PENGARUH PEMBERIAN ESTROGEN TERHADAPEKSPRESI CALCITONINGENE RELATED PEPTIDE, PROTEIN GENE PRODUCT 9.5, DAN TYROSINEHYDROXYLASE PADA EPITEL MUKOSA VAGINA TIKUS WISTAR YANGDILAKUKAN OVOREKTOMI BILATERAL I Gede Ngu!" H!# W$%!#! Su#!Program DoktorProgram Studi Ilmu KedokteranProgram PascasarjanaUniversitas UdayanaDenpasarA&'(!)Tu%u!* Pe*e+$($!*,Mengetahui peranCGRP, PGP9.5danTHpada mekanismepatogenesis perubahan epitel mukosa vaginatikus Wistar akibat penurunan hormonestrogenMe(-de Pe*e+$($!*, Ranangan penelitian iniadalahrandomized post test only controlgroup design.!elompok perlakuan adalahtikus post ovorektomi bilateral "angdiberikan estrogen. !elompok kontrol adalahtikus post ovorektomi bilateral "ang tidakdiberikan estrogenH!'$+ Pe*e+$($!*,#alam penelitian inidigunakan seban"ak $% ekor tikus Wistar&Ratus 'orvegius( sebagai sampel "angterbagi men)adi* kelompok masingmasingber)umlah +, ekor tikus kelompok perlakuandan +, ekor tikus kelompok kontrol. #alampembahasan ini akan diuraikan hubunganekspresi CGRP, PGP 9.5 dan TH padakelompok perlakuan dan kontrol. -nalisismemperlihatkan bah.a ekspresi CGRP padakelompok kontrol +/ kali meningkatdibandingkan dengan kelompok perlakuan.&0R 1 +/, p 1 2,22+(, ekspresi PGP 9.5 padakelompok kontrol +/ kali meningkatdibandingkan dengan kelompok perlakuan&0R1 +/, p 1 2,22+(, ekspresi THpadakelompok kontrol *9,$$ kali meningkatdibandingkan dengan kelompok perlakuan&0R 1 *9,$$, p 1 2,22+(,S$./u+!*,3kspresi CGRP palingterpengaruh dengan pemberian estrogen padakelompok perlakuan dibandingkan denganekspresi PGP9.5danTHpada kelompok"ang samaK!(! Ku*0$ 1 0vorektomi bilateral, estrogen,CGRP, PGP 9.5, TH, perubahan epitelmukosa vaginaK-e'/-*de*'$ 1 4 Gede 'gurah Harr" Wi)a"a 5ur"aL!/-!* Pe*e+$($!* PENDAHULUAN0vorektomi bilateraladalahoperasipengangkatankedua ovarium melaluilaparotomi atas indikasitertentu. 0perasi tersebutmengakibatkan penurunankadarhormonestrogen"angmengakibatkan menopause.5ementara, menopausemerupakan masalahkesehatanperempuanterkaitdengan anatomi dan 6isiologimukosa vagina dimana)umlah menopause semakinmeningkat. 5elain itu,menopause mengakibatkanpenipisan mukosa vagina,dispareneu, penurunanlubrikasi vagina, dan keluhansub)ekti6 seperti instabilitasemosi, berkeringat malam,terasa semburan panas,insomnia, berdebar7debardan penurunan konsentrasi.Pengaruh estrogenterhadap vagina adalahkekeringan pada vagina,kehilangan kelenturan, rasa iritasi, hiperalgesia atau n"erisaat berhubungan, "angsering akan dirasakan selamaberhubungan &dispareneu(.Hal ini umumn"a ter)adikarena penurunan estrogen dimanasalahsatumekanismebagaimana estrogen dapatmempengaruhi vagina adalahmelalui e6ek langsungn"apada target sel di vagina.Reseptor estrogen sangatban"ak di vagina, danestrogen merangsangproli6erasi epitel sel divagina danremodeling daripembuluhdarah.!arenaitu,penurunan kadar estrogenmen"ebabkan dis6ungivagina&Ting, dkk., *22%(8erbagai upa"atelahdilakukan untuk mengatasikeluhan dan ge)ala terkaitde6isit hormonal tersebut,baik melalui terapi topikalmaupun sistemik denganterapi sulih hormone. 'amunhasiln"a masih belummemuaskan dan bahkankontroversi. 