EL LISOZIMA EN EL TRACTO DIGESTIVO DEL RECIEN NACIDOY LACTANTE

Prof. H, VACCARO, Dres. J. CABEZAS y D. COPAJACatedra de Ba-cteriologia e Inmunologia de U Univ^rsidad de Chile.

CONCERTOS GENERATES SOBRE EL LISOZIMA

Entre los factores inespecificos 'de defensa mas amplia-. mente distribuidos, merece consideracion especial el principiomhibidor y litico que fue descrito por primera vez por Ale-xander Fleming.

Este autor, partiendo de las investigaciones de Laschts-chenko (1909) y de Rettger y Sperry (19-12), logro, conti-nuandolas, verificaciones reveladoras, las que publico, en1922, en un trabajo acerca del poder bactericida de la clarade huevo. (24)

Un anc mas tarde amplia sus estudios en colaboracioncon Allison (25) , llegando Ic^s dos autores a identificar unprincipio bactericida de naturaleza- enzimatica, al cual deno-minnn "Lisozima", Demostraron que dicbo principio inhi-bidor y litico se hallaba presence en la casi tctalidad de loshumores y tejidos del organismo humano y animal. Del mis-"mo mode comprobaron su ,presencia en algunos tejidos vege-tales.

Este principio producia la inhibicion o la lisis de nurrre-rosas especies bacterianas, saprofitas y patogehas.

El Lisozima contenidc en la clara de huevo, fue el quesirvio a F'eming y Allison para estudiar su poder bacterici-da. Una dilucion de clara de huevo al 1 (/'( , mezc'iada, enpartes iguales, con una emulsion microbiana concentrada deMk'rococcu? lyfodeikticus, y colocada a una temperatura cer-cana a los 50 grades, prcdujo la lisis total de la emulsion bac-terica antes de medio minuto, como se demostro ntediante los

598 RHVISTA CHILENA DE PEMATRIA

examenes directos y los cultivos .practicados, quc fueren, per-sistentemente negatives. La adkipn de uaa gota de clara dchuevo a un cultiyo de 24 horis de #quella misma especietiacterdana, sembrada en placa de Petri, produjo el aclara-'miento complete del medio en 1 minuto a la temperatura de37 grades.

El Micrccoccus lysodeikticus demostro ser tan altamentesensible, que diluciones de clara de huevo del 1 por cincuentamillcnes. produjeron su lisis total despues de 24 horas a latemperatura de 37 grades.

Estos investigadores demostraron la presenda de esteprinciple litico, en la casi totalidad de las secreciones y ex-creciones del organismo humane, come ser: lagrimas, mucusnasal, saliva, liquidq pleura'l, liquido ascitico y de hidrocele,semen, suero sanguineo, secreckmes viaginales, lequios, etc.Asi mismc, lo contenian algunes productos patologices: pus,orina albuminurica o purulenta,'liquidos de quistes, etc.

Tambien los tejidos humanos demostraron contenerlo yentre estos se distinguieron per un alto contenido lisozimico,la fibrina y una muestra de cartilage articular de la rotu]_a.

El tejido cerebral lo contenia en proporciones inferioresa las meningeas.

Los huevojs de distintas especies de peces y sobre todoles huevos de spile, contendrian en alfa proportion el prin-ciple litico de Fleming.

Fleming y Allison hicieron un estudio comparative delLisozima contenido en la clara de huevo de distintas especiesde aves: gallinas, patas, tordos y nevatillas y compruebauque la clara de huevo de gallina es la que comtiene la mas altaconcentracion lisozimica, siguiendo en impcrtancia, la clar:de huevo de pata.

Norman J. Miller y Francis Me Donald (26) en 1933,investigan el Lisozima en las leches de: mujer, mona, perra,gata, ratona y Hama, 'coniprobando su presencia en todascllas y encontrando una concentracion casi identica.

La leche de vaca, segiin J. y M. Bordet (27), careceriade este principle; Blatt y Kessler, en 1937, llegan a la mismaconclusion.

Prickett y colaboradores, en 1933, demuestran, por elcontrario, que la leche de vaca contiene Lisozima.

Nuestres trabajos concordantes con lo verificado per Ro-senthal y Lieberman (28) en 1931, nos han demostrado ppr-sistentemente It ausencia de Lisozima en la leche de vaca.

BL LISGZIMA EN EL TRACTO DIGESTIVO 599

Las leches de: coneja, ca-bra, oveja, cuyes, contendrianmuy escasa cantidad dc este principle, llegando en determi-nadas ocasicnes a carecer totalmente de el.

No centendrian Lisozirna, segiin Fleming y AQlison, elliquido cefalo raquideo, el sudor, la orina y deposicipnesnormales.

Segun Goevaerts, el liquido amniotico carece de Liso-zima.

Bordet, en 1928, demostro que el sudor humano es ca-paz de producir 'la lisis de las bacterias senstbles al Lisoiima.

Nuestros trabajos en curso, coinciden con la opinionde Bordet. La sarcina test, especie micrcbiana altamente sen-sible al Lisozima, que nosotros hemos empleado en todosnuestros trabajos acerca del contenido lisozimico en Ics clis-cintos humores y secreciones, ha sido lizada con facilidad por'el sudor humano. Algun.as especies patogenas, tales come:Escherichia coli, Staphylococcus, Streptococcus viridans yhaemolyticus han sido, en mayor o menor- grado, inhibidasen su desarrollo.

Wolff (29), en 1927; Meyer y colaboradores (30) , en1936; Roberts (61), en 1937,- y Abraham (32) , en 1932,son Ics investigadores que en forma mas completa se han pre-acupado del problema de la naturaleza quimica del Liso-zima.

Abraham obtuvo este principio a partir de la clara dehuevo, en forma de un polvo bianco desecado en acetona yeter, con una actividad de alrededor de dos mil unidades pormiligramo y un pesp molecular de aproxirnadamente 18,000,que cont^nia N 16,4 %, S 3,2 %, calculado sobre una basede cenizas 'libres. (^btuvo un producto amorfo, y otfo cris-talizado, con semejante grado de actividad.

El anaflasis cuantitativo verificado de la substancia amor-fa, demostro qufe esta contenia los siguientes amino-acidos;Arginina 11,6 %,. Cistiina 7 •%, Lisina 5/8 %t Tirosina4,4 % e Histidina 2,6 %.

El Lisozima obtenido y purificado por Meyer y cob-boradores, en 1936, que se cqfnsidera como una de las pre/paraciones de mas alta pureza, es un cuerpo de naturakzabasica , soluble en medio acuoso, acidificado e insoluble en losdisolventes organicos puros en las medios alca'linos.

