gnozka labak

8/12/2019 gnozka labak

1/39

Npl praktickch cvien z predmetu FARMAKOGNZIA 2Letn semester akad. r. 2013/2014

loha . 1: Polysacharidy, slizy. Saponny.Polysacharidy, slizy.A) Skky totonostiB) Stanovenie sla napuiavaniaSaponny.A) 1. Skky totonosti

2. Dkaz kyseliny glycyretnovej tenkovrstvovou chromatografiouB) Stanovenie sla penivosti

loha . 2: Antraglykozidy.A) Skky totonostiB) Stanovenie obsahu antraglykozidov kolorimetricky

loha . 3: Fenolov glykozidy.

A) 1. Skky totonosti2. Dkaz arbutnu a hydrochinnu tenkovrstvovou chromatografiouB) Stanovenie obsahu arbutnu kolorimetricky

loha . 4: Flavonoidy.A) 1. Skky totonosti

2. Hodnotenie flavonoidov tenkovrstvovou chromatografiouB) Stanovenie obsahu flavonoidov kolorimetricky

loha . 5: Rastlinn farbiv.Antokyny.A) 1. Skky totonosti

2. Dkaz antokynov tenkovrstvovou chromatografiouB) Stanovenie obsahu antokynov kolorimetrickyKarotenoidy.B) Stanovenie obsahu celkovch karotenoidov kolorimetricky

loha . 6: KardioglykozidyA) Skky totonostiB) Stanovenie obsahu kardioglykozidov kolorimetricky

loha . 7: Silice. Hydroxykoricov derivty.Silice.B) 1. Stanovenie obsahu silice v Menthae piperitae folium

2. Izolcia silice z Menthae piperitae folium

A) 3. Dkaz mentolu v silici (Menthae piperitae aetheroleum) tenkovrstvovouchromatografiouHydroxykoricov derivty. B) Stanovenie obsahu celkovch hydroxykoricovch derivtov vyjadrench

ako kyselina rozmarnovloha . 8: Horiny. Valepotrity.

Horiny.A) 1. Skky totonosti

2. Dkaz horn tenkovrstvovou chromatografiouB) Stanovenie sla horkostiValepotrity. A) 1. Skky totonosti

2. Dkaz valepotritov tenkovrstvovou chromatografiou


2/39

loha . 9: Triesloviny.

A) 1. Skky totonosti2. Dkaz kyseliny galovej tenkovrstvovou chromatografiou

B) 1. Stanovenie straty suenm2. Stanovenie obsahu trieslovn kolorimetricky

loha . 10: Alkaloidy I.A) 1. Skky totonosti2. Dkaz alkaloidov tenkovrstvovou chromatografiou

B) Stanovenie obsahu alkaloidov titranou metdouloha . 11: Alkaloidy II. Purnov bzy.

A) 1. Skky totonosti2. Dkaz purnovch derivtov tenkovrstvovou chromatografiou

B) Stanovenie obsahu alkaloidov gravimetrickou metdouloha . 12: Alkaloidy III.

piov alkaloidy.A) 1. Skky totonosti

2.Dkaz piovch alkaloidov tenkovrstvovou chromatografiouB) Stanovenie obsahu morfnu v makovine spektrofotometrickou metdouNmeov alkaloidy.A) 1. Skky totonosti

2. Dkaz nmeovch alkaloidov tenkovrstvovou chromatografiouloha . 13: Chromatografick metdy pri izolcii a identifikcii prrodnch ltok.

Delenie a identifikcia antraglykozidov stpcovou a tenkovrstvovou chromatografiou.

Literatra:

1.) Bukov A. a kol.: Praktick cvienia z farmakognzie. Chemick as.Univerzita Komenskho, Bratislava 2000. (skriptum)

2.) Tomko J. a kol.: Farmakognzia. Osveta, Martin 1999. (uebnica)3.) Nagy, M. a kol.: Farmakognzia. Biogenza prrodnch ltok. Osveta, Martin 2011. (uebnica)4.) Slovensk liekopis. 1. vydanie. Herba, Bratislava 1997-2003.5.) Slovensk farmaceutick kdex 2007. Vestnk MZ SR Osobitn vydanie, Bratislava 2008.6.) eskoslovensk liekopis. 4. vydanie. Avicenum, Praha 1987.7.) Ntherov .: Farmakognzia (makroskopick a mikroskopick as).

Univerzita Komenskho, Bratislava 2000. (skriptum)8.) European Pharmacopoeia, Council of Europe, Strasbourg. (aktulne vydanie + jeho doplnky)


3/39


4/39

Farmakognzia (2) praktick cvienia 3. ronkLetn semester

2

Polysacharidy, slizy.

ad A) Skky totonosti

Inulae radixTaraxaci radix

Prkovan droga sa prevlh kvapkou 20% alkoholovho roztoku -naftolu a1 kvapkou koncentrovanej kyseliny srovej, vznikne fialov zafarbenie (dkaz inulnu).

ad B) Stanovenie sla napuiavania slizov

Droga Nvaok Etanol 96%na navlhenie

Althaeae folium 0,2 g 1,0 ml Althaeae radix 1,0 g 1,0 ml Lichen islandicus 1,0 g 1,0 ml Lini semen 1,0 g 1,0 ml Malvae sylvestris flos 0,2 g 0,5 ml Tiliae flos 0,2 g 0,5 ml Verbasci flos 1,0 g 2,0 ml

Defincia. slom napuiavania sa vyjadruje objem v ml, ktor zaber 1,0 g drogy spolus prilipnutm slizom po 4-h napuiavan vo vode.

Robia sa tri paraleln stanovenia!!! Do 25-ml odmernho valca sa odvi predpsanmnostvo prkovanej drogy. Droga sa navlh predpsanm mnostvom 96% etanolu a pridsa 25 ml destilovanej vody. Poas jednej hodiny sa pretrepva vdy po 10 min. alie 3 h sanech st. Po uplynut 90 min od zaiatku skky je u vina kvapaliny viazan na drogu.astice, ktor zostali na hladine sa odstrnia miernym krivm pohybom valca. Po uplynutuvedenho asu sa odta objem, ktor zaber droga spolu s prilipnutm slizom.


