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Universidad Autónoma de San Luis Potosí
Facultad de Ingeniería - Área Agroindustrial
Evaluación del efecto cicatrizante en piel
del extracto etanólico de Calea urticifolia
(Mill.) DC en un modelo in vivo.
Presenta
Luis Gerardo Rangel Baena
Asesores
Dra. Erika García Chávez
Dr. Gerson A. Soto Peña
Mayo, 20181
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Contenido
▪ Introducción
▪ Antecedentes
▪ Justificación
▪ Hipótesis
▪ Objetivo General
▪ Objetivos Específicos
▪ Metodología
▪ Avances
▪ Cronograma de actividades
▪ Referencias
2
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PielÓrgano de
Protección
Homeostasis
fisiológica
Interacción con
el medio
ambiente
Barrera física
Se compone de
3 capas
principales
Epidermis: Capa superior formada por
células (sistema inmune)
Dermis: Capa inferior formada
por tejidos
Hipodermis:Capa mas
espesa de piel formada por adipocitos.
Estímulos
ambientales y a la
invasión de
agresores externos
Se
enfrenta
http://boletinvipassana.tripod.com/id39.ht
ml
3
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Herida
Pérdida de la
integridad de la
piel
Fuerzas
mecánicas o
térmicas que
rompen la piel y
dañan el tejido
conjuntivo y los
vasos
sanguíneos
causas
Daña y
expone la
piel
causaProfundidad
Superficiales
Epidermis
Profundidad parcial
Dermis
Profundidad Total
Tejido subcutáneo
http://www.elenaconde.com/?p=583
4
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Cicatrización
Complejo
proceso
destinado a
reparar los
tejidos dañados
Una compleja
interacción
entre muchos
componentes
celulares de la
piel
Hemostasia
• Respuesta inicial
de los tejidos
• Vaso construcción
inicial
• Comienzo de la
cascada de
coagulación
• Taponamiento de
la coagulación
INFLAMACIÓN
Liberación de
interleucinas
pro-
inflamatorias
(TNF- α, IL-1
β e IL-6)
• Síntesis de
colágeno
• Angiogénesis
(VEGF)
• Re-epitelización
https://enfermeriamayor.wordpress.com/tag/heridas/
5
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• Comprende
la
hemostasia
• Secreción de
histamina
• Aumento de
flujo
sanguíneo y
temperatura
• Reposición
de capilares
deteriorados
• Aumento de
la fuerza
tensional del
tejido dañado
Inflamación FibroplasticaRemodelaci
ón
Etapas
0 a 3 días4 días a 3
semanas
4 semanas
a 6 meses 6
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Aumento del
volumen de
pacientes en
México con
heridas crónicas
Estrategias
eficaces de
distribución de
recursos
humanos y
materiales
Se requieren
Problemática actual
Pérdida de la integridad de la
piel
Lesión o enfermedad que puede conducir a una discapacidad grave o incluso la
muerte
Medicina tradicional
Calea urticifoliaDC. (Mill)
7
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Antecedentes
8
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Calea urticifolia Mill DC.
Calea urticifolia conocida como negrito es una planta
utilizada tradicionalmente por la etnia Xi’oi de la región
de La Palma en el municipio de Rayón-Tamasopo en
San Luis Potosí.
Cicatrización Anti-
Inflamatorios
9
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Aspecto Referencia
Inhibitorios de la
diferenciación
preadipocitaria
Matsuura , 2005
Citotóxico en células de
cáncer de colon y leucemia
Nakagawa, 2005
Antioxidante Umemura, 2008
Tratamiento gastritis y Matsuura, 2005
Gamboa, 2005
Guzmán , 2010
Aspectos farmacológicos de la especie
10
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Justificación
11
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Continuidad a la caracterización farmacéutica de Calea urticifolia
(Mill.) DC
Demostrar su utilidad clínica y
garantizar un bajo riesgo para la salud.
Desarrollo de un fitomedicamentoseguro y eficaz
12Inhibición del proceso
inflamatorio e
Inductor vascular
El uso de la medicina
tradicional o herbolaria
sigue estando muy
extendido
Proporcionar indicios
para nuevas áreas de
investigación
Productos naturales de
plantas se consideran las
fuentes más disponibles y
baratas
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El extracto etanólico de Calea urticifolia (Mill.) DC.,
estimulará el proceso de cicatrización a través de
modular positivamente la secreción de los mediadores
biológicos relacionados en el proceso de cicatrización
(inflamación y vascularización), reduciendo así el tiempo
de recuperación del epitelio.
