma el anillo o la formacioacuten de un anillo marroacuten

Trazas La formacioacuten de un anillo puacuterpura o de color rosado

2(+) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro estrecho limitado

4 (++++) La formacioacuten de un anillo puacuterpura oscuro extenso

DETECCION DE SANGRE EN ORINA (SANGRE OCULTA)

PRUEBA DE BENCIDINA

Reactivo A

Solucioacuten de Bencidina al 1 en aacutecido aceacutetico al 50

Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes

Procedimiento

En un tubo o sobre un papel filtro( en este caso ldquomancharrdquo el papel con la muestra

en estudio)

2 ndash 4 gotas de bencidina

Agregar 2 ndash 4 gotas de peroacutexido de hidroacutegeno (agua oxigenada)

Interpretacioacuten

Si existe sangre se formaraacute un halo verde azulado

Negativo halo marroacuten

Reactivo B

Solucioacuten de Piramidoacuten al 5 en aacutecido aceacutetico al 50

Peroacutexido de hidroacutegeno de 10 voluacutemenes

La solucioacuten de piramidoacuten puede ser preparada sin aacutecido aceacutetico por lo tanto el

orden de uso es piramidoacuten acido aceacutetico agua oxigenada Resultado

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DETERMINACION DE BILIRRUBINA Y UROBILINOGENO

REACCION DEL YODO DE SMITH (BILIRRUBINAS)

En un tubo de ensayo colocar 5ml de orina aacutecida y cubrirla con 2ml de una

solucioacuten de yodo al 07 en alcohopl etiacutelico al 95 La presencia de un anillo de

color verde esmeralda en la interfase de ambos liacutequidos indica la presencia de

bilirrubina

La deteccioacuten de urobilinoacutegeno en orina tambieacuten indican un problema hepaacutetico Uno

de los problemas importantes en la deteccioacuten de urobilinoacutegeno

REACCION CUANTITATIVA DE EHRLICH

Reactivo de Ehrlich

p-dimetilanminobenzaldehiacutedo 10g

HCl concentrado 75ml

Agua destilada 75ml

Procedimiento

1- Colocar 10ml de orina en un tubo de ensayo recieacuten emitida

2- Agregar 1ml del reactivo de Ehrlich

3- Dejar en reposo durante 5 minutos

La presencia urobilinoacutegeno determina que la solucioacuten cambie de color niveles

altos y dan un color rojo cereza

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E PRACTICA 3

DEPURACION DE CREATININACREATININA Generalidad

La creatinina es una sustancia que deriva del metabolismo muscular

(muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina y representa el

subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina es independiente

de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es proporcional dentro

de ciertos liacutemites a la masa muscular Se libera de los glomeacuterulos y no

es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales puede ser excretada

especialmente cuando se aumenta la concentracioacuten hemaacutetica El

aumento de la creatinina en el suero empieza a ser evidente cuando el

filtrado glomerular es por debajo de 60 ml por minuto

Indicaciones

La determinacioacuten de la cratinina es utilizada en el diagnoacutestico de las

enfermedades renales agudas o croacutenicas y tambieacuten para el monitoreo

de la diaacutelisis renal El aumento de la creatinina es un iacutendice de la

insuficiencia glomerular en cuanto eacutesta es eliminada por filtracioacuten

glomerular Mientras la uremia en la sangre puede ser controlada a

traveacutes de una oportuna dieta la creatinina se correlaciona casi

exclusivamente a la eficiencia de la filtracioacuten glomerular La creatinina

representa el iacutendice maacutes fiel de la insuficiencia renal

Preparacioacuten del paciente

Ayuno

Modalidad de la toma de muestra

Ninguna particularidad

Transporte

Transportar a temperatura ambiente

Conservacioacuten

Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede

conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y

6 meses en congelacioacuten

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Centrifugacioacuten

Poner el tubo de ensayo en la centriacutefuga de modo balanceado poner el

reloj 5 minutos y centrifugar por 3000 rpm Verificar la idoneidad del

suero o plasma ictericia presencia de coaacutegulos filamentos de fibrina

turbidez Sentildealar eventualmente en el resultado la no idoneidad de la

muestra

Metoacutedicas de determinacioacuten

Meacutetodo cineacutetico enzimaacutetico

El meacutetodo enzimaacutetico colorimeacutetrico consiste en la medida del color

desarrollado con el reactivo de Jaffe antes y despueacutes de una reaccioacuten

con la enzima especiacutefica la creatincinasa esta enzima transforma la

creatinina en creatina con medida final a 340 nm de la creatina

Meacutetodo colorimeacutetrico y procedimiento analiacutetico

Ademaacutes de la determinacioacuten de la creatinina con una teacutecnica de punto

final maacutes frecuentemente se utiliza una teacutecnica cineacutetica en la cual la

creatinina en medio alcalino reacciona con picrato produciendo un

complejo coloreado rojo-naranja la diferencia de absorcioacuten durante el

tiempo de conversioacuten es directamente proporcional a la concentracioacuten

de creatinina en la muestra

Creatinina + aacutecido piacutecrico mdashmdashmdashgt creatinina picrato (complejo)

Materiales

1048664 Guantes descartables no esteacuteriles

1048664 Tubos de ensayo 13 x 100 mm

1048664 Puntas de pipeta 10-100 ul

1048664 1048664 Puntas de pipeta 100-1000 ul

1048664 1048664 Centriacutefuga

1048664 Espectrofotoacutemetro

1048664 Bantildeo Mariacutea

1048664 Reloj marcador

1048664 Pipetas automaacuteticas 10-100 ul

1048664 Pipetas automaacuteticas 100-1000 ul

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Procedimiento

Seguir las instrucciones de la casa comercial

Control de Calidad

Se deberaacuten usar sueros control normal y patoloacutegico en las mismas

condiciones que las muestras

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

La metoacutedica es especiacutefica para la creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el meacutetodo Jaffe es necesario corregir el valor de

03 mgdl para lograr valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias maacutes significativas son

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Algunos antibioacuteticos como las cefalosporinas pueden dar valores

falsamente elevados

Valor de referencia

Hombres Hasta 13 mgdl

Mujeres Hasta 11 mgdl

Neonatos o nintildeos Hasta 07 mgdl

Criterios de validacioacuten

Confrontar paraacutemetros de funcionalidad renal (urea potasio proteiacutenas

densidad urinaria)

Confrontar paraacutemetros de equilibrio electroliacuteticos (sodio potasio cloro)

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Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de

embarazo

Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)

DEPURACION DE CREATININA

Generalidad

La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la

filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del

metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina

y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina

es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es

proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera

desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales

puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la

concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero

empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de

60 ml por minuto

La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un

determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la

concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la

creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina

en un minuto de tiempo)

C= U x VP (mlmin)

donde

C= aclaramiento

U= concentracioacuten de creatinina en la orina

V= volumen de la orina eliminada

P= concentracioacuten de creatinina en el plasma

Indicaciones

La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el

valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la

creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la

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creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de

funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la

urea

El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la

enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico

obstruccioacuten de la viacutea renal)

Preparacioacuten del paciente

Ayuno

Modalidad de la toma de muestra

A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento

Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco

de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un

estabilizante si es necesario

Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente

a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la

orina

b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas

c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda

la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC

Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada

inmediatamente al laboratorio

B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma

de muestra de sangre

Transporte

La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de

sangre a temperatura ambiente

Conservacioacuten

Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede

conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y

6 meses en congelacioacuten

Conservar las orinas a 2-4degC

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Verificacioacuten de la muestra

Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto

Metoacutedica de determinacioacuten

Cu x Vmin

Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash

Ps

donde

Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl

Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl

Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)

Procedimiento analiacutetico

Ver metoacutedica de la creatinina

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el

meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr

valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias significativas se deben

Para las orinas

Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)

Mala recoleccioacuten de orina

Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos

Para la sangre

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Valor de referencia

ge70mlmin

PRACTICA 4

EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO

PROPOacuteSITO

Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares

cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin

de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten

en diferente localizacioacuten

MUESTRA REQUERIDA

15 mL de orina

MATERIALES

- Tubos coacutenicos de 15 mL

- Laacuteminas portaobjetos

- Laminillas cubreobjetos

- Marcador para vidrio

- Gradillas para tubos

- Guantes descartables

EQUIPO

- Reloj marcador

- Centriacutefuga

- Microscopio

PROCEDIMIENTO

- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm

- Descartar el liacutequido sobrenadante

- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano

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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto

- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del

sedimento

- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x

- Anotar lo observado

FUENTES DE ERROR

- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios

- Desecacioacuten del sedimento urinario

-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten

microscoacutepica

- Uso excesivo de luz

- Centrifugacioacuten inadecuada

FORMA DE REPORTE

CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas

moderadas o abundantes

GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros

hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos

Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo

FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes

CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de

calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de

amonio leucina cistina y tirosina

Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes

LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes

PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis

huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces

BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes

solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo

Valores de referencia

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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas

CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse

GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse

LEUCOCITOS 0-5 por campo

CILINDROS No deben observarse

FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse

CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a

moderada cantidad

LEVADURAS No deben observarse

PARAacuteSITOS No deben observarse

BACTERIAS Escasas o no presentes

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PRACTICA 6

UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO

Condiciones generales

La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta

razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber

sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su

procesamiento

Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin

sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten

incorrecta o demora en la siembra

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO

Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos

a) Guantes de laacutetex esteacuteriles

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo

ser de 4rdquo x 4rdquo

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina

Procedimiento

a) Mantener la privacidad de la paciente

b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la

muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos

humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas

maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea

expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes

f) Descartar la gasa

g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el

procedimiento con otra gasa

h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca

i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar

Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio

j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la

superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente

Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones

Materiales

a) Guantes de laacutetex

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra

Procedimiento

a) Mantener la privacidad del paciente

b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra

hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten

Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande

con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa

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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra

gasa

g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca

h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten

directamente en un recipiente (orina para descartar)

i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del

chorro medio

j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio

SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA

Objetivo

Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina

Campo de aplicacioacuten

Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de

infecciones del tracto urinario

Materiales y equipos

a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL

b) Estufa de 35 ndash 37 degC

c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar

d) Guantes de laacutetex

e) Contenedor de material contaminado

f) Pinza esteacuteril

g) Propipeta o pipetor automaacutetico

h) Medios de cultivo

ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)

ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)

Procedimiento

a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por

cultivo

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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del

mechero Bunsen

c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a

temperatura ambiente Rotular las placas

d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola

en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa

e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del

frasco en el mechero Bunsen

f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y

sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra

g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra

hacia delante y hacia atraacutes

h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos

perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa

i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey

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Lectura

a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar

incubar hasta las 48 horas

b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se

multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL

Interpretacioacuten

a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es

la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen

b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el

procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente

c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la

muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra

d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL

pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias

polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos

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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se

informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En

pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a

pocas colonias

IDENTIFICACION BACTERIANA

Lectura de cultivos en agar Mac Conkey

ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde

entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente

rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas

de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm

ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color

rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide

ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color

rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae

Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales

PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados

erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de

hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Utilizacioacuten de hidratos de carbono

ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)

Abreviatura (A)

ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura (A)

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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

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Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 9: Guia de Practicas de Uroanalisis

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DETERMINACION DE BILIRRUBINA Y UROBILINOGENO

REACCION DEL YODO DE SMITH (BILIRRUBINAS)