5/39


6/39


7/39


2

ad B) Stanovenie obsahu antraglykozidov kolorimetricky

Nvaky Frangulae cortex 0,0125 gRhei radix 0,0500 g

Prkovan droga sa var 15 min so zmesou 7,5 ml koncentrovanej kyseliny octovej a1 ml koncentrovanej kyseliny chlorovodkovej vo varnej banke na 100 ml pod sptnmchladiom. Po vychladnut sa prid cez chladi 30 ml chloroformu a var sa alch 15 min.Tekutina sa nech vychladn a prefiltruje sa cez vatu do deliaceho lievika tak, aby drogazostala v banke. K zbytku v banke sa prid 30 ml chloroformu a var sa znovu 10 min.Chloroformov vluh sa po vychladnut prefiltruje tou istou vatou k prvmu vluhuv deliacom lieviku. Vata sa niekokokrt premyje malm mnostvom chloroformu.K spojenm chloroformovm vluhom v deliacom lieviku sa prid opatrne 12 mlkoncentrovanho roztoku hydroxidu sodnho a 24 ml amoniaklneho roztoku hydroxidusodnho a 5 min sa pretrepva. Vodn vrstva sa oddel do banky na 250 ml a chloroformovvrstva sa 3 min pretrepva s 20 ml amoniaklneho roztoku hydroxidu sodnho. To sa opakujeete raz. Spojen vodn vtrepky sa pod sptnm chladiom zahrievaj 2 h na vodnom kpeli.Po vychladnut sa poda potreby roztok prefiltruje, filter sa premyje amoniaklnym roztokomhydroxidu sodnho. Filtrt sa prenesie do odmernej banky na 100 ml a dopln saamoniaklnym roztokom hydroxidu sodnho po znaku. Potom sa ihne meria absorbancia pri 530 nm. Obsah vonch a viazanch antrachinnov sa vypota z kalibranej krivky avyjadr sa ako obsah frangula-emodnu.


8/39


1

loha . 3:Fenolov glykozidy.

A) 1. Skky totonosti

Salicis cortex 1* Uvae ursi folium 1, 2, 3*

2. Dkaz arbutnu a hydrochinnu tenkovrstvovou chromatografiou

Uvae ursi folium 4*#, 5*

B) Stanovenie obsahu arbutnu kolorimetricky prlohaUvae ursi folium

Skky totonosti: skmavkov reakcie, mikrosublimcia a alie mikrochemick reakcie* Bukov A. a kol.: Praktick cvienia z farmakognzie. Chemick as. Univerzita Komenskho Bratislava# Vyvjacia sstava chloroform : metanol = 9 : 1


9/39


2

ad B) Stanovenie obsahu arbutnu kolorimetricky

0,0500 g prkovanej drogy sa vo varnej banke var 30 min na elektrickom varii podsptnm chladiom s 30 ml vody a 0,10 g uhliitanu vpenatho. Po ochladen sa vluh prefiltruje do odmernej banky na 100 ml tak, aby droga zostala v banke. iastoky drogy prpadne uchyten na filtranom papieri sa oplchnu 30 ml vody sp do banky a zmes saznovu var 30 min. Po ochladen sa vluh prefiltruje tm istm filtrom do tej istej odmernej banky a zbytky na filtri i v banke sa premyj 3 krt s 10 ml vriacej vody. K spojenmfiltrtom sa pridaj 2,0 ml 10% roztoku octanu olovnatho a tekutina sa premiea. Povychladnut sa obsah banky dopln destilovanou vodou po znaku a prefiltruje sa suchmfiltrom. K filtrtu sa prid 0,20 g hydrognfosforenanu sodnho a po dkladnom pretrepansa op prefiltruje suchm filtrom. K 10,00 ml filtrtu sa do odmernej banky na 50 ml prid10,0 ml zriedenho roztoku amoniaku a za stleho mieania 5,0 ml roztoku diazotovanejkyseliny sulfanilovej tak, aby roztok nestekal po stench banky. Po 20 min sa zmeriaabsorbancia 10 mm vrstvy tohto roztoku pri 530 nm oproti porovnvaciemu roztokuzloenmu z 10,0 ml zriedenho roztoku amoniaku, 10,0 ml vody a 5,0 ml roztokudiazotovanej kyseliny sulfanilovej.

Obsah arbutnu (C12H16O7) sa vypota z kalibranej krivky.


10/39


1

loha . 4:Flavonoidy.


Crataegi folium cum flore 3* Sambuci flos 3* Aurantii amari epicarpium et mesocarpium 1*

2. Hodnotenie flavonoidov tenkovrstvovou chromatografiou prloha

Rutae herbaTiliae flos

Verbasci flos

B) Stanovenie obsahu flavonoidov kolorimetricky prloha

Betulae foliumEquiseti herbaEuphrasiae herbaFagopyri herbaPolygoni avicularis herbaSambuci flosSolidaginis herba

Skky totonosti: skmavkov reakcie, mikrosublimcia a alie mikrochemick reakcie* Bukov A. a kol.: Praktick cvienia z farmakognzie. Chemick as. Univerzita Komenskho Bratislava


11/39


2

ad A) Hodnotenie flavonoidov tenkovrstvovou chromatografiou (TLC)

Prprava extraktov. 0,3 g prkovanej drogy a 5 ml metanolu sa povar v skmavke 5 min navodnom kpeli. Extrakt sa prefiltruje a odpar sa na minimlny objem. Tento roztok sa pouije na tenkovrstvov chromatografiu.

TLC chromatografia Nosi Silufol UV254tandardy kvercetn, rutnVyvjacia sstava etylacett : kyselina mravia : voda = 8 : 1 : 1 Detekcia a) 5% roztok kyseliny trihydrognboritej a 2% roztok

kyseliny aveovej v pomere 1 : 2 b) UF iarenie

Na tart chromatogramu sa nanesie 5 l extraktu drogy spolu s uvedenmitandardami. Flia sa nech vyvja v uvedenej zmesi do vky 1 cm od hornho okrajachromatogramu. Flia sa su vone na vzduchu a do vymiznutia zpachu. Potom sa postrieka pripravenm deteknm inidlom a su sa v suiarni 10 min pri teplote 105 C. Povychladnut sa pozoruj kvrny ltok v UF iaren. V analyzovanch drogch sa vyhodnot prtomnos flavonoidov.


12/39


3

ad B) Stanovenie obsahu flavonoidov kolorimetricky

Nvaky Betulae folium 0,2000 gEquiseti herba 0,8000 gEuphrasiae herba 0,3000 gFagopyri herba 0,3000 gPolygoni avicularis herba 0,4000 gSambuci flos 0,6000 gSolidaginis herba 0,2000 g

Zkladn roztok. K predpsanmu mnostvu drogy v 100 ml varnej banke sa prid 1 mlroztoku metenamnu (hexametylntetraamnu) (5 g/l), 20 ml acetnu a 2 ml koncentrovanejkyseliny chlorovodkovej. Zmes sa 30 min zahrieva na vodnom kpeli pri teplote varu podsptnm chladiom. Po ochladen sa zmes prefiltruje cez vatu do 100 ml odmernej banky.Extrahovan droga i vata sa zahrievaj v tej istej banke tm istm spsobom ete s 20 mlacetnu 10 min.

