efectos del ejercicio fÍsico extenuante sobre la
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UNIVERSIDAD DE LOS ANDES FACULTAD DE HUMANIDADES Y EDUCACIÓN
ESCUELA DE EDUCACIÓN DEPARTAMENTO DE EDUCACIÓN FÍSICA
COMISIÓN DE MEMORIA DE GRADO
EFECTOS DEL EJERCICIO FÍSICO EXTENUANTE SOBRE LA
PRODUCCIÓN DE ÓXIDO NÍTRICO, ÁCIDO ÚRICO, ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL Y ESTRÉS OXIDATIVO EN
SALIVA DE TRIATLETAS ELITE
Memoria de Grado para optar al Título de Licenciado en Educación Mención Educación Física
AUTOR: Br. JOSÉ R. GUERRERO TUTOR: Dr. ANTONIO J. RODRÍGUEZ M. CO-TUTOR: Dr. RAFAEL A. REYES
MÉRIDA, JUNIO DE 2007
AGRADECIMIENTOS
* Al Dr. Antonio J. Rodríguez Malaver, por su aceptación y oportuna
tutoría, así como también por sus orientaciones a lo largo de esta
investigación. * Al Dr. Rafael A. Reyes Álvarez, por su asesoramiento académico y por
la ayuda prestada, las cuales contribuyeron en la elaboración de este
trabajo. * Al Consejo de Desarrollo Científico Humanístico y Tecnológico
(CDCHT-ULA) por el financiamiento de esta investigación. * Al Laboratorio de Bioquímica Adaptativa de la Facultad de Medicina,
por permitirme realizar la investigación y recabar los datos en sus
instalaciones y bajo su funcionamiento. * A la Asociación de triatlón del Estado Mérida. * A Ramón Marquina y David González compañeros del laboratorio, por
su apoyo y ayuda. * A Jean Carlos Zambrano por su colaboración y ayuda prestada. * A todas aquellas personas que me ayudaron en la recolección de las
muestras por su colaboración y apoyo brindado.
Eternamente agradecido.
DEDICATORIA
• A mi Dios Todopoderoso, y al Divino Niño, por permitir mi desarrollo y
evolución como futuro profesional de Educación Física.
• A mi Mamá por brindarme la oportunidad de alcanzar este objetivo, a
través de su amor, comprensión, paciencia, sacrificio, entrega; con el
firme propósito de obtener mis metas.
• A mi Papá por el apoyo incondicional en el desarrollo de mis actos y
desenvolvimiento durante mi formación.
• A mis Hermanos para que este logro los impulse a alcanzar sus
metas.
• A la señora Flor de Osuna quien un día puso su confianza en mí, y es
la persona a quien le debo gran parte de lo que ahora soy como
persona.
• A Sandra por brindarme todo el apoyo, Ella conoce mis temores, mis
deseos, mis miedos... ella sabe cuando siento pena, dolor, angustia y
cuando estoy feliz, por tenerme tanta paciencia.
• A mis Sobrinos que le sirva de estímulo para sus desenvolvimientos
en sus formaciones como estudiantes.
• A mis compañeros de clases por compartir su amistad y ayuda en
momentos difíciles.
José Reilander Guerrero
INDICE
AGRADECIMIENTOS.....................................................................................................i
DEDICATORIA ..............................................................................................................ii
LISTA DE TABLAS ....................................................................................................... iii
LISTA DE GRÁFICOS ..................................................................................................iv
RESUMEN ....................................................................................................................vi
Capítulo I El Problema ..............................................................................................................1
Planteamiento del Problema .........................................................................................1
Objetivos........................................................................................................................3
Justificación ...................................................................................................................4
Capítulo II Marco Teórico..........................................................................................................6
Antecedentes ..................................................................................................................6
Bases Teóricas ...............................................................................................................9
Capítulo III Metodología..........................................................................................................16
Tipo de Investigación...................................................................................................16
Población y Muestra ....................................................................................................16
Diseño de la Investigación...........................................................................................16
Instrumentos y Medios.................................................................................................17
Sistemas de Variables .................................................................................................18
Sistemas de Hipótesis .................................................................................................18
Análisis Estadístico..............................................................................19
Procedimiento experimental ................................................................19
Análisis de las Muestras ......................................................................20
Determinación del NO .........................................................................20
Determinación del AU.................................................................... 21-22
Determinación de la AAT............................................................... 22-23
Determinación del EO.................................................................... 23-24
Capítulo IV. RESULTADOS...........................................................................25
Características descriptivas de sujetos................................................25
Efectos del ejercicio físico extenuante sobre el óxido nítrico ...............26
Efectos del ejercicio físico extenuante sobre el ácido úrico .................27
Efectos del ejercicio físico extenuante sobre el la actividad antioxidante
total ................................................................................................................29
Efectos del ejercicio físico extenuante sobre el estrés oxidativo ..........30
Efectos del ejercicio físico extenuante sobre las variables dependientes31
Capítulo V. DISCUCIÓN DE LOS RESULTADOS.........................................32
Capítulo VI. CONCLUSIONES ......................................................................34
REFERENCIAS .............................................................................................36
ANEXOS........................................................................................................42
LISTA DE TABLAS
Tabla 1. Reactivos que contienen las muestras utilizadas en el
estudio del NO, mediante la reacción de Griess ...............................20
Tabla 2. Reactivos que contienen las muestras para el estudio del
AU, mediante el método enzimático ..................................................21
Tabla 3. Reactivos que contienen las muestras para el estudio de la
AAT mediante el método ABTS.........................................................22
Tabla 4. Reactivos que contienen las muestras para el estudio del
hidroperóxido lipídico (EO), mediante el método de FOX..................24
Tabla 5. Características descriptivas de los sujetos estudiados......................26
Tabla 6. Efecto de la condición del ejercicio físico extenuante sobre
las variables estudiadas ....................................................................31
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 Efecto del ejercicio físico extenuante sobre el NO.............................27
Figura 2 Efecto del ejercicio físico extenuante sobre el AU.............................28
Figura 3 Efecto del ejercicio físico extenuante sobre la AAT...........................29
Figura 4 Efecto del ejercicio físico extenuante sobre el EO.............................30
Efectos del Ejercicio Físico extenuante sobre la producción de Óxido Nítrico, Ácido Úrico, Actividad Antioxidante Total y Estrés Oxidativo en
Saliva de Triatletas Elite.
