flssebastianes 200801 seminario[1]

LGN 5799 - SEMINRIOS EMGENTICA E MELHORAMENTO DE PLANTAS

Programa de Ps-Graduao em Gentica e Melhoramento de Plantas

Programa de Ps-Graduao em Gentica e Melhoramento de Plantas

Departamento de GenticaAvenida Pdua Dias, 11 - Caixa Postal 83, CEP: 13400-970 - Piracicaba - So Paulo - Brasil

Telefone: (0xx19) 3429-4250 / 4125 / 4126 - Fax: (0xx19) 3433-6706 - http://www.genetica.esalq.usp.br/semina.php

Vias de Biossntese de Antibiticos

Vias de Biossntese de Antibiticos

Fernanda Luiza de Souza SebastianesProfa. Dra. Aline Aparecida Pizzirani-Kleiner

Seminrio Ps Graduao Vias de Biossntese de Antibiticos

SumrioSumrio

Histrico

Mecanismo de ao dos antibiticos

Vias de biossntese de antibiticos

Resistncia Microbiana

Obteno de novos antibiticos


Histria dos antibiticos

Cientistas da segunda metade do sculo XIX (Tyndal, Lister, Huxley,Duchesne e Vuillemin) j observavam o fenmeno denominado porantibiose, o qual era resultado dos agentes antimicrobianos.

Em 1860 Joseph Lister estudou o efeito inibitrio de substncias qumicas sobre as bactrias.

Fenol Esteriliza instrumentoscirrgicos

taxas de mortalidade associadas cirurgias

Pasteur e Joubert em 1877 reconheceram o potencial clnicos dosprodutos microbianos como agentes teraputicos

Bacillus antracisCrescia em urina estril

Morte com a adio de bactrias junto com ele na mesma urina

(Greenwood, 1997)Seminrio Ps Graduao Vias de Biossntese de Antibiticos

Alexander Fleming1881 1955

Nobel Medicina 1945

1928 Alexander Fleming descobriu a penicilina

Saint Marys Hospital de Londres

(Bentley, 2005 )Seminrio Ps Graduao Vias de Biossntese de Antibiticos


Colnias de Staphylococcus vizinhas do fungoPenicillium apresentavam-se translcidas (lise celular).

Cresceu Penicillium em meio lquido e verificou que uma substncia antimicrobiana era secretada no meio.

Contaminante inibia o crescimento de Staphylococcusmesmo diludo 800 vezes.

Agente antibacteriano penicilina

Penicillium chrysogenum


1941 incio do uso clnico da penicilina (estreptococos e pneumococo).

Penicilina Primeiro antibitico usado para o tratamento de infeces em humanos

13 anos da descoberta ao uso

prtico. (Gomez & Lopez, 2006)

Chain & Florey em 1940 analisaram o efeito antibacteriano da penicilina.

No final da dcada de 1930, no auge da segunda guerra mundial, o elevado nmero de pacientes infectados exigia a descoberta de substncias efetivas para o tratamento de infeces bacterianas.



1944 Selman Abraham Waksman e colaboradores isolaram a estreptomicina de uma cepa Streptomyces, a primeira droga efetiva contra o bacilo da tuberculose.

Em 1889 o nome antibitico foi criado por Vuillemim e, posteriormente, em 1942 foi redefinido por Waksman.

Prmio Nobel de Medicina (1952)

Antibitico: um composto qumico derivado de microrganismos (bactrias, fungos) que tm a capacidade de inibir o crescimento, inclusive chegando a destruir outros microrganismos em solues diludas antibacteriano, antifngico e antitumoral.

(Greenwood, 1997)


Microrganismos apresentam dois tipos de metabolismo:

Produo de Antibitico

Microrganismos

Biossntese de antibiticos em microrganismosSeminrio Ps Graduao Vias de Biossntese de Antibiticos

Os produtos naturais isolados de actinomicetos e fungos tm sidoa principal fonte da maioria dos antibiticos comercializados.

Secundrio: rotas biossintticas longas e complexas derivadas do metabolismo primrio

Primrio: ativo durante todo o ciclo de vida


Mais de 8000 antibiticos foram identificados

200 novos antibiticos a cada ano

Atualmente existem 90 antibiticos utilizados na prtica clnica.