Jednotliv vluhy sa po ochladen prefiltruj do tej istej odmernej banky. Banka afilter sa premyj acetnom a objem sa dopln acetnom na 50 ml. 20 ml tohto roztoku sa prenesie do deliaceho lievika, prid sa 20 ml vody a zmes sa pretrepva 1 s 15 ml a 3s 10 ml etylacettu. Etylacettov vtrepky sa spoja v deliacom lieviku a pretrepvaj sa 2s 50 ml vody, prefiltruj sa cez 2 g bezvodho sranu sodnho do 50-ml odmernej banky.Objem sa zriedi etylacettom na 50,0 ml za sasnho premytia filtranho lievika a sranusodnho.

Skan roztok. K 10,0 ml zkladnho roztoku sa prid 1,0 ml 2% roztoku chloridu hlinithov zmesi metanolu a koncentrovanej kyseliny octovej (95 : 5) a zriedi sa zmesou metanolu a

koncentrovanej kyseliny octovej (95 : 5) na 25 ml. Porovnvac roztok . 10,0 ml zkladnho roztoku sa zriedi zmesou metanolu a koncentrovanejkyseliny octovej (95 : 5) na 25 ml.

Po 30 min sa meria absorbancia skanho roztoku pri 425 nm oproti porovnvaciemuroztoku.

Vpoet obsahu flavonoidov.

Obsah flavonoidov sa v prpade drog Betulae folium, Polygoni avicularis herba aSolidaginis herba vyjadr ako hyperozid za predpokladu, e pecifick absorbanciahyperozidu je 500.

Obsah flavonoidov sa v prpade drog Equiseti herba, Euphrasiae herba, Fagopyri herbaa Sambuci flos vyjadr ako izokvercitrn za predpokladu, e pecifick absorbanciaizokvercitrnu je 500.

Percentulny obsah flavonoidov sa vypota poda vzorca:

A = absorbanciam = nvaok drogy v gramochm

A 25,1%


13/39


1

loha . 5:Rastlinn farbiv.

Antokyny.

A) 1. Skky totonosti prloha

Malvae sylvestris flosPaeoniae flosSambuci fructus

2. Dkaz antokynov tenkovrstvovou chromatografiou prloha


B) Stanovenie obsahu antokynov kolorimetricky prloha


Karotenoidy.B) Stanovenie obsahu celkovch karotenoidov kolorimetricky prloha

Aurantii amari epicarpium et mesocarpiumCapsici fructusCalendulae flos sine calyceRosae pseudo-fructus

Skky totonosti: skmavkov reakcie, mikrosublimcia a alie mikrochemick reakcie


14/39


2

Antokyny.

ad A) 1. Skky totonosti

Nvaky Malvae sylvestris flos 0,3 gPaeoniae flos 0,3 gSambuci fructus 0,1 g

Predpsan mnostvo prkovanej drogy sa na vodnom kpeli povar s 5 mlzriedenho roztoku kyseliny srovej (0,5 mol/l). Po ochladen sa extrakt prefiltruje a pokvapkch sa prid roztok amoniaku (6 mol/l).

Pri prtomnosti antokynov je extrakt z drogy erveno sfarben. Po pridan alklidochdza k zmene farby na modr alebo zelen, ktor nie s stle.

ad A) 2. Dkaz antokynov tenkovrstvovou chromatografiou (TLC) Nvaky Malvae sylvestris flos 0,3 g

Paeoniae flos 0,3 gSambuci fructus 0,1 g

Prprava extraktu. Prkovan droga sa povar s 5 ml metanolu a 0,5 ml koncentrovanejkyseliny chlorovodkovej. Po ochladen sa zmes prefiltruje a extrakt sa nanesie na tenkvrstvu silikaglu.

TLC chromatografia

Nosi Silufol UV366 Vyvjacia sstava etylacett : izopropylalkohol : voda = 65 : 25 : 10Vyhodnotenie Antokyny mono pozna na chromatograme priamo pri

dennom svetle, ako erveno sfarben oxniov soli.

ad B) Stanovenie obsahu antokynov kolorimetricky

K 0,2500 g drogy sa v banke so zbrusom prid 20 ml metanolu a pretrepva sa natrepake 30 min. Prefiltruje sa do 25-ml odmernej banky, banka a filter sa premyj malmmnostvom metanolu a objem sa dopln metanolom na 25 ml. 0,5 ml tohto roztoku sa vodmernej banke zriedi 0,1% roztokom kyseliny chlorovodkovej v metanole na 25,0 ml.Absorbancia roztoku sa meria okamite pri 528 nm. Ako porovnvac roztok sa pouije 0,1%roztok kyseliny chlorovodkovej v metanole. Obsah antokynov sa vyjadr ako cyanidn-3-glukozid chlorid a vypota sa zo vzorca

718 = pecifick absorbancia cyanidn-3-glukozid chloridu pri 528 nm

A = absorbancia pri 528 nmm = nvaok drogy v gramoch

m A718

1250%


15/39


3

Karotenoidy.

ad B) Stanovenie obsahu celkovch karotenoidov kolorimetricky

Nvaky Aurantii amari epicarpium et mesocarpium 0,5000 gCapsici fructus 0,1000 gCalendulae flos sine calyce 0,2000 gRosae pseudo-fructus 0,5000 g

Presne odven predpsan mnostvo prkovanej drogy sa v 100-ml Erlenmayerovej banke so zbrusom pretrepva na trepake 20 mint s 20,0 ml acetnu. Acetnov extrakt sa prefiltruje do 50-ml odmernej banky tak, aby droga ostala v banke. K droge sa op prid 20ml acetnu a pretrepva sa ete 20 mint. Prefiltruje sa k prvmu extraktu v odmernej banke aobjem sa dopln acetnom na 50,0 ml (acetnov extrakt A).

20,0 ml acetnovho extraktu A sa v deliacom lieviku pretrepe s 10 ml petrolteru,

priom karotenoidy prechdzaj do petrolterovho extraktu. Po pretrepan sa k zmesi vdeliacom lieviku prid 20 ml destilovanej vody, aby sa oddelili fzy. Spodn acetnovo-vodn fza sa ete raz vytrepe s 15 ml petrolteru. Spojen petrolterov vtrepky sa alej pretrep 2 s 10 ml 10% roztoku KOH v 50% etanole (odstrnenie chlorofylu). Nakoniec sa petrolterov extrakt premva 3 s 20 ml destilovanej vody, prefiltruje sa cez 2 g bezvodhosranu sodnho do 25-ml odmernej banky. Filter so sranom sodnm sa premyje malmmnostvom petrolteru a objem sa dopln petrolterom na 25,0 ml. Absorbancia sa meria po5 mintach pri 450 nm oproti petrolteru.