En un tubo de ensayo colocar 5ml de orina aacutecida y cubrirla con 2ml de una

solucioacuten de yodo al 07 en alcohopl etiacutelico al 95 La presencia de un anillo de

color verde esmeralda en la interfase de ambos liacutequidos indica la presencia de

bilirrubina

La deteccioacuten de urobilinoacutegeno en orina tambieacuten indican un problema hepaacutetico Uno

de los problemas importantes en la deteccioacuten de urobilinoacutegeno

REACCION CUANTITATIVA DE EHRLICH

Reactivo de Ehrlich

p-dimetilanminobenzaldehiacutedo 10g

HCl concentrado 75ml

Agua destilada 75ml

Procedimiento

1- Colocar 10ml de orina en un tubo de ensayo recieacuten emitida

2- Agregar 1ml del reactivo de Ehrlich

3- Dejar en reposo durante 5 minutos

La presencia urobilinoacutegeno determina que la solucioacuten cambie de color niveles

altos y dan un color rojo cereza

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E PRACTICA 3

DEPURACION DE CREATININACREATININA Generalidad

La creatinina es una sustancia que deriva del metabolismo muscular

(muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina y representa el

subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina es independiente

de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es proporcional dentro

de ciertos liacutemites a la masa muscular Se libera de los glomeacuterulos y no

es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales puede ser excretada

especialmente cuando se aumenta la concentracioacuten hemaacutetica El

aumento de la creatinina en el suero empieza a ser evidente cuando el

filtrado glomerular es por debajo de 60 ml por minuto

Indicaciones

La determinacioacuten de la cratinina es utilizada en el diagnoacutestico de las

enfermedades renales agudas o croacutenicas y tambieacuten para el monitoreo

de la diaacutelisis renal El aumento de la creatinina es un iacutendice de la

insuficiencia glomerular en cuanto eacutesta es eliminada por filtracioacuten

glomerular Mientras la uremia en la sangre puede ser controlada a

traveacutes de una oportuna dieta la creatinina se correlaciona casi

exclusivamente a la eficiencia de la filtracioacuten glomerular La creatinina

representa el iacutendice maacutes fiel de la insuficiencia renal

Preparacioacuten del paciente

Ayuno

Modalidad de la toma de muestra

Ninguna particularidad

Transporte

Transportar a temperatura ambiente

Conservacioacuten

Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede

conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y

6 meses en congelacioacuten

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Centrifugacioacuten

Poner el tubo de ensayo en la centriacutefuga de modo balanceado poner el

reloj 5 minutos y centrifugar por 3000 rpm Verificar la idoneidad del

suero o plasma ictericia presencia de coaacutegulos filamentos de fibrina

turbidez Sentildealar eventualmente en el resultado la no idoneidad de la

muestra

Metoacutedicas de determinacioacuten

Meacutetodo cineacutetico enzimaacutetico

El meacutetodo enzimaacutetico colorimeacutetrico consiste en la medida del color

desarrollado con el reactivo de Jaffe antes y despueacutes de una reaccioacuten

con la enzima especiacutefica la creatincinasa esta enzima transforma la

creatinina en creatina con medida final a 340 nm de la creatina

Meacutetodo colorimeacutetrico y procedimiento analiacutetico

Ademaacutes de la determinacioacuten de la creatinina con una teacutecnica de punto

final maacutes frecuentemente se utiliza una teacutecnica cineacutetica en la cual la

creatinina en medio alcalino reacciona con picrato produciendo un

complejo coloreado rojo-naranja la diferencia de absorcioacuten durante el

tiempo de conversioacuten es directamente proporcional a la concentracioacuten

de creatinina en la muestra

Creatinina + aacutecido piacutecrico mdashmdashmdashgt creatinina picrato (complejo)

Materiales

1048664 Guantes descartables no esteacuteriles

1048664 Tubos de ensayo 13 x 100 mm

1048664 Puntas de pipeta 10-100 ul

1048664 1048664 Puntas de pipeta 100-1000 ul

1048664 1048664 Centriacutefuga

1048664 Espectrofotoacutemetro

1048664 Bantildeo Mariacutea

1048664 Reloj marcador

1048664 Pipetas automaacuteticas 10-100 ul

1048664 Pipetas automaacuteticas 100-1000 ul

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Procedimiento

Seguir las instrucciones de la casa comercial

Control de Calidad

Se deberaacuten usar sueros control normal y patoloacutegico en las mismas

condiciones que las muestras

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

La metoacutedica es especiacutefica para la creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el meacutetodo Jaffe es necesario corregir el valor de

03 mgdl para lograr valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias maacutes significativas son

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Algunos antibioacuteticos como las cefalosporinas pueden dar valores

falsamente elevados

Valor de referencia

Hombres Hasta 13 mgdl

Mujeres Hasta 11 mgdl

Neonatos o nintildeos Hasta 07 mgdl

Criterios de validacioacuten

Confrontar paraacutemetros de funcionalidad renal (urea potasio proteiacutenas

densidad urinaria)

Confrontar paraacutemetros de equilibrio electroliacuteticos (sodio potasio cloro)

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Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de

embarazo

Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)

DEPURACION DE CREATININA

Generalidad

La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la

filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del

metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina

y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina

es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es

proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera

desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales

puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la

concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero

empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de

60 ml por minuto

La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un

determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la

concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la

creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina

en un minuto de tiempo)

C= U x VP (mlmin)

donde

C= aclaramiento

U= concentracioacuten de creatinina en la orina

V= volumen de la orina eliminada

P= concentracioacuten de creatinina en el plasma

Indicaciones

La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el

valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la

creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la

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creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de

funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la

urea

El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la

enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico

obstruccioacuten de la viacutea renal)

Preparacioacuten del paciente

Ayuno

Modalidad de la toma de muestra

A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento

Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco

de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un

estabilizante si es necesario

Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente

a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la

orina

b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas

c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda

la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC

Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada

inmediatamente al laboratorio

B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma

de muestra de sangre

Transporte

La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de

sangre a temperatura ambiente

Conservacioacuten

Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede

conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y

6 meses en congelacioacuten

Conservar las orinas a 2-4degC

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Verificacioacuten de la muestra

Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto

Metoacutedica de determinacioacuten

Cu x Vmin

Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash

Ps

donde

Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl

Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl

Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)

Procedimiento analiacutetico

Ver metoacutedica de la creatinina

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el

meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr

valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias significativas se deben

Para las orinas

Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)

Mala recoleccioacuten de orina

Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos

Para la sangre

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Valor de referencia

ge70mlmin

PRACTICA 4

EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO

PROPOacuteSITO

Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares

cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin

de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten

en diferente localizacioacuten

MUESTRA REQUERIDA

15 mL de orina

MATERIALES

- Tubos coacutenicos de 15 mL

- Laacuteminas portaobjetos

- Laminillas cubreobjetos

- Marcador para vidrio

- Gradillas para tubos

- Guantes descartables

EQUIPO

- Reloj marcador

- Centriacutefuga

- Microscopio

PROCEDIMIENTO

- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm

- Descartar el liacutequido sobrenadante

- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano

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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto

- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del

sedimento

- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x

- Anotar lo observado

FUENTES DE ERROR

- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios

- Desecacioacuten del sedimento urinario

-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten

microscoacutepica

- Uso excesivo de luz

- Centrifugacioacuten inadecuada

FORMA DE REPORTE

CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas

moderadas o abundantes

GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros

hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos

Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo

FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes

CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de

calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de

amonio leucina cistina y tirosina

Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes

LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes

PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis

huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces

BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes

solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo

Valores de referencia

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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas

CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse

GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse

LEUCOCITOS 0-5 por campo

CILINDROS No deben observarse

FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse

CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a

moderada cantidad

LEVADURAS No deben observarse

PARAacuteSITOS No deben observarse

BACTERIAS Escasas o no presentes

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PRACTICA 6

UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO

Condiciones generales

La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta

razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber

sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su

procesamiento

Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin

sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten

incorrecta o demora en la siembra

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO

Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos

a) Guantes de laacutetex esteacuteriles

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo

ser de 4rdquo x 4rdquo

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina

Procedimiento

a) Mantener la privacidad de la paciente

b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la

muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos

humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas

maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea

expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes

f) Descartar la gasa

g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el

procedimiento con otra gasa

h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca

i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar

Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio

j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la

superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente

Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones

Materiales

a) Guantes de laacutetex

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra

Procedimiento

a) Mantener la privacidad del paciente

b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra

hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten

Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande

con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa

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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra

gasa

g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca

h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten

directamente en un recipiente (orina para descartar)

i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del

chorro medio

j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio

SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA

Objetivo

Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina

Campo de aplicacioacuten

Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de

infecciones del tracto urinario

Materiales y equipos

a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL

b) Estufa de 35 ndash 37 degC

c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar

d) Guantes de laacutetex

e) Contenedor de material contaminado

f) Pinza esteacuteril

g) Propipeta o pipetor automaacutetico

h) Medios de cultivo

ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)

ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)

Procedimiento

a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por

cultivo

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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del

mechero Bunsen

c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a

temperatura ambiente Rotular las placas

d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola

en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa

e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del

frasco en el mechero Bunsen

f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y

sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra

g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra

hacia delante y hacia atraacutes

h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos

perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa

i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey

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Lectura

a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar

incubar hasta las 48 horas

b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se

multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL

Interpretacioacuten

a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es

la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen

b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el

procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente

c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la

muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra

d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL

pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias

polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos

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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se

informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En

pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a

pocas colonias

IDENTIFICACION BACTERIANA

Lectura de cultivos en agar Mac Conkey

ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde

entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente

rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas

de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm

ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color

rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide

ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color

rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae

Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales

PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados

erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de

hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Utilizacioacuten de hidratos de carbono

ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)

Abreviatura (A)

ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura (A)

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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

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Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 10: Guia de Practicas de Uroanalisis

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E PRACTICA 3

DEPURACION DE CREATININACREATININA Generalidad

La creatinina es una sustancia que deriva del metabolismo muscular

(muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina y representa el

subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina es independiente

de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es proporcional dentro

de ciertos liacutemites a la masa muscular Se libera de los glomeacuterulos y no

es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales puede ser excretada

especialmente cuando se aumenta la concentracioacuten hemaacutetica El

aumento de la creatinina en el suero empieza a ser evidente cuando el

filtrado glomerular es por debajo de 60 ml por minuto

Indicaciones

La determinacioacuten de la cratinina es utilizada en el diagnoacutestico de las

enfermedades renales agudas o croacutenicas y tambieacuten para el monitoreo

de la diaacutelisis renal El aumento de la creatinina es un iacutendice de la

insuficiencia glomerular en cuanto eacutesta es eliminada por filtracioacuten

glomerular Mientras la uremia en la sangre puede ser controlada a

traveacutes de una oportuna dieta la creatinina se correlaciona casi

exclusivamente a la eficiencia de la filtracioacuten glomerular La creatinina

representa el iacutendice maacutes fiel de la insuficiencia renal

Preparacioacuten del paciente

Ayuno

Modalidad de la toma de muestra

Ninguna particularidad

Transporte

Transportar a temperatura ambiente

Conservacioacuten

Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede

conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y

6 meses en congelacioacuten

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Centrifugacioacuten

Poner el tubo de ensayo en la centriacutefuga de modo balanceado poner el

reloj 5 minutos y centrifugar por 3000 rpm Verificar la idoneidad del

suero o plasma ictericia presencia de coaacutegulos filamentos de fibrina

turbidez Sentildealar eventualmente en el resultado la no idoneidad de la

muestra

Metoacutedicas de determinacioacuten

Meacutetodo cineacutetico enzimaacutetico

El meacutetodo enzimaacutetico colorimeacutetrico consiste en la medida del color

desarrollado con el reactivo de Jaffe antes y despueacutes de una reaccioacuten

con la enzima especiacutefica la creatincinasa esta enzima transforma la

creatinina en creatina con medida final a 340 nm de la creatina

Meacutetodo colorimeacutetrico y procedimiento analiacutetico

Ademaacutes de la determinacioacuten de la creatinina con una teacutecnica de punto

final maacutes frecuentemente se utiliza una teacutecnica cineacutetica en la cual la

creatinina en medio alcalino reacciona con picrato produciendo un

complejo coloreado rojo-naranja la diferencia de absorcioacuten durante el

tiempo de conversioacuten es directamente proporcional a la concentracioacuten

de creatinina en la muestra

Creatinina + aacutecido piacutecrico mdashmdashmdashgt creatinina picrato (complejo)

Materiales

1048664 Guantes descartables no esteacuteriles

1048664 Tubos de ensayo 13 x 100 mm

1048664 Puntas de pipeta 10-100 ul

1048664 1048664 Puntas de pipeta 100-1000 ul

1048664 1048664 Centriacutefuga

1048664 Espectrofotoacutemetro

1048664 Bantildeo Mariacutea

1048664 Reloj marcador

1048664 Pipetas automaacuteticas 10-100 ul

1048664 Pipetas automaacuteticas 100-1000 ul

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Procedimiento

Seguir las instrucciones de la casa comercial

Control de Calidad

Se deberaacuten usar sueros control normal y patoloacutegico en las mismas

condiciones que las muestras

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

La metoacutedica es especiacutefica para la creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el meacutetodo Jaffe es necesario corregir el valor de

03 mgdl para lograr valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias maacutes significativas son

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Algunos antibioacuteticos como las cefalosporinas pueden dar valores

falsamente elevados

Valor de referencia

Hombres Hasta 13 mgdl

Mujeres Hasta 11 mgdl

Neonatos o nintildeos Hasta 07 mgdl

Criterios de validacioacuten

Confrontar paraacutemetros de funcionalidad renal (urea potasio proteiacutenas

densidad urinaria)

Confrontar paraacutemetros de equilibrio electroliacuteticos (sodio potasio cloro)

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Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de

embarazo

Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)

DEPURACION DE CREATININA

Generalidad

La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la

filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del

metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina

y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina

es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es

proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera

desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales

puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la

concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero

empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de

60 ml por minuto

La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un

determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la

concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la

creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina

en un minuto de tiempo)

C= U x VP (mlmin)

donde

C= aclaramiento

U= concentracioacuten de creatinina en la orina

V= volumen de la orina eliminada

P= concentracioacuten de creatinina en el plasma

Indicaciones

La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el

valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la

creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la

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creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de

funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la

urea

El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la

enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico

obstruccioacuten de la viacutea renal)