Autor: Guerrero José Reilander Tutor: Dr. Rodríguez-Malaver, Antonio
Co-Tutor: Dr. Reyes A, Rafael Universidad de Los Andes Mérida-Venezuela
Resumen El ejercicio físico puede aumentar las defensas antioxidantes del organismo. Sin embargo, esta protección no podría ser suficiente. Se desconoce si el aumento de las defensas antioxidantes es suficiente para evitar el estrés oxidativo durante el ejercicio físico de larga duración. Propósito: Determinar el efecto del Ejercicio Físico Extenuante sobre la producción de Óxido Nítrico (NO), Ácido Úrico (UA), Actividad Antioxidante Total (AAT) y Estrés Oxidativo (EO) en Saliva de Triatletas Elite. Metodología: Doce Triatletas Elite (hombres 7 y mujeres 5), fueron estudiados durante el triatlón Falcón 2006. Las muestras de saliva fueron tomadas 24 h antes del triatlón, 1 h antes e inmediatamente después del triatlón (Idesp). Luego de enjugarse la boca con agua, las muestras de saliva estimulada fueron colocadas en tubos de ensayo y congeladas a -5ºC. Antes de ser analizadas, las muestras de saliva fueron centrifugadas a 3000 rpm durante 10 min. La concentración de NO se determinó por la reacción de Griess, el UA por un método enzimático, la AAT por el método de ABTS, y el EO se determinó por el método de FOX. Se utilizó una ANOVA medidas repetidas para determinar el efecto del ejercicio físico extenuante en las variables dependientes. Alpha colocado a-priori a p=0.05 y corregido por la técnica de Bonferroni para múltiples comparaciones, para determinar si existen diferencias estadísticamente significativas. Resultados: El ejercicio físico de la larga duración causó un aumento en comparación a 24h, en UA (mg/dl) (Idesp: 3.53 ± 1.58 mg/dl vs. 24 h: 1.35 ± 0.68 mg/dl vs.; p< 0.05) y 1 h (1.96 ± 0.93 mg/dl; p< 0.05). En cambio, en AAT disminuyó en 1 h ante con respecto a 24 h antes de la competencia (1 h: 1.02 ± 0.28 mM vs. 24 h: 1.42 ± 0.25 mM; p< 0.05). Por otro lado el EO disminuyó 1 h antes en comparación a 24 h (µM) (1 h: 85.2 ± 13.9 µM vs. 24 h: 90.8 ± 9.4 µM; p< 0.05). Sin embargo, no hubo un cambio significativo en la concentración de NO. Conclusiones: El ejercicio físico extenuante no cambió la producción de NO, aunque el estrés oxidativo perceptiblemente disminuyó después de la competencia. Por otra parte, el ejercicio físico extenuante causó un aumento en el AU y AAT en general. Palabras clave: ejercicio físico, óxido nítrico, ácido úrico, actividad antioxidante total y estrés oxidativo.
CAPÍTULO I EL PROBLEMA
Planteamiento del Problema
Los seres humanos utilizan los procesos oxidativos de los alimentos
para generar la energía necesaria para el trabajo celular. No obstante, estos
procesos oxidativos también generan otros sub-productos, tales como las
especies reactivas de oxígeno (ERO) y los radicales libres (RL) que pueden
ser nocivos para el organismo (McBride et al, 1998; Koracevic, 2001;).
Las ERO y los RL, a diferencia de otras moléculas que constituyen el
cuerpo humano, son moléculas muy inestables, altamente reactivas y de
corta vida que tienen un electrón libre (Cooper, 2002). Usualmente, las ERO
y RL producidos son removidos por antioxidantes enzimáticos y no
enzimáticos de origen endógeno. Sin embargo, sí la producción de ERO y RL
excede la Actividad Antioxidante Total (AAT) se genera una condición celular
o fisiológica de elevada concentración de estas especies reactivas,
denominada Estrés Oxidativo (EO) (Pérez, y Pérez 1999).
Esta condición celular, el EO se ha sugerido que es mediadora de
varias formas de daño celular a estructura y funciones vitales (tales como
lesiones de isquemia a diferentes órganos), respuestas inflamatorias y
lesiones que resultan del metabolismo intracelular de drogas y químicos.
(Koracevic.2001). Igualmente, la elevada concentración de RL ha sido
asociada al envejecimiento prematuro y a ciertos estados de enfermedades
cardiovasculares (Das 2000).
Varios factores han sido sugeridos como potenciales generadores de
EO en el organismo de los seres vivos. De acuerdo a su origen, estos
factores se dividen en endógenos (ejercicio y estrés psicológico) y exógenos
(alimentos, alcohol, humo del cigarrillo, radiación y polución ambientales)
(Miller et al., 1998). En el caso del ejercicio, la actividad física ha sido
asociada al EO en dos formas diferentes: en una de ellas, la respuesta al
ejercicio, la actividad física ha sido asociada a una elevada producción de RL
y EO debido al incremento del metabolismo oxidativo. Por el contrario, las
adaptaciones al ejercicio físico regular (por ejemplo, el entrenamiento de
ejercicios físicos aeróbicos) parece tener un efecto protectivo antioxidante
(disminuye la concentración de ERO y RL).
La mayoría de los estudios que ha examinado la producción de RL y la
AAT en respuesta a diferentes actividades físicas, así como en adaptación al
entrenamiento físico y respuesta al ejercicio físico, la concentración de los
indicadores de esta condición fisiológica EO han sido en el plasma
sanguíneo. De igual forma, en estos estudios la mayoría de los participantes
se han caracterizado por ser personas jóvenes en un estado normal de
salud. No obstante, otro fluido que podría revelar los niveles de producción y
remoción de ERO en repuesta a la actividad física lo representa la saliva. Sin
embargo el efecto en conjunto sobre los efectos del ejercicio físico
extenuante sobre la producción de NO, Ácido Úrico (AU), AAT y EO en
saliva de Triatletas Elite, no ha sido examinado. En tal sentido, el propósito
de este estudio esta dirigido a determinar las siguientes interrogantes: ¿Que
efecto tiene el ejercicio físico extenuante sobre la producción de óxido nítrico,
ácido úrico y actividad antioxidante total? Y ¿cuál puede ser el efecto del
ejercicio físico de Larga duración sobre la producción de estrés oxidativo?
Objetivos de la Investigación
General
- Examinar los efectos del ejercicio físico extenuante sobre la
producción de Óxido Nítrico, Ácido Úrico, Actividad Antioxidante Total
y Estrés Oxidativo en saliva de triatletas elite.
Específicos
- Determinar el efecto de las variables de Óxido Nítrico, Ácido Úrico,
Actividad Antioxidante Total y Estrés Oxidativo en saliva de triatletas
elite, 24 horas antes de la competencia.
- Determinar el efecto de las variables de Óxido Nítrico, Ácido Úrico
Actividad Antioxidante Total y Estrés Oxidativo en saliva de triatletas
elite, 1 hora antes de la competencia.
- Determinar el efecto de las variables de Oxido Nítrico, Acido Úrico,
Actividad Antioxidante Total y Estrés Oxidativo en saliva de triatletas
elite, inmediatamente después de la competencia.
- Comparar la producción de Óxido Nítrico, Ácido Úrico, Actividad
Antioxidante Total y Estrés Oxidativo en saliva de triatletas elite antes
y después de la competencia de triatlón.
Justificación
Las ERO y los RL se originan a través de los procesos normales del
organismo como la respiración, metabolismo de los alimentos y ejercicio
(McBride et al., 1998; Cooper et al., 2002; Das, 2000; Koracevic et al., 2001).
En las mitocondrias se produce la energía necesaria para el trabajo celular.