Obsah celkovch karotenoidov v meranej vzorke sa vyjadr ako -karotnv jednotkch [mg.100 g-1] a vypota sa poda vzorca

A = absorbancia pri 450 nmm = nvaok drogy v gramoch m A g mg 667,41100.1


16/39


1

loha . 6:Kardioglykozidy.

A) Skky totonosti Digitalis lanatae folium 1a, b* Digitalis purpureae folium 1a, b* Convallariae herba 1a, b*

B) Stanovenie obsahu kardioglykozidov kolorimetricky

Digitalis lanatae folium skriptum*, resp. prlohaDigitalis purpureae folium prloha

Convallariae herba skriptum*, resp. prloha



17/39


2

ad B) Stanovenie obsahu kardioglykozidov kolorimetricky

Digitalis lanatae foliumDigitalis purpureae foliumConvallariae herba

Asi 0,250 g prkovanej drogy sa v liekovke pretrepva 1 hodinu s 50,0 mldestilovanej vody na trepake. Prid sa 5,0 ml roztoku octanu olovnatho (150 g/l) a krtko sa premiea. Prid sa 7,5 ml roztoku hydrognfosforenanu dvojsodnho (40 g/l) a prefiltruje sacez skladan filtran papier. K 50,0 ml filtrtu sa prid 5 ml roztoku kyselinychlorovodkovej (150 g/l) a zahrieva sa 1 hodinu pod sptnm chladiom. Roztok sa prenesiedo deliaceho lievika a banka sa 2 oplchne, vdy s 5 ml destilovanej vody. Pretrepva sa 3,vdy s 25 ml chloroformu. Spojen chloroformov roztoky sa vysuia 2 g bezvodho sranusodnho, prefiltruj sa a zriedia chloroformom na 100 ml.

40 ml chloroformovho roztoku sa odpar na vkuovej rotanej odparovake do suchaa zvyok sa rozpust v 7 ml liehu 50 %; pridaj sa 2 ml roztoku kyseliny 3,5-dinitrobenzoovej(20g/l) a 1 ml roztoku hydroxidu sodnho (1 mol/l). Ako porovnvac roztok sa pouije zmes7 ml liehu 50 % (V/V), 2 ml kyseliny 3,5-dinitrobenzoovej a 1 ml hydroxidu sodnho (1mol/l).

Zmeria sa maximlna absorbancia roztoku vzorky pri 540 nm v priebehu 12 mint.Percentulny obsah kardioglykozidov vzorky sa vyjadr ako digitoxn a vypota saz nameranej maximlnej absorbancie poda vzorca

AVZ = absorbancia vzorky

mVZ = nvaok drogy v miligramochVZ VZ

m A 27,227%


18/39


1

loha . 7Silice. Hydroxykoricov derivty.

Silice.

B) 1. Stanovenie obsahu silice v Menthae piperitae folium prloha2. Izolcia silice z Menthae piperitae folium prloha

A) Dkaz mentolu v silici (Menthae piperitae aetheroleum) tenkovrstvovouchromatografiou prloha

Hydroxykoricov derivty.

B) Stanovenie obsahu celkovch hydroxykoricovch derivtov vyjadrench akokyselina rozmarnov v drogch rastln eade Lamiaceae

Melissae foliumMenthae piperitae foliumSalviae officinalis folium


19/39


2

Silice.

ad B) Stanovenie obsahu silice a jej izolcia z Menthae piperitae folium

1. Stanovenie obsahu silice v Menthae piperitae folium10,0 g rezanej drogy, 200 ml destilovanej vody a niekoko varnch kamienkov sa

vprav do 1000-ml varnej banky, ktor sa potom spoj s aparatrou na destilciu silice. Doaparatry sa postrannou trubicou prid destilovan voda tak, aby hladina v kalibrovanejtrubici dosiahla vku ohybu v bonom ramene. Postrannou trubicou sa prid 0,50 ml xylnua postrann trubica sa zatvor chumikom vaty.

Obsah v banke sa zahreje na varii do varu a destiluje sa 2 hodiny. Po uplynutnajmenej 10 mint od skonenia destilcie sa v kalibrovanej trubici odta objem destiltu, odktorho sa odta objem xylnu. Rozdiel tchto hodnt vyjadruje mnostvo silice zskanejdestilciou odvenho mnostva drogy. Vsledok sa prepota na ml/1000 g drogy, resp. naobjemovo-hmotnostn percent [% (V/m)].

2. Izolcia silice (Menthae piperitae aetheroleum)Vydestilovan silica rozpusten v xylne sa vypust z kalibrovanej stupnice, (po

otvoren kohtika a vypusten vody) do skmavky.

ad A) Dkaz mentolu v silici tenkovrstvovou chromatografiou (TLC)

3. Dkaz mentolu v silici (Menthae piperitae aetheroleum) tenkovrstvovou chromatografiou

TLC chromatografia

Nosi Silufol 254/366tandard mentolVyvjacia sstava chloroform : benzn = 3 : 1 Detekcia 1% roztok vanilnu v koncentrovanej kyseline srovej.

Na tart chromatogramu sa nanesie zskan silica a tandard mentolu. Chromatogramsa nech vyvja v uvedenej sstave. Vyvinut chromatogram sa vysu pri laboratrnejteplote a postrieka sa deteknm inidlom. Potom sa vlo asi na 10 seknd do suiarnevyhriatej na 105 C. Chromatogram sa vyhodnot vypotanm R f hodnt.


20/39


3

Hydroxykoricov derivty.

ad B) Stanovenie obsahu celkovch hydroxykoricovch derivtov vyjadrench akokyselina rozmarnov v drogch rastln eade Lamiaceae

Nvaky Melissae folium 0,1000 gMenthae piperitae folium 0,1000 gSalviae officinalis folium 0,2000 g

Zkladn roztok : K predpsanmu mnostvu prkovanej drogy sa prid 80 ml 50% etanolu avar sa 30 mint pod sptnm chladiom na vodnom kpeli. Ochlad sa a prefiltruje sa do100-ml odmernej banky a filter sa premyje 10 ml 50% etanolu. Obsah sa dopln 50%etanolom na 100 ml.

Skan roztok : Odoberie sa 1 ml zkladnho roztoku do odmernej banky na 10 ml, pridaj sa

2 ml roztoku 0,5 mol/l kyseliny chlorovodkovej, 2 ml Arnowovho inidla#

. Potom sa pridaj2 ml zriedenho roztoku hydroxidu sodnho (8,5 g/100 ml), dopln sa vodou na 10,0 ml a premiea sa. Ihne sa meria absorbancia skanho roztoku pri 505 nm oproti porovnvaciemu roztoku.

Porovnvac roztok . Do odmernej banky na 10 ml sa k 1 ml zkladnho roztoku pridaj 2 mlroztoku 0,5 mol/l kyseliny chlorovodkovej, 2 ml zriedenho roztoku hydroxidu sodnho (8,5g/100 ml) a dopln sa vodou na 10,0 ml.