600 REVISTA CHILENA DE PEDIATRIA

Su analisis centesimal, demostro lo siguiente:C: 49,65 %-, N: 15,33 '% ; H: 6,44 %4 P: 0'.25' %;

S: 0,64 %; Cenizas: 3,3 f/e.Su peso molecular aproximado fue de 25,000. Las

reacciones de Biuret, acido glioxilico, fenol Greenberg y ni-troprusiato de scdio, fueron positivas. La reaccion de Moe-lisch fue siempre negativa. El acido tricloroatetico y el sul-fosaliciHco, no precipitaban sus diluciones, el acido tungsti-co lo hizo incompletamentei. El acido perclorico y las sales deo'ro y plata, junto con precipitarlo, mactivaban el Lisczima.

El Lisozima se demostro como muy estable al calor v alacido; asi el acido acetico al 2 /v a 100 grades C-, no afectoel poder litico de este principle, despues de 45 minutos decontacto. - ' -

En medio alcalinc, a la temperatura ambiente, se dismi-imia notablemente la actividad litica del Lisozima' antes delos 10 minutos. De acuerdo con la totalidad de Ics invesfi-gadores, consideramos que en un medio neutro, se evidencia eloptimo de la activrdad lisozimica.

En pH acido, la solucion lisozimica atraviesa ocn faci-lidad la bujia Berkefeld 5, mientras que a pH neutro lo bacecon £irma dificultad. Los filtros de porcelana, algodon ypapel retienen el Lisozima, mientras no ban sido saturados,despues de lo cual el elemenlo los atraviesa con facilidad. Nodia'liza. Se comporta como un coloide electro positive^.

Es absorbido por el carbon vegetal, caolin, celulosa,perc no PGT el bidroxido de aluminio' coloidal, bidroxido dehierro coloidal y fosfato tricalcico. Su tamano molecular seriainferior a 30 milimicrones. Es destruido por la luz ultra-violeta.

Respectc de su estabrlidad, las soluciones de Lisozima,conservan su actividad, ya< a la temperatura de la estufa o-del frigidaire, por un tiempo mas o mencs largo. El yodo yel cxido cuproso, lo inactivan, fenomenos que son parcial-rnente reversibles,

Lcs fermentos proteolitictxs digestives no disminuyen elpoder bacteriolitko del Lisozima contenido en la clara.dehuevo. Los drstintos ,antisepticcs se comportan. de inodovariable. Mientras que algunos, como el fenol ail 1 %, su-blimado oxicianuro de mercurio al L por mil y el m^ntol al1 por 10 mil, no modifican en absoluto el ,poder litico delLisozima, la tintura de yodo a concentraciones que no de-terminan la precipitacion de este producto, inbibei totalmfnte-su activida>d inhibidortlinca. Los compuestos . su'lfamidadoe.

EL LISOZIMA EN EL TRACTO DIGESTIVG 601

asociados al Lisozima, parecen reforzar su accion cuando lie-gan a contacto con especies microbianas sensibles.

MECANISMO DE ACCION D'BL LISOZIMA

Fleming y Allison consideraron el Lisozima como unadiastasa, sin llegar a demostrar Su'calidad enzimatka ni el^ubstrato sobre el cual ejerce su accion.

Hallauer ( 3 3 ) creyo que dicha accion se ejercia 'Sobre lafraccion mucoide de la membrana microbiana, ya que el fc-nomeno litico va asociado con un aumento del N no pro-teico, de P inorganico y de substancias reductoras de otigenproroplasmatica que ban sido puestas en libertad gracias a ladesintegracion de dicha membrana.

K. Meyer, J. W. Palmer y R. Thompson (30) apoyanla teoria fisico-quimica del mecanismo de accion del Lisozima,considerandold como capaz de prqducir el. descenso de latension superficial,' opinion que ha quedado totalmente des-virtuada gracias a multiples investigaciones en las cuales seha probado que las substancias que disminuyen la tensionsuperficial en forma manifiesta —como el alcohol capriHcoque la hace descender en un 60 % en relacion con la delagua destilada—, no se comportan en absoluto como agen-tes liticos. .

Wolff y Kiwasawa, en 1927,' comprobaron que el Li-sozima altamente purificado, disuelto en agua o en suero fi-siologico, no hacia descender la tension superficia'l,

K. Meyer y colaboradores, siguiendo los trabajos deFleming y Allison y especialmente los cle Hallauer, que con-sidtran la accion del Lisozima como un fenomeno diasta^icoque se verifica sobre .la fraccion rnucoide de la membrana mi-crobiana, lagraron Ipcalizar en determinados eslabones azu-carados el sitio en que la desintegracioh se ejercia.

Estos autores, colocando al Lisozima purificado frentea determinados substratos, no lograron comprobar de suparte la calidad.de proteasa, quin'aga, amilasa, lipasa ni fos-fatasa. .

L. A. Epstein ^ E. Chain' (34) , en. 1940, aceptan queel Lisozima actua como una diastasa capaz de hidrolizardeterminados poUsacaridos contenidos en el cuerpoi de las es-pecies microbianas sensibles, rxtlisacarido insoluble en el agua,responsable del mantenirniento de lai estructura nxorfologicade las bacterias.

802 , KEVKTA CHILENA DE PEDIATRIA

En los casos en que este polisacarido es el unico ele-inento mantenedor de dicha estructura, las especies microbia-nas sensibles al Lisozima, puestas a su contacto, son desin-tegradas hasCa su completa lisis. Pero, cuando estan pre-sences tambien otras estructuras, el Lisozima tendria sobre lasespecies sensibles solo un pcder bacteriostatico, o bien bacrc-ricida, ya.que dicbo polisacarido desempenaria, aparte de in-tervenir en la mantendon de la estructura morfologica, un rolde vital importanda para la bacteria.

Segun lo establecen Epstein y Chain, el pcjisacarido quelograron aislar de cuerpos secos de Micrococcus lysodeikricusy que demostro tener un alto peso molecular, puesto a con-tacto coji ed Lisozima purificado de la clara de huevo o deotras fueares que lo contienen, -perinitio ubicar a esta sub?-tancia-en el grupo de las carbohidrasas.

La hidrolisis obtenida en un pH entre 2 y 9, dariaorigen, entre ctras substancias, a una N-aminoexosa acetiladay una queto exosa, no cqnsiguiendose demcstrar la presendade otros hidratps de carbono. s

En resumenr los estudios realizados acerca del mecanis-mc de accion del Lisozima frente a las 'especies microbianassensibles, saprofitas y patogenas, a pesar de no haber resueltoel problema en forma definitiva. permiten, gracias a las re-cientes verificaciones de Meyer y colaboradores, considerar aesta 'substancia como una diastasa.

NUESTRAS INVESTIGACIONES

El presente trabajo se basa en el estudio dinico-experi-mental que publicaran Rosenthal y Lieberman en el ario1931 (28) -sobre el papel que desempena el Lisozima en eldesarrollo de la flora intestinal del recien nacido y lactanfe.

