ESTREPTOCOCO ESTREPTOCOCO NEUMONIAENEUMONIAE

EXAMEN MICROSCOPICOMUESTRA

“IDEAL” “NO IDEAL”

ASPIRADOSTRANSTRAQUEALESLIQUIDO SINOVIALSANGRE

ESPUTOPUSSECRECIONESEXUDADOS PURULENTOS

AISLAMIENTO

THIOGLICOLATO SANGRE

( mas 5 pg/ml gentamicina)

Mejora significativamente

La recuperación del neurococo de muestra de esputo ( aunque algunos investigadores no hallaron mas células vivientes por este método

35 -37º c x 24 – 48 h 35 – 37º c x 24 – 48 h

CO2

GRAM

De las colonias, pequeñas redondas umbilicadasCon una zona de alfa hemólisis

PRUEBAS DIFERENCIALES

Solubilidad en bilis Reacción de Neufeld Susceptibilidad A la optoquina

Otros:

Fermentación De inulina Tipificación serológica

Antibiograma

En A sangre 35 – 37 c x 24 h

CO2

SOLUBILIDAD EN BILISSOLUBILIDAD EN BILIS

Los agentes tensioactivos como las sales biliares ( desoxicolato Na y taurocolato de Los agentes tensioactivos como las sales biliares ( desoxicolato Na y taurocolato de Na ) lisa los neumococos a los pocos minutos de ser añadidos a los cultivos puros Na ) lisa los neumococos a los pocos minutos de ser añadidos a los cultivos puros de 24 horas. Diferenciándolos de los otros estreptococos alfa hemolíticos que no se de 24 horas. Diferenciándolos de los otros estreptococos alfa hemolíticos que no se lisan.lisan.

PRUEBA EN CALDOPRUEBA EN CALDO

Transferir aproximadamenteTransferir aproximadamente 0.5 ml de un cultivo puro de 24 h. en caldo a 2 tubos 0.5 ml de un cultivo puro de 24 h. en caldo a 2 tubos limpios, alternativamente se puede preparar una suspensión salina de gérmenes limpios, alternativamente se puede preparar una suspensión salina de gérmenes tomados de un desarrollo de 24 h. en agar sangre o caldo nutritivo.tomados de un desarrollo de 24 h. en agar sangre o caldo nutritivo.

Agregar 1 gota de indicador rojo de fenol al cultivo de caldo.Agregar 1 gota de indicador rojo de fenol al cultivo de caldo.

Añadir NaOH 0.1 N para ajustar el pH a 7 si es necesario. ( El desoxicolato de sodio Añadir NaOH 0.1 N para ajustar el pH a 7 si es necesario. ( El desoxicolato de sodio puede precipitar a pH 6.5 o dando una reacción falso negativa.puede precipitar a pH 6.5 o dando una reacción falso negativa.

Añadir 0.5 ml de desoxicolato Na al 10% a uno de los tubos “desconocido”Añadir 0.5 ml de desoxicolato Na al 10% a uno de los tubos “desconocido”

Añadir 0.5 ml de sol. Salina normal estéril al segundo tubo “control”Añadir 0.5 ml de sol. Salina normal estéril al segundo tubo “control”

Agitar suavemente ambos tubos y colocarlos en incubadora o BM 35º por 10`Agitar suavemente ambos tubos y colocarlos en incubadora o BM 35º por 10`

Resultados:Resultados:

Reacción positiva: Aclaramiento visible del cultivo turbio ( si no aclara volver a Reacción positiva: Aclaramiento visible del cultivo turbio ( si no aclara volver a incubar y examinar a intervalo de 1 hora.)incubar y examinar a intervalo de 1 hora.)

Reacción negativa: El tubo con sol. Salina permanece turbio.Reacción negativa: El tubo con sol. Salina permanece turbio.

PRUEBA DE SOLUBILIDAD EN BILIS EN TUBO. LOS DOS TUBOS CONTIENEN UNA SUSPENSION DE NEUMOCOCO, UNAS POCAS GOTAS DE DESOXICOLATO AL 10 % SE AGREGARON AL TUBO DE LA DERECHA. OBSERVAMOS ACLARAMIENTO DE SUSPENSION DE LA DERECHA EN COMPARACION CON EL CONTROL NEGATIVO DE LA IZQUIERDA .

PRUEBA EN PLACA AGARPRUEBA EN PLACA AGAR

Sobre una colonia bien aislada de del germen en placa agar sangre colocar una gota Sobre una colonia bien aislada de del germen en placa agar sangre colocar una gota de ( una asada de 4 mm) de desoxicolato de Na al 10 % ( si se usan demasiado de ( una asada de 4 mm) de desoxicolato de Na al 10 % ( si se usan demasiado reactivo las colonias pueden ser arrastradas dando la apariencia de lisis)reactivo las colonias pueden ser arrastradas dando la apariencia de lisis)

Si la colonia corresponde a neumococo esta desaparecerá en 5`, si no incubar la Si la colonia corresponde a neumococo esta desaparecerá en 5`, si no incubar la

placa sin invertirla a 30 o x 30placa sin invertirla a 30 o x 30 `. `.