Percentulny obsah celkovch hydroxykoricovch derivtov, vyjadrench akokyselina rozmarnov, sa vypota poda vzorca

A = absorbancia skanho roztoku pri 505 nmm = nvaok drogy v gramoch

za predpokladu, e pecifick absorbancia kyseliny rozmarnovej pri 505 nm je 400.

# Arnowovo inidlo sa priprav rozpustenm 10 g dusitanu sodnho a 10 g molybdenanu sodnho v 100 ml vody

m A 5,2%


21/39


1

loha . 8Horiny. Valepotrity.

Horiny.


Condurango cortex 2*

2. Dkaz horn tenkovrstvovou chromatografiou prloha

Gentianae radixGentianae tinctura

B) Stanovenie sla horkosti prloha

Absinthii herbaCentaurii herbaGentianae radixMenyanthidis trifoliatae folium

Valepotrity.

A) 1. Skky totonosti Valerianae radix prloha + skriptum*

2. Dkaz valepotritov tenkovrstvovou chromatografiou prloha

Valerianae radix



22/39


2

Horiny.

ad A) 2. Dkaz horn tenkovrstvovou chromatografiou (TLC)

Gentianae radixGentianae tinctura

2,0 g prkovanej drogy sa miea 30 min s 20 ml metanolu. Roztok sa rchlo prefiltruje tak, aby dochdzalo k o najmenm stratm rozpadla. 20 ml filtrtu sa odparza znenho tlaku dosucha a pri teplote nepresahujcej 50 C. Zvyok sa rozpust v malommnostve metanolu tak, aby sa zskalo 2,5 ml roztoku, ktor me obsahova sediment.

TLC chromatografia Nosi Silufol UV254 Referenn roztok roztok fenaznu (50 mg v 10 ml metanolu)

Vyvjacia sstava voda : chloroform : acetn = 2 : 30 : 70 Detekcia a) UF iarenie (254 nm) b) roztok ervene pravej B (2 g/l)

Na chromatografick platniku sa nanesie vzorka extraktu, tinktra a referennroztok. Plata sa vyvja v uvedenej sstave do vky 1 cm od hornho okraja chromatogramu.Plata sa vysu na vzduchu a pozoruje sa v UF iaren pri 254 nm. Na chromatogrameskanho extraktu a tinktry s viditen kvrny zhajce fluorescenciu v jeho dolnej azvyajne aj v hornej asti, kvrna v strednej asti chromatogramu (amarogentn) sa polohouzhoduje so kvrnou fenaznu na chromatograme referennho roztoku. Tto kvrna fenaznusa ozna. Plata sa postrieka erstvo pripravenm roztokom ervene pravej B a nech sa 10

min st. Potom sa vlo maximlne na 5 min do suiarne vyhriatej na 105 C. Nachromatogramu extraktu je viditen vrazn kvrna s vysokou hodnotou R f , ktor polohouzodpoved fenaznu. Tto kvrna amarogentnu je oranov. Psobenm pr amoniaku sazafarb na erveno. Na chromatograme skanho roztoku a tinktry s v hornej aj dolnejasti viditen alie kvrny.


23/39


3

ad B) Stanovenie sla horkosti

Absinthii herbaCentaurii herbaGentianae radixMenyanthidis trifoliatae folium

Defincia. slo horkosti je prevrten hodnota zriedenia ltky, kvapaliny alebo extraktu,ktor m stle ete hork chu. Uruje sa porovnanm s chinniumchloridom, ktorho slohorkosti je 200 000. [SL 1]

1. Urenie koreknho faktora

UPOZORNENIE . Pri stanoven sla horkosti pracujte len s istm a suchm laboratrnymsklom a s erstvo prevarenou destilovanou vodou!

Zsobn roztok. 0,1 g chinniumchloridu sa rozpust v destilovanej vode a zriedi sa na 100,0ml. 1,0 ml tohto roztoku sa zriedi destilovanou vodou na 100,0 ml.

Referenn roztoky. Pripravia sa srie rieden zsobnho roztoku. Do prvej skmavky sa pipetou prid 3,6 ml zsobnho roztoku a do alej skmavky vdy o 0,2 ml viac zsobnhoroztoku, a po objem 5,8 ml, objem skmaviek sa dopln vodou do 10,0 ml. Ur sa riedenieroztoku s najniou koncentrciou, ktor m ete hork chu. 10,0 ml najzriedenejiehoroztoku sa 30 s nech v stach pohybova z jednej strany na druh na koreni jazyka. Ak saroztok nevnma ako hork, vypuje sa a pok sa 1 min. Potom sa sta vyplchnu vodou. Po10 min sa ska najbliie riedenie s vyou koncentrciou.

Korekn faktor k sa vypota poda vzorca

kden = poet mililitrov zsobnho roztoku v rieden s najniou koncentrciou, ktor savnma ete hork.

2. Prprava vzorky

K 1,0 g prkovanej drogy sa prid 100,0 ml vriacej destilovanej vody a zmes sazahrieva 30 min na vodnom kpeli za stleho mieania. Ochlad sa a dopln vodou do 100 ml.Po premiean sa prefiltruje, priom sa prv 2 ml filtrtu odstrnia. Filtrt sa ozna C-1 a mfaktor zriedenia (FZ) 100.

3. Urenie sla horkosti

Skan roztoky10,0 ml C-1 sa zriedi vodou na 100 ml: C-2 (FZ = 1 000)10,0 ml C-2 sa zriedi vodou na 100 ml: C-3 (FZ = 10 000)20,0 ml C-3 sa zriedi vodou na 100 ml: C-3A (FZ = 50 000)10,0 ml C-3 sa zriedi vodou na 100 ml: C-4 (FZ = 100 000)

00,5nk


24/39


4

Kad testujca osoba zane ochutnva vzorku C-4. Ur sa najniie riedenie, ktorm ete hork chu. Tento roztok sa ozna D. FZ roztoku sa ozna Y.

