estructura y propiedades de los canales de iones jueves 16 de abril: 14.30-17.30 cursos_2009...
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Estructura y propiedades de los canales de iones
Jueves 16 de abril: 14.30-17.30
ftp://einstein.ciencias.uchile.cl/Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1er semestre
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Canales de iones dependientes de potencial eléctrico.
Artículos para el seminario del martes 20 de abril:•Doyleetal1998Science_280_69.pdf•JiangEtal2003Nature423_42.pdf•JiangEtal2003Nature_423_33.pdf
Los archivos pdf están en el disco compacto.Hay además un archivo ppt con las figuras.
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Axón de jibiaElectrodo que inyecta corriente Electrodos para medir
el potencial
Con este sistema podemos observar la propagación del impulso nervioso a lo largo del axón.
Vx(t)
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Estímulo en de 25 microamperes en x = 0. Dura 0,5 milisegundos y empieza a t = 0 milisegundo.
Registro del potencial eléctrico intracelular a lo largo del nervio.
0.00 ms
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0.04 ms0.12 ms0.52 ms1.24 ms1.88 ms2.28 ms2.92 ms3.72 ms4.60 ms5.48 ms6.44 ms8.04 ms8.84 ms9.80 ms10.76 ms15.12 ms
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Arreglo experimental para controlar el potencial eléctrico de la membrana. (Voltage Clamp)
Vcomando
El potencial de la membrana es igual al potencial de comando en todos los puntos a lo largo del axón. El amplificador se encarga de pasar tanta corriente como sea necesario para mantener esta igualdad.
Voltage clamp
Vm
1x 105x
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Arreglo experimental para controlar el potencial eléctrico de la membrana. (Voltage Clamp)
El potencial de la membrana es igual al comando.
El ampérmetro A mide la corriente que pasa por la membrana contenida en 1 cm lineal de axón.
A
Voltage clamp
Vcomando
Vm
1x 105x
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Hodgkin y Huxley 1952 J. Physiol (London) 117:500-544Latorre et al Biofísica y Fisiología Celular. Sevilla,1996
Voltage clamp de un axón de jibia
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Voltage clamp de un axón de jibia en presencia de TTX, bloqueador de los canales de Na. La corriente que queda es la llevada por los canales de potasio
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La corriente de llevada por los canales de sodio es la diferencia de la corriente control – corriente con TTX.
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IK
INa
IL
IC
Im
LNaKm IIIdtdV
CI
LmLNamNaKmKm VVGVVGVVGdtdV
CI
Con voltage clamp:
Vm
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IK
INa
IL
IC
Im=0
LmLNamNaKmK VVGVVGVVGdtdV
C 0
LLNaNaKKLNaKr VGVGVGGGGV
LNaK
LLNaNaKKr GGG
VGVGVGV
Sin voltage clamp:
Vm
En reposo Vm = Vr y dV/dt = 0:
LrLNarNaKrK VVGVVGVVG 0
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Potencial de acción de membrana.
Tiempo, (ms)
Vm
, (m
V)
Im, (
mA
cm-2)
LNaK
LLNaNaKK
dt
dVm GGGVGVGVG
V
0
VNa
VL
VK
NaLK GGG
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Potencial de acción de membrana.
Tiempo, (ms)
Vm
, (m
V)
Im, (
mA
cm-2)
LNaK
LLNaNaKK
dt
dVm GGGVGVGVG
V
0
VNa
VL
VK
LKNa GGG
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Potencial de acción de membrana.
Tiempo, (ms)
Vm
, (m
V)
Im, (
mA
cm-2)
LNaK
LLNaNaKK
dt
dVm GGGVGVGVG
V
0
VNa
VL
VK
NaLK GGG
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The Nerve Impulse. This is a brief Textbook that covers the basics of the initiation and propagation of the nerve impulse using equivalent circuits with reference to ionic conductances. Voltage dependent conductances are explained on the basis of single channel properties. The text contains links to the simulation programs.
http://nerve.bsd.uchicago.edu/med98a.htm
Para saber más sobre impulso nervioso consulte el libro de texto del Dr. Francisco Bezanilla:
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Los canales responsables del potencial de acción en el axón gigante de jibia tienen dos atributos importantes.