Ellos observaron que el tracto intestinal del recien naci-do, esteril en el momento del nacimiento, es invadidc, dcntrode un corto "periodo de tiempo, por los microorganismos delmedio ambiente. Esta flora- intestinal inicial desaparece altercero o cuarto dia en los lactantes alimentados en forma .na-tural y es reemplazada por una flora, en la cual predomina eiLactobacillus bifidus. En los ninos alimentadcis en formaartificial! no sncede lo mismo, desarroll'andose una flora mi-crobiana intestinal muy variada y sin predominio de ningu-ria especie determinada. , ;

Tratando de investigar la causa de la modificadon.que ex-perimenta la-flora microblana inicial en 'los ninos all-

EL LISOZIMA EN EL TRACTO DIGESTIVO 603

mentados en forma natural, Rosenthal y' Lieberman fijaronsu atencion en las deposiciones y trataron de buscar en ellasla existencia de algun factor capaz de destruir a los germenesinvasores. Para ello prepararon un extracto de deppsicionesy lo pusieron en contacto con una cepa de Sarcinas, germensaprofito del aire, que tiene los caracteres de coco grampositivo, se dispone en tetradas y cuyas colonias en agarplaca son muy tipicas y facilmente diferenciables. .

La tecnka empleada por estos investigadores en sus ex-periencias, fue la siguiente: "el extracto se prepare mez-clando deposicicnes de un lactante de una semana de edad,con cantidad suficiente de suero fi-siologico, basta formaruna pasta espesa. Esta se centrifugo a una gran velocidad,por espacio de 20 minutos, y se decanto el sedimento. Comoun representante de las bacterias deJi aire, seleccionamos unacepa de Sarcina, que habiamos aislado del aire por exposi-cion de placas de agar descubiertas. Se eligio este germe-fl,porque su aspecto tipico al microscopic permite reconocerlofacilmente. Se obtuvo una suspension sCarfdard de Sarcinas,,en 5 cc. de suero fisiologico; 0,5 cc. de esta suspension, con2 cc. de extracto de deposiciones, se tncubo a 45 grados. Une&tudio microscopico en fresco de gotas sucesivas de esta mez-cla,. tcmada5 a intervalos de media hora, revelo la destruc-cion com pi eta y lisis de'las Sarcinas en una a dos horas".

Estudiando los caracteres fisico-quimicc~s del principioKtico revelado en las deposiciones, estos autores compruebansu notable resistencia a los agentes fisicos y quimicos, de-mostfando que no es afectado per temperaturas de 569 y quees inactivado solo despues de una hora y media a 65t? o des1

pues de 3 minutos a 100V Su poder bacteriolitko no es al-terado por el eter hi cloroformo. La filtracion a traves depapel filtro, cambia el principio acttvo del extracto proba-blemente por absorcion.

Rosenthal y Lieberman, por todas estas fazones> iden-tifican el principio litico encontrado por ellos en las deposi-ciones, con el Lisozima.

A continuacion invesdgan la presencia de LisQzima enlas deposiciones de ninos alimentados en forma natural yartificial, para lo cual examinan un total de 81 muestras,conduyendo de sus investigaciones que el Lisozima se en-cuentra presente solo en las deposiciones de nincxs alimenta-dos al pecho, y no en los alimentados con formulas de Techede vaca, de lo que deducen que tal principio se encuentracontemdo en la leche humana y que atravtesa» el tracto intes-

6C4

tmal, apareciendo en las deposiciones, sin ser destruido porel jugo gastrico ni por las secreciones intestinales.

Basandonos en las experiencias de Rosenthal y Lieber-man, las que hemos modificado en ,parte y .ampliado, verifi-camos en la Catedra el presente trabajo de orden experi-mental.

MATERIAL Y TECN1CA USA-DOS EN NUESTRAS EXPERIENCIAS

Germen de prueba.

- Hcmos utilizado la mism.3 cepa de Sarcina test, cm pi* ad a en toda.s lasinvcstigacton€s efectuadas -zn la Caredra. sabre el Lisozima.

D;-cha Sarcina fue aislada del aire en 1930 por L, 'RosoiUhal, del Labo-ratorio del United Israel Zion Hospital. ' E!la ha sido utilizada ;por Paul S1.Pricket*, del Laboratorio de Mead. Johnson and Company, EvansvUI's, India-1

na, en . s t i s trabajos sobrc Lisozima. y fue el quien. nos envio dioha cepia par>3'nu-estras investigacioncs.

El tstudio de sus caracieristkas morfo-ogicas, ' culturaUs y fisiologicas,ya fii j realixado *n la Catedra en 1942. por lo cual no iasistiremos mayor-mente y solo dir^mos qu« se trata de un gfrmtn de fofma -esferica, disput&toen tt-tradas. rio csporu'lado, inmovil, Gram positive. E« agat cstria- tiened'^sa-trollo ,-bundante en for,ma.- invasor, piano, lig-eramente lewntadd, opaco,de snperficie lisa y hiimeda, color-amarillo limon, sin olor, de conaist«nciaviscosa; no altera el medio, pnede cmLllsioIlars^ faci'lm'Snte, d^ndo una cmu!-s'6n homogenej. Las colonias -en agar placa son pequ>enas, redondeadas, desnperficie humiida, de color amarillo cremoso.

Deposlciofles,

En nuestris experi-encias hemos utilizado 'muestras de tneconio y depo-siciones d-e nines recien nacidos de la Maternidad del Hospital Bartos Lu<o /de Lcctantcs del Hospital Luis Calvo Mackenn'a. Estos ultimos nirios, en lascajos en que fueron alim':ntados en forma natural, tomafoan" leche human aordenada. Es del caso h-aner notar que, en1 su mayoria, se trataba de ninosdistroficos, contrariamente a los primtros, que fueron. en su. totalidad, cata-logados como clinicam^nte sanos.

Preparaci6n del extracto de deposictones.

1, A uru cantidad indet-erminada de deposicionts (retogidas gen«raNmente de la primera muda) . agregamo?' 10 cc. de suero fi&ioJolgko, agitandohasta format una ma^a semi liquids.

EL LISOZIMA EN EL TRACTO DIGESTIVO , 60>

2. Centrifuganjos dicha mez<la a razon de 5,000 revoludones porminuto, por espacio de 20 minu!os.

3, Ocean-tamos el scdimentu, obteniendo el "sbbrenadante como extracto dedeposiciones. Este extracto, asi obtenido, io mezclamos con un volumen igualde etcr sulfurico, llevando en seguida esta mezcla al barlomaria a 50 grado^,hasta la complete evaporation del eter, la que se conseguia despues de faora ymidia de calentamiento. En esta forma obtuvi*nos '^1 extracto de deposkionealibre ds impurezia, ya que la esterilizacion con eter y el calentamiento a 5.0grades, no afectan al Lisozima qu; pudieran contentr, en tanto qLie exicluyenla interv«ncion di; las bacterias del giupo Mcstnterkus-subtilis, ,que puedcntr.contrarse en las deposicion^.-; -y que, tal como lo ban demostrado 'Nicolle y<Rosen thai, son capaccs d; produtir n n . f e r m e n t o litico active.