Zanajc roztokom D sa priprav tto postupnos rieden:

Roztok D[ml] 1,2 1,5 2,0 3,0 6,0 8,0

Voda[ml] 8,8 8,5 8,0 7,0 4,0 2,0

Ur sa poet mililitrov roztoku D, ktor m po zrieden na 10,0ml ete hork chu a ozna saX.

slo horkosti sa vypota poda vzorca

1,0. X k Y

horkosti


25/39


5

Valepotrity.

ad A) Dkaz valepotritov vo Valerianae radix

Prprava extraktu. 0,5 g prkovanej drogy sa v Erlenmayerovej banke so zbrusom zmiea s10 ml chloroformu a 30 mint sa pretrepva na trepake. Potom sa extrakt prefiltruje a filtrtsa odpar do sucha na vkuovej rotanej odparovake pri teplote do 45 C. Odparok sarozpust v 0,2 ml metanolu a pouije sa na lohy1. (0,1 ml) a2.:

1. Skka totonosti Valerianae radix 2* (0,1 ml extraktu podavyieuvedenho postupu)

2. Dkaz valepotritov vo Valerianae radix tenkovrstvovou chromatografiou (TLC)

TLC chromatografia

Nosi Silufol UV254Vyvjacia sstava petrolter : metyletylketn = 9 : 1 Detekcia erstvo pripraven zmes koncentrovanej kyseliny octovej

a koncentrovanej kyseliny chlorovodkovej v pomere 1 : 1

Na tart chromatogramu sa nanesie extrakt drogy (pruhov nanka, aspo 20nanesen). Flia sa nech vyvja v uvedenej zmesi do vky 1 cm od hornho okrajachromatogramu. Chromatogram sa vysu pri laboratrnej teplote a postrieka sa erstvo pripravenm deteknm inidlom. Na chromatograme s viditen modr a modrofialovkvrny valepotritov, ich farba sa zintenzvni (zmen) po zahriat v suiarni pri 105 C.



26/39


27/39


28/39


3

ad B) 1. Stanovenie straty suenm

Defincia. Strata suenm je strata hmotnosti (drogy) po suen pri 105 C do kontantnejhmotnosti vyjadren v hmotnostnch percentch.

1,0000 g prkovanej drogy (urenej aj na stanovenie obsahu trieslovn) sav predvenej navaovake su 2 hodiny v suiarni pri teplote 100 C a 105 C. Navaovaka sa nech vychladn v exsiktore a odvi sa. Z rozdielu hmotnost sa vypotastrata suenm a vyjadr sa v percentch.

Zisten hodnota straty suenm sa pouije pri vpote obsahu trieslovn pri prepotanobsahu na vysuen drogu.

ad B) 2. Stanovenie obsahu trieslovn kolorimetricky

Nvaky Agrimoniae herba 1,0000 gBistortae radix 0,2000 gHamamelidis folium 0,7000 gQuercus cortex 0,7000 gTormentillae radix 0,5000 g

1. Kolorimetrick stanovenie trieslovn

UPOZORNENIE. Na stanovenie sa pouije destilovan voda bez oxidu uhliitho (prevaren)!

K predpsanmu mnostvu prkovanej drogy (180) vo varnej banke sa prid 150 ml

vody. Zahreje sa do varu a var sa 30 mint pod sptnm chladiom. Ochlad sa pod tecouvodou, prenesie sa do odmernej banky na 250 ml, varn banka sa 3 vyplchne 10 ml vody, adopln sa vodou po znaku. Potom sa vluh prefiltruje cez skladan filter, prvch 50 mlfiltrtu sa odstrni.

Celkov obsah polyfenolov. 5,0 ml filtrtu sa zriedi vodou na 25,0 ml. 2,0 ml tohto roztoku sazmiea s 1,0 ml inidla fosfomolybdnano-volfrmanovho a s 10,0 ml vody, zmes sa zriedi29% uhliitanom sodnm na 25,0 ml. Po 30 min sa meria absorbancia pri 760 nm (A1) oprotivode ako porovnvaciemu roztoku.

Polyfenoly neadsorbovan konm prkom. K 10,0 ml filtrtu sa prid 0,10 g konho prkuCRS a 60 min sa silne pretrepva. Roztok sa prefiltruje. 5,0 ml tohto roztoku sa zriedi vodouna 25,0 ml. 2,0 ml tohto roztoku sa zmiea s 1,0 ml inidla fosfomolybdnano-volfrmanovho a s 10,0 ml vody, zmes sa zriedi 29% uhliitanom sodnm na 25,0 ml. Po 30min sa meria absorbancia pri 760 nm (A2) oproti vode ako porovnvaciemu roztoku.

Referenn skka. 50,0 mg pyrogalolu sa rozpust vo vode a zriedi sa tm istmrozpadlom na 100,0 ml. 5,0 ml roztoku sa zriedi vodou na 100,0 ml. 2,0 ml tohto roztokusa zmiea s 1,0 ml inidla fosfomolybdnano-volfrmanovho a 10,0 ml vody, zmes sa zriedi29% uhliitanom sodnm na 25,0 ml. Po 30 min sa meria absorbancia pri 760 nm (A3) oprotivode ako porovnvaciemu roztoku. (A3 = 0,350)


29/39


4

2. Obsah trieslovn potan na vysuen drogu

Percentulny obsah trieslovn sa vypota poda vzorca

A1 = absorbancia meranho roztoku pri stanoven celkovho obsahu polyfenolovA2 = absorbancia pri stanoven polyfenolov neadsorbovanch konm prkomA3 = absorbancia pyrogalolu v referennej skke (A3 = 0,350)m1 = nvaok drogy v gramochm2 = nvaok pyrogalolu v gramoch (m2 = 0,0502 g)

Stanoven obsah trieslovn sa prepota na vysuen drogu. Na vpoet sa pouijezisten hodnota straty suenm.

Skmadlo fosfomolybdnano-volfrmanov R. 100 g volfrmanu sodnho R a 25 g molybdnanu sodnho R sa rozpust v 700 ml vody R.Prid sa 100 ml kyseliny chlorovodkovej R a 50 ml kyseliny fosforenej R. Zmes sa zahrieva10 h v sklenenej aparatre pod sptnm chladiom. Prid sa 150 g sranu ltneho R, 50 mlvody R a niekoko kvapiek brmu R. Zmes sa zahrieva pri teplote varu do odstrnenia prebytku brmu (15 min), ochlad sa, zriedi sa vodou R na 1000 ml a prefiltruje sa. inidlo

m by lt. Ak je zafarben do zelenkasta, nesmie sa poui. Me sa op regenerovazahrievanm pri teplote varu s niekokmi kvapkami brmu R a prebytok brmu sa taktoodstrni. Uchovva sa pri teplote 2 C a 8 C.

Skmadlo fosfomolybdnano-volfrmanov, zrieden R.1 objem inidla fosfomolybdnano-volfrmanovho R sa zmiea s 2 objemami vody R.

13

2215,62%m A

m A A


30/39


1

loha . 10Alkaloidy I.