•Selectividad. Conducen Na+ o K+ en forma excluyente.
•Excitabilidad. Capacidad de cambiar su capacidad de conducir iones en función del voltaje.
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Estructura
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Topología de los canales de Ca2+, Na+ y K+ sugerida de sus perfilesde hidrofobicidad
x4
x4
x2
x2
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Los canales pueden formarse a partir de una sola molécula de proteína, pueden ser tetrámeros o dímeros
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En los canales de K+ dependientes de potencial el segmento S4 y el poro (P)están muy conservados
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Doyle et al 1998 Science 280:69-77
KCsA de Streptomyces lividans
Tema de seminario martes 22
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Doyle et al 1998 Science 280:69-77
KCsA de Streptomyces lividans
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Doyle et al 1998 Science 280:69-77
KCsA de Streptomyces lividans
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Doyle et al 1998 Science 280:69-77
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Zhou et al 2001 Nature 414:43-48
KCsA de
Streptomyces lividans. El filtro de selectividad a más resolución
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oio KF ][
RTFVioi eKF /][
RTFV
i
o
oi
io eK
K
F
F /
][
][
i
oK K
K
FRT
V][
][ln
RTFV
K
K
F
F
i
o
oi
io
][
][lnln
58log10
K
oi
io VVFF
RT
VVFF
F K
oi
io )(ln
Razones de flujos unidireccionales
Armstrong 2003 PNAS 100:6257-6262
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Hodgkin y Huxley 1955. The potasium permeability of a giant nerve fibre. J. Physiol ( London) 128:61-68.
Los iones difunden en fila india a lo largo del canal.
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-+
-+
El ion + es atraído por la carga negativa.
El ion + es atrapado por la carga negativa.
La ocupación múltiple del poro permite un tránsito rápido de los iones
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-+ +
-+ +
El ion + se acerca a un par con carga neta cero
El ion + se aleja de un par con carga neta cero.
La ocupación múltiple del poro permite un tránsito rápido de los iones
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Morais-Cabral et al 2001 Nature 413:37-42
Ion K+Molécula de H2O
Optimización energética de la rapidez de por el filtro de selectividad del potasio.
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Potenciales de flujo
Corrientes de flujo
Un canal en que el agua y los iones se mueven en fila india
Pongo igual concentración de potasio a ambos lados del canal
Pongo igual potencial eléctrico a ambos lados del canal
Que flujo neto de K se espera?
Agrego un no electrolito a un lado del la membrana con el canal
Que flujo neto de K se espera?
Esta es la corriente de flujo. A que potencial el flujo se hace cero?
Este es el potencial de flujo.
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Corriente de K a través de un canal de potasio en presencia de un gradiente osmótico.
Las concentraciones de K a ambos lados de la membrana son iguales por lo que el potencial de Nernst para el K es 0 mV.
El gradiente osmótico lleva el potencial de inversión de la corriente a 4 mV.
El flujo de agua por los canales arrastra potasio.
Hay entre 2 y 4 moléculas de agua en el canal. Su longitud es de 6 a 12 angstrom.
Alcayaga et al 1989 Biophysical J. 55:367-371
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Doyle et al 1998 Science 280:69-77
12Å
6 a 12 AAlcayaga et al 1989
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Morais-Cabral et al 2001 Nature 413:37-42
2-4 aguas/canalAlcayaga et al 1989
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Los canales responsables del potencial de acción en el axón gigante de jibia tienen dos atributos importantes.
•Selectividad. Conducen Na+ o K+ en forma excluyente.
•Excitabilidad. Capacidad de cambiar su capacidad de conducir iones en función del voltaje.
