fluorek jako czynnik prozapalny i ograniczajĄcy biodostĘpnoŚĆ atp w komÓrkach makrofagÓw
DESCRIPTION
FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W KOMÓRKACH MAKROFAGÓW Krzysztof Woźniak Studenckie Koło Naukowe przy Samodzielnej Pracowni Biochemii i Chemii Medycznej, Wydział Nauk o Zdrowiu. SĄ JEDNYM Z NIEBEZPIECZNIEJSZYCH ZAGROŻEŃ PRZEMYSŁOWYCH - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
![Page 1: FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W KOMÓRKACH MAKROFAGÓW](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062500/56815300550346895dc12001/html5/thumbnails/1.jpg)
FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I
OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W
KOMÓRKACH MAKROFAGÓWKOMÓRKACH MAKROFAGÓW
Krzysztof Woźniak
Studenckie Koło Naukowe przy Samodzielnej Pracowni Biochemii i Chemii Medycznej, Wydział Nauk o Zdrowiu
![Page 2: FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W KOMÓRKACH MAKROFAGÓW](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062500/56815300550346895dc12001/html5/thumbnails/2.jpg)
• SĄ JEDNYM Z NIEBEZPIECZNIEJSZYCH ZAGROŻEŃ PRZEMYSŁOWYCH
• ZWIĄZKI FLUORU WYSTĘPUJĄ W WODZIE, POWIETRZU I ŻYWNOŚCI
•ZATRZYMYWANE W TKANKACH TWARDYCH MOGĄ BYĆ Z NICH STOPNIOWO UWALNIANE
![Page 3: FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W KOMÓRKACH MAKROFAGÓW](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062500/56815300550346895dc12001/html5/thumbnails/3.jpg)
• DŁUGOTRWAŁA EKSPOZYCJA NA FLUOREK STYMULUJE STRES OKSYDACYJNY
• STRES OKSYDACYJNY JEST STYMULATOREM PROCESU MIAŻDŻYCOWEGO
• W POWSTAWANIU BLASZKI MIAŻDŻYCOWEJ UCZESTNICZĄ MAKROFAGI
![Page 4: FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W KOMÓRKACH MAKROFAGÓW](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062500/56815300550346895dc12001/html5/thumbnails/4.jpg)
Uproszczony schemat powstawania miażdżycy
LDL Ox-LDL
Monocyt
Makrofag
Komórka piankowata
ROSROS
(Reaktywne formy tlenu)(Reaktywne formy tlenu)ROS ROS - - Reactive Oxygen SpeciesReactive Oxygen Species
Receptor LDL
ReceptorZmiatający CD36
![Page 5: FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W KOMÓRKACH MAKROFAGÓW](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062500/56815300550346895dc12001/html5/thumbnails/5.jpg)
• GŁÓWNYM MIEJSCEM POWSTAWANIA REAKTYWNYCH FORM TLENU (ROS) W MAKROFAGACH SĄ MITOCHONDRIALNE ENZYMY ŁAŃCUCHA ODDECHOWEGO
• ŹRÓDŁEM ROS W MAKROFAGACH SĄ TAKŻE ENZYMY AKTYWOWANE PODCZAS RÓŻNICOWANIA MONOCYTÓW W MAKROFAGI (LIPOKSYGENZY, CYKLOOKSYGENAZY, OKSYDOREDUKTAZA NADP)
![Page 6: FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W KOMÓRKACH MAKROFAGÓW](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062500/56815300550346895dc12001/html5/thumbnails/6.jpg)
Mając na uwadze, że zwiększona synteza ROS w makrofagach jest czynnikiem ryzyka rozwoju procesu miażdżycowego za cel pracy przyjęto próbę oceny wpływu fluorków na:
• WEWNĄTRZKOMÓRKOWĄ SYNTEZĘ ROS
• AKTYWNOŚĆ ENZYMÓW ŁAŃCUCHA ODDECHOWEGO
• SYNTEZĘ ATP
![Page 7: FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W KOMÓRKACH MAKROFAGÓW](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062500/56815300550346895dc12001/html5/thumbnails/7.jpg)
• BADANIA BYŁY PRZEPROWADZONE NA MAKROFAGACH UZYSKANYCH Z LINII KOMÓREK MONOCYTARNYCH THP-1
• MAKROFAGI HODOWANO Z ROZTWORAMI FLUORKÓW O STĘŻENIU 1,3 i 10 μΜ
![Page 8: FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W KOMÓRKACH MAKROFAGÓW](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062500/56815300550346895dc12001/html5/thumbnails/8.jpg)
• STRES OKSYDACYJNY OZNACZANO POPRZEZ POMIAR WEWNĄTRZKOMÓRKOWEGO UTLENIANIA DCFH-DA PRZY UŻYCIU CYTOMETRU PRZEPŁYWOWEGO
• SYNTEZĘ ATP OZNACZANO PRZY UŻYCIU KITU I CZYTNIKA PŁYTEK ELIZA
![Page 9: FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W KOMÓRKACH MAKROFAGÓW](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062500/56815300550346895dc12001/html5/thumbnails/9.jpg)
1. Inkubacja makrofagów z roztworami fluorków spowodowała istotne obniżenie ilości ATP w komórkach wraz ze wzrostem stężenia dodanego roztworu fluorku,
![Page 10: FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W KOMÓRKACH MAKROFAGÓW](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062500/56815300550346895dc12001/html5/thumbnails/10.jpg)
Ilość syntetyzowanego ATP
0
100
200
300
400
500
600
700
800
900
% fl
uore
scen
cji
K neg H2O F 1μM F 3μM F 10μM
44%44%
96%96%92%92%
- Różnice w odniesieniu do kontroli pozytywnej.