Belladonnae folium 1* Cinchonae cortex 1, 2, 3* + prlohaVeratri albi radix 1,2*

2. Dkaz alkaloidov tenkovrstvovou chromatografiouskriptum*#

Belladonnae radixCinchonae cortex

B) Stanovenie obsahu alkaloidov titranou metdou skriptum*

Belladonnae foliumCinchonae cortex

Skky totonosti: skmavkov reakcie, mikrosublimcia a alie mikrochemick reakcie* Bukov A. a kol.: Praktick cvienia z farmakognzie. Chemick as. Univerzita Komenskho Bratislava# Vyvjacia sstava benzn : acetn : dietylter : 25 % amoniak = 5 : 45 : 5 : 1,5


31/39


2


Cinchonae cortex

0,5 g prkovanej drogy sa zahreje k varu s 10 ml 0,5 mol/l kyseliny srovej, poochladen sa zmes prefiltruje. Filtrt sa prenesie do deliaceho lievika, prid sa 5 ml 6 mol/lamoniaku a 10 ml chloroformu a pretrepe sa. Chloroformov vrstva sa oddel a vytrepe sa s5 ml 0,5 mol/l kyseliny srovej. K 2 ml vtrepku kyseliny srovej sa prid 1 mlDragendorffovho inidla vznikne oranovoerven zafarbenie.


32/39


1

loha 11Alkaloidy II. Purnov bzy.


Alkaloidy Theae folium 2*

2. Dkaz purnovch derivtov tenkovrstvovou chromatografiou prloha

Coffeae semenTheae folium

B) Stanovenie obsahu alkaloidov gravimetrickou metdou prloha




33/39


2

ad A) 2. Dkaz purnovch derivtov tenkovrstvovou chromatografiou (TLC)


1 g prkovanej drogy sa v 100-ml liekovke preleje 1 ml koncentrovanho amoniaku, prid sa 10 ml chloroformu a 1 hodinu sa pretrepva na trepake. Potom sa extrakt prefiltrujea odpar sa na vodnom kpeli na objem cca 2 ml. Extrakt sa pouije na tenkovrstvovchromatografiu.

TLC chromatografia Nosi Silufol UV254tandardy kofen, teobromn, teofylnVyvjacia sstava chloroform : metanol = 95 : 5 Detekcia UF iarenie (254 nm)

Na tart chromatogramu sa nanes extrakty drog a tandardy. Flia sa nech vyvjav uvedenej zmesi do vky 1 cm od hornho okraja chromatogramu. Flia sa su vone navzduchu. Chromatogram sa vyhodnot vypotanm R f hodnt.


34/39


3

ad B) Stanovenie obsahu alkaloidov gravimetrickou metdou

Nvaky: Coffeae semen 3,0 gTheae folium 4,0 g

Prprava extraktu. K prkovanej droge v liekovke na 100 ml sa prid 30 ml chloroformu a 3ml 29 Na2CO3 a 60 mint sa silno pretrepva na trepake. Potom sa prid 7 ml vody, silnosa pretrepe a suchm filtrom sa prefiltruje do deliaceho lievika na 250 ml.

Izolcia alkaloidov. Filtrt chloroformovho vluhu sa v deliacom lieviku pretrepe najprv s20,0 ml a potom 3 s 15,0 ml zmesi zriedenej kyseliny chlorovodkovej a vody (1 : 9 obj.).

Spojen kysl vtrepky sa v alom deliacom lieviku zalkalizuj 10% roztokomamoniaku a tento alkalick roztok sa vytrepva s 20,0 ml a potom ete 3 s 15,0 mlchloroformu.

Gravimetrick stanovenie. Spojen chloroformov vtrepky sa prefiltruj cez such filter dosuchej vopred odvenej (analytick vhy) destilanej banky na 250 ml, filter sa premyje s 2 3 ml chloroformu a chloroform sa na vkuovej rotanej odparovake odpar do sucha.Odparok v banke sa su 30 mint v suiarni pri 105 C. Po vychladnut v exsiktore sa bankas odparkom odvi. Obsah alkaloidov v droge sa vyjadr v percentch.

Kvalitatvny dkaz purnov v odparku. Vysuen odparok sa potom rozpust v niekokchkvapkch 6 mol/l kyseliny chlorovodkovej a roztok sa preleje na odparovaciu misku.K roztoku na odparovacej miske sa prid asi 0,5 ml koncentrovanho peroxidu vodka a navodnom kpeli sa odpar do sucha. V prtomnosti purnovch derivtov vznikneruovoerveno zafarben odparok, po pokvapkan niekokmi kvapkami 6 mol/l amoniaku sa

farba zmen na fialov (murexidov reakcia).


35/39


1

loha . 12Alkaloidy III.

piov alkaloidy.A) 1. Skky totonosti

Papaveris fructus maturus (poda Opium) 3*

2. Dkaz piovch alkaloidov tenkovrstvovou chromatografiou prloha

Opium crudum (Tinctura opii methanolica)

B) Stanovenie obsahu morfnu v makovine prloha

Papaveris fructus maturus

Nmeov alkaloidy.


Secalis cornuti extractum siccum prloha

2. Dkaz nmeovch alkaloidov tenkovrstvovou chromatografiou prloha

Secalis cornuti extractum siccum



36/39


2

piov alkaloidy.

ad A) 2. Dkaz piovch alkaloidov tenkovrstvovou chromatografiou (TLC)

Opium crudum (Tinctura opii methanolica)TLC chromatografia

Nosi Silufol UV254tandardy morfn, koden, teban, papavern, noskapn (syn. narkotn)Vyvjacia sstava tolun : acetn : 25% amoniak : 99% etanol = 45:45:3:7 Detekcia a) UF iarenie (366 nm)

b) Dragendorffovo inidlo

Na chromatografick platniku nanesieme metanolov extrakt pia spolu so tandardami achromatogram nechme vyvja v uvedenej sstave. Po skonen vyvjania chromatogram sume

pri laboratrnej teplote minimlne 30 mint a do plnho vymiznutia zpachu. Chromatogramnakoniec vyhodnotme vypotanm R f hodnt.


37/39


3

ad B) Stanovenie obsahu morfnu v makovine

Papaveris fructus maturus

Zkladn roztok.0,2500 g usuenej rozomletej makoviny sa 20 mint homogenizuje v roztierakes 3 g kyslho oxidu hlinitho. Zmes sa kvantitatvne prenesie do banky so zbrusom a prid sa40 ml destilovanej vody a pretrepva sa 20 mint. Vodn extrakt sa prefiltruje cez filter doErlenmayerovej banky a prid sa 0,2 g chloridu amnneho. Tento roztok sa zalkalizujel0% roztokom amoniaku na pH 8,5 9,5. Po prave pH sa roztok trojnsobne vytrepva v deliacomlieviku do zmesi chloroform : izopropanol = 3 : l (vytrepva sa 2 s 20 ml a 1 s 10 ml, vdy podobu 5 mint). Spojen chloroformov vtrepky sa odparia v destilanej banke na vkuovejrotanej odparovake do sucha. Po vychladnut sa odparok rozpust v 5 ml chloroformu a vytrepvasa do 15 ml 0,l mol/l kyseliny chlorovodkovej. Po vypusten chloroformovej vrstvy sa odpipetuje5 ml kyslho zkladnho roztoku do skmavky (skan roztok), alch 5 ml sa pouije na prpravu porovnvacieho roztoku.