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Movimiento en un medio viscosoVelocidad = movilidad · fuerza (m s-1)
La “fuerza” que impulsa el movimiento de los iones es su gradiante de potencial químico.
dx
dfuerza
J mol-1m-1
movilidad = velocidad por unidad de fuerza ( ms-1 N-1mol)
N mol-1
velocidad = movilidad · fuerza (m s-1)
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Esta caja es un elemento de volumen de un sistema más grande. En la caja hay moléculas que se están moviendo impulsadas por un gradiente de potencial químico. La velocidad de las moléculas es v ms-1
Todas las moléculas que están a una distancia vt atraviesan la pared de la izquierda en un tiempo t
v
vt
A
Todas las moléculas que estaban en la caja a tiempo t han atravesado la pared al tiempo t + t.
El número de moles del soluto presente en la caja es igual a su concentración c multiplicada por el volumen de la caja. c A v t.
c
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Todas las moléculas que están a una distancia vt atraviesan la pared de la izquierda en un tiempo t
v
vt
A
Todas las moléculas que estaban en la caja a tiempo t han atravesado la pared al tiempo t + t. c A v t
El número de moles presentes en la caja es igual a su concentración c multiplicada por el volumen de la caja. c A v t.
c
El número de moles que atraviesa cada unidad de área por unidad de tiempo se llama Flujo, J.
cvJ mol m-2s-1
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v
vt
A
Todas las moléculas que estaban en la caja a tiempo t han atravesado la pared al tiempo t + t. c A v t
El número de moles presentes en la caja es igual a su concentración c multiplicada por el volumen de la caja. c A v t.
c
El número de moles que atraviesa cada unidad de área por unidad de tiempo se llama Flujo, J.
cvJ mol m-2s-1
J = c • movilidad • fuerza
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J = c • movilidad • fuerza
Para estudiar la selectividad de los canales compararemos los flujos de los iones medidos al aplicar la misma fuerza a todos.
Los factores que gobiernan la selectividad son entonces la concentración y la movilidad.
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J = concentración • movilidad • fuerza
Movilidades relativas a la del K en el agua
H+ 4.76Li+ 0.53Na+ 0.68K+ 1.00Rb+ 1.06Cs+ 1.05
F- 0.75Cl- 1.04Br- 1.06I- 1.04
En un poro acuoso las diferencias de movilidades entre Na y K son pequeñas
Examinemos entonces las concentraciones
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Suponiendo que el flujo es pequeño, se puede usar el coeficiente de partición, , para expresar la concentración en el borde de la membrana en función de la concentración en el seno de la solución.
C (membrana) C (solución)
soluciónmembrana CC
¿Cuál es la concentración dentro de una membrana?
J = csol • • movilidad • fuerza
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RTe0
)ln(0memmemmem CRT
)ln(0solsolsol CRT
eqsol
memsolmem C
CRT
ln0 00
ln)( 000 RTsolmem
En el equilibrio ( J = 0 ) los potenciales químicos son iguales
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Ver artículo de Armstrong en: Hille Armstrong MacKinnon 1999 NatureMedicine 5:1105-1119
La posición de mínima energía para el ion es equidistante de los grupos C=O.La energía de interacción es igual para todos los iones
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Estados de referencia: 1 mol por litro de ion en fase gaseosaSolución 1 molal de iones en agua
RTe0
Gran diferencia de coeficiente de partición entre fase acuosa y gaseosa.
Robinson and Stokes “Electrolyte Solutions” Butterworths,London 1959.
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Gran diferencia de coeficiente de partición entre fase acuosa y una membrana que no interactúe con los iones.
Gran diferencia de coeficiente de partición entre fase acuosa y gaseosa.
J = csol • • movilidad • fuerzaPregunta: ¿Cual será la selectividad de una membrana que interactúa por igual con todos los iones?
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J = csol • • movilidad • fuerzaPregunta: ¿Cual será la selectividad de una membrana que interactúa por igual con todos los iones?
Muy bien: la selectividad será Cs > Rb > K > Na > Li
Agreguemos ahora un efecto de tamiz: discriminación por tamaño.