Preparation de la emulsi6n de sarcinas.

1. A un cukivo de 24 boras en agar Undido dz Sarcina test, agrega-mos 10 cc. de suero fisiologico. agitamos.

2. 0.1 cc. dc esta mezcla agrcgamos a un tubo de agar fan-dido y ea-friado a. 45 grades.

3. Vaciamos a pla-cas .de Petri, e . i n c u b a m o g a 77 -grado-s por e-spa'ciod? 24 horas, a-1 cabo de-las cuales Icemos los ^-sulta-cfas1 obtenidos.

4. Usamos dos tubos <3e control: uno de ellos en el que reemplazabaniosel exrfacto de d^posiciones por suero fisiologico. y otro en el que solo tenia-mas extracto de depositions. Este. ultimo lo usa*bamo9 con el fin Je tener \Ascguridad de que mediante la esKri'lizacion previa habiamos deg!"rui<io la flora'microbrana intestinal normal.

En esta forma, investigabamos el poder liti-co inhibitor del extracto dedeposiciones. frente a la Sarcina t.'st. en forma instantanea.

A fin de facilitar la lectuta de los resultados obtenidostn todas nuestras experiencias, hemos adoptado la siguientepauta para !su interpretacion:

Lisis total, no hay <&sarroUo microbiano.Hay disminucion en un 75% en el niimero -de colonias,comparativament-e a la p"laca control.'La reduction ckl num«ro -de colonies alcanza a un 50%con raspecto al control.Hay drsminncion <jkl numero de colonias en un 25 %.El iramero de colonias es sensibfcmente igual al Je la pTacacontrol.

606

PROTOCOLO DE NUBSTRAS INVESTLGACiONES

Primera serie de experiencias.

Efec'tuamos la investigation del Lisozima en cl .m-econio y d-posicioflcsdc los reden nacidos alimenudos con leche raaterna.

Estudio verificado ien 75 ninos, protocolizados «n la Maternidad del' Hos-pital Barros Lnco, y cuyas edades f luctnaban entre 1 dia y 12 dias.

Los resultados obtenidos los resumimos en cl cuadro- siguientei

.CUADRO N.' 1.

Investigacion del poder liti-co-iahibidor del meconio y deposiciones delos recien nacidos alimentados con lech? niJterna, frente a 1'a Sarcina test..^cci6n instantan-ea.

Protocolo Nombrc Edad Proced, N.9 AlimentationOb;.

9944 ..11469 ..9938 ,.11470 ..11471 ..9946 ..9961 ..9939 ..11476 .11472 ..11464 ..11465 ..11466 ..11467 ..11474 ..11432 ..1 1438 ..11441 -.:11475 ..11433 ..11424 ..11435 ..11477 ..11478 ..11479. ..11480 ..9941 ..9965 ..12137 ...12138 „12139 ..12140 ..11.430 ..11431 ..

.. .. F... .. T... .. A... .. Ft... ,. A... .. E... .. R... .. O... .. M... ,. T... .. C... .. E... .. G... .. M... .. R... „ L... .. H.:.*... T... .. D... .. L.- .. E... .. Y... .. V.

- .. .. E... .. G.

C,.. .. M...*..- E... .. B... .. A... .-. E... .. E... .. A... .. M.

M.S.S.A.O.S.P.C.P.R.P.E.»S.P.M.C.S.P.B.P.C.S.V.H.Y.M.A.s. •E.C.S.s.p.s.

• 111

pl'l2222233-33344

-, 4

4444555555*55566

HBL. 56897

603156031V601675993632837'602465995151730602455949259890310425975856187597705978413531.6045-37236

600515981860170444802071845281

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4 1 1 5 25997760109498516032528109

EL LISOZIMA EN EL TRACTO DIGESTIV<3 607

Protocolo

9940 - -9962 .. .9964 .. .

11468 .. .12141 .. .12142 .. .12143 ., .12144 .. .12746 .. .12747 .. .12748 .. .12750 .. .'12751 .. .

.1275.2 .. .12753 .. .12754 .- .11436 ,r\11437 ..11439 .. .11440 .. -11481 .. -11482 .. .11483 .. .U484 .. .12755 . -12756 .. .12757 .. .12758 ... .12759 . . ' .127.60 . . " -12761 .. .12762 .. .U485 .. .11486 . .

' 11487 .. .1 1488 . '11489 .. .11490 . .

• 1 2 7 5 6 "12757 .

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E. C.. .. Y. C.. .. A. M.

.. .. A. D. •. .. C. A.. . A. G.. . R. G.. .'. N. L, - E. L... .. A. V... .. A- T... . L. L.

Edad Proced.

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N.^ AUmentacian LisozimaOb*.

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Pens- " " ' ++4-4-Pens. " " -\ — | — j — \-

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2425 " '' 4-4-4-460450 " " 4-4-+459934 " " 4-4-4-458272 " " . 4-4-+443251 " " 4-+4-46040~ " . " 4- + + 45985^ " . " +4-1-45986n " " 4-4- + 460329 " " 4-+4-459932 " " + ++459470 " " 4-4-+436258 " " 4-+4-460406 " " 4- + + 43 ? 5 2 1 " ." 4-+4-461210 " " 4-+4-459934 " " 4-4-4-4

. 5 8 2 7 2 " " 4-+4-4

Concl'Jsicnes de la primcra c^ ie dc cxp:riencias.• ' «

L9 Demuestrase en la totalidad de los casos investiga-dos, que el meconio catece de Lisozima.

2.Q Las depcsiciones de recien nacidos alimentados <;onleche materna demostraron, en todos los casos analiz-ados, un"ran contenido lisozimico.

«oa REVISTA CHILENA DE PEDIATRIA

3.9 La aparicion de Lisozima en" las deposiciones coin-/cidio constantemente con la iniciacion del amarnantamiento.

4.'-' Los controles verificados en forma continuada, apartir del l.er dia del amamantamiento hasta el 12.Q dia, de-mostraron un contenido lisozimico cOnstante.

Segunda serie de experiencias.Se investigo el pod-^r inhibidor l i t ico -de las -depositions de 79 lactantes,

cuyas cdlades 'fluctuabarv «ntre 15 dias y 22 meses, a l imentados en forma aa-.tufal (leche hnmana ordenada) , mixta y ar t i f ic ia l .

Estos caso.s. fueron proto-coliz.ados en el Hospital Luis Calvo Mack-cnna,• Los resultados obtcnidos estan rcsumidos en el cuadro siguiente:

CUADRO K.'! 2

Investigation del poder inhibidor l i t ico de las deposicioncs de lactanf^s,frente a la Sarcina test. Accion instantanea.

Profocolo

9928 -- .9920 . .9348 ..9350 - .9351 . .9919. .. .9929 .. .9930 . .