Preparacioacuten del paciente

Ayuno

Modalidad de la toma de muestra

A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento

Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco

de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un

estabilizante si es necesario

Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente

a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la

orina

b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas

c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda

la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC

Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada

inmediatamente al laboratorio

B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma

de muestra de sangre

Transporte

La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de

sangre a temperatura ambiente

Conservacioacuten

Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede

conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y

6 meses en congelacioacuten

Conservar las orinas a 2-4degC

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Verificacioacuten de la muestra

Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto

Metoacutedica de determinacioacuten

Cu x Vmin

Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash

Ps

donde

Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl

Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl

Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)

Procedimiento analiacutetico

Ver metoacutedica de la creatinina

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el

meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr

valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias significativas se deben

Para las orinas

Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)

Mala recoleccioacuten de orina

Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos

Para la sangre

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Valor de referencia

ge70mlmin

PRACTICA 4

EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO

PROPOacuteSITO

Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares

cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin

de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten

en diferente localizacioacuten

MUESTRA REQUERIDA

15 mL de orina

MATERIALES

- Tubos coacutenicos de 15 mL

- Laacuteminas portaobjetos

- Laminillas cubreobjetos

- Marcador para vidrio

- Gradillas para tubos

- Guantes descartables

EQUIPO

- Reloj marcador

- Centriacutefuga

- Microscopio

PROCEDIMIENTO

- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm

- Descartar el liacutequido sobrenadante

- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano

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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto

- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del

sedimento

- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x

- Anotar lo observado

FUENTES DE ERROR

- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios

- Desecacioacuten del sedimento urinario

-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten

microscoacutepica

- Uso excesivo de luz

- Centrifugacioacuten inadecuada

FORMA DE REPORTE

CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas

moderadas o abundantes

GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros

hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos

Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo

FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes

CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de

calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de

amonio leucina cistina y tirosina

Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes

LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes

PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis

huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces

BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes

solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo

Valores de referencia

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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas

CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse

GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse

LEUCOCITOS 0-5 por campo

CILINDROS No deben observarse

FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse

CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a

moderada cantidad

LEVADURAS No deben observarse

PARAacuteSITOS No deben observarse

BACTERIAS Escasas o no presentes

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PRACTICA 6

UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO

Condiciones generales

La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta

razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber

sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su

procesamiento

Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin

sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten

incorrecta o demora en la siembra

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO

Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos

a) Guantes de laacutetex esteacuteriles

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo

ser de 4rdquo x 4rdquo

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina

Procedimiento

a) Mantener la privacidad de la paciente

b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la

muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos

humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas

maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea

expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes

f) Descartar la gasa

g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el

procedimiento con otra gasa

h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca

i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar

Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio

j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la

superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente

Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones

Materiales

a) Guantes de laacutetex

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra

Procedimiento

a) Mantener la privacidad del paciente

b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra

hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten

Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande

con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa

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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra

gasa

g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca

h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten

directamente en un recipiente (orina para descartar)

i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del

chorro medio

j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio

SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA

Objetivo

Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina

Campo de aplicacioacuten

Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de

infecciones del tracto urinario

Materiales y equipos

a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL

b) Estufa de 35 ndash 37 degC

c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar

d) Guantes de laacutetex

e) Contenedor de material contaminado

f) Pinza esteacuteril

g) Propipeta o pipetor automaacutetico

h) Medios de cultivo

ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)

ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)

Procedimiento

a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por

cultivo

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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del

mechero Bunsen

c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a

temperatura ambiente Rotular las placas

d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola

en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa

e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del

frasco en el mechero Bunsen

f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y

sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra

g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra

hacia delante y hacia atraacutes

h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos

perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa

i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey

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Lectura

a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar

incubar hasta las 48 horas

b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se

multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL

Interpretacioacuten

a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es

la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen

b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el

procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente

c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la

muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra

d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL

pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias

polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos

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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se

informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En

pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a

pocas colonias

IDENTIFICACION BACTERIANA

Lectura de cultivos en agar Mac Conkey

ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde

entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente

rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas

de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm

ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color

rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide

ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color

rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae

Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales

PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados

erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de

hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Utilizacioacuten de hidratos de carbono

ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)

Abreviatura (A)

ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura (A)

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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

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Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 11: Guia de Practicas de Uroanalisis

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Centrifugacioacuten

Poner el tubo de ensayo en la centriacutefuga de modo balanceado poner el

reloj 5 minutos y centrifugar por 3000 rpm Verificar la idoneidad del

suero o plasma ictericia presencia de coaacutegulos filamentos de fibrina

turbidez Sentildealar eventualmente en el resultado la no idoneidad de la

muestra

Metoacutedicas de determinacioacuten

Meacutetodo cineacutetico enzimaacutetico

El meacutetodo enzimaacutetico colorimeacutetrico consiste en la medida del color

desarrollado con el reactivo de Jaffe antes y despueacutes de una reaccioacuten

con la enzima especiacutefica la creatincinasa esta enzima transforma la

creatinina en creatina con medida final a 340 nm de la creatina

Meacutetodo colorimeacutetrico y procedimiento analiacutetico

Ademaacutes de la determinacioacuten de la creatinina con una teacutecnica de punto

final maacutes frecuentemente se utiliza una teacutecnica cineacutetica en la cual la

creatinina en medio alcalino reacciona con picrato produciendo un

complejo coloreado rojo-naranja la diferencia de absorcioacuten durante el

tiempo de conversioacuten es directamente proporcional a la concentracioacuten

de creatinina en la muestra

Creatinina + aacutecido piacutecrico mdashmdashmdashgt creatinina picrato (complejo)

Materiales

1048664 Guantes descartables no esteacuteriles

1048664 Tubos de ensayo 13 x 100 mm

1048664 Puntas de pipeta 10-100 ul

1048664 1048664 Puntas de pipeta 100-1000 ul

1048664 1048664 Centriacutefuga

1048664 Espectrofotoacutemetro

1048664 Bantildeo Mariacutea

1048664 Reloj marcador

1048664 Pipetas automaacuteticas 10-100 ul

1048664 Pipetas automaacuteticas 100-1000 ul

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Procedimiento

Seguir las instrucciones de la casa comercial

Control de Calidad

Se deberaacuten usar sueros control normal y patoloacutegico en las mismas

condiciones que las muestras

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

La metoacutedica es especiacutefica para la creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el meacutetodo Jaffe es necesario corregir el valor de

03 mgdl para lograr valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias maacutes significativas son

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Algunos antibioacuteticos como las cefalosporinas pueden dar valores

falsamente elevados

Valor de referencia

Hombres Hasta 13 mgdl

Mujeres Hasta 11 mgdl

Neonatos o nintildeos Hasta 07 mgdl

Criterios de validacioacuten

Confrontar paraacutemetros de funcionalidad renal (urea potasio proteiacutenas

densidad urinaria)

Confrontar paraacutemetros de equilibrio electroliacuteticos (sodio potasio cloro)

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Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de

embarazo

Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)

DEPURACION DE CREATININA

Generalidad

La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la

filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del

metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina

y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina

es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es

proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera

desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales

puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la

concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero

empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de

60 ml por minuto

La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un

determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la

concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la

creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina

en un minuto de tiempo)

C= U x VP (mlmin)

donde

C= aclaramiento

U= concentracioacuten de creatinina en la orina

V= volumen de la orina eliminada

P= concentracioacuten de creatinina en el plasma

Indicaciones

La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el

valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la

creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la

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creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de

funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la

urea

El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la

enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico

obstruccioacuten de la viacutea renal)

Preparacioacuten del paciente

Ayuno

Modalidad de la toma de muestra

A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento

Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco

de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un

estabilizante si es necesario

Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente

a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la

orina

b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas

c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda

la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC

Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada

inmediatamente al laboratorio

B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma

de muestra de sangre

Transporte

La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de

sangre a temperatura ambiente

Conservacioacuten

Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede

conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y

6 meses en congelacioacuten

Conservar las orinas a 2-4degC

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Verificacioacuten de la muestra

Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto

Metoacutedica de determinacioacuten

Cu x Vmin

Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash

Ps

donde

Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl

Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl

Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)

Procedimiento analiacutetico

Ver metoacutedica de la creatinina

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el

meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr

valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias significativas se deben

Para las orinas

Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)

Mala recoleccioacuten de orina

Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos

Para la sangre

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Valor de referencia

ge70mlmin

PRACTICA 4

EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO

PROPOacuteSITO

Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares

cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin

de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten

en diferente localizacioacuten

MUESTRA REQUERIDA

15 mL de orina

MATERIALES

- Tubos coacutenicos de 15 mL

- Laacuteminas portaobjetos

- Laminillas cubreobjetos

- Marcador para vidrio

- Gradillas para tubos

- Guantes descartables

EQUIPO

- Reloj marcador

- Centriacutefuga

- Microscopio

PROCEDIMIENTO

- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm

- Descartar el liacutequido sobrenadante

- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano

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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto

- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del

sedimento

- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x

- Anotar lo observado

FUENTES DE ERROR

- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios

- Desecacioacuten del sedimento urinario

-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten

microscoacutepica

- Uso excesivo de luz

- Centrifugacioacuten inadecuada

FORMA DE REPORTE

CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas

moderadas o abundantes

GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros

hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos

Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo

FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes

CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de

calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de

amonio leucina cistina y tirosina

Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes

LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes

PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis

huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces

BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes

solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo

Valores de referencia

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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas

CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse

GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse

LEUCOCITOS 0-5 por campo

CILINDROS No deben observarse

FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse

CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a

moderada cantidad

LEVADURAS No deben observarse

PARAacuteSITOS No deben observarse

BACTERIAS Escasas o no presentes

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PRACTICA 6

UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO

Condiciones generales

La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta

razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber

sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su

procesamiento

Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin

sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten

incorrecta o demora en la siembra

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO

Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos

a) Guantes de laacutetex esteacuteriles

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo

ser de 4rdquo x 4rdquo

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina

Procedimiento

a) Mantener la privacidad de la paciente

b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la

muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos

humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas

maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea

expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes

f) Descartar la gasa

g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el

procedimiento con otra gasa

h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca

i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar

Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio

j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la

superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente

Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones

Materiales

a) Guantes de laacutetex

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra

Procedimiento

a) Mantener la privacidad del paciente

b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra

hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten

Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande

con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa

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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra

gasa

g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca

h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten

directamente en un recipiente (orina para descartar)

i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del

chorro medio

j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio

SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA

Objetivo

Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina

Campo de aplicacioacuten

Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de

infecciones del tracto urinario

Materiales y equipos

a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL

b) Estufa de 35 ndash 37 degC

c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar

d) Guantes de laacutetex

e) Contenedor de material contaminado

f) Pinza esteacuteril

g) Propipeta o pipetor automaacutetico

h) Medios de cultivo

ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)

ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)

Procedimiento

a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por

cultivo

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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del

mechero Bunsen

c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a

temperatura ambiente Rotular las placas

d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola

en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa

e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del

frasco en el mechero Bunsen

f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y

sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra

g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra

hacia delante y hacia atraacutes

h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos

perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa

i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey

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Lectura

a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar

incubar hasta las 48 horas

b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se

multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL

Interpretacioacuten

a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es

la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen

b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el

procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente

c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la

muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra

d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL

pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias

polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos

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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se

informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En

pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a

pocas colonias

IDENTIFICACION BACTERIANA

Lectura de cultivos en agar Mac Conkey

ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde

entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente

rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas

de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm

ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color

rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide

ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color

rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae

Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales

PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados

erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de

hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Utilizacioacuten de hidratos de carbono

ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)

Abreviatura (A)

ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura (A)

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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

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Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 12: Guia de Practicas de Uroanalisis

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Procedimiento

Seguir las instrucciones de la casa comercial

Control de Calidad

Se deberaacuten usar sueros control normal y patoloacutegico en las mismas

condiciones que las muestras

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

La metoacutedica es especiacutefica para la creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el meacutetodo Jaffe es necesario corregir el valor de

03 mgdl para lograr valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias maacutes significativas son

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Algunos antibioacuteticos como las cefalosporinas pueden dar valores

falsamente elevados

Valor de referencia

Hombres Hasta 13 mgdl

Mujeres Hasta 11 mgdl

Neonatos o nintildeos Hasta 07 mgdl

Criterios de validacioacuten

Confrontar paraacutemetros de funcionalidad renal (urea potasio proteiacutenas

densidad urinaria)

Confrontar paraacutemetros de equilibrio electroliacuteticos (sodio potasio cloro)

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Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de

embarazo

Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)