Antibiticos so produzidos principalmente por bactrias

ou fungos:

Antibiticos produzidos por fungos (principalmente pelosgneros Penicillium e Cephalosporium) Ex.: penicilina, cefalosporina, griseofulvina.

Gnero Streptomyces produz 70% dos antibiticos do mercado

(Pelez, 2006)

Microrganismos produtores

Streptomyces tenebraeus1968TobramicinaMicromonospora purpurea1963GentamicinaStreptomyces lincolnensis1962LincomicinaStreptomyces kanamyceticus1957KanamicinaStreptomyces orientalis1956VancomicinaStreptomyces ambofaciens1954EspiramicinaStreptomyces erithreus1952EritromicinaStreptomyces noursei1950NistatinaStreptomyces rimosus1950OxitetraciclinaStreptomyces fradiae1949NeomicinaCephalosporium sp1948Cefalosporina C, N e PStreptomyces aureofaciens1948ClortetraciclinaStreptomyces lavendulae1947 53FramicetinaBacillus polymyxa1947PolimixinaStreptomyces venezuelae1947CloranfenicolBacillus lincheniformis1945BacitracinaStreptomyces griseus1944EstreptomicinaPenicilium griseofulvum1939 / 1945GriseofulvinaBacillus brevis1939TirotricinaPenicillium notatum1929 40Penicilina

MicrorganismoData da descobertaNome

Seminrio Ps Graduao Vias de Biossntese de Antibiticos(Greenwood, 1997)



Produo de antibiticos

1. Preparao do inculo;

2. Inoculao em meio de fermentao;

3. Incubao em condies de fermentao controladas e aerao forada com ar esterilizado;

4. Remoo do miclio por centrifugao e/ou filtrao;

5. Extrao e purificao do antibitico.

Esquema bsico de um processo fermentativo para produo comercial de um antibitico:

Porcentagem de empresas envolvidas com a pesquisa de metablitos de interesse industrial no Brasil

Pesquisa


Produo de antibiticos

A cada ano so produzidos 100000 toneladas de antibiticos, o que corresponde a US$ 5 bilhes em vendas destinadas :

medicina

agricultura

teraputica animal

Biossntese de antibiticos em microrganismosSeminrio Ps Graduao Vias de Biossntese de Antibiticos

Mecanismo de ao dos antibiticos

Ex.: Penicilina,Cefalosporina, Vancomicina

Inibio da sntese de protenas

Ex.: EritromicinaRifampicinaEstreptomicina

Inibidores da sntese da parede celular microbiana

Interferem na sntese de nucleotdeos

Interferem com a membrana celular bacteriana

Ex.: SulfonamidasTrimetropina

Ex.: Polimixina BColistina



Peptdeos no ribossomais e policetdeos so as principais classes de antibiticos que apresentam ampla diversidade estrutural e funcional.

Eles so sintetizados respectivamente por enzimas multifuncionais chamadas de peptdeo sintetase no ribossomal (NRPS) e policetdeosintetase (PKS).

Estas enzimas apresentam similaridade na estrutura modular dosdomnios catalticos e no mecanismo de montagem linear.

Peptdeos no ribossomais e policetdeos no so sintetizados com a participao direta dos ribossomos.


(Walsh, 2004)



Enzima peptdeo sintetase no ribossomal (NRPS)

As NRPSs so constitudas por mdulos que so responsveis pela incorporao de um resduo na cadeia de peptdeo nascente.

Cada mdulo responsvel por: ativao, adenilao, tioesterificao, condensao e modificao de um substrato (aminocido) especfico.

Ex.: Penicilina, vancomicina,ciclosporina.

(Challis & Naismith, 2004)



Os domnios apresentam stios catalticos distintos com motivosestruturais conservados importantes para a atividade cataltica.