Esta producción varía a lo largo del día (después de las comidas o el
ejercicio físico) en los que se consume gran cantidad de oxígeno (Astrand y
Rodhal, 1986). La producción de ERO y RL se incrementa en presencia de
contaminantes, tales como los plaguicidas y herbicidas utilizados en la
agricultura normal o extensiva, como también en la exposición a elementos
nocivos del medio ambiente, tales como la polución industrial, tabaco,
radiación, medicamentos, aditivos químicos en los alimentos procesados y
pesticidas, entre otros (Cooper et al., 2002).
Las ERO y los RL producidos por el cuerpo durante determinadas
funciones son neutralizados por el propio sistema. Con este fin, el cuerpo
produce unas enzimas (como la catalasa o la superóxido dismutasa) que son
las encargadas de neutralizarlos (Cooper et al., 2002; Husain 2002). Estas
enzimas tienen la capacidad de neutralizar las ERO y los RL sin
desestabilizar su propio estado. No obstante, la incapacidad del cuerpo para
neutralizar estas especies reactivas a los que se exponen diariamente obliga
a recurrir a nutrientes con la propiedad de neutralizarlos. Estos nutrientes
actúan liberando electrones en la sangre que son captados por los RL
convirtiéndose así en moléculas estables.
Por el contrario, el problema para el sistema se produce cuando tiene
que tolerar una elevada producción de ERO y RL. Esta elevada producción
de especies reactivas puede ser debida a contaminantes externos que
penetran en el cuerpo y a procesos metabólicos internos. Esta elevada
producción de ERO y RL puede no ser eliminado por el cuerpo y, en su labor
de captación de electrones, las especies reactivas dañan las membranas de
las células, llegando finalmente a destruir y mutar su información genética,
facilitando así el camino para que se desarrollen diversos tipos de
enfermedades. La acción de las ERO y RL está ha sido asociada al cáncer,
así como a enfermedades cardiovasculares (McBride et al., 1998; Das,
2000).
Por otra parte el ejercicio físico es conocido por jugar un papel
importante como cardioprotector. Sin embargo una paradoja parece
presentarse cuando trabajos anteriores han mostrado que el ejercicio físico
aeróbico lleva a una formación de RL, pero también demostraron que las
defensas antioxidantes aumenta para así contrarrestar estos RL (Brites y
col., 2006).
Para finalizar, es importante señalar que la producción de RL se ha
asociado al elevado consumo de oxígeno como consecuencia del ejercicio
físico (Astrand y Rodhal, 1986; Brooks et al., 1995). Por tanto, la importancia
de este estudio está en la necesidad de determinar la incidencia de la
respuesta al ejercicio físico extenuante, y la producción de NO, AU, AAT y
EO, ya que un exagerado estrés oxidativo podría generar daños moleculares
irreversibles en tejidos y funciones vitales del cuerpo humano, así como
acelerar el proceso de envejecimiento.
CAPITULO II
MARCO TEORICO
Antecedentes
Gran cantidad de evidencia clínica y patológica ha demostrado que el
ejercicio físico regular es capaz de producir una reducción de las
enfermedades cardiovasculares, tales como ateroesclerosis, enfermedad
coronaria, hipertensión arterial (Peters y col., 1983; Blair y col., 1995; Blair y
col., 1996). Se ha demostrado un incremento del diámetro coronario después
del entrenamiento físico regular (Heath y col, 1983), sugiriendo que el
ejercicio físico puede reducir la resistencia vascular. De hecho, el ejercicio
regular ha mostrado tener ese efecto tanto en pacientes hipertensos
(Mannarino y col., 1989) como en individuos sanos (Ekelund y col, 1988;
Jungersten y col., 1996). Sin embargo, el mecanismo por el cual se obtiene
estos efectos no está totalmente dilucidado.
(Panassian et al., 1999), encontró en su trabajo que el ejercicio
extenuante causa un aumento del NO en saliva, y que el uso de un
adaptogeno evitó este aumento.
En el caso de los estudios que han examinado la influencia del
entrenamiento físico (adaptaciones) sobre la producción de Oxido Nítrico
(NO) en el organismo se presenta el ejemplo del estudio realizado por
Kingwell et al. (1997), en el cual examinó la producción de NO en 13
hombres sanos sedentarios, luego de 4 semanas de actividades normales y
4 de entrenamiento físico, se observó que el entrenamiento físico produce un
aumento en la producción basal del NO en el organismo.
Hasta la presente fecha, son muy pocas las referencias que se han
podido encontrar en relación a la duración e intensidad del ejercicio físico o
entrenamiento físico y la producción del NO y el estrés oxidativo en
triatlonistas, por lo que se podría asumir la necesidad por la realización de
más estudios con sujetos a diferentes edades, aptitud física, estado de salud,
alimentación y duración e intensidad del ejercicio físico, de manera que
permita un mayor entendimiento y comprensión de las adaptaciones del
organismo, en lo que a producción de NO con el ejercicio físico.
Viguie et al. (1993), trabajando con hombres atletas moderadamente
entrenados, probaron si días consecutivos de ejercicio sub-máximo
prolongado resultaba en un estrés oxidativo suficiente como para alterar los
perfiles antioxidantes de la sangre hasta agotarlos progresivamente y si se
alcanzaba un daño al ARN o no. Estos investigadores encontraron cambios
similares en los perfiles de oxidación-reducción (Redox) en días consecutivos
de ejercicio con recuperación pre-ejercicio de 15 min, esto es evidencia de
que no existen efectos persistentes o acumulativos del ejercicio en el estado
de los antioxidantes plasmáticos, y que estos esfuerzos físicos son
insuficientes como para alterar el estado del ARN.
Por otro lado Knez y col., (2007), trabajaron con 16 triatlonistas, este
estudio busco examinar pre y post rastros de estrés oxidativo y antioxidantes
en entrenamiento de ultra resistencia atlética, resistiendo al post ejercicio se
tomaron muestras de sangre antes y después del ejercicio, estos
investigadores señalaron que después del entrenamiento de los triatlonistas
tenían diferentes efectos de enzimas antioxidantes y de estrés oxidativo, es
decir que la AAT fue elevada mientras que el EO incremento después del
ejercicio.
Brites y col., (2006), examinaron el EO y la AAT, en 18 triatletas
altamente entrenados, después de un triatlón se les tomaron muestras de
sangre, encontraron en estos atletas que el EO fue asociado con alta
oxidación después de la competencia mientras que la AAT también
incremento, en conclusión los ejercicios aeróbicos regulares fueron
asociados a las funciones eficientes de la AAT que pueden constituir una
respuesta adaptativa para el aumento del EO.
Palazzetti y col., (2003), hipótetisaron si el triatlón inducirá el EO y
AAT, analizaron 9 triatletas ejercitados después de un triatlón recolectando
muestras de sangre, los triatletas fueron medidos antes y después del
ejercicio, induciendo variaciones en la cantidad de la sangre,
comprometiendo el mecanismo de las defensas antioxidantes con respecto a
la respuesta del ejercicio, resultando un aumento del EO después del
ejercicio y de la AAT.