DEPURACION DE CREATININA

Generalidad

La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la

filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del

metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina

y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina

es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es

proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera

desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales

puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la

concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero

empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de

60 ml por minuto

La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un

determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la

concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la

creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina

en un minuto de tiempo)

C= U x VP (mlmin)

donde

C= aclaramiento

U= concentracioacuten de creatinina en la orina

V= volumen de la orina eliminada

P= concentracioacuten de creatinina en el plasma

Indicaciones

La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el

valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la

creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la

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creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de

funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la

urea

El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la

enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico

obstruccioacuten de la viacutea renal)

Preparacioacuten del paciente

Ayuno

Modalidad de la toma de muestra

A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento

Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco

de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un

estabilizante si es necesario

Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente

a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la

orina

b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas

c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda

la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC

Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada

inmediatamente al laboratorio

B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma

de muestra de sangre

Transporte

La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de

sangre a temperatura ambiente

Conservacioacuten

Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede

conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y

6 meses en congelacioacuten

Conservar las orinas a 2-4degC

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Verificacioacuten de la muestra

Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto

Metoacutedica de determinacioacuten

Cu x Vmin

Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash

Ps

donde

Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl

Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl

Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)

Procedimiento analiacutetico

Ver metoacutedica de la creatinina

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el

meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr

valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias significativas se deben

Para las orinas

Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)

Mala recoleccioacuten de orina

Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos

Para la sangre

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Valor de referencia

ge70mlmin

PRACTICA 4

EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO

PROPOacuteSITO

Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares

cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin

de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten

en diferente localizacioacuten

MUESTRA REQUERIDA

15 mL de orina

MATERIALES

- Tubos coacutenicos de 15 mL

- Laacuteminas portaobjetos

- Laminillas cubreobjetos

- Marcador para vidrio

- Gradillas para tubos

- Guantes descartables

EQUIPO

- Reloj marcador

- Centriacutefuga

- Microscopio

PROCEDIMIENTO

- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm

- Descartar el liacutequido sobrenadante

- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano

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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto

- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del

sedimento

- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x

- Anotar lo observado

FUENTES DE ERROR

- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios

- Desecacioacuten del sedimento urinario

-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten

microscoacutepica

- Uso excesivo de luz

- Centrifugacioacuten inadecuada

FORMA DE REPORTE

CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas

moderadas o abundantes

GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros

hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos

Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo

FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes

CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de

calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de

amonio leucina cistina y tirosina

Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes

LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes

PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis

huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces

BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes

solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo

Valores de referencia

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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas

CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse

GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse

LEUCOCITOS 0-5 por campo

CILINDROS No deben observarse

FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse

CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a

moderada cantidad

LEVADURAS No deben observarse

PARAacuteSITOS No deben observarse

BACTERIAS Escasas o no presentes

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PRACTICA 6

UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO

Condiciones generales

La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta

razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber

sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su

procesamiento

Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin

sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten

incorrecta o demora en la siembra

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO

Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos

a) Guantes de laacutetex esteacuteriles

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo

ser de 4rdquo x 4rdquo

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina

Procedimiento

a) Mantener la privacidad de la paciente

b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la

muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos

humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas

maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea

expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes

f) Descartar la gasa

g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el

procedimiento con otra gasa

h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca

i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar

Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio

j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la

superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente

Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones

Materiales

a) Guantes de laacutetex

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra

Procedimiento

a) Mantener la privacidad del paciente

b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra

hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten

Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande

con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa

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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra

gasa

g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca

h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten

directamente en un recipiente (orina para descartar)

i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del

chorro medio

j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio

SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA

Objetivo

Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina

Campo de aplicacioacuten

Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de

infecciones del tracto urinario

Materiales y equipos

a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL

b) Estufa de 35 ndash 37 degC

c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar

d) Guantes de laacutetex

e) Contenedor de material contaminado

f) Pinza esteacuteril

g) Propipeta o pipetor automaacutetico

h) Medios de cultivo

ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)

ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)

Procedimiento

a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por

cultivo

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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del

mechero Bunsen

c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a

temperatura ambiente Rotular las placas

d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola

en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa

e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del

frasco en el mechero Bunsen

f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y

sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra

g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra

hacia delante y hacia atraacutes

h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos

perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa

i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey

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Lectura

a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar

incubar hasta las 48 horas

b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se

multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL

Interpretacioacuten

a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es

la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen

b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el

procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente

c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la

muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra

d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL

pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias

polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos

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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se

informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En

pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a

pocas colonias

IDENTIFICACION BACTERIANA

Lectura de cultivos en agar Mac Conkey

ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde

entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente

rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas

de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm

ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color

rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide

ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color

rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae

Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales

PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados

erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de

hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Utilizacioacuten de hidratos de carbono

ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)

Abreviatura (A)

ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura (A)

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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

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Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 13: Guia de Practicas de Uroanalisis

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Controlar sexo y edad del paciente y tambieacuten eventual estado de

embarazo

Controlar paraacutemetros del metabolismo muscular (CPK miacuteoglobulina)

DEPURACION DE CREATININA

Generalidad

La cantidad de creatinina excretada con la orina estaacute en relacioacuten con la

filtracioacuten glomerular La creatinina es una sustancia que deriva del

metabolismo muscular (muacutesculo estriado liso y cardiacuteaco) de la creatina

y representa el subproducto de excrecioacuten La produccioacuten de creatinina

es independiente de la dieta y del ejercicio muscular sin embargo es

proporcional dentro de algunos liacutemites a la masa muscular Se libera

desde los glomeacuterulos y no es reabsorbida por los tuacutebulos de los cuales

puede ser excretada especialmente cuando se aumenta la

concentracioacuten hemaacutetica El aumento de la creatinina en el suero

empieza a ser evidente cuando el filtrado glomerular es por debajo de

60 ml por minuto

La medida de la cantidad de creatinina en la orina producida en un

determinado periacuteodo de tiempo simultaacuteneamente a la medida de la

concentracioacuten plasmaacutetica lleva al caacutelculo el aclaramiento de la

creatinina (volumen del plasma en ml que es depurado de la creatinina

en un minuto de tiempo)

C= U x VP (mlmin)

donde

C= aclaramiento

U= concentracioacuten de creatinina en la orina

V= volumen de la orina eliminada

P= concentracioacuten de creatinina en el plasma

Indicaciones

La estrecha correlacioacuten entre la velocidad de filtracioacuten glomerular y el

valor de la creatinina plasmaacutetica y el hecho que la concentracioacuten de la

creatinina hemaacutetica no es influenciada por la dieta hacen de la

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creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de

funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la

urea

El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la

enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico

obstruccioacuten de la viacutea renal)

Preparacioacuten del paciente

Ayuno

Modalidad de la toma de muestra

A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento

Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco

de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un

estabilizante si es necesario

Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente

a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la

orina

b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas

c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda

la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC

Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada

inmediatamente al laboratorio

B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma

de muestra de sangre

Transporte

La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de

sangre a temperatura ambiente

Conservacioacuten

Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede

conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y

6 meses en congelacioacuten

Conservar las orinas a 2-4degC

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Verificacioacuten de la muestra

Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto

Metoacutedica de determinacioacuten

Cu x Vmin

Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash

Ps

donde

Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl

Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl

Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)

Procedimiento analiacutetico

Ver metoacutedica de la creatinina

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el

meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr

valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias significativas se deben

Para las orinas

Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)

Mala recoleccioacuten de orina

Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos

Para la sangre

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Valor de referencia

ge70mlmin

PRACTICA 4

EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO

PROPOacuteSITO

Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares

cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin

de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten

en diferente localizacioacuten

MUESTRA REQUERIDA

15 mL de orina

MATERIALES

- Tubos coacutenicos de 15 mL

- Laacuteminas portaobjetos

- Laminillas cubreobjetos

- Marcador para vidrio

- Gradillas para tubos

- Guantes descartables

EQUIPO

- Reloj marcador

- Centriacutefuga

- Microscopio

PROCEDIMIENTO

- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm

- Descartar el liacutequido sobrenadante

- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano

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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto

- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del

sedimento

- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x

- Anotar lo observado

FUENTES DE ERROR

- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios

- Desecacioacuten del sedimento urinario

-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten

microscoacutepica

- Uso excesivo de luz

- Centrifugacioacuten inadecuada

FORMA DE REPORTE

CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas

moderadas o abundantes

GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros

hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos

Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo

FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes

CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de

calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de

amonio leucina cistina y tirosina

Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes

LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes

PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis

huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces

BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes

solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo

Valores de referencia

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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas

CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse

GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse

LEUCOCITOS 0-5 por campo

CILINDROS No deben observarse

FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse

CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a

moderada cantidad

LEVADURAS No deben observarse

PARAacuteSITOS No deben observarse

BACTERIAS Escasas o no presentes

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PRACTICA 6

UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO

Condiciones generales

La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta

razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber

sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su

procesamiento

Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin

sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten

incorrecta o demora en la siembra

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO

Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos

a) Guantes de laacutetex esteacuteriles

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo

ser de 4rdquo x 4rdquo

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina

Procedimiento

a) Mantener la privacidad de la paciente

b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la

muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos

humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas

maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea

expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes

f) Descartar la gasa

g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el

procedimiento con otra gasa

h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca

i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar

Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio

j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la

superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente

Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones

Materiales

a) Guantes de laacutetex

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra

Procedimiento

a) Mantener la privacidad del paciente

b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra

hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten

Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande

con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa

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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra

gasa

g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca

h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten

directamente en un recipiente (orina para descartar)

i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del

chorro medio

j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio

SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA

Objetivo

Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina

Campo de aplicacioacuten

Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de

infecciones del tracto urinario

Materiales y equipos

a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL

b) Estufa de 35 ndash 37 degC

c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar

d) Guantes de laacutetex

e) Contenedor de material contaminado

f) Pinza esteacuteril

g) Propipeta o pipetor automaacutetico

h) Medios de cultivo

ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)

ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)

Procedimiento

a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por

cultivo

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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del

mechero Bunsen

c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a

temperatura ambiente Rotular las placas

d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola

en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa

e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del

frasco en el mechero Bunsen

f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y

sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra

g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra

hacia delante y hacia atraacutes

h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos

perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa

i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey

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Lectura

a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar

incubar hasta las 48 horas

b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se

multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL

Interpretacioacuten

a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es

la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen

b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el

procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente

c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la

muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra

d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL

pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias

polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos

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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se

informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En

pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a

pocas colonias

IDENTIFICACION BACTERIANA

Lectura de cultivos en agar Mac Conkey

ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde

entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente

rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas

de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm

ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color

rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide

ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color

rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae

Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales

PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados

erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de

hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Utilizacioacuten de hidratos de carbono

ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)

Abreviatura (A)

ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura (A)

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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

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Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 14: Guia de Practicas de Uroanalisis

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creatinina en particular el aclaramiento de la creatinina un iacutendice de

funcionalidad renal muy sensible y seguramente maacutes significativo que la

urea

El aclaramiento de la creatinina se modifica en relacioacuten con la

enfermedad renal (glomerulonefritis agudas o croacutenicas rintildeoacuten policiacutestico

obstruccioacuten de la viacutea renal)

Preparacioacuten del paciente

Ayuno

Modalidad de la toma de muestra

A) Recoger la orina de 24 horas con el siguiente procedimiento

Para la recoleccioacuten de orina de 24 horas se tiene que utilizar un frasco

de 25 30 litros de boca ancha con tapoacuten de rosca Antildeadir al frasco un

estabilizante si es necesario

Para la recogida de la orina se procede del modo siguiente

a) En el tiempo preestablecido vaciar la vejiga e eliminar toda la

orina

b) Posteriormente comenzar a recoger toda la orina de 24 horas

c) Al cumplir las 24 horas vaciar de nuevo la vejiga y depositar toda

la orina en el frasco Conservar las orinas a 2-4degC

Al finalizar la recoleccioacuten de orina eacutesta debe ser enviada

inmediatamente al laboratorio

B) Cuando se entrega la muestra de orina es necesario efectuar la toma

de muestra de sangre

Transporte

La muestra de orina debe ser transportada de 2-4degC la muestra de

sangre a temperatura ambiente

Conservacioacuten

Centrifugacioacuten y separacioacuten del suero la toma de muestra se puede

conservar por 1 diacutea a temperatura ambiente de 20-25oC 7 diacuteas 2-4oC y

6 meses en congelacioacuten

Conservar las orinas a 2-4degC

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Verificacioacuten de la muestra

Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto

Metoacutedica de determinacioacuten

Cu x Vmin

Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash

Ps

donde

Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl

Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl

Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)

Procedimiento analiacutetico

Ver metoacutedica de la creatinina

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el

meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr

valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias significativas se deben

Para las orinas

Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)