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Por la energía de hidratación: la selectividad es Cs > Rb > K > Na > Li
¿Cuál será el ion preferido si se excluye el Cs y el Rb por tamaño?.
¿Cuál será el ion preferido si se excluye el Cs, Rb y K por tamaño?.
El potasio
El sodio
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Los canales responsables del potencial de acción en el axón gigante de jibia tienen dos atributos importantes.
•Selectividad. Conducen Na o K en forma excluyente.
•Excitabilidad. Capacidad de cambiar capacidad de conducir iones en función del voltaje.
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Los canales tienen una compuerta en la entrada intracelular.
CH3
N
CH2
CH3
CH2
CH2 CH3CH2CH3
Tetra Etil AmonioTEA
El TEA bloquea los canales de K con una cinética muy rápida
CH3
N
CH2
CH3
(CH2)8
CH2 CH3CH2CH3
C9
C9 también bloquea pero su cinética es lenta.
+ +
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Armstrong 1971 JGP 58:413
Control
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Armstrong 1971 JGP 58:413
+C9
![Page 56: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/56.jpg)
Armstrong 1971 JGP 58:413
++C9
![Page 57: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/57.jpg)
Armstrong 1971 JGP 58:413
+++C9
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Armstrong 1971 JGP 58:413
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También en: Hille Armstrong MacKinnon 1999 NatureMedicine 5:1105-1119
Armstrong 1971 JGP 59:413
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En: Hille Armstrong MacKinnon 1999 NatureMedicine 5:1105-1119
Armstrong 1971 JGP 59:413
![Page 61: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/61.jpg)
En: Hille Armstrong MacKinnon 1999 NatureMedicine 5:1105-1119
Armstrong 1971 JGP 59:413
![Page 62: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/62.jpg)
Conclusiones 1971:
El canal de K es un poro
La compuerta está por dentro
Hay un vestíbulo interno amplio capaz de alojar C9
Las paredes del vestíbulo son hidrófobas.
Salto en el tiempo al siglo XXI
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Doyle et al 1998 Science 280:69-77
El cristal de KcsA corresponde a un canal cerrado
Bicapa
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KcsAMthK
Jiang et al 2002 Nature 417:515-522
El cristal de MthK corresponde a un canal abierto
Methanobacterium thermoautotrophicum
![Page 65: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/65.jpg)
Mecanismo de activación por ligandos intracelulares
MthK, canal de potasio activado por calcio intracelular de Methanobacterium thermoautotrophicum.
Jiang et al 2002 Nature 417:523-526
417515a-s2.mov 417523a-s2.mov
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KcsA MthK
Apertura 4 Ǻ 26Ǻ
La compuerta cerrada deja una abertura de 4 Ǻ de diámetro. Pero el K+ tiene sólo 2 Ǻ de diámetro. ¿Por qué el K+ no puede pasar?