Mientras que McBride et al. (1998), examinaron el efecto del ejercicio
de resistencia (ejercicios con pesas) de alta intensidad sobre la producción
de RL en 12 hombres entrenados en forma recreacional. Los participantes en
este estudio (asignados al azar a un grupo con suplementación de vitamina E
y a otros sin suplementación de vitamina E) exhibieron valores más elevados
en la actividad de la creatin kinasa antes del ejercicio en comparación a los
valores registrados inmediatamente después y en los valores obtenidos 6 y
24 horas después de culminar el ejercicio en ambos grupos. En ese mismo
estudio, observaron que durante la realización de ejercicios de resistencia
hay un aumento en la producción de RL medido indirectamente mediante la
presencia de productos de peroxidación lipídica, tales como Malondialdehido,
concluyendo que después de la realización de ejercicios de resistencia se
presenta un elevado estrés oxidativo.
Mientras Banerjee, (2003), Estudiaron que el ejercicio físico vigoroso
caracterizado por un aumento notable en el consumo del oxígeno con la
producción de las ERO presenta un desafío a los sistemas antioxidantes.
Puesto que la capacidad antioxidante de la reserva en la mayoría de los
tejidos finos es algo marginal, el ejercicio físico agudo de suficiente
intensidad se ha demostrado para estimular actividades de enzimas
antioxidantes. Esto se podía considerar como mecanismo defensivo de la
célula bajo tensión oxidativa. Sin embargo, el ejercicio prolongado puede
causar una reducción transitoria del contenido de la vitamina E y del tejido
fino del cuerpo. El ejercicio agudo parece inducir enzimas antioxidantes y
quizás estimular niveles de fluidos corporales.
Owen-Smith y col (1998) reportaron que el ejercicio físico incremento
el ácido úrico en la saliva.
Aguiló y col., (2005) 8 voluntarios participantes de una competencia de
ciclismo de montaña (171 km), analizaron muestras de sangre después de
finalizar la competencia, para determinar la AAT, AU, y EO, reportaron que el
EO y la AAT después del ejercicio exhaustivo aumento, mientras que el AU
después de la observación en la sangre incremento también después del
ejercicio.
Mientras Margaritis y col., (1997) estudiaron la no evidencia del EO
después de un triatlón, doce triatletas participaron en este estudio,
tomándoles muestras de sangre antes y después de un triatlón, estos
investigadores encontraron que después de finalizado el triatlón no sufrieron
de daños oxidativos, y la magnitud de las defensas antioxidantes aumento.
Bases Teóricas
Los seres humanos necesitan oxígeno para sobrevivir. El cuerpo
utiliza oxígeno para obtener energía de los alimentos y la suministra a los
procesos corporales. A este proceso se le denomina oxidación y es esencial
para la vida (Astrand y Rodhal, 1986). Sin embargo, los procesos de
oxidación producen especies reactivas de oxigeno (ERO) y radicales libres
(RL), que pueden interferir en los procesos bioquímicos normales y dañar las
células corporales (Cooper et al., 2002; Das, 2000; Koracevic et al., 2001;
McBride et al., 1998).
Cuando tales especies reactivas se producen en la membrana celular,
predomina la reacción en cadena de la peroxidación lipídica, que es el
proceso mediante el cual los ácidos grasos (componentes de las membranas
celulares) se oxidan o ceden sus electrones a los radicales, con el
consecuente daño a la membrana celular.
En determinadas circunstancias, la producción de RL puede aumentar
en forma descontrolada, situación conocida con el nombre de EO. El
concepto expresa la existencia de un desequilibrio entre las velocidades de
producción y de destrucción de las moléculas tóxicas que da lugar a un
aumento en la concentración celular de los RL (Desmarchelier y Ciccia,
1998).
El EO ocurre en los organismos por mal nutrición, enfermedades u
otras causas. Esta situación de estrés oxidativo incrementa la producción de
ERO y RL, los cuales reaccionan químicamente con lípidos, proteínas,
carbohidratos y con componentes de la matriz extracelular, lo que puede
desencadenar en un daño irreversible que, si es muy extenso, puede llevar a
la muerte celular.
Existen otras patologías cuya generación podrían estar asociadas a
los efectos de las ERO y los RL. Entre ellas se han considerado las
enfermedades degenerativas del sistema nervioso (enfermedades de
Alzheimer, de Parkinson y de Hodgkin); cataratas; arteriosclerosis;
adicciones (tabaquismo y alcoholismo); el daño tóxico agudo del hígado, el
proceso de isquemia y reperfusión (que ocurre cuando un tejido sufre una
interrupción transitoria del aporte sanguíneo, seguida por su restauración
parcial o total como es el caso en los infartos del miocardio, en los
transplantes de órganos, cirugía cardiaca, etc.) y agresiones físicas o
químicas; por ejemplo, por radiaciones o contaminación ambiental. Todas
estas situaciones significan la presencia de un estado de EO, que podría ser
tanto causa como consecuencia de la patología en cuestión (Desmarchelier y
Ciccia, 1998).
También ha sido sugerido que las ERO y los RL contribuyen al
proceso del envejecimiento cuando toman el electrón que les hace falta, del
colágeno de la piel. Como resultado, la piel pierde su elasticidad y luce seca
y arrugada. Lógicamente, y de la misma forma que no se puede realizar una
prevención o terapia racional de un proceso patológico específico sin
conocer su etiología, no se podrá frenar el envejecimiento normal ni prevenir
el prematuro sin comprender las causas moleculares de la involución que
sufren las células y los órganos con el paso del tiempo. Por ello, Lane, et al.
(2002) son de la opinión que no se disponen de todos los factores del
proceso del envejecimiento y que no se puede aplicar una relación de causa-
efecto generalizada tanto a nivel molecular como subcelular, celular y
sistémico.
En otro orden de ideas, se ha establecido que la actividad física
vigorosa puede incrementar el consumo de oxígeno en 10 a 20 veces por
encima del valor de reposo para satisfacer las demandas de energía. Este
elevado consumo de oxígeno resultante produce EO que conduce a la
generación de RL. El ejercicio aumenta la tasa de utilización de oxígeno y el
flujo de electrones a través de la cadena mitocondrial de transporte de
electrones, lo que puede acelerar la tasa de producción de ERO y RL. La
explicación de por qué se generan más especies reactivas con el deporte se
basa en que al realizar ejercicios, la respiración se incrementa y, con ella,
aparecen los ERO y los RL que saturan los mecanismos de defensa
naturales del cuerpo.
Existen diversas fuentes de producción de ERO y RL durante el
ejercicio. Una de ellas sería por un "escape" de electrones, probablemente a
nivel de la ubiquinona-citocromo b, en la cadena mitocondrial de transporte
de electrones con producción de anión superóxido (O2•-) (Boveris y Chance,
1973; Boveris y Cadenas, 1975; Cadenas et al., 1977; Sjodin et al, 1990).
Otro mecanismo posible es el de isquemia-reperfusión. Durante el
ejercicio, el flujo sanguíneo es restringido en numerosos órganos y tejidos
(riñón, región esplácnica, etc.) para aumentar el aporte a los músculos
activos. Es así que las regiones deprivadas temporalmente del flujo
adecuado ingresan en un estado de hipoxia, que es tanto mayor cuanto más
intenso es el ejercicio, y más aún si se supera la capacidad aeróbica máxima
(VO2max). Incluso el propio músculo activo entra en un estado de hipoxia por
insuficiente aporte de oxígeno. Al finalizar la actividad intensa, todas las
áreas afectadas son reoxigenadas, cumpliéndose el fenómeno de isquemia-
reperfusión con la conocida producción de RL que la acompaña (Kellog y
Firdovich, 1975; Wolbarsht y Fridovich, 1989). Un tercer posible mecanismo
de generación de RL es la auto-oxidación de catecolaminas, cuyos niveles
suelen estar aumentados durante el esfuerzo (Singh, 1992).