11419 - -11428 . .11429 ..9349 .-9459 .9460 .9918 , .9931 .

11410 ..11426 -11427 ..11430 - .11431 .

9354 ..9355 . -9924 ..9932 . .

11415 - -11416 ..11417 ..'11421 - -1 1422 ..

Nombr«

- P.,. J ... O... M.

G... B.. N.

.. j;. c.

.. L.

.. L.

.-. L.. O.. M.

.. B.

.. C.

.. N... c... E... O... C... M... M.., H... E... R.

N.C.

., V.

.. E."

B..O.T.T.

S.C.N.C.A.'G.N.V.O.O.s.N.C.N.P.U.H.B.M.

O.N.F.C.C.V.s.

Edad Proced.

1.5 ds. H. LCM.'18 "21 "

1 ms.1 "1 '"'1 • • , ' • -] "1 " - Part.1 " H.LCM., M

2 " , • "2 "2 "2 "

2 •'

i.2 "2 " • "2 "2 " Part!3 " H.LCM.3 "3 "3 "3 " P;xr.3 "3 "3 " H. L-CM.3 "

N.9 Obs.

43/68243/62343/36043/46643/28043/62443/68843 /655

—43/67Q4.3/71043/2M4 3 / 6 2 24 3 / 6 2 143/25943/3034 3 / 3 5 643 /62043/64043/504

—

43/30243/319

— -

43/56243/520

A'limentacion

L. H. •"

L.H.HE IL.H.-J. de F.

''L. M.

L;H.-£1L. M.

"." L.H.-E1

' '"

L. H."

. L2/3 8%-L.H.L2/3 8</<-LH-LALH-.E1-J. a* F.

L. H.L2/3 8 f /r-LH-LA

L. H.11

Ar t i f i c i a l"

L-H.-lL.A.L2/3 8 Ov -LH-LA

L. M.""

L.H.-L.A.* •

Lisozima

++++++++

+++++++ +++++

++--H++++

-H-+

+++^_^_^_l__l_^_-^^_-l_-^_l_4-+++- j-

+++++++

+++_j_-|_^._^++++

++++• _j_-|_-j__j-

+++++++++_!_++++++

+++

EL LISOZIMA EN EL TRACTO DIGESTIVO

Protocolo

93'56 ;. ..9362 .. ..9364 ., ..9400.. . ..9921 .'. ..

] 142311424 .. ..11425 .. ..9352 .. ..9358 .. ..9397 . . . .9933 .. ..9934 .. ..

11409 .. ..-1 1 4 1 1 .. ..11412 '.. ..

9359 . . . .9363 . . . .9454 .. ..9455 . . . .9461 ..- ..9922 .. .9923 .. ..9925 . . * . .99279935 .. ..9357 . . ' . .9361 . ..9365 .. ..9396 .. .9799 .. ..9402 .. ..

. 9403 .. .9458 .. .P926 .. ..9 3 5 2 , . . .9401 .. ..9936

11407 .; ,1.1408 .. :.11414 .. ..11418 ..11420 .. ..

9457 . . . .9456" . . ..9394 . . .9398 .. ..93609395 .: ..

Nbmbre

R. P,M/ F.

.1, M.M. A.L, M.F. 'P.

' A. F.R. M.S. G.J. C.F. Y.P. L.E. G.B. V.G. R.M. L.V. R.E. I.

- N. A.N. S.M. N.o: G.G. N.M. C.P. B.J. V.

' R. L. 'L. 0.S. G.G. J.F. F.G. D.H. C.A. H.A,. A.I. M.H. M.L. I.M. S.C. M. .C. H.I. R-.C. B..L. C.G. U.G. O. 'J. C.M. G.L, S.

Edad Proced.

4 ms . - M. HBL:4 " - . - • • " - -

,4 , '.; .4 "4 " ( "4 "4 " •

•4 "5 "•5 "5 "-

5 " • "5 " .. • ' . '5 -

5 "6 "6 " '6 " " •6 "6 "6 "6 " •6 "6 "6 "7 - . - -7 "7 "7 "7 " '7 "•7 " • ••

. 7 "7 "8 " "8 "" ' " '.8 "8 " s '-8 "8 " Part.8 "' . "8 " H. I.CM.

10 "12 "12 "14 "15 "22 "

NV' Obs- Alimentation

^'43/203 • Artificial•43/249 . . . - "- . ,43-/.24S . , "

• 4 3 / 2 7 74*3/28743 /27943/30043 /245 LH-E1 5'/,.-JF4V238 Artificial . •43/236 ' ' "43/14243/160 L2/3 8.%-LA-LH43/260 • Artificial •43/146 • •'43/16243/16443/19043/66.J43 /590 • LH-E1 7<%43/394 Artificial

"43/178 '43/673 LH-E-7.^ •43/34S bH-LA-PL^ -SS-PV4V362 LH-LA-E1 5-%-JF43/368 Artificial43 /21443/22043/500 > -43/506 ' . -43/59843/7043/238 • ' "43/22943 /229 . ''43 /107 , "43/109 • "43/8943/10843/90

_ _••

43/9643/2684 VI 6143/1043/52843/49043/25

Lisozima

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_—4-4-4-

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„+4-+

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' ++, .

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.

.

. ,

„

610 REVISTA CH1LBNA DG PEDIATTUA

Conclusions de la segunda serie de experteocias.

1. Las deposiciones de lactantes alimentados con lecbchurr.ana ordenada, contienen Lisozima.

2. El contenido lisozimico que poseen ias deposicionesde estos ninos, es tan elevado como el de los ninos alimen-tadcs con lecbe materna.

3. La actividad lisozimica fue siempre constante e in-dependiente de la edad del lactante.

4. Los lactantes alimentados en forma mixta, demos~traron contener Lisozima en sus deposiciones.

5. Las deposiciones de estcs ninos presentaron uncontenido lisczimico inferior al de los ninos alimentados enforma natural, variando su concentracion en forma propor-cionalmente directa a 'la cantidad de leche humana que re-cibian.

6. Los lactantes que recibian alimentacion artificial noprerentaron, en ningun caso, Lisozima en sus

ACCION DEL LISOZIMA CONTENIDO EN LAS DEPOSICIONESDE RECIEN NACIDOS, FRENTE A ALGUNAS ESPECIES

M1CROBIANAS S.APROFITAS Y PATOGEJSAS

c creidc de interes investigar la accion del Lisozi-ma fecal de los recien nacidos, frente a algunos germeines pa-togenos del tracto digestive.

Procedimos a estas investigaciones despues de habercomprobado, utilizando la Sarcina test como especie micro-biana sensible, el alto poder lisozimico de las deposiciones aexaminar.

Verificamcis este estudio en 52 muestras de deposicionesobtenidas de recien nacidos, cuyas edades fluctuaban entre 4y 8 dias.