![Page 67: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/67.jpg)
Max Born
Born: 11 Dec 1882 in Breslau, Germany (now Wroclaw, Poland)
Died: 5 Jan 1970 in Göttingen, Germany
1-
0
20 Jmol
8
)(
rπε
zeNU auto
mnewtoncoulomb 108542.8 -2-12120
-123 mol 10022.6 N
coulomb 106.1 190
e
Energía necesaria para cargar un ion en medios de diferente constante dieléctrica. Self energy. Energía de Born
Ver LaEnergiadeBorn.ppt en einstein.ciencias.uchile.cl
![Page 68: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/68.jpg)
Parsegian V. A 1969. ParsegianNature_221_844_1969
Ion en una membrana ion en un poro ion en un carrier
![Page 69: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/69.jpg)
Parsegian V. A 1969. ParsegianNature_221_844_1969
![Page 70: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/70.jpg)
Doyle et al 1998 Science 280:69-77
Dibujo esquemático del canal KcsA mostrando tres iones potasio en su interior
![Page 71: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/71.jpg)
Energía libre de transferencia del ion K+ desde el agua al centro de una bicapa
de 40 Ǻ de espesor y = 2
RTGe /286.0/38 103 e
kcal/mol 38G
Benoît Roux an Roderick Mackinnon 1999 Science 285:100-102
![Page 72: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/72.jpg)
Energía libre de transferencia del ion K+ desde el agua al centro de la proteína
puesta en la bicapa = 2
RTGe /286.0/38 103 e
kcal/mol 38G
Benoît Roux an Roderick Mackinnon 1999 Science 285:100-102
![Page 73: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/73.jpg)
Energía libre de transferencia del ion K+ desde el agua al centro de la cavidad
kcal/mol 3.6G
RTGe /56.0/3.6 103 e
kcal/mol 38G
Benoît Roux an Roderick Mackinnon 1999 Science 285:100-102
![Page 74: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/74.jpg)
Energía libre de transferencia del ion K+ desde el agua al centro de la cavidad, estando dos iones en el filtro de selectividad
RTGe /126.0/3.16 105.1 e
kcal/mol 3.6Gkcal/mol 38G
kcal/mol 3.16G
Benoît Roux an Roderick Mackinnon 1999 Science 285:100-102
![Page 75: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/75.jpg)
Energía libre de transferencia del ion K+ desde el agua al centro de la cavidad, estando dos iones en el filtro de selectividad
RTGe /126.0/3.16 105.1 e
kcal/mol 3.6Gkcal/mol 38G
kcal/mol 3.16G
Benoît Roux an Roderick Mackinnon 1999 Science 285:100-102
![Page 76: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/76.jpg)
RTGe /66.0/5.8 105.1 e
kcal/mol 3.6Gkcal/mol 38G
kcal/mol 3.16Gkcal/mol 5.8G
Energía libre de transferencia del ion K+ desde el agua al centro de la cavidad, estando dos iones en el filtro de selectividad, considerando el efecto de las cargas de la proteína
Benoît Roux an Roderick Mackinnon 1999 Science 285:100-102
![Page 77: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/77.jpg)
RTGe /36.0/5.4 102e
kcal/mol 3.6Gkcal/mol 38G
kcal/mol 3.16Gkcal/mol 5.8Gkcal/mol 5.4G
Energía libre de transferencia del ion K+ desde el agua al centro de la cavidad, estando dos iones en el filtro de selectividad, considerando sólo el efecto de las hélices del poro.
Benoît Roux an Roderick Mackinnon 1999 Science 285:100-102
![Page 78: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/78.jpg)
kcal/mol 7.6G
Energía libre de transferencia del ion K+ desde el agua al canal de entrada cerrado
Parsegian V. A 1969. ParsegianNature_221_844_1969
RTGe /56.0/7.6 105.1 e
![Page 79: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/79.jpg)
Energía libre de transferencia del ion K+ desde el agua al canal de entrada abierto
kcal/mol 0Gkcal/mol 7.6G
RTGe /16.0/0 e
![Page 80: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/80.jpg)
Identificación de las cargas del sensor de potencial
![Page 81: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/81.jpg)
Un Condensador eléctrico consiste en dos placas conductoras separadas por un aislante.
Al cargar un condensador con una carga Q, se genera una diferencia de potencial eléctrico, V:
CVQ Un condensador de una capacidad de 1 Farad adquiere una diferencia de potencial de 1 Volt al cargarlo con 1 Coulomb.
La intensidad de una corriente eléctrica, I, se mide en Amperes.Una corriente de 1 Amper transporta 1 Coulomb por segundo. Un condensador de una capacidad de 1 Farad se demora un segundo al cargarlo con una corriente de 1 Amper.