El O2•- producido por los mecanismos mencionados, puede reaccionar
con otra molécula similar en presencia de protones (dismutación) para
producir peróxido de hidrógeno (H2O2), reacción catalizada por la superóxido
dismutasa (SOD). El H2O2 puede reaccionar con metales de transición para
producir el radical hidroxilo (HO•), una de las especies más tóxicas y
reactivas del oxígeno, que reacciona con la primera molécula que encuentre
a su alcance. El HO•, por lo tanto, puede dañar proteínas, lípidos y ácidos
nucleicos.
Ante el avance de enfermedades neurodegenerativas como el mal de
Alzheimer, la enfermedad de Parkinson y otras alteraciones
neurometabólicas, parece no existir duda en la prevención neural que exhibe
el uso de los antioxidantes, unido al cuidado de otros aspectos del estilo de
vida humana. Sólo estudios prospectivos con un mayor alcance en seres
humanos eliminaran las dudas existentes al respecto. Una aseveración se
impone: ante el conocimiento de varias causas como desencadenantes de
estos procesos, los antioxidantes pudieran ser un aporte en la solución de los
mismos (Halliwell., 2000).
Sin embargo, durante la situación de esfuerzo físico, también
participan enzimas antioxidantes que contribuyen a reducir el daño oxidativo,
como lo son la glutatión peroxidasa (que cataliza la descomposición de los
peróxidos) y la glutatión reductasa (que reduce el glutatión oxidado). Los
niveles de estas enzimas en los eritrocitos y en el músculo esquelético
aumentan con el entrenamiento (Evelo et al., 1992; Ohno et al., 1988). El
ácido úrico (UA) puede ser definido como el resultado final del metabolismo
de las purinas (partes de DNA y RNA). La mayor parte del ácido úrico se
excreta por el riñón, y algo por el sistema intestinal.
Éste ácido, es un poderoso antioxidante, es decir, aquel que tiene la
capacidad de retardar o prevenir la oxidación en presencia de oxígeno, o
sea, se encarga de contrarrestar los efectos nocivos de los radicales libres
(estrés oxidativo); además, ayuda a reducir el radical formado por la reacción
del peróxido con la hemoglobina y a proteger contra la peroxidación lipídica.
(Ames, et al., 1981).
En resumen, durante la realización de ejercicios físicos, el consumo de
oxígeno se incrementa por encima del valor en reposo para sastifacer las
demandas de energía del sistema (Astrand y Rodhal, 1986). En tal sentido,
es sugerido que el elevado consumo de oxígeno durante ejercicios
aeróbicos, isométricos y de resistencia induce un mayor estrés oxidativo que
conlleva a elevadas concentraciones de ERO y RL. (Alesio, 2000, Cooper,
2000).
CAPITULO III
METODOLOGIA
Tipo de Investigación
El presente estudio es de tipo experimental, ya que su propósito
fundamental es el de determinar el efecto de una variable física (el ejercicio
extenuante), que podemos modificar, sobre las variables biológicas
(producción de NO, AU, AAT y EO), de las cuales se quiere conocer su
variación (Hernández et al., 1991).
Población y Muestra
Se seleccionó un grupo de 20 atletas de la IV valida nacional de
triatlón que se realizó en la Vela de Coro Estado Falcón, en septiembre del
2006, a los cuales firmaron una carta de consentimiento (Anexo 1), y de igual
forma se les aplicaron una evaluación previa (Anexo 2). La mencionada
evaluación, fue realizada con la finalidad de aplicar los criterios de inclusión y
exclusión a los participantes, ya que no se admitieron aquellos individuos que
padecían patologías crónicas o presenten cualquier tipo de vicio. Las
muestras fueron de 12 personas que se seleccionaron según los criterios
antes mencionados.
Diseño de la Investigación
La presente investigación presenta un diseño experimental puro, ya
que requirió de la manipulación de una o más variables para lograr
determinar el efecto de las variables independientes (modificables) sobre la
dependiente (efecto a estudiar) (Hernández, et al., 1991)
Instrumentos y/o Medios
• Tubos de ensayo plásticos herméticos de 10 ml, para las tomas de las
muestras de saliva.
• Tubos de ensayo eppendorf de 1,5 ml, para los ensayos químicos.
• Cera rosada para muestras dentales, para la estimulación de la saliva.
• Centrifugadora “Optima II”, tipo BHG 602. Utilizada para centrifugar los
tubos de ensayo de 10 ml.
• Mini Centrifugadora “Cole Parmer” serie 17307. Para la centrifugación de
los tubos de ensayo eppendorf.
• Baño Termorregulado “Kottermann”. Para mantener la temperatura de las
muestras a 37º C.
• Espectrofotómetro “Perkin Elmer” (Lambda 3B). Utilizado para determinar
la absorbancia de las muestras.
• Pipetas automáticas Gilson, de 200 y 1000 µl. Para colocar las muestras y
reactivos en los tubos de ensayo eppendorf.
• Vibrador electrónico “IKA” MS1. Para homogenizar las muestras de saliva.
Reactivos Químicos Para la determinación de NO mediante la reacción de Griess:
• 4,4-tiaminodiscensilsulfono 14 mM em HCl 2N => (Dapsone)
• N-(1-naftil (-etilendiamino)) => (NED)
• (KCl-HCl) pH = 1, 5 => (Buffer)
• Nitrito de Sodio
Para la determinación del AU mediante el método Enzimático:
• Solución Tamponada (250 ml)
• Enzimas Uricasa y Peroxidasa
• Sustratos 4-AAP y DCBS
Para la determinación de la AAT mediante el método de ABTS:
• ABTS (7mM)
• Persulfato de amonio
• Buffer Fosfato (pH 7.4)
• Trolox y Etanol
Para la determinación del Hidroperóxido lípidico (EO) mediante el metodo de
FOX
• Reactivo de FOX
• Patron (Peróxido de hidrogeno)
Sistema de variables
Variables independientes: La variable independiente de este estudio fue: El
Triatlón. Natación 1.500 metros, Ciclismo 40 Km y carrera a pie 10 Km.
Variable dependiente: Producción de Óxido Nítrico, Ácido Úrico, Actividad
Antioxidante Total y Estrés Oxidativo de los sujetos estudiados.
Sistema de hipótesis
Hipótesis general
- Si el ejercicio físico extenuante de los triatletas elite, tiene un efecto
benéfico sobre el organismo, en cuanto a la producción de óxido
nítrico, ácido úrico, actividad antioxidante total y estrés oxidativo,
entonces es de esperarse que la actividad antioxidante del organismo
sea suficiente para contrarrestar el efecto del estrés oxidativo
producido por ejercicio físico extenuante, también la producción de
ácido úrico y actividad antioxidante total sea mayor que la producción
de estrés oxidativo.