Trs domnios so necessrios na estrutura de um mdulo como:

1. Domnio A (adenilao) - selecionae ativa os aminocidos (seqncia primria);

3. Domnio C (condensao) - catalisa a formao das ligaes peptdicas

(Challis & Naismith, 2004)

2. Domnio PCP (protena carreadorpeptidil) - liga o resduo de serinado grupo tiol do cofator com o aminocido ativado


Enzima PKS (policetdeo sintase)

Policetdeos so cadeias de cidos graxos que apresentamatividade farmacolgica. Ex.: antibiticos, antitumorais, fitoalexinas;

Enzimas PKS atuam sobre o substrato acil CoA (cidos graxos) para sintetizar os policetdeos;

So organizados tambm em unidades funcionais (mdulos);

Cada mdulo de PKS catalisa as diferentes etapas das reaes qumicas para a formao da estrutura do antibitico.

(Lal et al., 2000)



A biossntese de policetdeo:

Ex.: Eritromicina, tetraciclina.

(Lal et al., 2000)

PKS I

Modificaes Ps-PKS

Eritromicina A 6-Deoxieritronolide B


A biossntese de policetdeo:

Um mdulo de PKS tambm pode ser subdividido em domnios

c) Domnio KS (cetosintase) - catalisa a reao de elongao;

d) Domnio Te (tioesterase) - liberao do produto (policetdeo).


Os quatros domnios essenciais so:

a) Domnio AT (acetiltransferase): ativao de cidos graxos;

b) Domnio ACP (protena carreadoraacil) - transporta os substratos participando da elongao;

Domnio AT

Domnio KS

Domnio Te

Reconhecimento do substrato e transferncia para domnio ACP

Formao da ligao cetide (ligao C-C)

Liberao do produto



As PKSs so classificadas em tipo I, II, III

PKS I - uma nica cadeia polipeptdica multifuncional apresenta todas as atividades enzimticas necessrias para um ciclo de elongao e processamento;

PKS II - a atividade enzimtica para a elongao e processamento da cadeia de policetdeos esto presentes em polipeptdeos separados;

PKS III cadeia elongada e processada em um nico stio ativo multifuncional.

(Castoe et al., 2007)



Fitoalexinas so compostos antimicrobianos que so sintetizados durante a infeco no tecido lesado via econmica;

Estes compostos so sintetizados pela via PKS III;

A sntese de fitoalexina induzida por microrganismos, radiao ultravioleta, compostos qumicos - sais de metais pesados, componentes da parede celular de fungos quitina;

Os agentes que podem induzir a sntese de fitalexinas so chamados de elicitores.

(Jeandet et al., 2002)



Os policetdeos so sintetizados por bactrias, fungos, animais e plantas;

Em plantas os policetdeos apresentam diversas funes: pigmentao de flores, resposta a exposio de luz UV, defesa contra patgeno (fitoalexinas);

PKS especficos de plantas so chalcona sintase (CHS) e 2-pirona sintase (2-PS);

Estas enzimas apresentam 74% de seqncia idntica de aminocidos. Entretanto, elas diferem no substrato selecionado e no nmero de reaes de condensao.

(Jez et al., 2000)



Anlise da estrutura tridimensional das PKSs de plantas mostraram que a cavidade de iniciao e elongao da enzima 2-pirona sintase menor do que a da chalcona sintase

A variao de aminocidos que compem a cavidade do stio ativo altera a preferncia ao substrato e o comprimento da cadeia de policetdeo

(Jez et al., 2000)



(Jez et al., 2000)

A manipulao do volume do stio ativo uma estratgia para aumentar a diversidade molecular de policetdeos.

Para demonstrar este princpio o stio ativo da CHS foi modificada para parecer-se com a 2-PS por mutagnese stio dirigida;

Identificao dos produtos da reao confirmaram que a modificao na CHS alterou a preferncia do substrato de p-coumaroyl-CoA por acetyl-CoA e o produto formado foi um tricetdeo em vez de tetracetdeo;



Enzimas ps PKSs

Enzimas ps PKSs alteram a estrutura de policetdeos sendoimportantes para a atividade biolgica dos mesmos;

Oxidao, metilao, alquilao e glicosilao;

A funo das enzimas ps PKSs testada por meio da inativao de genes, seguido por caracterizao dos metablitos resultantes;

possvel avaliar a seqncia de modificaes at chegar ao composto bioativo final.

