Extracció d’ADN de plàtanExtracció d’ADN de plàtan

ObjectiuObjectiu Extreure àcids nucleics de teixits de

plàtan

Per extreure i visualitzar l’ADN del Per extreure i visualitzar l’ADN del plàtan cal…plàtan cal…

Trencar el teixit del plàtan per alliberar les cèl·lules.

Desfer les membranes lipídiques (plasmàtica i nuclear) per alliberar l’ADN.

Evitar que les nucleases lliures al citoplasma hidrolitzin l’ADN.

Precipitar l’ADN per poder visualitzar-lo

Abans de començar!!!Abans de començar!!! L’etanol, si es refreda en un frigorífic,

s’ha de posar en un recipient tancat per evitar l’acumulació de vapors dins del frigorífic que es poden encendre amb una guspira

Procediment: Pas 1Procediment: Pas 1

Tritura gel a la batedora i posa’l ben triturat dins d’un got.

Posa aproximadament 15 mL (fins la marca feta al tub) d’etanol (alcohol 96º) al tub.

Tapa el tub amb film transparent i celo.

Enfonsa el tub tapat dins el gel. El glaç ha de cobrir al màxim l’etanol.

Deixa aquest muntatge al frigorífic fins al final de l’experiment.

Procediment: Pas 2Procediment: Pas 2

Tritura un plàtan amb 250 ml d’aigua destil·lada (és l’equivalent a un got d’aigua) fins que obtinguis una mescla homogènia.Mescla 1

Procediment: Pas 3Procediment: Pas 3

En un got de plàstic mescla una cullerada petita de xampú i dos pessics de sal.

A continuació, afegeix 20 mL d’aigua destil·lada (5 cullerades petites)

No barregis encaraMescla 2

Procediment: Pas 4Procediment: Pas 4

Afegeix al got que conté la mescla 2 3 cullerades petites del preparat de plàtan de la mescla 1.

Procediment: Pas 5Procediment: Pas 5

Remena la solució durant 5 minuts amb una cullera de plàstic. Fes-ho lentament evitant així l’aparició de molta escuma.Mescla 3

Procediment: Pas 6Procediment: Pas 6

Mentre un membre del grup remena la solució de plàtan, l’altre col·loca el filtre al got. Posa’l de manera que el filtre no toqui el fons del got. Pots fer servir una pinça.

Procediment: Pas 7Procediment: Pas 7

Passa la mescla 3 pel filtre i deixa que la solució vagi filtrant durant uns minuts, fins que obtinguis uns 5ml de mostra (fins que es cobreixi el fons del got).

Procediment: Pas 8Procediment: Pas 8

Omple la pipeta de plàstic amb la mescla 3 filtrada.

Procediment: Pas 9Procediment: Pas 9

Treu el tub del frigorífic. Afegeix la mescla a l’alcohol fred.

Deixa que la solució reposi durant 2 ó 3 minuts sense moure-la. És molt important no agitar el tub.

Observació de resultatsObservació de resultats

El DNA precipita en contacte amb l’alcohol.

Té l’aparença d’un moc filamentós i blanc.