Análisis estadístico
Los resultados fueron expresados como la media más o menos la
desviación estándar de la media. Mediante un análisis de varianza (ANOVA)
Alpha colocado a-priori a p=0.05 corregida por la técnica de Bonferroni para
múltiples comparaciones, para determinar si existen diferencias
estadísticamente significativas, el cual se analizaron con el programa SPSS
11.
Procedimiento
Toma de saliva:
Se realizaron tres tomas de saliva, luego de haber seleccionado a los
participantes y firmado la carta de consentimiento. El procedimiento fue el
siguiente:
Primer día: a los participantes aceptados para el estudio: (1) se les
realizaron la medición del peso, talla y composición corporal; (2) llenaron un
cuestionario para la determinación de su condición física; y (3) se les realizó
la Toma de la Primera Muestra de saliva. Esta primera muestra se realizó 24
horas antes del triatlón, y consistió en que los participantes suministraron una
muestra de saliva dentro de un tubo de ensayo, bajo la supervisión de los
asistentes de la investigación. Cada participante suministro 5 ml de saliva en
un tiempo de 5 minutos aproximadamente.
Segundo día: Toma de la Segunda y Tercera Muestra de saliva. La segunda
muestra de saliva se realizó 1 hora antes de comenzar el triatlón, mientras
que la tercera muestra de saliva se realizó inmediatamente después de
finalizar el triatlón; ambas muestras se tomarán siguiendo el mismo
procedimiento de la primera.
Todas las muestras se colocaron en hielo y fueron trasladadas a un
congelador en un tiempo menor a 2 horas, donde fueron congeladas a -5º C
aproximadamente.
Análisis de las Muestras:
Luego de descongelar las muestras de saliva fueron centrifugadas a
3.000 rpm, con la centrifugadora BHG 602, durante 10 minutos, para separar
la saliva de cualquier otro elemento como la cera. Se colocaron las muestras
en los tubos de ensayo eppendorf junto con los reactivos, como lo demuestra
la Tabla 1.
Determinación del NO
Para determinar la producción de NO, se utilizo la Reacción de Griess,
la cual consistió en la aplicación de los reactivos junto con las muestras de
saliva obtenidas de los participantes como se describe en la Tabla 1., y se
aplicaro el procedimiento de la siguiente manera:
Los tubos de ensayo se clasificaron en “Muestra” (donde se colocaron
las muestras de saliva), “Nitrito de Sodio” (se utilizaron para hacer la curva
de calibración del NO) y “Blanco” (se utilizo para calibrar el
espectrofotómetro). Luego de colocar los reactivos (como lo muestra la Tabla
1), los tubos de ensayo “Muestra” se centrifugarán a 5.000 rpm, en la Mini
centrifugadora “Cole Parmer”, durante 10 minutos. Al terminar la
centrifugación, se colocarán todos los tubos eppendorf en el baño
termorregulado durante 10 minutos a 37º C.
Por último, cada muestra se situó dentro del espectrofotómetro a 540 nm,
para determinar los valores de absorbancia (ABS), conociendo de esta
manera su concentración de nitrito y así estimar la producción de Óxido
Nítrico de cada uno de los participantes.
Tabla 1. Reactivos que contienen las distintas muestras a utilizar para la determinación del Óxido Nítrico (NO).
La producción de NO se calculó aplicando la siguiente fórmula:
1
0
ββ−
=AbsNO
Donde: NO. Producción de Óxido Nítrico. Abs. Absorbancia de la muestra.
β0. Coeficiente de la concentración µM.
β1. Constante de la concentración µM.
Nombre de los contenidos
Nitrito de Sodio Muestra N1 N2 N3
Blanco
Pasos Cantidades
1º
100µl
Dapsone
100µl
Dapsone
100µl
Dapsone
100µl
Dapsone
100µl
Dapsone
2º
100µl NED
100µl NED
100µl NED
100µl NED
100µl NED
3º 50µl Saliva
50µl NaNO2
25µl NaNO2
12,5µl NaNO2
50µl H2O
4º 750µl Buffer
750µl Buffer
775µl Buffer
787,5µl Buffer
750µl Buffer
Determinación del Ácido Úrico (AU)
La concentración del UA se determino aplicando un kit (Qualitest,
enzimático, el cual plantea la utilización de los reactivos descritos en la Tabla
2. Éste método fue aplicado de la siguiente manera:
Los tubos de eppendorf se clasificaron en “Muestra” (para las muestras de
saliva), “Patrón” (para determinar la absorbancia del patrón) y “Blanco” (para
calibrar el espectrofotómetro).
Después de colocar los reactivos correspondientes (descritos en la Tabla 2),
se procedió a incubar a 37ºC durante 10 minutos y se determino la
absorbancia en el espectrofotómetro a 520 nm. Luego de obtener los valores
de absorbancia, se calculo la concentración de UA según la siguiente
fórmula: UA = (ABS muestra/ABS Patrón) x concentración Patrón (10 mg/dl).
Tabla 2. Reactivos que contienen las distintas muestras a utilizar para el
estudio del UA.
Nombre de las muestras Muestra Patrón Blanco
Pasos Contenido
1º 25µ Saliva
25µ Patrón 25µ H2O
2º 1000µ Reactivo
1000µ Reactivo
1000µReactivo
Determinación de la AAT
Para la determinación de la AAT se utilizo el Método ABTS, el cual
consiste en la aplicación de los reactivos junto con las muestras de saliva
obtenidas de los participantes como se describe en la Tabla 3. Aplicando el
procedimiento de la siguiente manera:
Se clasificaron los tubos de ensayo en “Muestra” (para las muestras de saliva
y determinar el % de decoloración), y “Blanco” (2 para la calibración del
espectrofotómetro).
Para medir la absorbancia de las muestras, se graduó el espectrofotómetro a
734 nm y se procedió a colocar las muestras de saliva junto con los reactivos
como lo presenta la Tabla 3. La medición de la absorbancia se realizo
colocando la muestra en el espectrofotómetro, se tomo el primer valor
inmediatamente para obtener la Absorbancia sin antioxidante (DOsin) y el
segundo valor 6 minutos después para obtener la Absorbancia a los 6
minutos (DO6min). Estos dos valores son introducidos en la fórmula
establecida por el Método ABTS para calcular el % de decoloración (%Dc), el
cual se utilizo para determinar la AAT.
Formula: %Dc= (Dosin - DO6min/DOsin*100
Tabla 3. Reactivos que contienen las distintas muestras a utilizar para la
determinación de la AAT.
Nombre de las muestras Blanco Muestra
Pasos Contenido
1º 975µ Buffer
975µ Buffer
2º
25µ ABTS
3º ---------------- 10µ Saliva
La AAT de las muestras se calculó mediante la siguiente fórmula:
1
0
ββ−
=AbsAAT
Donde:
AAT. Actividad Antioxidante Total.
β0. Coeficiente de la concentración.
β1. Constante de la concentración. Abs. Absorbancia de la muestra.