5elain itu,keberhasilan terapi topikal)uga tergantung padaketepatan dosis karena targetterapi adalahlangsungpadasel epitelial9 bukanmengaktivasi proteinpengendalin"a. Tambahanpula estrogen )uga didugabersi6at karsinogenik.Mekanisme ker)aestrogen diduga melibatkanprotein gene product 9.5&PGP 9.5( "ang terdapat pada)aringan sara6, melibatkan6ungsiproteolytic post-translational"angbeker)a7sama denganCGRP7likeimmunoreactivity"angka"aserabut sara6 men"okongpembuluh darah dan otothalus nonvasular.Mekanisme ker)aestrogen diduga )ugamelibatkan TH dimanagenn"aterletakpadalenganpendek kromosom ++p+5.5"angterdiriatas+2kpasangbasa.Mekanisme ker)aestrogen pada terapi sulihhormon adalah belum)elasdandidugamelibatkan)alurpers"ara6an. Terapi sulihhormon sendiri adalah )angkapan)ang bahkan sampaipuluhan tahun selamamenopause sehingga sangatberpotensi menimbulkanmasalah kesehatan lainn"aseperti peningkatan risikokanker, in6eksi, keemasanserta depresi &:rit;, dkk.,*225b(. !arena itu dilakukanpenelitian tentang CGRP,PCG 9.5, dan TH dalamkaitann"a dengan mekanismeker)a estrogen sehubungandengan anatomi dan 6isiologivagina, terutama struktur danintegritas mukosa vagina.#ibutuhkan studiditingkat molekuler untukdapat meningkatkan e6ek7ti6itas dan meminimalisasirisiko pemberian estrogen)angka pan)ang tersebut.5elan)utn"a, diharapkandapat men)elaskan meka7nisme ker)a estrogen danhubungann"a dengan ge)alaklinisterutamapadavagina.-pabila dapat dibuktikanadan"a peran CGRP, PGP 9.5dan THpada penelitian inimaka hasiln"a akan dapatmen)elaskan mekanisme barubagaimana ker)a hormonsteroid estrogen terhadapanatomi dan 6isiologikvagina. Mekanisme tersebutterutama "ang melibatkanpersara6an, selain vas7kularisasi dan psikologik.Penelitian ini kemudiandapat )uga dipakai sebagaidata penelitian lan)utan padamanusia baik menopausemaupun andro7pause, disamping menentukanbeberapa indikator bio7molekuler untuk prediksi,diagnosis dan terapi padakondisi kadar estrogenrendah9 terutama padamenopause.METODERanangan penelitian iniadalahrandomi;edpost testonl" ontrol group design.!elompokperlakuan adalahtikus post ovorektomibilateral "ang diberikanestrogen. !elompok kontroladalah tikus post ovorektomibilateral "ang tidak diberikanestrogenHASIL#alam penelitian inidigunakan seban"ak $%ekortikus Wistar &Ratus'orvegius( sebagai sampel"ang terbagi men)adi *kelompok masing masingber)umlah +, ekor tikuskelompokperlakuandan+,ekor tikus kelompok kontrol.#alampembahasanini akandiuraikanhubunganekspresiCGRP, PGP 9.5 dan TH padakelompok perlakuan dankontrolA*!+$'$' E)'/e'$ CGRP, PGP 9.5 D!* THA*(! Ke+-./-) Hu&u*g!* E)'/e'$ CGRP P!d! Ke+-./-) Pe+!)u!* d!* K-*(-+3kspresi CGRP0R 4! 95< pTinggi Rendah!elompokPerlakuan 5 +*+/,22 *,9=7+29,== 2,22+!ontrol +5 *>)i diatas memperlihatkan bah.a ekspresi CGRP pada kelompok kontrol +/ kali meningkatdibandingkan dengan kelompok perlakuan.Hu&u*g!* E)'/e'$ PGP 9.5 P!d! Ke+-./-) Pe+!)u!* d!* K-*(-+ 3kspresi PGP 9.5R0 4! 95< pTinggi Rendah!elompokPerlakuan5 +*+/,22 *,9=7+29,==2,22+!ontrol +5 *>)i diatas memperlihatkan bah.a ekspresi PGP 9.5 pada kelompok kontrol +/ kali meningkatdibandingkan dengan kelompok perlakuan.Hu&u*g!* E)'/e'$ TH P!d! Ke+-./-) Pe+!)u!* d!* K-*(-+ 3kspresi THR0 4! 95< pTinggi Rendah!elompokPerlakuan = ++*9,$$ $,297*,/,/$ 2,22+!ontrol += +>)i diatas memperlihatkan bah.a ekspresi TH pada kelompok kontrol *9,$$ kali meningkatdibandingkan dengan kelompok perlakuanA*!+$'! Mu+($1!$!( P!d! Ke+-./-) Pe+!)u!* d!* K-*(-+3kspresi 8 R0 P 4! 95)idiatasmenun)ukkanbah.aekspresi CGRP "angpalingterpengaruhdenganpemberianestrogenpadakelompokperlakuandibandingkandenganekspresi PGP9.5danTHpadakelompok "ang sama. DISKUSI8laklok dkk&*22%( mendapatkan hasilpenelitian "ang berbedadimana dikatakan bah.asetelah ovorektomi dankemudian diberikanestrogen ter)adipeningkatanserabut sara6"ang mengandung CGRP,ini berarti bah.a ter)adiproli6erasi sara6 selamapemberian estrogen&8laklok dkk.,*22%(.Pada penelitian inididapatkanekspresi CGRPpadakelompokkontrol +/kali meningkatdibandingkan dengankelompok