(Weissman & Leadlay, 2005)



Enzimas ps PKSs

Outra tcnica alternativa expressar um gene ps-PKS em hospedeiro heterlogo na presena de uma cadeia de policetdeo;

Glicosiltransferases (GTs) tm sido estudadas para avaliar a tolerncia delas a outros acares alternativos;

Estes experimentos so realizados em hospedeiros heterlogos usando a combinao de GTs nativas e exgenas,genes da via PKSs e de accares.




Ex.: Genes que codificam GTs e o acar desosamina foram coexpressos em uma biblioteca gnica codificando diferentes macrolactonas.


Narbomicina

Algumas ps PKSs so especficas a um determinado substrato, enquanto que outras so mais flexveis permitindo a produo de novos compostos bioativos;



A flexibilidade destas enzimas pode ser conseguida com mutagnese stio dirigida ou evoluo dirigida.



Evoluo

A via de biossntese de cidos graxos (FAS) est presente em todos os organismos;

A via de FAS e PKS usam o mesmo ncleo de atividade enzimtica, portanto, acredita-se que exista uma conexo evolutiva entre estas vias.

(Kodama et al., 2005)

FAS

PKS


Evoluo

Para provar essa hiptese, foram estudadas as seqncias do domnio KS presentes em classes de FASs e PKSs encontrados em bactrias, fungos, animais e vegetais;

A rvore filogentica derivada destas seqncias reflete um processo evolutivo longo e compartilhado destas vias (PKS e FAS).



Evoluo

Protenas KS de plastdios e mitocndrias esto localizados prximo das bactrias, consistente com a origem procaritica destas organelas.



Evoluo


FAS I micobacteriana agrupou com FAS I de fungos -arquitetura muito similar destas duas enzimas;

Eventos evolucionrios independentes podem ter levado ao desenvolvimento do sistema de FAS em fungos e animais.

PKSI bacteriano divide um ancestral comum com FAS I animal e PKS I de fungos


Evoluo


Reconstrues da rvore indicaram que o PKSI bacteriano apresenta um papel central, sendo que ele pode ser derivado de FAS bacterianas.


Evoluo


Seqncias dos domnios KSsrevelaram que duplicaes mltiplas de genes, perda de genes, e transferncia horizontal de genes tem contribudo para a evoluo de PKS em bactrias


A biossntese de PKS-NRPS:

Existem tambm antibiticos que so sintetizados por um sistema hbrido NRPS-PKS.

A Leinamicina um antibitico hbrido peptdeo-policetdeo.

Caracterizao bioqumica dos genes da biossntese da leinamicina em Streptomyces atroolivaceus S-140 revelou que este antibitico (antitumoral) sintetizado por um sistema hbrido NRPS-PKS (2-NRPS e 6-PKS).

(Tang et al., 2006) Seminrio Ps Graduao Vias de Biossntese de Antibiticos

Mdulos

Enzimas NRPS-PKS


Peptdeos antimicrobianos so sintetizados com a participao direta de ribossomos em animais, plantas e microrganismos;

A maioria destes peptdeos so catinicos e lipoflicos provocando a morte de bactrias atravs do rompimento na membrana celular;

A carga positiva destes peptdeos facilita a interao com a carga negativa da membrana bacteriana que contm fosfolipdios. O carter lipoflico permite a permeabilizao na membrana bacteriana;

Nos animais, os peptdeos antimicrobianos so a primeira linha de defesa do sistema imunolgico.

(Pelez, 2006)Seminrio Ps Graduao Vias de Biossntese de Antibiticos


(Pelez, 2006)

Uma ampla variedade de peptdeos antimicrobianos produzida por bactrias como bacteriocinas;

Os peptdeos antimicrobianos sintetizados nos ribossomos das bactrias so conhecidos como bacteriocinas;

Entretanto, os antibiticos no esto includos nesse grupo, pois so sintetizados por meio do metabolismo secundrio, ou seja, sem o envolvimento direto dos ribossomos.


Genes da biossntese de antibiticos em procariotos

Os genes responsveis pela biossntese de antibiticos encontram-se agrupados em clusters contguos.