Mala recoleccioacuten de orina

Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos

Para la sangre

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Valor de referencia

ge70mlmin

PRACTICA 4

EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO

PROPOacuteSITO

Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares

cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin

de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten

en diferente localizacioacuten

MUESTRA REQUERIDA

15 mL de orina

MATERIALES

- Tubos coacutenicos de 15 mL

- Laacuteminas portaobjetos

- Laminillas cubreobjetos

- Marcador para vidrio

- Gradillas para tubos

- Guantes descartables

EQUIPO

- Reloj marcador

- Centriacutefuga

- Microscopio

PROCEDIMIENTO

- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm

- Descartar el liacutequido sobrenadante

- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano

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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto

- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del

sedimento

- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x

- Anotar lo observado

FUENTES DE ERROR

- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios

- Desecacioacuten del sedimento urinario

-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten

microscoacutepica

- Uso excesivo de luz

- Centrifugacioacuten inadecuada

FORMA DE REPORTE

CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas

moderadas o abundantes

GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros

hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos

Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo

FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes

CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de

calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de

amonio leucina cistina y tirosina

Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes

LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes

PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis

huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces

BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes

solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo

Valores de referencia

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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas

CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse

GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse

LEUCOCITOS 0-5 por campo

CILINDROS No deben observarse

FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse

CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a

moderada cantidad

LEVADURAS No deben observarse

PARAacuteSITOS No deben observarse

BACTERIAS Escasas o no presentes

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PRACTICA 6

UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO

Condiciones generales

La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta

razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber

sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su

procesamiento

Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin

sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten

incorrecta o demora en la siembra

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO

Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos

a) Guantes de laacutetex esteacuteriles

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo

ser de 4rdquo x 4rdquo

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina

Procedimiento

a) Mantener la privacidad de la paciente

b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la

muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos

humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas

maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea

expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes

f) Descartar la gasa

g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el

procedimiento con otra gasa

h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca

i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar

Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio

j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la

superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente

Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones

Materiales

a) Guantes de laacutetex

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra

Procedimiento

a) Mantener la privacidad del paciente

b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra

hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten

Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande

con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa

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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra

gasa

g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca

h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten

directamente en un recipiente (orina para descartar)

i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del

chorro medio

j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio

SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA

Objetivo

Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina

Campo de aplicacioacuten

Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de

infecciones del tracto urinario

Materiales y equipos

a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL

b) Estufa de 35 ndash 37 degC

c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar

d) Guantes de laacutetex

e) Contenedor de material contaminado

f) Pinza esteacuteril

g) Propipeta o pipetor automaacutetico

h) Medios de cultivo

ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)

ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)

Procedimiento

a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por

cultivo

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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del

mechero Bunsen

c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a

temperatura ambiente Rotular las placas

d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola

en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa

e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del

frasco en el mechero Bunsen

f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y

sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra

g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra

hacia delante y hacia atraacutes

h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos

perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa

i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey

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Lectura

a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar

incubar hasta las 48 horas

b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se

multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL

Interpretacioacuten

a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es

la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen

b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el

procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente

c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la

muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra

d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL

pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias

polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos

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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se

informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En

pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a

pocas colonias

IDENTIFICACION BACTERIANA

Lectura de cultivos en agar Mac Conkey

ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde

entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente

rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas

de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm

ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color

rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide

ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color

rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae

Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales

PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados

erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de

hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Utilizacioacuten de hidratos de carbono

ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)

Abreviatura (A)

ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura (A)

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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 15: Guia de Practicas de Uroanalisis

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Verificacioacuten de la muestra

Verificar que el registro de la toma de muestra esteacute correcto

Metoacutedica de determinacioacuten

Cu x Vmin

Aclaramiento de la creatinina = mdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdashmdash

Ps

donde

Cu= concentracioacuten de creatinina en la orina expresado en mgdl

Ps = concentracioacuten de creatinina en suero expresado en mgdl

Vmin= volumen por minuto (cantidad de la diuresis entre 1440)

Procedimiento analiacutetico

Ver metoacutedica de la creatinina

Notas sobre la metoacutedica

Linealidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Es lineal hasta 250 mgdl

Sensibilidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina Su sensibilidad es 01 mgdl

Especificidad

Referirse a las metoacutedicas de creatinina

Las muestras de suero tienen proteiacutenas que pueden reaccionar no

especiacuteficamente con el

meacutetodo Jaffe Es necesario corregir el valor de 03 mgdl para lograr

valores maacutes correctos

Interferencias

Las interferencias significativas se deben

Para las orinas

Presencia de partiacuteculas en suspensioacuten (centrifugar las orinas)

Mala recoleccioacuten de orina

Presencia de bacterias de barbituacutericos de cuerpos cetoacutenicos

Para la sangre

Hemoacutelisis con Hb ge100 gl

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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Valor de referencia

ge70mlmin

PRACTICA 4

EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO

PROPOacuteSITO

Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares

cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin

de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten

en diferente localizacioacuten

MUESTRA REQUERIDA

15 mL de orina

MATERIALES

- Tubos coacutenicos de 15 mL

- Laacuteminas portaobjetos

- Laminillas cubreobjetos

- Marcador para vidrio

- Gradillas para tubos

- Guantes descartables

EQUIPO

- Reloj marcador

- Centriacutefuga

- Microscopio

PROCEDIMIENTO

- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm

- Descartar el liacutequido sobrenadante

- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano

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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto

- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del

sedimento

- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x

- Anotar lo observado

FUENTES DE ERROR

- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios

- Desecacioacuten del sedimento urinario

-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten

microscoacutepica

- Uso excesivo de luz

- Centrifugacioacuten inadecuada

FORMA DE REPORTE

CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas

moderadas o abundantes

GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros

hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos

Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo

FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes

CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de

calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de

amonio leucina cistina y tirosina

Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes

LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes

PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis

huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces

BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes

solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo

Valores de referencia

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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas

CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse

GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse

LEUCOCITOS 0-5 por campo

CILINDROS No deben observarse

FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse

CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a

moderada cantidad

LEVADURAS No deben observarse

PARAacuteSITOS No deben observarse

BACTERIAS Escasas o no presentes

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PRACTICA 6

UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO

Condiciones generales

La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta

razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber

sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su

procesamiento

Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin

sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten

incorrecta o demora en la siembra

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO

Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos

a) Guantes de laacutetex esteacuteriles

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo

ser de 4rdquo x 4rdquo

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina

Procedimiento

a) Mantener la privacidad de la paciente

b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la

muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos

humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas

maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea

expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes

f) Descartar la gasa

g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el

procedimiento con otra gasa

h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca

i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar

Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio

j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la

superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente

Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones

Materiales

a) Guantes de laacutetex

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra

Procedimiento

a) Mantener la privacidad del paciente

b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra

hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten

Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande

con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa

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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra

gasa

g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca

h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten

directamente en un recipiente (orina para descartar)

i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del

chorro medio

j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio

SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA

Objetivo

Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina

Campo de aplicacioacuten

Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de

infecciones del tracto urinario

Materiales y equipos

a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL

b) Estufa de 35 ndash 37 degC

c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar

d) Guantes de laacutetex

e) Contenedor de material contaminado

f) Pinza esteacuteril

g) Propipeta o pipetor automaacutetico

h) Medios de cultivo

ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)

ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)

Procedimiento

a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por

cultivo

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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del

mechero Bunsen

c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a

temperatura ambiente Rotular las placas

d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola

en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa

e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del

frasco en el mechero Bunsen

f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y

sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra

g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra

hacia delante y hacia atraacutes

h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos

perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa

i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey

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Lectura

a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar

incubar hasta las 48 horas

b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se

multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL

Interpretacioacuten

a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es

la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen

b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el

procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente

c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la

muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra

d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL

pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias

polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos

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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se

informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En

pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a

pocas colonias

IDENTIFICACION BACTERIANA

Lectura de cultivos en agar Mac Conkey

ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde

entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente

rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas

de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm

ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color

rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide

ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color

rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae

Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales

PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados

erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de

hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Utilizacioacuten de hidratos de carbono

ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)

Abreviatura (A)

ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura (A)

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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

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Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 16: Guia de Practicas de Uroanalisis

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Icteacuterico bilirrubina ge400 mgdl

Lipemia trigliceacuteridos ge20000 mgdl

Acetona ge500 mgdl

Valor de referencia

ge70mlmin

PRACTICA 4

EXAMEN MICROSCOacutePICO DEL SEDIMENTO URINARIO

PROPOacuteSITO

Observar microscoacutepicamente en el sedimento urinario elementos celulares

cilindros cristales paraacutesitos filamentos mucoides y bacterias Con el fin

de sugerir una patologiacutea del tracto urinario u otras enfermedades que esteacuten

en diferente localizacioacuten

MUESTRA REQUERIDA

15 mL de orina

MATERIALES

- Tubos coacutenicos de 15 mL

- Laacuteminas portaobjetos

- Laminillas cubreobjetos

- Marcador para vidrio

- Gradillas para tubos

- Guantes descartables

EQUIPO

- Reloj marcador

- Centriacutefuga

- Microscopio

PROCEDIMIENTO

- Centrifugar durante 5 minutos a 2500 rpm

- Descartar el liacutequido sobrenadante

- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano

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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto

- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del

sedimento

- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x

- Anotar lo observado

FUENTES DE ERROR

- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios

- Desecacioacuten del sedimento urinario

-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten

microscoacutepica

- Uso excesivo de luz

- Centrifugacioacuten inadecuada

FORMA DE REPORTE

CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas

moderadas o abundantes

GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros

hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos

Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo

FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes

CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de

calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de

amonio leucina cistina y tirosina

Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes

LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes

PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis

huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces

BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes

solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo

Valores de referencia

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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas

CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse

GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse

LEUCOCITOS 0-5 por campo

CILINDROS No deben observarse

FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse

CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a

moderada cantidad

LEVADURAS No deben observarse

PARAacuteSITOS No deben observarse

BACTERIAS Escasas o no presentes

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PRACTICA 6

UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO

Condiciones generales

La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta

razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber

sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su

procesamiento

Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin

sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten

incorrecta o demora en la siembra

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO

Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos

a) Guantes de laacutetex esteacuteriles

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo

ser de 4rdquo x 4rdquo

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina

Procedimiento

a) Mantener la privacidad de la paciente

b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la

muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos

humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas

maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea

expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes

f) Descartar la gasa

g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el

procedimiento con otra gasa

h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca

i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar

Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio

j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la

superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente

Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones

Materiales

a) Guantes de laacutetex

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra

Procedimiento

a) Mantener la privacidad del paciente

b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra

hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten

Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande

con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa

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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra

gasa

g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca

h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten

directamente en un recipiente (orina para descartar)

i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del

chorro medio

j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio

SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA

Objetivo

Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina

Campo de aplicacioacuten

Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de

infecciones del tracto urinario

Materiales y equipos

a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL

b) Estufa de 35 ndash 37 degC

c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar

d) Guantes de laacutetex

e) Contenedor de material contaminado

f) Pinza esteacuteril

g) Propipeta o pipetor automaacutetico

h) Medios de cultivo

ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)

ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)

Procedimiento

a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por

cultivo

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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del

mechero Bunsen

c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a

temperatura ambiente Rotular las placas

d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola

en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa

e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del

frasco en el mechero Bunsen

f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y

sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra

g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra

hacia delante y hacia atraacutes

h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos

perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa

i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey

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Lectura

a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar

incubar hasta las 48 horas

b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se

multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL

Interpretacioacuten

a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es

la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen

b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el

procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente

c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la

muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra

d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL

pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias

polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos

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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se

informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En

pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a

pocas colonias

IDENTIFICACION BACTERIANA

Lectura de cultivos en agar Mac Conkey

ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde

entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente

rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas

de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm

ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color

rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide

ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color

rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae

Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales

PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados

erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de

hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Utilizacioacuten de hidratos de carbono

ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)

Abreviatura (A)

ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura (A)

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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

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Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 17: Guia de Practicas de Uroanalisis

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- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto

- Observar la preparacioacuten con el objetivo 10x para lograr una visioacuten general del

sedimento

- Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x

- Anotar lo observado

FUENTES DE ERROR

- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios

- Desecacioacuten del sedimento urinario

-Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacioacuten

microscoacutepica

- Uso excesivo de luz

- Centrifugacioacuten inadecuada

FORMA DE REPORTE

CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Y REDONDAS reportar escasas

moderadas o abundantes

GLOacuteBULOS ROJOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

LEUCOCITOS Reportar el nuacutemero estimado por campo

CILINDROS se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros

hialinos granulosos finos y gruesos leucocitarios hemaacuteticos grasos y ceacutereos