CVtI
![Page 82: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/82.jpg)
CVtI
t = 0s, V = 0 Volts
1A 1A
t = 1s, V = 1 Volt
Vacío entre las placas
![Page 83: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/83.jpg)
CVtI
t = 0s, V = 0 Volts
1A 1A
t = 10s, V = 1 Volt
Un diléctrico entre las placas
![Page 84: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/84.jpg)
CVtI
t = 0s, V = 0 Volts
+
+
+
+ -
--
-
1A 1A
t = 10s, V = 1 Volt
+
+
+
+
-
-
-
-
Un diléctrico entre las placas
![Page 85: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/85.jpg)
V = 1.0 VoltV = 1.0 Volt
+
+
+
+
+
+
+
+
-
--
-
-
-
-
-
Las cargas del dieléctrico se mueven en el campo eléctrico produciendo una corriente de desplazamiento:
Las corriente de desplazamiento representa movimiento de cargas positivas desde el lado positivo hacia el lado negativo. Esta corriente transportó 9 Coulombs en 10 segundos. Representa la polarización del dieléctrico.
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![Page 87: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/87.jpg)
-40 mV
-100 mV
+40 mV
Animación sensores.exe
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Oocitos sin Shaker
Oocitos con Shaker
Aggarwal y MacKinnon Neuron 16:1169-1177
Canal de potasio Shaker de Drosophila
![Page 89: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/89.jpg)
Oocito de Xenopus expresado el canal Shaker de Drosophyla bloquados por AGTX
Sin ShakerCon Shaker
Aggarwal y MacKinnon Neuron 16:1169-1177
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Oocito de Xenopus expresado el canal Shaker de Drosophyla bloquados por AGTX
Sin ShakerCon Shaker
CerradosAbiertos
TransiciónCarga desplazada
Q = 40 nC, pero ¿de cuántos canales?Aggarwal y MacKinnon Neuron 16:1169-1177
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El número de canales se determina con AGTX radiactiva de actividad específica conocida.
Resulta 13.6 cargas por canalAggarwal y MacKinnon Neuron 16:1169-1177
Nú
me
ro d
e c
arg
as e
lem
en
tale
s
Número de canales
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>shaker 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1234567890 1 MAAVAGLYGL GEDRQHRKKQ QQQQQHQKEQ LEQKEEQKKI AERKLQLREQ 50 51 QLQRNSLDGY GSLPKLSSQD EEGGAGHGFG GGPQHFEPIP HDHDFCERVV 100101 INVSGLRFET QLRTLNQFPD TLLGDPARRL RYFDPLRNEY FFDRSRPSFD 150151 AILYYYQSGG RLRRPVNVPL DVFSEEIKFY ELGDQAINKF REDEGFIKEE 200201 ERPLPDNEKQ RKVWLLFEYP ESSQAARVVA IISVFVILLS IVIFCLETLP 250251 EFKHYKVFNT TTNGTKIEED EVPDITDPFF LIETLCIIWF TFELTVRFLA 300301 CPNKLNFCRD VMNVIDIIAI IPYFITLATV VAEEEDTLNL PKAPVSPQDK 350351 SSNQAMSLAI LRVIRLVRVF RIFKLSRHSK GLQILGRTLK ASMRELGLLI 400401 FFLFIGVVLF SSAVYFAEAG SENSFFKSIP DAFWWAVVTM TTVGYGDMTP 450451 VGVWGKIVGS LCAIAGVLTI ALPVPVIVSN FNYFYHRETD QEEMQSQNFN 500501 HVTSCPYLPG TLGQHMKKSS LSESSSDMMD LDDGVESTPG LTETHPGRSA 550551 VAPFLGAQQQ QQQQPVASSL SMSIDKQLQH PLQHVTQTQL YQQQQQQQQQ 600601 QQNGFKQQQQ QTQQQLQQQQ SHTINASAAA ATSGSGSSGL TMRHNNALAV 650651 SIETDV
Estructura primaria del producto de expresión de un gen que le falta al mutante Shaker de Drosophila.