Cluster do cido clavulmico em Streptomyces clavuligerus

Nestes agrupamentos gnicos encontram-se tambm genes reguladores e de resistncia ao antibitico.

Os genes podem estar organizados em operon (gramicidina S, surfactina e tirocidina).



Genes da biossntese de antibiticos em fungos filamentosos

Genes de fungos filamentosos que atuam na biossntese de antibiticos esto organizados em clusters

Genes da biossntese de antibiticos organizados em clustersem Penicillium chrysogenum, Aspergillus nidulans e Acremoniumchrysogenum.

(Gutirrez et al., 1999)



Genes agrupados em um nico cromossomo ou em cromossomos diferentes

Genes da biossntese de Cefalosporina em clusters diferentes no fungo Acremonium chrysogenum

Genes da biossntese de penicilina agrupados em um nico cromossomo cluster em Penicillium chrysogenum e Aspergillus nidulans

(Gutirrez et al., 1999)


Organizao dos genes em cluster

Facilita a expresso coordenada de genes da biossntese de antibiticos, a identificao e o sequenciamento de novos clusters de PKSs

Biossntese de antibiticos em microrganismosSeminrio Ps Graduao Vias de Biossntese de Antibiticos(Weissman & Leadlay, 2005)

Estratgias gerais de resistncia s drogas:

Os patgenos podem:

Produzir uma enzima que destri a droga;

Alterar o alvo molecular da droga;

Diminuio do acmulo do antibitico nabactria.

Genes de resistncia so transportados em plasmdeos e so encontrados em transposons

Mutao cromossmica

Genes de resistncia em plasmdeos

Por meio do uso abusivo e indiscriminado dos antibiticos ocorreu a seleo de microrganismos resistentes as drogas.

Resistncia microbiana

Seminrio Ps Graduao Vias de Biossntese de Antibiticos(Rang et al., 1997)


A resistncia a antibiticos nos microrganismosdissemina-se em trs nveis:

Transferncia de bactrias entre pessoas;

Transferncia de genes de resistncia entre bactrias (geralmente em plasmdios);

Transferncia de genes de resistncia entre elementos genticos no interior das bactrias, por meio de transposons.

Resistncia microbiana

(Rang et al., 1997)


Novos antibiticos

e) Necessidade de estudo e identificao de novos antibiticos na rea de agricultura, que podero substituir os produtos agroqumicos, os quais apresentam alta toxicidade, custo e agressividade ao meio ambiente.

(Strobel et al., 2004)

As pesquisas que visam ao desenvolvimento de novos antibiticos so prioritrias devido a vrios fatores:

a) Aparecimento de novos patgenos e a seleo de resistentes;

b) Aquisio de mltiplos nveis de resistncia pelas bactrias;

c) Variados efeitos colaterais indesejveis dos antibiticos existentes, que devem ser eliminados;

d) Escassez de tratamento efetivo para mltiplas doenas tropicais como malria, doena de Chagas, leishmaniose e diversos tipos de diarrias;

Microrganismos endofticos e alguns de seus produtos

Endfito Composto qumico Referncia

Acremonium sp. Leucinostatina A Strobel & Hess(1999)

Conoplea elegantula Isocumarinas Findlay et al. (1995)

C. cf. quercina Criptocina Li et al. (2000)

Cryptoriopsis cf. quercina

Criptocandina Strobel (2003)

Streptomyces sp. Kakadumicina Castillo et al. (2003)

Streptomyces sp. Munumbicina A, B, C e D

Strobel (2003)

Streptomyces sp. Metilalbonoursina Strobel (2003)


Novas Aplicaes

Aspergillus fumigatus Endfito Cynodon dactyron Produo de novos compostos bioativos

Asperfumide, asperfumina Separados por CLAE e identificados por EM

Atividade contra 3 patgenos C. albicans, Tricophyton rubrum e A. niger

(Liu et al., 2004)Seminrio Ps Graduao Vias de Biossntese de Antibiticos

Biossntese de antibiticos em microrganismos

Novos antibiticos

Entretanto, os novos antibiticos podem apresentar alta toxicidade e propriedades farmacocinticas indesejveis como baixa absoro por via oral e instabilidade da droga.