Reportar el nuacutemero de cilindros observados por campo

FILAMENTOS MUCOIDES reportar escasos moderados o abundantes

CRISTALES se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales oxalatos de

calcio acido uacuterico uratos amorfos fosfatos amorfos fosfatos triples urato de

amonio leucina cistina y tirosina

Reportar en la forma siguiente escasos moderados o abundantes

LEVADURAS Reportar escasos moderada y abundantes

PARAacuteSITOS Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis Phitirus pubis

huevos y quistes de paraacutesitos por contaminacioacuten con heces

BACTERIAS Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes

solamente cuando se observen maacutes de 10 leucocitos por campo

Valores de referencia

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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas

CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse

GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse

LEUCOCITOS 0-5 por campo

CILINDROS No deben observarse

FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse

CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a

moderada cantidad

LEVADURAS No deben observarse

PARAacuteSITOS No deben observarse

BACTERIAS Escasas o no presentes

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PRACTICA 6

UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO

Condiciones generales

La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta

razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber

sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su

procesamiento

Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin

sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten

incorrecta o demora en la siembra

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO

Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos

a) Guantes de laacutetex esteacuteriles

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo

ser de 4rdquo x 4rdquo

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina

Procedimiento

a) Mantener la privacidad de la paciente

b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la

muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos

humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas

maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea

expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes

f) Descartar la gasa

g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el

procedimiento con otra gasa

h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca

i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar

Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio

j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la

superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente

Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones

Materiales

a) Guantes de laacutetex

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra

Procedimiento

a) Mantener la privacidad del paciente

b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra

hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten

Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande

con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa

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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra

gasa

g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca

h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten

directamente en un recipiente (orina para descartar)

i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del

chorro medio

j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio

SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA

Objetivo

Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina

Campo de aplicacioacuten

Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de

infecciones del tracto urinario

Materiales y equipos

a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL

b) Estufa de 35 ndash 37 degC

c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar

d) Guantes de laacutetex

e) Contenedor de material contaminado

f) Pinza esteacuteril

g) Propipeta o pipetor automaacutetico

h) Medios de cultivo

ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)

ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)

Procedimiento

a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por

cultivo

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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del

mechero Bunsen

c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a

temperatura ambiente Rotular las placas

d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola

en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa

e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del

frasco en el mechero Bunsen

f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y

sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra

g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra

hacia delante y hacia atraacutes

h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos

perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa

i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey

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Lectura

a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar

incubar hasta las 48 horas

b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se

multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL

Interpretacioacuten

a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es

la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen

b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el

procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente

c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la

muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra

d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL

pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias

polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos

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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se

informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En

pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a

pocas colonias

IDENTIFICACION BACTERIANA

Lectura de cultivos en agar Mac Conkey

ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde

entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente

rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas

de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm

ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color

rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide

ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color

rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae

Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales

PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados

erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de

hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Utilizacioacuten de hidratos de carbono

ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)

Abreviatura (A)

ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura (A)

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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

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Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 18: Guia de Practicas de Uroanalisis

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CEacuteLULAS EPITELIALES ESCAMOSAS Escasas a moderadas

CEacuteLULAS EPITELIALES REDONDAS No deben observarse

GLOacuteBULOS ROJOS No deben observarse

LEUCOCITOS 0-5 por campo

CILINDROS No deben observarse

FILAMENTOS MUCOIDES No deben observarse

CRISTALES Podriacutean observarse oxalatos uratos y fosfatos amorfos de escasa a

moderada cantidad

LEVADURAS No deben observarse

PARAacuteSITOS No deben observarse

BACTERIAS Escasas o no presentes

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PRACTICA 6

UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO

Condiciones generales

La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta

razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber

sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su

procesamiento

Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin

sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten

incorrecta o demora en la siembra

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO

Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos

a) Guantes de laacutetex esteacuteriles

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo

ser de 4rdquo x 4rdquo

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina

Procedimiento

a) Mantener la privacidad de la paciente

b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la

muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos

humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas

maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea

expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes

f) Descartar la gasa

g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el

procedimiento con otra gasa

h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca

i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar

Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio

j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la

superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente

Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones

Materiales

a) Guantes de laacutetex

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra

Procedimiento

a) Mantener la privacidad del paciente

b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra

hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten

Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande

con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa

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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra

gasa

g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca

h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten

directamente en un recipiente (orina para descartar)

i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del

chorro medio

j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio

SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA

Objetivo

Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina

Campo de aplicacioacuten

Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de

infecciones del tracto urinario

Materiales y equipos

a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL

b) Estufa de 35 ndash 37 degC

c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar

d) Guantes de laacutetex

e) Contenedor de material contaminado

f) Pinza esteacuteril

g) Propipeta o pipetor automaacutetico

h) Medios de cultivo

ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)

ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)

Procedimiento

a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por

cultivo

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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del

mechero Bunsen

c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a

temperatura ambiente Rotular las placas

d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola

en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa

e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del

frasco en el mechero Bunsen

f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y

sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra

g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra

hacia delante y hacia atraacutes

h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos

perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa

i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey

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Lectura

a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar

incubar hasta las 48 horas

b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se

multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL

Interpretacioacuten

a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es

la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen

b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el

procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente

c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la

muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra

d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL

pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias

polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos

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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se

informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En

pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a

pocas colonias

IDENTIFICACION BACTERIANA

Lectura de cultivos en agar Mac Conkey

ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde

entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente

rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas

de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm

ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color

rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide

ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color

rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae

Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales

PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados

erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de

hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Utilizacioacuten de hidratos de carbono

ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)

Abreviatura (A)

ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura (A)

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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

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Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 19: Guia de Practicas de Uroanalisis

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PRACTICA 6

UROCULTIVO Y ANTIBIOGRAMA

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA PARA CULTIVO

Condiciones generales

La orina es un excelente medio de cultivo para la proliferacioacuten bacteriana por esta

razoacuten la muestra debe ser procesada dentro de las 2 horas despueacutes de haber

sido obtenida o debe refrigerarse a 4 degC (maacuteximo 24 horas) hasta su

procesamiento

Generalmente el desarrollo de dos o maacutes tipos de colonias (en pacientes sin

sonda vesical) indican que la muestra se ha contaminado por recoleccioacuten

incorrecta o demora en la siembra

OBTENCIOacuteN DE MUESTRA DE ORINA DEL CHORRO MEDIO

Obtencioacuten de muestras de orina en pacientes mujeres Materiales y equipos

a) Guantes de laacutetex esteacuteriles

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril de tamantildeo adecuado pudiendo

ser de 4rdquo x 4rdquo

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la muestra de orina

Procedimiento

a) Mantener la privacidad de la paciente

b) Rotular el frasco con el nombre de la paciente fecha de obtencioacuten de la

muestra hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos

humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas

maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea

expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes

f) Descartar la gasa

g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el

procedimiento con otra gasa

h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca

i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar

Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio

j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la

superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente

Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones

Materiales

a) Guantes de laacutetex

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra

Procedimiento

a) Mantener la privacidad del paciente

b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra

hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten

Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande

con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa

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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra

gasa

g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca

h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten

directamente en un recipiente (orina para descartar)

i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del

chorro medio

j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio

SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA

Objetivo

Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina

Campo de aplicacioacuten

Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de

infecciones del tracto urinario

Materiales y equipos

a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL

b) Estufa de 35 ndash 37 degC

c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar

d) Guantes de laacutetex

e) Contenedor de material contaminado

f) Pinza esteacuteril

g) Propipeta o pipetor automaacutetico

h) Medios de cultivo

ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)

ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)

Procedimiento

a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por

cultivo

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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del

mechero Bunsen

c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a

temperatura ambiente Rotular las placas

d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola

en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa

e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del

frasco en el mechero Bunsen

f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y

sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra

g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra

hacia delante y hacia atraacutes

h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos

perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa

i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey

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Lectura

a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar

incubar hasta las 48 horas

b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se

multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL

Interpretacioacuten

a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es

la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen

b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el

procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente

c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la

muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra

d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL

pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias

polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos

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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se

informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En

pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a

pocas colonias

IDENTIFICACION BACTERIANA

Lectura de cultivos en agar Mac Conkey

ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde

entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente

rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas

de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm

ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color

rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide

ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color

rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae

Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales

PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados

erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de

hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Utilizacioacuten de hidratos de carbono

ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)

Abreviatura (A)

ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura (A)

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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

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Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 20: Guia de Practicas de Uroanalisis

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d) Preparar una pieza de gasa para la limpieza de los genitales externos

humedicieacutendola con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten Preparar dos piezas

maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Separar los labios mayores con dos dedos de una mano y limpiar el aacuterea

expuesta pasando la gasa de adelante hacia atraacutes

f) Descartar la gasa

g) Con otra gasa humedecida enjuagar el aacuterea de adelante hacia atraacutes Repetir el

procedimiento con otra gasa

h) Finalmente secar el aacuterea de adelante hacia atraacutes con un trozo de gasa seca

i) Mantener separados los labios mayores mientras la paciente empieza a orinar

Luego del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar el chorro medio

j) Al terminar la recoleccioacuten tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la

superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente

Obtencioacuten de muestra de orina en pacientes varones

Materiales

a) Guantes de laacutetex

b) Cinco o maacutes piezas de gasa esteacuteril

c) Jaboacuten

d) Agua tibia esteacuteril

e) Frasco esteacuteril de boca ancha para la obtencioacuten de la muestra

Procedimiento

a) Mantener la privacidad del paciente

b) Rotular el frasco con el nombre del paciente fecha de obtencioacuten de la muestra

hora y el procedimiento usado para la obtencioacuten de la muestra

c) Lavarse las manos con jaboacuten y abundante agua

d) Preparar una pieza de gasa con agua y una pequentildea cantidad de jaboacuten

Preparar dos piezas maacutes de gasa para el enjuague con agua tibia

e) Realizar la higiene de los genitales Retraer el prepucio antes de lavar el glande

con la gasa humedecida con jaboacuten Descartar la gasa

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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra

gasa

g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca

h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten

directamente en un recipiente (orina para descartar)

i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del

chorro medio

j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio

SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA

Objetivo

Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina

Campo de aplicacioacuten

Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de

infecciones del tracto urinario

Materiales y equipos

a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL

b) Estufa de 35 ndash 37 degC

c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar

d) Guantes de laacutetex

e) Contenedor de material contaminado

f) Pinza esteacuteril

g) Propipeta o pipetor automaacutetico

h) Medios de cultivo

ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)

ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)

Procedimiento

a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por

cultivo

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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del

mechero Bunsen

c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a

temperatura ambiente Rotular las placas

d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola

en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa

e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del

frasco en el mechero Bunsen

f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y

sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra

g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra

hacia delante y hacia atraacutes

h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos

perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa

i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey

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Lectura

a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar

incubar hasta las 48 horas

b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se

multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL

Interpretacioacuten

a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es

la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen

b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el

procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente

c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la

muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra

d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL

pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias

polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos

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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se

informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En

pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a

pocas colonias

IDENTIFICACION BACTERIANA

Lectura de cultivos en agar Mac Conkey

ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde

entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente

rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas

de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm

ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color

rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide

ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color

rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae

Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales

PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados

erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de

hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Utilizacioacuten de hidratos de carbono

ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)

Abreviatura (A)

ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura (A)

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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 21: Guia de Practicas de Uroanalisis

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f) Enjuagar el glande usando una gasa huacutemeda Repetir el procedimiento con otra

gasa

g) Secar la zona usando uno o maacutes piezas de gasa seca

h) Indicar al paciente que mantenga el prepucio retirado e inicie la miccioacuten

directamente en un recipiente (orina para descartar)

i) Despueacutes del chorro inicial colocar el frasco esteacuteril para colectar la muestra del

chorro medio

j) Obtenida la muestra tapar el frasco inmediatamente y limpiarle la superficie

k) Transportar el frasco con la muestra de orina inmediatamente al laboratorio

SIEMBRA PRIMARIA DE MUESTRA DE ORINA

Objetivo

Describir el procedimiento para la siembra primaria de muestra de orina

Campo de aplicacioacuten

Se aplica para el cultivo de muestra de orina en el diagnoacutestico bacterioloacutegico de

infecciones del tracto urinario

Materiales y equipos

a) Asa calibrada de platino o descartable de 0001 mL oacute 001 mL

b) Estufa de 35 ndash 37 degC

c) Mechero Bunsen o cabina de flujo laminar

d) Guantes de laacutetex

e) Contenedor de material contaminado

f) Pinza esteacuteril

g) Propipeta o pipetor automaacutetico

h) Medios de cultivo

ndash Placas con agar sangre de carnero (AS)

ndash Placas con agar Mc Conkey (McC)