Hay 7 cargas positivas en el posible sensor de potencial
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13.6 -9.7 = 3.9 cargas para R1
Aggarwal y MacKinnon Neuron 16:1169-1177
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13.6 -9.7 = 3.9 cargas para R113.6 -8.8 = 4.8 cargas para R2 suman 8.1
Aggarwal y MacKinnon Neuron 16:1169-1177
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13.6 -9.7 = 3.9 cargas para R113.6 -8.8 = 4.8 cargas para R2 suman 8.1
13.6 -10.0 = 3.6 cargas para R3 suman 11.7
Aggarwal y MacKinnon Neuron 16:1169-1177
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13.6 -9.7 = 3.9 cargas para R113.6 -8.8 = 4.8 cargas para R2 suman 8.1
13.6 -10.0 = 3.6 cargas para R3 suman 11.7
13.6 -9.8 = 3.8 cargas para R14 suman 14.5
Aggarwal y MacKinnon Neuron 16:1169-1177
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13.6 -9.7 = 3.9 cargas para R113.6 -8.8 = 4.8 cargas para R2 suman 8.1
13.6 -10.0 = 3.6 cargas para R3 suman 11.7
13.6 -9.8 = 3.8 cargas para R4 suman 14.5
13.6 -11.5 = 2.1 cargas para K5 suman 15.6
Aggarwal y MacKinnon Neuron 16:1169-1177
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13.6 -9.7 = 3.9 cargas para R1
13.6 -8.8 = 4.8 cargas para R2 suman 8.1
13.6 -10.0 = 3.6 cargas para R3 suman 11.7
13.6 -9.8 = 3.8 cargas para R4 suman 14.5
13.6 -11.5 = 2.1 cargas para K5 suman 15.6
13.6 -13.5 = 0.1 cargas para K7 suman 15.6
Aggarwal y MacKinnon Neuron 16:1169-1177
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Experimentos de reactivos de grupos SH.MTSET CH3-S02-S-CH2-CH2-N+-(CH3)3
Hacer una mutación puntual, por ejemplo R326C
Comparar la rapidez de la reacción de cisteína-MTSET para el canal abierto y el canal cerrado, poniendo MTSET ya sea por el interior o por el exterior.
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R1 R362R2 R365R3 R368R4 R371K5 K374
Esquema resumen de la accesibilidad de los residuos del segmento S4
Larsson et al 1996 Neuron 16:387-397
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Modelo 1966 del funcionamiento del sensor de potencial eléctrico
Jiang et al 2003 Nature 423:33-41
El desplazamiento vertical es de 16 Ångström
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Estructura cristalina del canal de potasio activado por potencial eléctrico KvaPde Aeropyrum pernix.Vista desde el lado intracelular
Jiang et al 2003 Nature 423:33-41
Fragmento de anticuerpo
S4
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Jiang et al 2003 Nature 423:33-41
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Jiang et al 2003 Nature 423:33-41
La estructura cristalina difiere de la esperada.
Los segmentos de hélices alfa no están perpendiculares al plano de la membrana.
El segmento S4 está fuera de la membrana.
El segmento S3 está dividido en dos segmentos S3a y S3b.
El segmento S6 está quebrado: el canal está abierto
Esta estructura está distorsionada por la inmovilización del S3b-S4 por el Fab.
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Jiang et al 2003 Nature 423:33-41
Estructura cristalina del sensor de potencial aislado de KvaP
Cristal completo
Composición de los dos cristales
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Jiang et al 2003 Nature 423:33-41
![Page 107: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/107.jpg)
Para saber como sigue la historia del modelo de sensor de potencial en canales de eucariontes vea:
Long et al Science 2005 309:897-903Long et al Science 2005 309:903-908
Long et al Science 2007 450:367-383
![Page 108: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/108.jpg)
Long et al Science 2005 309:897-903
Canal de potasio de mamífero Kv1.2
![Page 109: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/109.jpg)
Long et al Science 2007 450:367-383
Quimera del Canal Kv1.2 con el sensor de potencial de Kv2.1 cristalizado con fosfolípidos y detergente
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Long et al Science 2007 450:367-383
![Page 111: Estructura y propiedades de los canales de iones Jueves 16 de abril: 14.30-17.30 Cursos_2009 CursoTroncal Clase 1 er](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062217/5665b4cd1a28abb57c93d178/html5/thumbnails/111.jpg)