Portanto, alguns pesquisadores se dirigem a tecnologias como a biossntese combinatria e produo de antibiticos hbridos para conseguir novos compostos bioativos.

(Rodriguez & McDaniel, 2001)Seminrio Ps Graduao Vias de Biossntese de Antibiticos

Antibiticos hbridos

O princpio da produo de antibiticos hbridos baseado na clonagem de genes heterlogos da biossntese de antibiticos, em uma cepa que produz um composto similar.

So clonados genes que codificam enzimas utilizadas em reaes estruturais de modificao como metiltransferases, hidroxilases, redutases, glicosiltransferases e oxidases.

(Hutchinson, 1997)Seminrio Ps Graduao Vias de Biossntese de Antibiticos

Novos antibiticos

Produo de 11-hidroxiaclacinomicina A pela expresso do gene dnrF de Streptomyces peucetius (produtor de aclacinomicina). As setas indicam o stio de ao de DnrF; o asterisco indica o novo grupo hidroxila.

(Salas & Mendez, 1998)Seminrio Ps Graduao Vias de Biossntese de Antibiticos

Biossntese combinatria

O princpio da produo de biossntese combinatria baseado na clonagem ou mistura de ncleos de enzimas biossintticas produzindo novos ncleos moleculares.

Os experimentos com esta PKSs e NRPS geralmente envolvem a deleo, a substituio ou a adio de mdulos, ou a criao de mdulos hbridos de diferentes PKS-NRPS.

Assim, novos metablitos podem ser gerados a partir da formao de protenas com novas propriedades enzimticas.

Seminrio Ps Graduao Vias de Biossntese de Antibiticos(Hutchinson, 1997)



Biossntese combinatria com sintases aromticas policetnicas.

A) Combinando o PKS da actinorodina (act min) e aaromatase/ciclase(ARO/CYC) da tetracenomicina (tcm).

B) Combinando o PKS da tetracenomicina, act KR e griseusin (gris) ARO/CYC.

Estas combinaes resultaram em novas molculas.



Rifampicina B: no ativa via oral Rifampicina: ativa via oral

Geldanamicina: antitumoral txico 17-DMAG: menos txico



A biossntese combinatria compreende a manipulao biossinttica que tenta acelerar o processo de evoluo;

A evoluo dirigida por mutao, recombinao e seleo. A biossntese combinatria acelera o processo de mutao e recombinao entre os genes presentes em diferentes espcies;

A seleo ocorre primeiro com a escolha de mdulos e por fim so escolhidas as molculas ativas farmacologicamente.

Os requerimentos para a obteno de antibiticos hbridos tm sido analisados por Hutchinson (1997) e Salas & Mendes (1998):

Escolha do organismo produtor do antibitico;

Conhecimento qumico e bioqumico da via biossinttica;

Conhecimento gentico de sntese do antibitico;

Determinao do novo antibitico produzido por um microrganismo hbrido.

Novos antibiticos


Novos antibiticos


Descoberta de novos genes da via de biossntesede antibiticos

Sequenciamento do genoma microbiano permite a identificao de todos os clusters de PKSs e a rede regulatria. Ex.: Streptomyces coelicolor e Streptomyces avermitilis;

Rastreamento de uma biblioteca de cosmdeo de uma determinada bactria para os genes de PKSsmodulares;

Metagenmica: biblioteca de DNA obtida de amostras do ambiente.


Indstria Farmacutica

Fases de P & D

aquisio das amostras extrao testes iniciais isolamento e caracterizao testes in vitro estrutura testes pr-clnicos * testes clnicos*

* alto investimento

Ten Kate & Laird,1999Seminrio Ps Graduao Vias de Biossntese de Antibiticos

Concluso

Os produtos naturais apresentam uma grande fatia dos produtos que so utilizados na medicina e agricultura.

Atualmente tm sido foco de ateno os trabalhos com microrganismos produtores de compostos bioativos, os quais apresentam um grande potencial para a descoberta de novos metablitos secundrios - antibiticos.