Procedimiento

a) Mantener las muestras en refrigeracioacuten (4 degC) hasta su procesamiento por

cultivo

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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del

mechero Bunsen

c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a

temperatura ambiente Rotular las placas

d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola

en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa

e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del

frasco en el mechero Bunsen

f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y

sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra

g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra

hacia delante y hacia atraacutes

h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos

perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa

i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey

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Lectura

a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar

incubar hasta las 48 horas

b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se

multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL

Interpretacioacuten

a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es

la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen

b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el

procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente

c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la

muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra

d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL

pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias

polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos

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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se

informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En

pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a

pocas colonias

IDENTIFICACION BACTERIANA

Lectura de cultivos en agar Mac Conkey

ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde

entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente

rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas

de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm

ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color

rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide

ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color

rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae

Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales

PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados

erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de

hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Utilizacioacuten de hidratos de carbono

ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)

Abreviatura (A)

ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura (A)

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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

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Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 22: Guia de Practicas de Uroanalisis

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b) Los cultivos deben realizarse en una cabina de bioseguridad o cerca del

mechero Bunsen

c) Las placas con AS y McC que se utilizaraacuten en el urocultivo deben estar a

temperatura ambiente Rotular las placas

d) Si el asa calibrada no es descartable esterilizar el asa de siembra flameacuteandola

en el mechero Bunsen hasta que se ponga rojo vivo Dejar enfriar el asa

e) Tomar el frasco con la muestra de orina abrir la tapa y flamear la boca del

frasco en el mechero Bunsen

f) Tomar la muestra de orina con el asa de siembra esteacuteril introducieacutendola y

sacaacutendola del frasco en forma vertical Tapar el frasco con la muestra

g) Inocular en el centro de la placa con AS a partir del cual se extiende la muestra

hacia delante y hacia atraacutes

h) Luego sin quemar el asa el inoacuteculo se disemina uniformemente con trazos

perpendiculares a la siembra inicial en toda la placa

i) Proceder de la misma forma para el agar Mc Conkey

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Lectura

a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar

incubar hasta las 48 horas

b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se

multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL

Interpretacioacuten

a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es

la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen

b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el

procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente

c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la

muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra

d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL

pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias

polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos

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e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se

informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En

pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a

pocas colonias

IDENTIFICACION BACTERIANA

Lectura de cultivos en agar Mac Conkey

ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde

entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente

rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas

de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm

ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color

rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide

ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color

rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae

Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales

PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados

erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de

hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Utilizacioacuten de hidratos de carbono

ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)

Abreviatura (A)

ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura (A)

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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

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Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
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Lectura

a) Realizar la evaluacioacuten a las 24 horas si no hay crecimiento bacteriano dejar

incubar hasta las 48 horas

b) La evaluacioacuten consiste en realizar el recuento de colonias cuyo resultado se

multiplica por el factor de dilucioacuten para obtener las UFC por mL

Interpretacioacuten

a) En pacientes sin sonda vesical la cuenta significativa de bacterias en orina es

la presencia de maacutes de 105 UFC mL de un solo germen

b) Los recuentos intermedios (103 ndash 104 UFCmL) indican infeccioacuten si el

procedimiento de recoleccioacuten de orina fue realizado correctamente

c) Generalmente el aislamiento de tres o maacutes especies bacterianas indican que la

muestra se ha contaminado por recoleccioacuten inadecuada o demora en la siembra

d) En pacientes con sonda vesical cuentas bacterianas menores de 105 UFCmL

pueden tener significado asiacute tambieacuten se pueden encontrar bacteriurias

polimicrobianas hasta en casi 15 de enfermos

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se

informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En

pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a

pocas colonias

IDENTIFICACION BACTERIANA

Lectura de cultivos en agar Mac Conkey

ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde

entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente

rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas

de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm

ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color

rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide

ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color

rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae

Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales

PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados

erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de

hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Utilizacioacuten de hidratos de carbono

ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)

Abreviatura (A)

ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura (A)

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

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d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

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firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

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Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

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Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 24: Guia de Practicas de Uroanalisis

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

e) En pacientes sin cateacuteter se puede comprobar si el procedimiento de obtencioacuten

de muestra fue realizado correctamente observando la frecuencia con la cual se

informan recuentos de colonias intermedias entre 103 ndash 104 UFCmL En

pacientes sin infecciones del tracto urinario el recuento es nulo o se reduce a

pocas colonias

IDENTIFICACION BACTERIANA

Lectura de cultivos en agar Mac Conkey

ndash En agar Mc Conkey Escherichia coli lactosa positiva forma colonias de borde

entero de color fucsia opacas de 2 mm ndash 3 mm de diaacutemetro usualmente

rodeadas de una zona opaca alrededor de la colonia (bilis precipitada) Las cepas

de E coli que son lactosa negativa dan colonias incoloras de 3 ndash 4 mm

ndash En agar Mc Conkey K pneumoniae forma colonias de borde entero de color

rosado a rosado oscuro de 3 ndash 4 mm de diaacutemetro y aspecto mucoide

ndash En agar Mc Conkey Enterobacter spp forma colonias de borde entero de color

rosado de 2 ndash 4 mm de diaacutemetro no tan mucoides como K pneumoniae

Las colonias con estas caracteriacutesticas son subcultivadas en medios diferenciales

PRUEBAS BIOQUIMICAS

TSI

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas para no obtener resultados

erroacuteneos La lectura se hace sobre la base de tres caracteriacutesticas Utilizacioacuten de

hidratos de carbono produccioacuten de gas y produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Utilizacioacuten de hidratos de carbono

ndash Utilizacioacuten de lactosa Reaccioacuten aacutecida en el pico de flauta (color amarillo)

Abreviatura (A)

ndash Utilizacioacuten de glucosa Reaccioacuten aacutecida en la columna del medio (color amarillo)

Abreviatura (A)

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ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 25: Guia de Practicas de Uroanalisis

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

ndash No hay utilizacioacuten del carbohidrato Se puede observar una reaccioacuten alcalina

(color rojo) o que no hay cambio de color (permanece del mismo color que el

medio no inoculado) Abreviaturas (K) o (N) respectivamente

Nota Cuando el microorganismo tambieacuten produce H2S el precipitado negro

puede ocultar la acidez

Produccioacuten de gas de glucosa

ndash Se considera positivo Presencia de una sola burbuja de gas burbujas en el

medio divisioacuten del medio desplazamiento completo del medio del fondo del tubo

dejando un aacuterea clara o una ligera muesca del medio en el costado del tubo

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Produccioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

ndash Se manifiesta por un color negro distribuido por toda la columna del medio de

cultivo o soacutelo en la parte superior

ndash Se registra la lectura por medio de cruces (+)

Resultados

Ejemplo de simbolizacioacuten e interpretacioacuten

KA ndash+ Significa alcalinidad en la inclinacioacuten y acidez en el fondo (fermentacioacuten de

glucosa) gas negativo y H2S positivo

NN ndash ndashSignifica que no hay utilizacioacuten de la lactosa y glucosa ni produccioacuten de

H2S

AGAR LISINA HIERRO

En este medio se determina simultaacuteneamente la produccioacuten de lisina

descarboxilasa y de la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico

Lectura

Es importante hacer la lectura entre las 18 ndash 24 horas si la lectura se realiza antes

podemos obtener resultados falsos positivos asiacute como falsos negativos si se lee

despueacutes de las 24 horas Realizar la lectura en la columna y en la superficie

inclinada y observar la formacioacuten de aacutecido sulfhiacutedrico el cual se evidencia por una

coloracioacuten negra

Nota Generalmente las cepas del grupo Proteus y Providencia desaminan la

lisina a aacutecido ndashcetocarboacutenico Este uacuteltimo forma compuestos pardo-rojizos en la

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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 26: Guia de Practicas de Uroanalisis

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regioacuten superficial del medio de cultivo con la sal de hierro y bajo la influencia del

oxiacutegeno

Recomendaciones

No incubar maacutes del tiempo necesario para no ocasionar una alcalinizacioacuten en la

superficie del medio y por lo tanto producir un viraje hacia el violeta

UTILIZACIOacuteN DE CITRATO

Para determinar si un microorganismo es capaz de utilizar citrato como uacutenica

fuente de carbono para su metabolismo

Procedimiento

a) Incubar a 35ndash37 degC de 24 horasndash 48 horas En algunos casos es necesario una

incubacioacuten hasta por 4 diacuteas

b) Ver el viraje de color

Resultados

a) Prueba positiva Crecimiento con un color azul intenso en el pico de flauta o

presencia de colonias en ausencia del color azul

b) Prueba negativa No se observa crecimiento ni cambio de color (verde)

Controles

Positivo Enterobacter cloacae

Negativo Escherichia coli

HIDROacuteLISIS DE LA UREA (PRODUCCIOacuteN DE UREASA)

Es uacutetil para determinar la capacidad de un organismo de degradar la urea

formando dos moleacuteculas de amoniaco por accioacuten de la enzima ureasa

Procedimiento

Realizar la lectura despueacutes de 18 horas ndash 24 horas de incubacioacuten observando el

viraje de color

Resultados

Prueba positiva Color rosado intenso en el pico de flauta o todo el agar

Puede haber una reaccioacuten positiva retardada despueacutes de 24 horas y hasta

6 diacuteas de incubacioacuten (algunas cepas de Klebsiella por ejemplo)

Prueba negativa No se produce cambio de color

Controles

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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

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Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

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Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

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Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
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Negativo Escherichia coli

Positivo Klebsiella pneumoniae

MOTILIDAD (MEDIOS SIM O MIO O AGAR MOVILIDAD)

Para determinar si un organismo es moacutevil o inmoacutevil

Procedimiento

Incubar a 35 ndash 37 degC de 24 a 48 horas

Resultados

Positivo Los microorganismos migran de la liacutenea de siembra y se difunden en el

medio provocando turbidez Tambieacuten puede manifestarse semejando

ldquovellosidadesrdquo a lo largo del trazo de siembra

Negativo Se observa un crecimiento bacteriano acentuado siguiendo el trazo de

siembra y el medio circundante se mantiene claro

Controles

Control positivo Escherichia coli

Control negativo Klebsiella pneumoniae

h) Prueba de indol[6]

Es uacutetil para determinar la capacidad de un microorganismo de producir indol a

partir del aminoaacutecido triptoacutefano

Medios y reactivos

Caldo de triptoacutefano o de peptona o caldo de triptona

Reactivo de indol de Kovacs

Procedimiento

Retirar aseacutepticamente 2 mL de caldo de cutivo con 24 horas de incubacioacuten

Agregar 5 gotas de reactivo de Kovacs

Mover suavemente el tubo y realizar la lectura

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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 28: Guia de Practicas de Uroanalisis

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
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ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 30: Guia de Practicas de Uroanalisis

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

ANTIBIOGRAMA

Preparacioacuten del Agar Mueller Hinton

Preparar el medio a partir de la base deshidratada de acuerdo a las

indicaciones del fabricante

Autoclavar y dejar enfriar en bantildeo de agua hasta que alcance los 45degC - 50degC

Repartir el medio en placas petri (60 ml ndash 70 ml o 25 ml ndash 30 ml para placas de

150 mm o 100 mm de diaacutemetro interno respectivamente) de manera que el

grosor del agar en la placa sea de 4 mm

Realizar las pruebas de esterilidad para cada lote de Mueller Hinton incubando

una o dos placas de cada lote a 30degC ndash 35degC durante 24 horas o maacutes Estas

placas utilizadas deben ser luego descartadas

Preparacioacuten del estaacutendar (05 Mc Farland) para el inoacuteculo

Para estandarizar la densidad del inoacuteculo se usa una suspensioacuten de sulfato de

bario (05 de la escala de Mac Farland) como estaacutendar

Preparacioacuten del estaacutendar de turbidez

a Agregar 05 ml de una solucioacuten de BaCl2 0048 M (BaCl22H2O al 1175 PV)

a 995 mL de una solucioacuten de H2SO4 018 M (036 N) (1 VV) en constante

movimiento para mantener la suspensioacuten

b Verificar la densidad correcta del estaacutendar usando un fotocoloriacutemetro oacute

espectrofotoacutemetro cuya absorbancia a 625 nm es 008 a 010 para el estaacutendar 05

de Mc Farland

c Distribuir de 4 ml a 6 ml en tubos con tapa de rosca o tapoacuten de jebe similares a

los que se usaraacuten para preparar el inoacuteculo

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 31: Guia de Practicas de Uroanalisis

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

d Ajustar bien las tapas o tapones y conservarlos en la oscuridad a temperatura

ambiente y anotar la fecha de preparacioacuten

e Antes de ser usado agitar vigorosamente dicho estaacutendar de preferencia en un

agitador mecaacutenico

f Verificar mensualmente la densidad de los estaacutendares de sulfato de bario y

reemplazarlo cuando sea necesario

INOCULACIOacuteN

Preparacioacuten del inoacuteculo

Puede realizarse de dos formas

Meacutetodo de desarrollo previo

a Seleccionar cuatro a cinco colonias bien aisladas del mismo tipo morfoloacutegico

de un cultivo en placa

b Tocar la superficie de cada colonia con una asa de siembra y transferirlo a un

tubo que contiene de 4 a 5 mL de caldo apropiado (Ej Caldo Tripticasa soya)

c Incubar el caldo a una temperatura entre 35degC a 37degC hasta que alcance o

exceda la turbidez del estaacutendar 05 de la escala de Mc Farland (por lo general de