Hipótesis
13
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Evaluar el efecto cicatrizante del extracto etanólico de
Calea urticifolia (Mill.) DC., mediante la medición del
área de la incisión dorsal quirúrgica y la cuantificación
de los mediadores biológicos en el proceso de
cicatrización (citocina proinflamatoria y el factor de
vascularización VEGF).
Objetivo general
14
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• Valorar el efecto cicatrizante mediante la
disminución del área de incisión quirúrgica del dorso
de la rata.
• Evaluar el efecto antiinflamatorio y de angiogénesis
del extracto etanólico de Calea urticifolia (Mill.) DC.
por medio de la cuantificación del factor VEGF y la
inhibición de la secreción de la citocina
proinflamametoria TNF-α.
Objetivos Específicos
15
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Avances
16
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Metodología
17
Recolección del
material vegetal
Elaboración del
extracto etanólico
y rendimiento de
extracción
Valoración del extracto
etanólico de Calea urticifolia
Disminución
del área
quirúrgica
dorsal
Cuantificación de
los medidores
biológicos
𝑨𝒓𝒆𝒂 𝒊𝒏𝒊𝒄𝒊𝒂𝒍 −𝑨𝒓𝒆𝒂 (𝒅í𝒂 𝒙)
𝑨𝒓𝒆𝒂 𝒊𝒏𝒊𝒄𝒊𝒂𝒍𝒙 𝟏𝟎𝟎
Antiinflamatorio Angiogénesis
TNF-α VEGF
Técnica ELISA
Modelo animal
incisión
quirúrgica
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18
Comunidad Potrero del Carnero
(comunidad indígena Xi’iuy) en
el municipio de Rayón, S.L.P.
Recolección del material vegetal
Preparación del extracto etanólico
Ejemplares en papel
adsorbente por un
período de 48 h.
Secado: 15 días al
abrigo a una
temperatura de 22°C
Pulverizado y macerado con etanol
durante 14 días.
Filtrado y desecado a
temperatura ambiente del
exceso de etanol.
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1. Preparación de los extractos de Calea
urticifolia
peso de extracto seco/100 g de planta seca
Rendimiento del extracto etanólico: 3.46 g/100 g de
planta seca
Extracto etanólico
Aspecto ceroso
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• Las ratas fueron sometidas a la
adaptación del ciclo luz-
obscuridad de 12 h
• Capacitación en la
manipulación y el cuidado de
animales de laboratorio.
• Entrenamiento en las
condiciones quirúrgicas sin
dañar el músculo del animal.
Manejo animal
20
25 ratas hembra cepa
Wistar
10 a 12 semanas de edad
NOM-062-ZOO-1999
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21
𝑨𝒓𝒆𝒂 𝒊𝒏𝒊𝒄𝒊𝒂𝒍 −𝑨𝒓𝒆𝒂 (𝒅í𝒂 𝒙)
𝑨𝒓𝒆𝒂 𝒊𝒏𝒊𝒄𝒊𝒂𝒍𝒙 𝟏𝟎𝟎
• Objetivo específico 1. Efecto cicatrizante del
extracto vegetal, mediante la disminución del
área de incisión quirúrgica del dorso de la rata.
% de contracción de la
herida (n=5)=
Herida Cicatrización
20 días
Aplicación de tratamientos
Día 0
Extracción muestra de sangre
Día 4 Día 8 Día 12 Día 16
Día 5 Día 10 Día 15
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22
Elaboración del Excipiente (gel) y preparación de los tratamientos
a) b) c) d)
Tratamientos empleados; a) Dosis alta, b)
Dosis baja, c) Excipiente (gel) y d)
Fármaco de referencia (Brosín).
Suspensión coloidal
de Carbopol (2.5 g en
500 ml de agua
desionizada).
Trietanolamina (5
ml) Gel
Dosis baja: gel con
7.95 mg de extracto
etanólico/kg de peso
Dosis alta: gel con
15.9 mg de extracto
etanólico/kg de peso
dosis referida al doble
del uso tradicional;
Guzmán y
colaboradores 2010
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Control. Solución salina al 0.9%
Excipiente. Gel sin extracto etanólico.
Fármaco de referencia. Brosín.
Dosis baja. Gel con 7.95 mg de extracto etanólico/kg
de peso (dosis referida al doble del uso tradicional;
Guzmán y colaboradores 2010).