Em^'.eamos 'las slguientes especies micro bianas: Escberi-chia coli: Eberthella typhoira, Salmonella tP^ratypbi A., Strep-tococcus faecalis (enterococo) , Proteus morga>nilf Sbigella p^-radysenceriae (Bacilo Flexner) .

En cuanto a. la tecnica seguida, ella ba sido analcga-ala ya descrita para las experiencias con Sarcina test.

Hemos variado la dilucion d^i extracto " de deposicio-nes desde 1/10, que corresponde a la dilucion empkada enlas exoeriencias verifioadas con la Sarcina test, hasta 1/200.

EL LISOZIMA EN EL TKACTO DIGE'STIVO

Asi mismo, hemos variado el tiempo de comtacto entre laemulsion microbiana y -el extracto de deposiciones, desde las24 horas hasta la fluracion de la accion instantanea, que en.las experiencias con Sarcina test file el tiempo optimo deaccion.

Los protocclos de las experiencias y los resdltados obte-nidos, frente a cada una de estas especies mkrobianas, estanresumidos en 'la serie de cuadros siguientes:

CUA^RO N.9 3

Accion -dtl Lisozima, contenido en Las deposicroni2s del recien nacido sobre

la Escherichia coli.

Muestra Extr. Deposit. Tiempo contacto en. horas e interpretacion<k lew resaltados.

- Instant,

1-2137

12138

12139

12140

12141

12142

12143

1/10 .. ..1/20 .. ..1/50 .. ..1/100 .. ..1/200 .. -..1/10 '., ..1/20 - .. ..1/50 .. .1/100 .. ..1/200 .. -..1/10 .- ..1/20 .. ..1/50 .. ..1/1001/200 .. .1/10 . .1/20 .. ..1/50 .. ..1/100 .. .1/2001/101/201/5Q - ..l/l'OO .. ..'1/200 .1/101/20 .. /.1/50T/100

: j/200 - . . - • . . .1/10

- • + 4- 4+4- ++++, . . . - ( - -j- -f-+... -- — • — - —. . . . — — —. . . . — — - —.. -. + + +4+ H-++4- •• • • • ' + 4- +4-. . . . • • — — —..• . — —.. .. — • — —• • •- ++ +-f+ +++-f• • •- 4- 4- +-f.. .. — — • —

„ ,

— —.. .. ++ . +- \--\- -(-4.++-- -- 4- -1- ++.. .- — : — • —,. .. — — — '

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.. . 4- - 4- ++

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.. . — — • — "

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- — • — - —' :

.. - ++ ih++ +4-+4-

18

++++

24

++H-+++ ++ ++H-

+++4-

REV 1ST A CH1LENA DE PEDI ATRIA-

Mnestra . Extr. Depotic. Tiempo de tontacto ta horas e interprttacioa<tt lo

Instant. 3

12144

12145

12146

12147

1214.8

1/20 .. ' + +. ++1/50 - — — , —1/100 — — —1/200 — — —1/10 ++ - + + + ++++ 41/20 . . . . . . . . . + ' + ++1/50 — ~ —1/100 • _ _ _ _ . __1/200 — — —1/10 .. .. .. .. ++ +++ ++++ 41/20 + + ++1/50 — — —1/100 — — —1/200 — — —1/10 - '.. ++ + + + ++++ 41/20 + + + +.1/50 — — . —1/100 — — —1/200 .. ' — — —1/10 ++ +++ + + + + +1/20 + + + +1/50 '. — — —1/1,00 — — —1/200 — — ' — '

1/20 + + ++'1/50 ' — —1/100 . — — —1/200 — — —

6 * 12 18

+ +

24

++ . ++4-

4-4+44 +

Conchisiones.

De esta serie de experiendas, pueden deducirse las si-guientes conclusiones:

1. Las deposiciones de recien nacidos, contieaen Liso-zima active para la Erx:herichia coli.

2. El grado de actividad es direct a meat e proporcionala la concentracion y al tiempo de contacto,

3. Al 1/10 se produce lisis parcial en forma instanta-nea, la que se hace total despues de 6 horas de contacto.

4. Al 1/20 la lisis es apenas perceptiW e hasta. las 3horas; se va haciendo mas evidente a medida que aumentafl tiempo de contacto, sin llegar en ningun caso a- la pfoduc-cion de lisis total, •

EL LISOZTMA EN EL TRACTO DLGESTLVO

5. AI 1/50 hubo. ligera accion despues de 24 hpra» dccontacto, en dos del total de las muestras exaniinadasl

6. AI " 1/200, el extracto de deposiciones no cjerceninguna accion frente a la Escherkbia coli.

CUADRO N.' 4

Accion del Lisozima cont«nido cc las deposiciones del recten niacido, sobrela Ebcrthella typhosa.

Muestra Extr Deposic. Tiempo de contacto «en borasj, de los resnltario-

N.*

12137

12138

12139

.

12140

12141

12142

12143

Instant. • 3 6

1/10 — 4- +1/20 : .. — — —1/50 .. — •— —1/100 — —1/200 — — —1/10 — .4 -t-

J/20 : .. — — —1/50 — —1/100 .. — -— —1/200 -. - ... .. — — ' _.1/10 - — 4 - +1/20 — — —1/50 — — —1/100 .. ... —1/200 — • — • —1/10 — + 4-1/20 . — ' — —1/50 : .. — — • _-1/100 — — —1/200 — — —1/10 .. __ 4. +

1/20 — — . _1/50 — _ —1/100 — — —1/200 — — —1/10 . . . . . - . _ 4- 4-1/20 _ ' _ _

-1/50 .. — • — - —1/100 ..• . _ _ . _1/200 .- - . . . . . . _ — •_ -1/10 .. .. . . . . ' _ 4. ' . - ;4. "1/20 — — - : _1/50 — — < _1/100 . . ; . . . _ _ L_1/200 . . . . - . . . — . ' — —

12

444.

. — .

+44-

- — .——

44_(_

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—4-4-

4

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4- '

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18

+++ ++-H+4- +4-

4+

44

4-44 4;4-'44+ 44

614' REVISTA CHILENA DE PEDIATRIA

12144

12145

12146

12147

Extr. Deposic.

1/101/201/501/1001/2001/101/201/501/1001/2001/101/201/501/1001/2001/101/201/501/1001/200

Tiempo de contacto en horas e interpretacionde los resultado5

Instant. 12 18 24

— +

Conclttsiones,

E>e esta serie de experimentos se deducen las siguientesconclusiones: *

• 1. B^ Lisozima contenido en las 'depcsiciones del re-cien nacido, tiene accion inhibidor litica evidente sobre laEbcrthella typfoosa.

2. El grado de actividad es directamente proporcto-nal a la concentracion y al tiempo de contacto.

3. Al 1/10 se produce lisis parcial a las -3 horas, laque se hace total a las 24 horas de contacto.

4. Al 1/20, su accion empieza a ejercerse a las 12horas de contacto y no llega a ser completa aun despues de24 horas.

5. A mayores diluciones, el extracto de deposicionesno dernostro ningtin efecto sobre ia Eberthella typho&a, aundespues de 24 horas de contacto.