![Page 11: FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W KOMÓRKACH MAKROFAGÓW](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062500/56815300550346895dc12001/html5/thumbnails/11.jpg)
2. W tym samym czasie rosła produkcja wolnych rodników tlenowych (ROS) wraz ze wzrostem stężenia dodanego roztworu fluorku
![Page 12: FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W KOMÓRKACH MAKROFAGÓW](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062500/56815300550346895dc12001/html5/thumbnails/12.jpg)
Ilość syntetyzowanych ROS
0
50
100
150
200
250
300
350
% f
luor
esce
ncji
K neg H2O F 1μM F 3μM F 10μM
P< 0,05
P< 0,05
![Page 13: FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W KOMÓRKACH MAKROFAGÓW](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062500/56815300550346895dc12001/html5/thumbnails/13.jpg)
3. Dodanie do hodowli inhibitorów łańcucha oddechowego spowodowało istotne, ale nie całkowite obniżenie ilości syntetyzowanych ROS
![Page 14: FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W KOMÓRKACH MAKROFAGÓW](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062500/56815300550346895dc12001/html5/thumbnails/14.jpg)
Ilość syntetyzowanego ROS przy dodaniu
inhibitorów łańcucha oddechowego
0
50
100
150
200
250
300
350
% f
luor
esce
ncji
K neg H2O F 1μM F 3μM F 10μM
93%93%92%92% 94%94%94%94%94%94%
- Różnice w odniesieniu do syntezy ROS bez inhibitorów
![Page 15: FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W KOMÓRKACH MAKROFAGÓW](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062500/56815300550346895dc12001/html5/thumbnails/15.jpg)
4. Dodanie do hodowli apocyniny (inhibitora oksydoreduktazy NADH) spowodowało nieznaczne obniżenie syntezy ROS w makrofagach.
![Page 16: FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W KOMÓRKACH MAKROFAGÓW](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062500/56815300550346895dc12001/html5/thumbnails/16.jpg)
0
50
100
150
200
250
300
350
% f
luor
esce
ncji
K neg H2O F 1μM F 3μM F 10μM
Ilość syntetyzowanego ROS
przy dodaniu apocyniny 3%3%
25%25%5%5%
25%25%29%29%
- Różnice w odniesieniu do syntezy ROS bez inhibitorów
![Page 17: FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W KOMÓRKACH MAKROFAGÓW](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062500/56815300550346895dc12001/html5/thumbnails/17.jpg)
• FLUOREK SODU DODANY DO MAKROFAGÓW PRAWDOPODOBNIE STYMULUJE STRES OKSYDACYJNY
• OBJAWIA SIĘ TO WZROSTEM SYNTEZY ROS ORAZ OBNIŻENIEM ILOŚCI SYNTETYZOWANEGO ATP
![Page 18: FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W KOMÓRKACH MAKROFAGÓW](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062500/56815300550346895dc12001/html5/thumbnails/18.jpg)
• PRAWDOPODOBNIE DZIAŁANIE FLUORKU POLEGA NA ROZPRZĘGANIU ŁAŃCUCHA ODDECHOWEGO
• ZASTOSOWANIE APOCYNINY POTWIERDZIŁO UDZIAŁ KOMPLEKSU I ŁAŃCUCHA ODDECHOWEGO W SYNTEZIE ROS
• WZRASTAJĄCE STĘŻENIE FLUORKU BYŁO ISTOTNIE SKORELOWANE ZE WZROSTEM SYNTEZY ROS ORAZ ZE SPADKIEM STĘŻENIA ATP
![Page 19: FLUOREK JAKO CZYNNIK PROZAPALNY I OGRANICZAJĄCY BIODOSTĘPNOŚĆ ATP W KOMÓRKACH MAKROFAGÓW](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062500/56815300550346895dc12001/html5/thumbnails/19.jpg)