Determinación del EO
La concentración de EO en las muestras de saliva de los participantes
se determino aplicando el Método de FOX por la determinación de
hidroperóxidos lipídicos, el cual plantea la utilización de los reactivos
descritos en la Tabla 4. Éste método se aplico de la siguiente manera:
Los tubos de eppendorf se clasificarán en “Muestra” (para las muestras de
saliva), “Patrón” (para determinar la absorbancia del patrón) y “Blanco” (para
calibrar el espectrofotómetro).
Luego de mezclar las muestras de saliva con los reactivos como lo describe
la Tabla 4, se agitaron las muestras, se incubaron a 37ºC durante 30 minutos
y se centrifugaron a 5.000 rpm por 5 minutos. Después de esto, se determino
la absorbancia de las muestras en el espectrofotómetro a 560 nm.
Tabla 4. Reactivos que contienen las distintas muestras a utilizar para la
determinación de los hidroperóxido lipídico (EO).
El EO se determinó empleando la siguiente fórmula:
( ) 2*
1
0
ββ−
=AbsEO
Donde: EO. Producción de Estrés Oxidativo.
β0. Coeficiente de la concentración µM.
β1. Constante de la concentración µM. Abs. Absorbancia de la muestra.
Nombre de las muestras
Patrón Muestra P1 P2 P3
Blanco
Pasos Contenido 1º
50µ H2O
75µ H2O
50µ H2O
_________
100µ H2O
2º
50µSaliva
_________
_________
_________
_________
3º
________
25µ Patrón
50µ Patrón
100µ Patrón
_________
4º
900µ FOX
900µ FOX
900µ FOX
900µ FOX
900µ FOX
CAPITULO IV
Análisis de los resultados El propósito fundamental de este capítulo es reportar los resultados
obtenidos en esta investigación en correspondencia con los objetivos
planteados. En consecuencia, a continuación se presenta la información
correspondiente al efecto del ejercicio físico extenuante sobre la producción
de óxido nítrico y ácido úrico, actividad antioxidante total y estrés oxidativo en
las muestras de saliva de triatletas elite.
Características Descriptivas de los Sujetos
Un total de 12 personas 5 mujeres y 7 hombres, participantes de la IV
valida Nacional de triatlón olímpico realizado en el estado Falcón 2006,
fueron analizados para determinar el efecto del ejercicio físico extenuante
sobre las variables dependientes. En la Tabla 5 se presentan los resultados
de la estadística descriptiva de los sujetos estudiados.
Tabla 5. Características descriptivas de los sujetos.
Variables Descriptivos
Edad (Años) 21,08 + 1,31
Peso (Kg) 59,33 + 6,43
Estatura (Mts) 1,70 + 0,06
% Grasa 18,91 + 2,69
Cintura (Cm) 77,16 + 5,57
Cadera (Cm) 87,75 + 5,15
Imc (Kg/m2) 20,42 + 0,68
Tiempo (seg) 7842,42 + 594,45
Los datos representan la media + la desviación estándar.
Efecto del ejercicio físico extenuante sobre la producción de óxido nítrico.
Los resultados de la ANOVA de medidas repetidas no revelaron una
diferencia significativa en las concentraciones de NO en las muestras de
saliva obtenidas (Fig. 1). 24 horas y 1 hora antes e inmediatamente después
de finalizar el triatlón (24 h: 70.08 + 12.42 µM; 1 h: 60.12+15.07 µM; Idesp
57.42+11.42 µM.). De igual manera, las comparaciones múltiples a posteriori
tampoco revelaron una diferencia entres las tres medias. Estos resultado
parecen indicar que el ejercicio físico extenuante en atletas entrenados no
tiene un efecto principal sobre la producción de NO en saliva.
Figura 1 Efecto del Ejercicio Físico Extenuante sobre la Producción de Oxido Nítrico.
Los valores representan la media + desviación estándar. Los resultados no revelaron diferencia significativa entre las medias de los grupos. (p < 0. 05)
Efecto del Ejercicio Físico Extenuante sobre la Concentración de Ácido Úrico.
En relación al efecto del ejercicio físico extenuante sobre la
concentración de ácido úrico en saliva (Fig. 2). Los resultados de la ANOVA
de medidas repetidas revelaron un efecto significativo del ejercicio físico
extenuante sobre la concentración de AU en las muestras de saliva
obtenidas de los triatletas (p< 0.05). En ese sentido, las comparaciones
múltiples a posteriori revelaron que la concentración de AU inmediatamente
0, 00 10, 00 20, 00 30, 00 40, 00 50, 00 60, 00 70, 00 80, 00 90, 00
24H 1H Idesp Tiempo
Óxi
do N
ítric
o (µ
M)
después del triatlón (Idesp) fue significativamente mayor que la
concentración de AU 24 h y 1 h antes de competencia (24 h: 1.34 + 0.68
mg/dl; 1 h: 1.95 + 0.92 mg/dl; e Idesp: 3.52 + 1.57 mg/dl). . De igual manera,
la concentración de AU 1 h antes del triatlón fue significativamente mayor a
la concentración de AU 24 h antes de la competencia (p< 0.001).
0,00
0,50
1,00
1,50
2,00
2,50
3,00
3,50
4,00
4,50
24H 1H Idesp
Tiempo
Ácid
o Ú
rico
(mg/
dl)
Figura 2. Efecto del ejercicio físico extenuante sobre la producción de Ácido Úrico.
Los valores representan la media + desviación estándar. * = Indica diferencia significativa en comparación a la concentración de AU 24 H antes de la competencia (p < 0.001). † = Indica diferencia significativa en comparación a la concentración de AU 1 H antes de la competencia (p < 0.044) X = Indica diferencia significativa en comparación a la concentración de AU 24 H (p < 0.507).
† *
×
Efecto del ejercicio físico extenuante sobre la actividad antioxidante total de la saliva de los triatlonistas.
Dado que la Actividad Antioxidante Total los resultados de la ANOVA
de medidas repetidas revelaron un efecto significativo del ejercicio físico
extenuante sobre la concentración de la AAT (mM) en 24 h (1.41+0.25) 1 h
(1.01+0.27) e Idesp (1.90+0.42) (Fig. 3).
0,00
0,50
1,00
1,50
2,00
2,50
3,00
24H 1H Idesp
Tiempo
Act
ivid
ad A
ntio
xida
nte
Tota
l (m
M)
Figura 3. Efecto del ejercicio físico extenuante sobre la actividad antioxidante
total.
† *
Los valores representan la media + desviación estándar. *= Indica diferencia significativa en comparación a la concentración de la AAT 24 H (p < 0.034). † = Indica diferencia significativa en comparación a la concentración de la AAT 1 H antes de la competencia (p < 0.000). x = Indica diferencia significativa en comparación a la concentración de AAT 24 H antes de la competencia (p <0,012)
×
Efecto del ejercicio físico extenuante sobre el estrés oxidativo en la saliva de los triatlonistas.
Después de aplicar la ANOVA de medidas repetidas, revelaron que
hubo un efecto significativo con respecto al ejercicio físico extenuante sobre
el EO medido como (hidroperóxidos lipídicos µM) (Fig. 4) en la saliva de los
deportistas. De igual forma, las comparaciones indicaron que el EO a las
24 h fue significativamente mayor (90.84+9.39) que Idesp (69.75+11.77)
(p<0,002) fue menor en comparación a 24 h antes y 1 h antes.
