Érika carvalho silva disciplina: termogênese nos seres vivos professora: ana maria landeira estudo...
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Érika Carvalho Silva
Disciplina: Termogênese nos seres vivosProfessora: Ana Maria Landeira
Estudo do papel da proteína CIDEA
no controle do estresse oxidativo
celular
Família Cide
(Liang et al., 2003)
(Cory, 1998)
Cidea e Cideb como indutoras de apoptose
(Inohara et al., 1998)
Cide3 como indutora de apoptose
(Liang et al., 2003)
293T controle 293T CIDEB 293T CIDE3
Expressão das proteínas Cide em humanos
(Inohara et al., 1998)
(Liang et al., 2003)
Camundongos knockout
CIDEA e UCP1
AMPK e suas vias de sinalização
AMPK e Cidea
Modelo proposto
MOM
MIMCadeia
Transportadora de Elétrons
F0
F1ADP
ATP
H+ H+ H+
UCP
H+H+
H+
Knockout
MOM
MIMCadeia
Transportadora de Elétrons
F0
F1ADP
ATP
H+ H+ H+
UCP
H+H+
H+
MOM
MIMCadeia
Transportadora de Elétrons
F0
F1ADP
ATP
H+ H+ H+
UCP
H+H+
H+
Knockout
Superexpressão
MOM
MIMCadeia
Transportadora de Elétrons
F0
F1ADP
ATP
H+ H+ H+
UCP
H+H+
H+
MOM
MIMCadeia
Transportadora de Elétrons
F0
F1ADP
ATP
H+ H+ H+
UCP
H+H+
H+
X
Superexpressão
MOM
MIMCadeia
Transportadora de Elétrons
F0
F1ADP
ATP
H+ H+ H+
UCP
H+H+
H+
X
H+
H+ H+ H+ H+ H+H+H+
Superexpressão
MOM
MIMCadeia
Transportadora de Elétrons
F0
F1ADP
ATP
H+ H+ H+
UCP
H+H+
H+
X
H+
H+ H+ H+ H+ H+H+H+
ROS
Superexpressão
MOM
MIMCadeia
Transportadora de Elétrons
F0
F1ADP
ATP
H+ H+ H+
UCP
H+H+
H+
X
H+
H+ H+ H+ H+ H+H+H+
ROS
Superexpressão
Morte celular!!!
Objetivo
Caracterizar o papel da proteína Cidea no
controle do estresse oxidativo
1) Estabelecimento do modelo
Linhagem Jurkat de célula T e células primárias
• Western blot para Cidea e UCP2
2) Colocalização e inibição de UCP2 por Cidea
• Microscopia confocal
• Imunoprecipitação de proteínas • FACS para DiOC6
3) Efeito do estresse oxidativo: tratamento com H2O2
• Célula Cidea-KO é mais resistente ao tratamento com peróxido de hidrogênio?
• Célula UCP2-KO produz mais espécies reativas de oxigênio?
• Após o tratamento com peróxido de hidrogênio, ocorre diminuição da interação entre
Cidea e UCP2?
• Doses celulares letais de peróxido de hidrogênio associado a tratamento com FCCP
em Cidea-KO inibe essa morte?
AMPK na proteção celular do estresse oxidativo
AMPK na proteção celular do estresse oxidativo
4) Papel de Cidea na regulação de AMPK e outras vias metabólicas• Ocorre fosforilação de AMPK após tratamento com peróxido?
• Cidea é capaz de ubiquitinar AMPK e levá-la para a degradação?
• Não degradação de AMPK necessária para sobrevivência após tratamento com
peróxido?
• O que ocorre com enzimas da via glicolítica?
5) Cidea como sensor redox?
• Modelagem molecular e localização das cisteínas.
• Mutagênese sítio-dirigida das cisteínas para avaliar capacidade de responder ao
estresse oxidativo.
Aceito para The Journal of Biologial Chemistry
Outra proposta!
Será um inibidor das proteínas CIDE um
futuro medicamento anti-obesidade???