EL LtSOZIMA EN EL TRACTO 'DKiESTIVO

CUADRO N.o 5

Accion del Lisozimla contenido en las deposiciones cjel recitn nacido sobre.h Salmonella paratyphi A.

Muestra

N->

12746

12747

12748

12749

12750

12751

12752

12753

12754

Extr. Deposic. Tiempo de contacto en horis ede los resultadtos

Instant. 3 6 12

1/10 .. _ ++4- ++++ ++++1/20 — — 4- 4-4-1/50 ' .. _ _ — _1/100 — — — —1/200 — — — —1/10 4-4- 4-++ ++++ 4-4-4-4-1/20 — — 4- +1/50 — — — —1/100 - _ _ • - _ _1/200 — — — —1/10 — 4-4-4- +4-++ +4-4-+1/20 ; .. _ 4- + 4.1/50 — — — —1/100 . • _ _ _ _ _ __1/200 — — ~ —1/10 .+ +++ ++++ ++++1/20 -^ — 4- +1/50 -r- — — —

1/100 — — — —1/200 .. — — — —1/10 +4- 4-++ ++++ ++++1/20 4- + 4- 4-1/50 — — — —1/100 — — — —1/200 — — — —1/10 + ++4- + + + + ++++1/20 — — +. 4-1/50 — — — —1/100 . — — — —1/200 ... — — — • —1/10 ., ++ ++4- + +++ + + + +1/20 — + + +1/50 — ^ — —1/100- .. _ ' _ _ „•1/200 .. ". ~ — — —1/10 + + + + ++++ +++-^-1/20' — — , + 4.1/50 .. — — — —J/100 ' — — — • —1/200 — — —1/10 + +4-+ ++4-+ +++ +1/20 .. - - -u _L1/50 .. — — — . —1/100 _ _ — „_1/200 — — — ~

interpretacion

18 24

+H_+4_ 4.4-4-4-++ ++

—. . —

—_l__l_^_l_ +4—1-4-

_[_ +4.

———

++++ ++++++ ++

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4-4--H-~ +++++ ++__,

__•__

++++ +++++ +^

616 , KEVISTA CHILENA DE PEDTATRlA

Conclusiones.

De esta serie de experiencias, se deducen las siguientesconclusiones:

1. El Lisezima contenido en las deposiciones del reciennacido, tiene accion litica evidente sobre la Salmonella^ para-typbi A.

2. El grado de actividad es directamente proporcionala la concentration y al tiempo de contacto,

3. Al 1/10 se produce Usis parcial en forma instan-tanea, la que se hace total despues de 6 horas de contacto.

4. Al 1/20 su accion empieza a ejercerse a las 3 bora'sy no llega a ser completa aun despues de 24 horas;

5. A mayores diluciones, el extracto de deposiciones nodemostro ningun efecto sobre la Salmonella; paratyphi A.

. : CUADRO N.' 6

Accion d«l Lisozima contenido en las deposiciones del r-ecien fucido sobreel Streptococcus faecalis.

Muestra Extr. peposic. Tiempo de contacto en boras e mterpretaci6nde los resultados

Instant. 3 6 12 18 2-1

12137 1/10 ........ — — — — + _.1/20 ........ — — _ — . „ _:_1/50 ........ — — — — __ __1/100 ........ — — — _ __ __1/200 ........ — _ ' _ _ _ _•

12138 1/10 .. . ..... — _ _ _ _ __1/20 ........ __ _ _ _ _1/50 .. ...... — — _ _ _1/100 ........ — — — ' — • _ __1/200 ........ — — . — _- __ __

+

Conclusion's.

En esta serie de experiences, nos hemos entontrado condificultades tecnicas, practicamente insalvables, por lo qnenuestras conclusiones serin solo transitorias, quedando supe-ditadas a estudios posteriores. Las dificultades se refieren es~pecialmeirte al hecho de que los cultivos en placas de estaespecie microbiana, dan colonias pequefiisimas y de aspectotransparente, muy dificiles de apreciar aun con ayuda de5upa. En todo caso, como se desprende del cuadro, parece queel Lisozima tiene una accion muy debil scbre esta germen.

CUADRO N.' 7

Accion del Lisozima contenido en las depasiciones del recicn nactdo sabreel Proteus morganii.

Mucstra Extr E*eposic. Tiempo de contacto en horas e int-ejrp-retacionde los tesoltados

N.? lastant. 3 6 12 18 24

12750 ,1/10 ++ ++++ ++++1/20 „ -f + ++ +++

• 1/50 + ++1/100 — —1/200

12751 1/101/20 .1/50 + '++ . ++1/100 -^- — —1/200 .-. — — —

J2752' 1/10 .. -++• 1/20 .. ' ++

1/50 ++ +'+ ++ ++i/aoo — — — — —1/200 - — — — — —

12753 1/10 . + + ++++•++++ + +++' ++-}-+1/20 ++ ++ +++ +++ +++ ++++1/50 + ++ ++ ++ -f-+ ++ +1/100 — — — — — -f1/200 — — — — — __

12754 1/10 ' ++ ++++ ++++ ++++ ++++ +++'+1/20. ' . ++ • ++ .+ + + + + + +++1/50 +. ++ ++ +,+ +4.1/100 — — — — — . -f1/200 — — — "

12755 1/10 ++ ++++ ++++1/20 ..1/50 .. 4+ +*+ ++

REVISTA CHILENA DE PEDIATRIA

Muestra Extr. Deposit. Tiempo cte contacto en boras e interpretationde los resuludos

N.» Instant. 3 6 12 18 24

12756

12757

12758

12759

1/100 .. ..1/200 . . . .1/10 .. ..1/20 -,. ..1/50 .. ..1/100 .. ..1/200 .. ..1/10- .. ,.1/20 .. ..1/50 .. ..1/100 .. ..1/200 .. ..1/10 .. ..1/20 .1/50 .. ..1/100 .. ..1/200 .. ..1/10 .. ..1/20 .. ..1/50 ,. ..1/100 .. .1/200 .. -..

.. .. —- - . . . + +- .. + +.- - +.. .. —.. .. —.. - + +- - + +.. :. +.. .. . . —.. .. " —,. .. ++

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_j_ —4444 4444

_i i_ 4_i i_44 44

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'+ + ++

__

44444444

4444

—44444444

4444

—44444- +++

+++•4-—

Conclusiones.

E>e esta serie de experiencias, se deducen las siguientescondhisiones:

1. El Lisozima cojntenido en las deposiciones de1!recien nacido, tiene a'ccion inhibidcir litica evidente sobre elProteus morganii.