Skan roztok.K 5 ml kyslho zkladnho roztoku v skmavke sa pridaj 2 ml erstvo pripravenho 1% roztoku dusitanu sodnho a ihne sa 20 seknd silne pretrepva. Po 15 mintachsa pridaj 3 ml 10% roztoku amoniaku a po pretrepan 2,5 ml destilovanej vody. Po alch 5mintach, v priebehu ktorch sa priprav porovnvac roztok, sa meria absorbancia skmanhoroztoku pri 420 nm oproti porovnvaciemu roztoku.

Porovnvac roztok.5 ml kyslho zkladnho roztoku sa zmiea v skmavke s 3 ml 10% roztokuamoniaku a 4,5 ml destilovanej vody. Zmes sa zahrieva na vodnom kpeli 5 mint a po ochladensa prenesie do kyvety.

Vpoet obsahu morfnu. Mnostvo morfinu vo vzorke (ma) sa odta z kalibranej krivky.Percentulny obsah morfinu v makovine sa vypota poda vzorca:

mma 0003,0%

ma = mnostvo morfnu vo vzorke odtan z kalibranej krivky (v g)m = nvaok drogy v gramoch


38/39


4

Nmeov alkaloidy.


Secalis cornuti extractum siccum

0,1 g suchho extraktu drogy sa pretrepva 3 minty s 8 ml teru a 5 kvapkami 15 amoniaku. Vluh sa prefiltruje a filtrt sa vytrepe s 3 ml 0,1 mol/l kyseliny chlorovodkovej. Pooddelen vrstiev sa zo spodnej vodnej vrstvy pipetou odmeraj 2 ml a rozdelia sa na 2 diely:

a) k 1 ml sa prid 5 kvapiek Mayerovho inidla, vznikne zrazenina alkaloidov, b) na 1 ml sa v skmavke opatrne navrstvia 2 ml roztoku p-dimetylaminobenzaldehydu, na

styku obidvoch tekutn sa vytvor modr prstenec (nmeov alkaloidy).

2. Dkaz nmeovch alkaloidov tenkovrstvovou chromatografiou (TLC)

Secalis cornuti extractum siccum0,1 g suchho extraktu drogy sa zmiea sa s 30 ml acetnu a 1 ml koncentrovanho roztoku

amoniaku. Zmes sa intenzvne premieava poas 1 hodiny na trepake. Po filtrcii sa roztok odparna odparovacej miske do sucha a zvyok sa rozpust v malom mnostve zmesi chloroform : etanol =95 : 5. Tento roztok sa pouije na tenkovrstvov chromatografiu.

TLC chromatografia Nosi Silufol UV254tandard ergotamnVyvjacia sstava chloroform : metanol = 9 : 1 Detekcia a) UF iarenie (366 nm) b) roztok p-dimetylaminobenzaldehydu (van Urkovo inidlo)

Na tart chromatogramu sa nanesie extrakt drogy a tandard. Flia sa nech vyvjav uvedenej zmesi do vky 1 cm od hornho okraja chromatogramu. Flia sa su vone navzduchu. Chromatogram pozorujeme pod UF iarenm. Nsledne sa chromatogram zahrejev suiarni na 105 C a ihne sa postrieka van Urkovm inidlom. Nmeov alkaloidy poskytujfialov kvrny. Chromatogram sa vyhodnot vypotanm R f hodnt.


39/39


loha . 13Chromatografick metdy pri izolcii a identifikcii prrodnch ltok.

A) Delenie a identifikcia antraglykozidov stpcovou a tenkovrstvovou chromatografiou

Frangulae cortexRhei radixRumicis radix

1. Prprava extraktu0,2 g prkovanej drogy sa za varu hydrolyzuje s 10 ml 0,5% kyseliny chlorovodkovej pod

sptnm chladiom po dobu 10 mint. Po vychladnut sa k zmesi prid 20 ml chloroformu aextrahuje sa za varu 15 mint. Po ochladen sa extrakt sfiltruje cez vatu do deliaceho lievika. Pooddelen vodnej fzy sa chloroformov roztok sfiltruje do porcelnovej misky a odpar sa do sucha.Odparok sa rozpust v 2 ml chloroformu a naadsorbuje sa na mal mnostvo silikaglu

v porcelnovej miske.2. Delenie derivtov antrachinnu na stpci silikaglu Prprava stpca silikaglu. 10 g silikaglu sa suspenduje v 30 ml benznu v malej kadike.Suspenzia sa dobre rozmiea tyinkou a naleje sa do chromatografickej kolny, v ktorej je na dneksok vaty. Po usaden adsorbentu sa steny chromatografickej kolny oplchnu ete asi 5 ml benznu. Na stpec sa nanesie naadsorbovan extrakt z drogy. Po jeho usaden a vsiaknut benznusa steny chromatografickej kolny oplchnu 1 2 ml benznu a op sa nech vsiaknu. Ihne sazane premva elunou sstavou, lebo povrch adsorbentu nesmie vyschn. Delenie ltok na stpci silikaglu. Chromatografick kolna sa premva najprv istm benznomtak dlho, a sa prv lt zna posunie smerom dolu tak, aby za ou vznikol asi 3 cm irok psistho odfarbenho adsorbentu. Potom sa polarita elunej zmesi postupne zvyuje pridanm 10, 20,30, 40 a 50 % teru k benznu (vdy 5 ml zmesi), m sa vytvoria alie zny polrnejchderivtov.

Frakcie sa odoberaj po 5 ml do skmaviek (prv znu odoberte naraz ako jednu frakciu,t. j. asi 25 ml). Frakcie sa opatrne odparia na vodnom kpeli v digestriu, odparok sa rozpustv 1 ml chloroformu a pouije sa na identifikciu na tenkej vrstve.

3. Identifikcia derivtov antrachinnu

TLC chromatografia Nosi Silufol 366tandardy chryzofanol, fyscin, frangula-emodn, aloe-emodn

(nanies v uvedenom porad)Vyvjacia sstava cyklohexn : ter = 3 : 1 Detekn inidlo 10% etanolov roztok hydroxidu draselnho

Jednotliv frakcie z kolny sa nanes kapilrou na chromatografick platniku spolu sotandardami. Do komory sa naleje 40 ml erstvo pripravenej sstavy a komora sa nech sti. Povyvinut sa chromatogram vysu a opakovane sa vyvinie v tej istej sstave. Po vysuen sa postrieka deteknm inidlom a vyhodnot.

gnozka labak

Documents