2 a 6 horas)

d Ajustar la turbidez del inoacuteculo con solucioacuten salina o caldo apropiado hasta el

tubo 05 de la escala de Mc Farland por comparacioacuten visual con el estaacutendar Para

realizar este paso correctamente usar una luz apropiada y mirar los tubos contra

un fondo blanco con liacuteneas negras como contraste

e La suspensioacuten preparada contendraacute aproximadamente 1 a 2 x 108 UFCmL

Meacutetodo directo de inoculacioacuten a partir de colonias aisladas

a De una placa de cultivo con agar no selectivo e incubada por 18 - 24 h

seleccionar colonias aisladas y preparar una suspensioacutem directa en solucioacuten

salina oacute caldo

b La suspensioacuten debe ser inmediatamente ajustada a la escala 05 de Mc

Farland

Inoculacioacuten de las Placas

Dentro de los 15 minutos siguientes al ajuste de la turbidez del inoacuteculo sumergir

un hisopo esteacuteril en la suspensioacuten rotar el hisopo varias veces presionando

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 32: Guia de Practicas de Uroanalisis

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

firmemente sobre la pared interior del tubo por encima del nivel del liacutequido para

remover el exceso de inoacuteculo

Inocular la superficie seca de la placa de Mueller Hinton estriando con el hisopo

en tres direcciones para asegurar una distribucioacuten uniforme del inoacuteculo Antes de

colocar los discos dejar secar la placa a temperatura ambiente durante 3 a 5

minutos para que cualquier exceso de humedad superficial sea absorbido

APLICACIOacuteN DE LOS DISCOS

Colocar los discos individuales o multidiscos sobre la superficie del agar con la

ayuda de una pinza esteacuteril o la punta de una aguja presionando suavemente sobre

cada disco para asegurar un contacto completo con la superficie del agar

Distribuir los discos uniformemente de modo que esteacuten a una distancia miacutenima de

25 mm uno del otro (el diaacutemetro de los discos seguacuten las normas de la

Organizacioacuten Mundial de la Salud (OMS) debe ser de 6 mm) No deben colocarse

maacutes de 12 discos en una placa de 150 mm ni maacutes de 6 en una placa de 100 mm

de diaacutemetro interno para evitar la superposicioacuten de las zonas de inhibicioacuten Un

disco no debe ser removido una vez que tomoacute contacto con la superficie del agar

debido a que algunos antibioacuteticos se difunden raacutepidamente

INCUBACIOacuteN

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 33: Guia de Practicas de Uroanalisis

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Incubar lar placas en posicioacuten invertida a 35degC por 18 a 24 horas dentro de los 15

minutos posteriores a la aplicacioacuten de los discos

Despueacutes del tiempo recomendado de incubacioacuten examinar cada placa y medir los

diaacutemetros de los halos de inhibicioacuten alrededor de cada disco

LECTURA DE LAS PLACAS E INTERPRETACIOacuteN DE LOS RESULTADOS

Medir los diaacutemetros de las zonas de inhibicioacuten completa (incluyendo el diaacutemetro

del disco) usando

una regla o calibrador Se debe mantener iluminada la parte posterior de la placa

petri con una luz reflejada localizada a unos cuantos centiacutemetros sobre un fondo

negro Tener la precaucioacuten de observar la placa siguiendo una vertical directa para

evitar una lectura erroacutenea de las marcas de la regla por efecto de paralelismo En

los medios suplementados con sangre las zonas son medidas en la parte superior

de la superficie del agar y retirando la tapa Tener cuidado de no medir la zona de

la hemoacutelisis sino la de inhibicioacuten del crecimiento

El punto final debe tomarse como el aacuterea que no muestra un crecimiento obvio

visible que puede ser detectado mediante observacioacuten visual no incluyendo velo

de crecimiento o colonias muy pequentildeas que puedan ser detectadas solo con

mucha dificultad en el borde de la zona Sin embargo las colonias mayores

creciendo dentro de la zona clara deberaacuten ser subcultivadas reidentificadas y

reensayadas Algunos Proteus spp debido a su gran movilidad pueden presentar

un velo de invasioacuten o ldquoswarmingrdquo dentro de las zonas de inhibicioacuten de algunos

antibioacuteticos En estos casos el velo del swarming debe ser ignorado al momento

de medir los halos de inhibicioacuten

DISCOS DE SENSIBILIDAD ANTIBIOacuteTICA A INCLUIR EN EL ANTIBIOGRAMA

Grupo I

Ampicilina

Cefalotina

Ampicilina Sulbactam o Amoxicilina Aacutecido Clavulaacutenico

Cefuroxima

Cefotaxima o Ceftriaxona

Gentamicina

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 34: Guia de Practicas de Uroanalisis

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Amikacina

Aacutecido Nalidiacutexico(1)

Norfloxacina(1)

Ciprofloxacina

Cotrimoxazol (TrimetoprimSulfametoxazol)

Nitrofurantoiacutena(1)

Grupo II

Cefoxitina

Aztreonam

Ceftazidima

Cefixima

CefoperazonaSulbactam

Cefepime o Cefpirome

Imipenem o Meropenem

Cloramfenicol

Ofloxacina (1)

(1) Disco utilizado exclusivamente para infecciones de las viacuteas urinarias

Resistencias Naturales

Las enterobacterias son resistentes a Penicilina Oxacilina Macroacutelidos

Clindamicina y Glicopeacuteptidos

Klebsiella spp es resistente a las Aminopenicilinas

Citrobacter freundii Enterobacter cloacae y Enterobacter aerogenes son

resistentes a las Aminopenicilinas AminopenicilinasInhibidores de

betalactamasas Cefalosporinas de primera generacioacuten y Cefuroxima

Serratia marcescens es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten y Cefoxitina

Proteus mirabilis es resistente a Nitrofurantoiacutena

Proteus vulgaris es resistente a las Aminopenicilinas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
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Morganella morganii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Cefuroxima y Nitrofurantoiacutena

Providentia stuartii es resistente a las Aminopenicilinas

AminopenicilinasInhibidores de betalactamasas Cefalosporinas de primera

generacioacuten Gentamicina (bajo nivel) y Nitrofurantoiacutena

ANTIBIOTICOS Y DIAMETROS CRITICOS PARA ENTEROBACTERIAS

E PRACTICA 7

EXAMEN QUIMICO DE CALCULO RENAL

EXAMEN FISICO

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
Page 36: Guia de Practicas de Uroanalisis

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Se debe pesar el caacutelculo y anotar el dato obtenido Medir dos de los diaacutemetros y

tomar nota del aspecto general textura y color y despueacutes de seccionado el

aspecto general la prominencia y el color de los distintos estratos

Se secciona el caacutelculo con una sierra Se raspan las caras con una aguja Se

procede lo mismo con el nuacutecleo Cada una de las muestras obtenidas se trituran

por separado en un mortero

PROCESO

Se coloca una porcioacuten del polvo del caacutelculo en un crisol y se calienta al fuego Si

no hay ennegrecimiento ni se altera el tamantildeo original el caacutelculo estaraacute formado

por sustancias inorgaacutenicas Si en cambio se carboniza desapareciendo estaraacute

formado por sustancias orgaacutenicas Si se funde y se ennegrece este caacutelculo estaacute

formado por sulfamidasa

Una vez obtenidos los datos pueden seleccionarse las reacciones necesarias

para confirmarlos

REACCIONES QUIMICAS

Solucioacuten A

10mg del polvo en matraz y antildeadir 50 ml de ClH 5 Observar si se

produce efervescencia Calentar en bantildeo de agua hirviendo por 10 a 15 minutos y

filtrar en caliente El filtrado se distribuye en 8 tubos numerados y se introduce un

trocito de papel tornasol en cada uno

Solucioacuten B

Agitar con Cl3CH unos 10 mg del polvo Reposar en tubo tapado a

temperatura ambiente hasta que el insoluble haya precipitado Decantar la

solucioacuten clorofoacutermica y guardar igual que el sedimento por separado

Carbonato efervescencia al agregar el CIH por desprendimiento de CO 2

Amonio al tubo 1 de la solucioacuten A se le agrega solucioacuten de OHNa 10 gota a

gota y agitando hasta que el papel tornasol vire

Agregar 1 ml de reactivo de Nessler Un color amarillo oscuro oporto indica

positividad de la reaccioacuten

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
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El NH 3 formado por los grupos NH 4 en medio alcalino reacciona con el yoiduro

doble del reactivo de Nesler para dar yoduro amoacutenico dimercuacuterico precipitado

pardo anaranjado

Acido uacuterico Neutralizar el contenido del tubo 2 como se explicoacute antes

Agregar igual volumen de CNN Na 2 y 05 ml de reactivo de Folin para aacutecido

uacuterico Un color azul intenso indica presencia de aacutecido uacuterico

El aacutecido uacuterico reduce al aacutecido fosfotuacutengstico en medio alcalino dando color azul

intenso de azul de tungsteno y a su vez se oxida a alantoiacutena

Reactivo fosfotuacutengstico (Folin y Denis) Antes del uso diluir al 10 en agua

destilada

Oxalato de calcio Neutralizar el contenido del tubo 3 Agregar CH 3 COOH 10

hasta reaccioacuten aacutecida al tornasol Precipitado blanco que no se redisuelve por

agitacioacuten indica presencia de oxalato de calcio

Calcio Neutralizar el tubo 4 Acidificar con CH 3 COOH glacial Agregar 2 ml C 2

O 4 ( NH 4 ) 4 Precipitado blancodenso indica presencia de Ca ++

Fosfato Neutralizar el tubo 5 Agregar 1 ml de solucioacuten de molibdato Mezclar

antildeadir 05 ml de aacutecido aminonaftol sulfoacutenico (ANS) 025 Coloracioacuten azul que

aparece en 5 minutos indica fosfatos

El color azul se debe a los oacutexidos reducidos de molibdeno

Reactivos

1 ClH concentrado2 Solucioacuten de OHK 203 NO 3 H concentrado4 Mo O 4 (NH 4 ) 2 disolver 25 g de la droga en 50 ml de SO 4 H 2 10 N y

diluir a 100 ml con H2 O destilada5 Amoniacuteaco

Reactivo ANS En matraz x 250 ml poner 05 g de aacutecido aminonaftolsulfoacutenico y

agrgar 195 ml de bisulfito de sodio 15 y 5 ml de sulfito de sodio 20 Mezclar

bien hasta disolucioacuten Si no se disuelve en media hora agregar maacutes sulfito y

agitar El reactivo dura unas 2 semanas

Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos
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Laboratorio Cliacutenico PAULINA ARROLLO PEREacuteZ

Magnesio Neutralizar el tubo 7 con OHNH 4 y antildeadir 1 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de p ndash Nitrobenceno azorresorcinol Un cromoacutegeno rojo indica presencia de

magnesio

En medio alcalino se forma (OH) 2 Mg El colorante azo resulta absorbido por el

(OH) 2 Mg en medio alcalino

Xantina A un tercio del residuo de la solucioacuten B agregarle gotas de NO 3 H

concentrado

Se disuelve el residuo sin desprender gas Evaporar a sequedad en bantildeo Mariacutea

hirviente quedando un residuo amarillo Dejar enfriar y humedecer con gotas de

OHNa 10 Una coloracioacuten anaranjada que vira al rojo oscuro al calentar indica

presencia de xantina

La reaccioacuten es la xantoproteica Migracioacuten de los anillos fenilo existentes en la

tirosina fenilalanina y triptoacutefano que da un color amarillo de los productos de

nitrosustitucioacuten para virar al anaranjado tras la adicioacuten de un aacutelcali ( formacioacuten de

la sal)

Nota El reactivo de molibdato se puede preparar asiacute

Solucioacuten 1 SO 4 H 2 01 N

Medir 450 ml de SO4 H 2 concentrado y agregarlos a 1300 ml de agua

destilada

Solucioacuten 2

A 250 ml de SO 4 H 2 01 N antildeadir la solucioacuten de molibdato y llevar con

agua destilada a 250 ml Mezclar

Sulfamidas Neutralizar el uacuteltimo tubo Antildeadir 1 ml de NO 2 Na 05 preparado

recientemente Agitar y reposar por 3 minutos Antildeadir 5 ml de solucioacuten alcohoacutelica

de dimetil-alfa naftilamina 025 Un color rojizo indica presencia de sulfamidas

Finalmente procede hacer mencioacuten de ciertos procedimientos fiacutesicos como la

microscopia de polarizacioacuten difraccioacuten de rayos X cristalografiacutea

espectrofotometriacutea de rayos infrarrojos etc que permiten actualmente un

conocimiento maacutes confiable de la estructura de los caacutelculos

  • Reactivos