2. El grado de actividad es directamente proporcionala la concentration y al tiempo de contacto.

3. Al 1/10 se produce lisis parcial en forma Instan-tanea, la que se hace total despues de 3 horas de contacto.

4. Al 1/20 su accion tambien se ejerce en forma ins-tantanea, hadendose la 'lisis total a las 24 horas de contacto.

5. Al 1/50 se 'produce lisis parcial en forma instanta-nea, la que no llega a hacerse completa aun despues de 24horas de contacto.

6 , - Al 1/100 se manifiesta una pequena accion litico-inhibidora, despues de 24 horas de contacto.

EL LISOZIMA EN EL, TRACTO DJGE6TIVO

CUADRO N,p 8

Accion del Lisozima conttnido en las depoii clones del recien. 'nacidoh Sbigeth paiadysaitecia*.

Muwtra Extr. Deposit. Tiem-po de contacto «n haras e interpret a cionde los reSultados

I-iwtant. 3 6 12 18. 24

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Conclusiones . .

Del analisis del cuadrc precedence, se desprende que laShigelh paradyEenteriae es altamente resistente a la accion delLisozima fecal.

CONSIDERACIONES GENERALES

Del presente trabajo experimental se desprende que elLisozima se pncuentra solamente en las deposiciones de reciennacidos y lactantes que son alimentados con leche humana,ya sea en forma exclusiva o mixta. . •

. . ; , Si consideramos ahora Ics dos hechos, ya demostradospor Rosenthal y Lieberman en 1931 (28) y cortfirmadospor nuestras recientes investigaciones, que ni el meconio de

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los recien nacidos, ni las deposiciones de Ics lactantes de cual-. quiera edad -alimentados- en forma artificial, contienen Liso-zima, podemos deducir que este eleroento presente en las-tle-posiciones de los* ninos que reciben leche humana, provengaexclusivamente de esta substancia alimenticia.

M. y J. Border ccmprobaron en 1828 (27) que, mien-tras el caloptro y la leche humana contienen el Lisozima enalta proporcion, la leche de vaca • carece de este (principio.Blatt y Kessler (34-) llegaron en 1937 >a la misma conclu-sion. Prickett, Miller y Me Donald (26), en 1933, sin em-bargo, concluyen de sus trabajos que la leche de vaca contie-ne Lisozima, pero, comparativamente con la leche humana,en cantidades muy reducidas. Nuestras investigaciones reali-zadas en la Catedra, nos permiten confirmar los resultadosobtenidos por Bo'rdet. • •

Puesto que los jugos digestives no mpdifican ni dismi-nuyen el poder de este principio inhibidor-liticof hecho com-prohado per Fleming y Allison (25) en 1924, el Lisozimaejerceria su accion antimicrobiana en forma eficaz, a lolargo de todo. el tracto digestive del lactante.

En cuanto a los microorganismos mas frecuentementeraisladcjs del intestine y de las deposiciones de recien nacidos ylactantes" norm-ales, los diferentes investigadores oqncuerdanen considerar al Lactobacillus bjfidus como una de las espe-.cies de mayor resistencia frente al Lisozima, lo que explica-ria la frecuencia con que este germen es aislado de las deposi-ciones de los ninos alimentados con leche humana y, al mis-mo tiempo, la escasez o ausenda de otra flora microbiana enestos terrenos. .

Teniendo pfesentes las anteriores consideraciones, pode-mos deducir que, gracias a los recientes ^trabajos de Meyer,Palmer y Thompson (30), que ban logrado obtener el Li-sozima al estado de maxima pureza y aun en forma cristali-zada, ccntamos ahora 'con una substancia mas pata combatireficazmente ciertos procesos rnorbidos digestives del nino denaturaleza toxi-infecciosa.

CONOLUSIONES GENERATES

De nuestro estudio sobre la presencia de Lisozima en elmeconio y en las deposicicmes de recien nacidos y lactantes yde su accion inhibidora y litica frente a algunas especies mi-crobianas saprofitas y patogenas del tracto digestive, se des-prenden las siguientes conclusiones:

EL 'LISOZIMA-EN EL TTRACTO DIOESTIVO 621

1) En la totalidad de llos casos investigados.se demos-tro la ausencia de Lisozima en el meconio.

2) Por el contrario, se evidencio su presencia en todaslas deposicioyies de los recien" nacidos alimentados con lechematcrna.

3) La aparicion del lisozima tuvo lugar, en todos loscases controlados, en el tercer dia, coincidiendo con la ini-ciacion de1 amamantamientc. • .

4) Los lactantes alimentados con leche humana. or-defiada, demostraron contener en sus deposiciones un alto ti-tulo lisozimico, semejante al que se comprobo en los niiiosalimentados con leche materna.

5) La edad del nino alimentado con leche humana notiene, evidentemente, ninguna relacion con el contenido liso-zimico de las deposiciones.

6) La tasa lisozlmica de las deposiciones de lactantesalimentados en forma mixta, guarda relacion directa con lacantidad de leche humana ingerida.

7) En los lactantes alimentados en forma artificial,no pudo demostrarse, en ningun case, la presencia de lisozimaen sus deposicicnes.

8) En cuanto al poder lisozimico de las deposicionesfrente a diversos germenes patogenos y saorofitos 'del tubodigestivo, se com,probo que la intensidad de su accion variasegun la especie microbiana:

a) .La Escherichia coli fue inhibida en su desarrolloen forma total por concentraciones del 1 x 10 y despues de6 horas de contacto. A concentraciones de 1 x 50 se demostrouna acci6n muy leve despues de 24 boras.

b) La Eberthella typbosa sufrio la. inhibicion total aconcentraciones de 1 x 10 y despues de 24 horas de. contacto.A concentraciones de 1 x 20 se demostro, en el mismo tiem-po, una accion inhibidor-litica incompleta.

c) El Streptococcus faecalis (enterococo) probo seruna especie muy resistente a la accion del lisozima fecal.

d) La Salmonella paratyphi A fue inhibida en su des-arrollo en forma total por concentraciones de 1 x 10 despuesde 6 horas de contacto. Al 1 x 20, el efecto mhibidor fuesolo parcial, aun despues de 24 horas.

e) El Prcteus morganiii se revelo, de las especies mi-crobianas estudiadas cojno la mas sensible al lisozima fecal.A concentraciones de 1 x 10 y a las 3 horas de contacto, secomprobo la inbibicion total de su desarrollo. Un efecto par-

522 REVISFA CHILENA DE PEDIATRIA

cial pudo observarse aiin a concentraciones de 1 x 100 despuesde 24 horas.

f) La SbigcIIa paradysenteriae (Bacilo de Flexner) semostro altamente resistente a la accion del lisozima fecal de'los recien naddos. Concentraciones de 1 x 10 .produjeron,despues de 24 horas de contacto, solo en alguncs de los casosinvestigados, una inhibicion parcial de su desarrallo.

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EL LISOZIMA EN BL TRACTO DIGESTIVO 623

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