REACCION DE NEUFELD ( QUELLUNG )REACCION DE NEUFELD ( QUELLUNG )Permite principalmente un dx. rápido de enfermedad por neumococo. Determinar el Permite principalmente un dx. rápido de enfermedad por neumococo. Determinar el tipo capsular ( tipificación serologica)tipo capsular ( tipificación serologica)

Colocar una asada de esputo emulsionada. L.C.R o caldo de cultivo joven en ambos Colocar una asada de esputo emulsionada. L.C.R o caldo de cultivo joven en ambos extremos de un portaobjetos. Dejar secar.extremos de un portaobjetos. Dejar secar.

Añadir una gota de suero monovalente o polivalente especifico en un extremo y otra Añadir una gota de suero monovalente o polivalente especifico en un extremo y otra gota de sol. Salina como control en otro extremo del portaobjeto.gota de sol. Salina como control en otro extremo del portaobjeto.

Añadir una gota de azul de metileno 1% sol acuosa a cada extremo.Añadir una gota de azul de metileno 1% sol acuosa a cada extremo.

Colocar cubreobjeto y observar con aceite de inmersión después de 10`- 15`.Colocar cubreobjeto y observar con aceite de inmersión después de 10`- 15`.

Una reacción positiva será cuando los gérmenes presenten un halo refringente Una reacción positiva será cuando los gérmenes presenten un halo refringente rodeándolos, de color azul. Comparar con el control de sol. Salina donde no debe rodeándolos, de color azul. Comparar con el control de sol. Salina donde no debe observarse hinchamiento de las capsulas.observarse hinchamiento de las capsulas.

Si es negativo examinar después de 10 – 15 minutos.Si es negativo examinar después de 10 – 15 minutos.

AGAR SANGRE DONDE SE HA REALIZADO LA PRUEBA DE SOLUBILIDAD EN BILIS UNA GOTA DE DESOXICOLATO AL 10% FUE COLOCADO EN LAS COLONIAS AL CENTRO. OBSERVESE EL ACLARAMIENTO DE LAS COLONIAS QUE INDICA SU NATURALEZA SOLUBLE.

FERMENTACION DE LA INULINAFERMENTACION DE LA INULINAInocular con cultivo puro un medio de fermentaciòn conteniendo Inocular con cultivo puro un medio de fermentaciòn conteniendo inulina al 0.5 % e inocular a 35º C x 24 horas. Si corresponde a inulina al 0.5 % e inocular a 35º C x 24 horas. Si corresponde a neumococo fermentara la inulina.neumococo fermentara la inulina.

TIPIFICACION SEROLOGICA.TIPIFICACION SEROLOGICA.

La serologia se basa en el polisacárido C capsular y se ha La serologia se basa en el polisacárido C capsular y se ha identificado 33 tipos capsulares.identificado 33 tipos capsulares.

Se realiza en laboratorios especializados de investigación con fines Se realiza en laboratorios especializados de investigación con fines epidemiológicos. La técnica es la misma que la reacción Neufeld, epidemiológicos. La técnica es la misma que la reacción Neufeld, es decir se enfrenta al germen con un suero capsular especifico. es decir se enfrenta al germen con un suero capsular especifico.

SUCEPTIBILIDAD A LA OPTOQUINASUCEPTIBILIDAD A LA OPTOQUINALa optoquina tiene actividad detergente, los neumococos expuestos La optoquina tiene actividad detergente, los neumococos expuestos a la optoquina difundida en medio que rodea al disco son lisados a la optoquina difundida en medio que rodea al disco son lisados debido a la variación de la tensión superficial, produciéndose una debido a la variación de la tensión superficial, produciéndose una inhibición del desarrollo. inhibición del desarrollo.

Obtener un cultivo para el germen en estudio y sembrar en A. Obtener un cultivo para el germen en estudio y sembrar en A. Sangre.Sangre.

Colocar un disco de optoquina ( 5 ug/ml) o disco de papel Colocar un disco de optoquina ( 5 ug/ml) o disco de papel impregnado en la sustancia diluida 1/4000 en el centro del área impregnado en la sustancia diluida 1/4000 en el centro del área estriada.estriada.

Incubar a 35º x 24 h en campana de CO2.Incubar a 35º x 24 h en campana de CO2.

Reacción Positiva: El neumococo forma una característica zona de Reacción Positiva: El neumococo forma una característica zona de inhibición de 15mm o mas. Otros estreptococos alfa hemolítico inhibición de 15mm o mas. Otros estreptococos alfa hemolítico producen zonas de menos de 10 mm, lo cual es una reacción producen zonas de menos de 10 mm, lo cual es una reacción dudosa, realizar otras pruebas solubilidad en bilis, quellug, etc.dudosa, realizar otras pruebas solubilidad en bilis, quellug, etc.

Reacción Negativa: Sin zona de inhibiciòn.Reacción Negativa: Sin zona de inhibiciòn.

PLACA DE AGAR SANGRE QUE MUESTRA COLONIAS DE 24 HORAS DE S. PNEUMONIAE CON LA CARACTERISTICA DE UNA AMPLIA ZONA DE INHIBICIÒN DEL CRECIMIENTO ALREDEDOR DEL DISCO DE OPTOQUINA

PLACA DE AGAR SANGRE COMPARANDO EL CRECIMIENTO DE S. VIRIDANS (DERECHA) CON S.PNEUMONIAE (IZQUIERDA). OBSERVECE LA RESISTENCIA DEL GRUPO VIRIDANS AL DISCO DE OPTOQUINA (DERECHA) EN CONTRASTE CON LA AMPLIA ZONA DE INHIBICION DEL S. PNEUMINIAE.

MUCHAS GRACIAS