Figura 3. Efecto del ejercicio físico extenuante sobre la producción de estrés
oxidativo.
0, 00
20, 00
40, 00
60, 00
80, 00
100, 00
120, 00
24H 1H Idesp
Tiempo
Estr
és O
xida
tivo
(µM
)
* †
Los valores representan la media + desviación estándar. *= Indica diferencia significativa en comparación a la concentración del EO 24 H (p < 0.002) y † = 1 H antes de la competencia (p < 0,094)
Efecto del ejercicio físico extenuante sobre las variables dependientes en la saliva de triatletas.
En resumen se puede concluir que en la saliva de los atletas la AAT y
la concentración de de AU inmediatamente después de la competencia
fueron mayores en comparación a 24 h y 1 h antes. Por otro lado, el EO y
NO disminuyeron aunque la reducción del NO no fue estadísticamente
significativo (Tabla. 6).
Tabla 6. Efecto del ejercicio físico extenuante sobre Variables dependientes.
Variables 24 horas 1 hora Idesp.
EO(µM) 90.84 + 9.39 85.24 + 13.90 69.75 + 11.77∗†
AAT(mM) 1.42 + 0.25 1.02 + 0.27∗ 1.91 + 0.42∗†
AU(mg/dL) 1.35 + 0.68 1.95 + 0.93∗ 3.52 + 1.57∗†
NO(µM) 72.08 + 41.16 60.13 + 50.00 57.42 + 37.30
Los datos representan la media + la desviación estándar. ∗ = diferente de 24 H. † = Diferente 1 H.
CAPÍTULO V
DISCUSIÓN DE LOS RESULTADOS
El propósito fundamental de esta investigación estuvo dirigido a
examinar el efecto del ejercicio físico extenuante sobre la producción de NO,
AU, AAT y EO en saliva de triatletas elite.
Efecto del ejercicio físico extenuante sobre la producción de NO.
Los resultados de este estudio no mostraron diferencias significativas
sobre la producción de NO en la saliva luego del ejercicio físico extenuante,
solo se encontró un trabajo donde se dice que el ejercicio extenuante causa
un aumento del NO en saliva que el uso de un adaptogeno evitó este
aumento (Panassian et al., 1999). Sin embargo Jungersten y col (1997)
analizaron sujetos de ambos sexos entrenados y no entrenados, luego de 2 h
en la bicicleta ergométrica, y encontraron un incremento en la producción de
NO a nivel del plasma.
Efecto del ejercicio físico extenuante sobre la producción de AU.
Los resultados revelaron un incremento después del ejercicio físico
extenuante en la producción de ácido úrico en la saliva, en comparación a
24 h y 1 h antes, lo cual parece indicar que el ácido úrico aumenta la
capacidad de la respuesta del organismo para compensar el efecto del
ejercicio físico. Owen-Smith y col (1998) reportaron que el ejercicio físico
incremento el ácido úrico en la saliva. Aguiló y col (2005) estudiaron 8
voluntarios participantes de de una competencia de ciclismo de montaña
(171 km), el cual analizaron muestras de sangre, 3 horas después de
finalizar una competencia, donde examinaron el efecto del ejercicio físico
exhaustivo sobre la AAT, y AU, en la que se reportaron que la AAT y el AU
después del ejercicio exhaustivo aumentó compensando así el EO inducido
por el ejercicio.
Efecto del ejercicio físico extenuante sobre la producción de la AAT.
Los resultados de este análisis mostraron un incremento de la AAT en
la saliva después del ejercicio físico extenuante, el cual representa una
respuesta del organismo similar a la del AU, por tanto parece indicar que la
capacidad antioxidante total busca compensar con una mayor capacidad
neutralizante en relación al EO producido por el ejercicio físico. Estos
resultados soportan previos hallazgos sugiriendo que la respuesta del
ejercicio físico extenuante puede evitar algunos factores de riesgo, como
enfermedades cardiovasculares y muerte celular producida por el EO.
Efecto del ejercicio físico extenuante sobre el EO.
Los resultados exhibieron una disminución de los niveles de estrés
oxidativo en la saliva de los atletas después del ejercicio físico en relación a
sus valores 24 h y 1 h antes del ejercicio físico extenuante. Sin embargo
Aguiló y col (2005) concluyeron que después del ejercicio físico exhaustivo
hay un amento en el EO. Entre las posibles explicaciones a este fenómeno
podrían estar las diferencias en el tipo de alimento consumido por los
triatlonistas y el tipo de entrenamiento diario. Por otra parte Margaritis y col.,
(1997) estudiaron la no evidencia del EO después de un triatlón, doce
triatletas participaron en este estudio, tomándoles muestras de sangre antes
y después de un triatlón, estos investigadores encontraron que después de
finalizado el triatlón no sufrieron de daños oxidativos, y la magnitud de las
defensas antioxidantes aumento.
CAPÍTULO VI
CONCLUSIONES
Los objetivos específicos de este estudio estuvieron dirigidos a
examinar el efecto del ejercicio físico extenuante sobre la producción de
óxido nítrico, ácido úrico, actividad antioxidante total y estrés oxidativo en
saliva de triatletas elite, de un grupo de 12 personas altamente entrenados
luego de realizar un triatlón olímpico Natación 1.500 metros, Ciclismo 40 Km
y carrera a pie 10 Km. En tal sentido, entre las principales conclusiones que
se arribaron a través de este estudio, se pueden mencionar las siguientes:
- El ejercicio físico extenuante no obtuvo diferencias significativas
sobre la producción del NO ya que su disminución no es
estadísticamente significativa; lo que explica que la producción esta
siendo compensada por el AU y la AAT.
- El ejercicio físico extenuante tiene una disminución de radicales
libres. Sin embargo, el ejercicio físico induce como respuesta del
organismo un incremento de sus mecanismos antioxidantes, y en
consecuencia es capaz de compensar la producción de radicales
libres.
- Esta capacidad antioxidante total aumentada por el ejercicio físico
está presente no sólo en respuesta a un ejercicio de larga duración,
sino también en condiciones básales, lo cual podría ser beneficioso
durante las 24 horas del día.
- Con respecto al AU los resultados indican que el efecto del ejercicio
físico extenuante influyen favorablemente ya que aumento
estadísticamente significativo después de la realización del mismo,
modulando así los riesgos del estrés oxidativo: las enfermedades
cardiovasculares y el envejecimiento prematuro.
- Para finalizar los resultados de la presente investigación señalan
que el ejercicio físico extenuante fue asociado a una eficiente
actividad antioxidante total y ácido úrico, ya que esto puede
constituir una respuesta para contrarrestar los radicales libres. Esto
explica en gran parte que el efecto del ejercicio físico extenuante
puede ser saludable para el organismo de los triatletas elite.
También es recomendable que los triatlonistas que participaron en
este estudio continúen con su plan de entrenamiento diario, ya que
el entrenamiento aumenta el sistema antioxidante.
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