O desenvolvimento de tcnicas para a descoberta de novas biomolculas, atravs de biossntese combinatria e antibiticos hbridos, contribuiu para melhorar efeitos farmacocinticos como absoro e ao da droga, e ainda diminuiu possveis efeitos colaterais.



Referncias

Ayuso-Sacido A, Genilloud O (2004) New PCR primers for the screening of NRPS and PKS systems in actinomycetes: detection and distribution of these biosynthetic gene sequences in major taxonomic groups. Microbial Ecology 49:10-24.Amnuaykanjanasin A, Punia J, Paungmoung P, Rungroid A, Tachaleat A, Punkpatanaguichot S, Cheedihanarak S, Tanticharoen M (2005) Diversity of type I polyketide synthase genes in the wood-decay fungus Xylaria sp. BCC1067. FEMS Microbiology Letters 251125-133.Baltz RH (1998) Genetic manipulation of antibiotic producing Streptomyces. Trends in Microbiology 6:76-82.Bentley R (2005) The development of penicillin. Biology and Medicine 48:444-452. Brown K (2004) Penicillin Man: Alexander Fleming and the Antibiotic revolution. Journal of antimicrobial chemotherapy 17:444-445. Challis GL, Naismith JH (2004) Structural aspects of non-ribosomal peptide biosynthesis. Current Opinion in structural biology 14:748-756. Cohen FL, Tarsky D (1997) Microbial resistance to drug therapy: a review. State of the science 25:51-67.Floss, HG (2006) Combinatorial biosyntesis Potential and problems. Journal of Biotechnology 124:242-257. Hutchinson CR (1997) Combinatorial Biosynthesis for new drug discovery. Current Opinion in Microbiology 1:319-329. Katz L, McDaniel R (1999) Novel macrolides through genetic engineering. Kosan Bioscience 19:543-557Krechel A, Faupel A, Hallmann J, Ulrich A, Berg G (2002) Potato-associated bacteria and their antagonistic potential towards plant-pathogenic fungi and the plant-parasitic nematode Meloidogyne incognita (Kofoid & White) Chitwood. Canadian Journal Microbiology 48:772-786. Martin JF (1998) New aspects of genes and enzymes for -lactam antibiotic biosynthesis. Apply Microbiol Biotechnology 50:1-15. Owen NL, Hundley N (2004) Endophytes the chemical synthesizer inside plants. Science Progress 87:79-99. Padilla, G (2002) Manipulao gentica e molecular de actinomicetos produtores de antibiticos. Embrapa Meio Ambiente, Jaguarina, pp246-261.Papagianni, M (2003) Ribosomally synthesized peptides with antimicrobial properties: biosynthesis, structure, function, and applications. Biotechnology Advances 21:465-499. Pelez F (2006) The historical delivery of antibiotic from microbial natural products can history repeat? Biochemical Pharmacology 71:981-990. Rodriguez E, McDaniel, R (2001) Combinatorial biosynthesis of antimicrobials and other natural products. Current Opinion in Microbiology 4:526-534. Salas JA, Mendez C (1998) Genetic manipulation of antitumor agent biosynthesis to produce novel drugs. Trends in Biotechnology 16:475-482.Schwarzer D, Mariel MA (2001) Multimodular biocatalysts for natural product assembly. Naturwissenchaften 88:93-101.Strobel G, Daisy B (2003) Bioprospecting for Microbial Endophytes and their natural productis. Microbiology and Molecular Biology Review 67:491-502.Sessitsch A, Reiter B, Berg G (2004) Endophytic bacterial communities of field-grown potato plants and their plant-growth-promoting and antagonistic abilities. Canadian Journal Microbiology 50:239-249.Walsh CT (2004) Polyketide and Nonribosomal peptide antibiotics: modularity and versatility. Science 303: 1805-1810.Yoon YJ, Becu BJ, Kim BS, Kang HY, ReynoldsKA, Sherman DH (2002) Generation of Multiple bioactive macrolides by hybrid modular polyketidesyntheses in Streptomyces venezuelae. Chemistry & Biology 9:203-214. Zhang HW, Song YC, Tan RX (2006) Biology and chemistry of endophytes. Natural Product Reports 23:753-771.

Fim

Obriga

da!

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