Dosis alta. Gel con 15.9 mg de extracto etanólico/kg
de peso (el doble de la dosis baja).
Tratamientos
23
http://www.mendozapetshop.com/mascotas/ratitas-de-laboratorio/
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24
Fármaco de Referencia Brosín
Sulfato de
NeomicinaAntibiótico
Vitamina AIncrementa la síntesis de
colágeno
Acetato de
PrednisolonaAntiinflamatorio
Clorhidrato de
TetraciclinaAntibiótico
http://www.veterimaster.com/producto.php?Id=147
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Inducción de la herida
Remoción
quirúrgicamente del
parche de piel del dorso
de la rata de 1.5 x 1.0 cm.
25
1.5 𝑐𝑚2
https://www.emaze.com/@AOOLCRZR/aprendizaje-y-memoria
http://scielo.isciii.es/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0376-78922012000200007
Rasurado
eléctrico (24 h
antes)
limpieza
séptica con
etanol 90%.
Pentobarbital
dosis
(80mg/kg), vía
intraperitoneal
.
https://es.slideshare.net/manuelgug/inoculacin-en-animales-va-intraperitoneal-subcutnea-e-intracutnea
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Remoción quirúrgica de piel
Porcentaje de contracción =𝐴𝑟𝑒𝑎 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 −𝐴𝑟𝑒𝑎 (𝑑í𝑎 𝑥)
𝐴𝑟𝑒𝑎 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙𝑥 100
(Sana et al.2016).
Medición del área de la herida
26
https://www.emaze.com/@AOOLCRZR/aprendizaje-y-memoria
ImageJ
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Resultados
27
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28
0
20
40
60
80
100
120
0 4 8 12 16 20
Po
rce
nta
je d
e c
on
trac
ció
n d
e la
he
rid
a (%
)
Tiempo (días)
CONTROL
EXCIPIENTE
REFERENCIA
DOSIS BAJA
DOSIS ALTA
% DE CONTRACCIÓN A LOS 20 DÍAS
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29
99.62 99.42
89.04
97.39
98.38
82.00
84.00
86.00
88.00
90.00
92.00
94.00
96.00
98.00
100.00
102.00
CONTROL EXCIPIENTE REFERENCIA DOSIS BAJA DOSIS ALTA
Tratamientos
Co
ntr
ac
ció
n d
e la
he
rid
a (
%)
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Biomarcadores biológicos
Valoración del efecto
cicatrizante de Calea urticifolia
30
https://biologyblogg.wordpress.com/tag/elisa/
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310
500
1000
1500
2000
2500
3000
3500
4000
Día 0 Día 5 Día 10 Día 20
Co
nce
ntr
ació
n [
pg/
mL]
Tiempo
TNF-α
CONTROL
EXCIPIENTE
REFERENCIA
DOSIS BAJA
DOSIS ALTA
* * *
*
* P> 0.05
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320
200
400
600
800
1000
1200
1400
Día 0 Día 5 Día 10 Día 20
Co
nce
ntr
ació
n [
pg/
mL]
Tiempo
VEGF
CONTROL
EXCIPIENTE
DOSIS ALTA
DOSIS BAJA
REFERENCIA
* P> 0.05
*
* * **
*
*
*
* *
*
*
*
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El extracto etanólico de Calea urticifolia (Mill.) DC.,
mediante la medición del área de la incisión dorsal
quirúrgica favorece el proceso de cicatrización de
forma superficial.
Con este mismo efecto se corroboro a nivel molecular a
través de la cuantificación de los biomarcadores :
Concentraciones bajas de TNF-α y concentraciones
altas VEGF.
La dosis baja de 7.95 mg/kg del extracto etanólico de
Calea urticifolia (Mill.) DC, favorece de mejor manera el
proceso de cicatrización tanto de forma superficial
como interna a través de los biomarcadores.
Conclusiones
33
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Cronograma de actividades
Enero – Mayo 2018
39
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Actividad Enero Febrero Marzo Abril Mayo
Semana 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4 1 2 3 4
Análisis de
ELISA
(VEGF)
Realización
del análisis
estadístico
Comparación
de resultados
Elaboración
del un
articulo
científico
Presentación
40
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Análisis estadístico
Concentraciones de TNF-α
VEGF
Análisis de normalidad de
varianzas
Análisis de post hoc
Contracción de la herida
(áreas)
Análisis de varianza (ANOVA)
Comparación múltiple de
medías
SAS (Statistical Analysis
System) V8, Copyright SAS
Institute Inc. 1999.