perlakuan.Pemberianestrogensearasigni6ikan menurunkanekspresiCGRP padaepitelmukosavaginatikus. Padapenelitian ini )ugadibandingkan antarakelompok kontrol danperlakuan dengankelompok normal "aitukelompoktikus"angtidakdilakukan ovorektomi dantidak diberikan estrogendengan hasil adan"apeningkatan sebesar 2,2%kali antara kelompokkontrol dan kelompoknormal dan tidak adan"aperbedaan antara kelompokperlakuan dan kelompoknormal. Hal ini sesuaidengan teori "angmen"atakanbah.asetelahdilakukan ovorektomi makaakan ter)adi peningkatanekspresi CGRP dankemudian setelah diberikanestrogen maka ekspresiCGRP akanturun&Moniadkk., *22=(.Penelitian 3lenadkk &*222( dan ?in :andkk &*222( menemukanekspresi PGP9.5menurunpada saat diberikanestrogendanekspresi PGP9.5 meningkat saat tidakdiberikan estrogen. Hal"ang mendasari hal inidikatakan belum )elas.!emungkinan"angter)adiadalah ter)adin"a ke)adiandegenerati6 danregenerative. -ksonaldegenerati6 ter)adi ketikakontinuitas dengan badansel terganggu, akan tetapihal lain )uga dapatberpengaruh. Perubahanstruktural "angberhubungan degenerasisara6 dikatakan ter)adi padauterus selama kehamilan,mendukung kemungkinanbah.a degenerasiberhubungan pada beberapabentuk remodelling sara6.@ariasi normal inimere6leksikan bah.adegenerasi sara6 akandiikuti 6ase restorasi serabutsara6 dan regenerasi. Hallain "ang mungkin ter)adiadalah retraksi serabutsara6. Retraksi ini normalter)adi selamaperkembangan dan padabinatang de.asa. #ikatakanretraksi sara6 iniberhubungan denganberkurangn"apertumbuhansara6 &3lena dan Peter,*2229 ?in :an dkk, *222 (.Pada penelitiandidapatkan ekspresi PGP9.5pada kelompok kontrol+/ kali meningkatdibandingkan dengankelompok perlakuan.Pemberianestrogensearasigni6ikan menurunkanekspresi PGP 9.5 padaepitel mukosa vagina tikus.Pada penelitian ini )ugadibandingkan antarakelompok kontrol danperlakuan dengankelompok normal "aitukelompoktikus"angtidakdilakukan ovorektomi dantidak diberikan estrogendengan hasil adan"apeningkatan sebesar 2,2=kali antara kelompokkontrol dan kelompoknormal dan tidak adan"aperbedaan antara kelompokperlakuan dan kelompoknormal. Hal ini sesuaidengan teori "angmen"atakanbah.asetelahdilakukan ovorektomi makaakan ter)adi peningkatanekspresi PGP 9,5 dankemudian setelah diberikanestrogen maka ekspresiPGP 9.5 akan turun&Monia dkk., *22=(PenelitianTingdkk&*225( mendapatkan bah.apada perobaan binatang"ang dilakukan ovorektomiter)adi peningkatan ekspresiTH. TH relati6 sedikit padabinatang perobaan akantetapi men)adi menngkatseara signi6ikan ketikakadar estogen menurunpada ovorektomi. -ksonsimpatik melepaskannorepineprin men"ebabkankontraksi otot halus, ter)adivasokontriksi danpeningkatan tonus ototvagina. -khirn"apeningkatan serabut sara6simpatikini pada keadaanestrogen "ang rendahmen"ebabkan penurunanaliran darah dan penurunanlumbrikasi. Hal ini sesuaidengan ter)adin"avasokontriksi, penurunanaliran darah dan lumbrikasipada menopause dansetelahoperasi ovorektomipada manusia dan binatangperobaan. pemberianestrogen men"ebabkanpenurunan ekspresi TH danberkurangn"a keluhan7keluhan"angter)adi &Tingdkk., *225(. Pada penelitiandidapatkan ekspresi THpada kelompok kontrol*9,$$ kali meningkatdibandingkan dengankelompok perlakuan.Pemberianestrogensearasigni6ikan menurunkanekspresi TH pada epitelmukosavaginatikus. Padapenelitian ini )ugadibandingkan antarakelompok kontrol danperlakuan dengankelompok normal "aitukelompoktikus"angtidakdilakukan ovorektomi dantidak diberikan estrogendengan hasil adan"apeningkatan sebesar 2,2%kali antara kelompokkontrol dan kelompoknormal dan tidak adan"aperbedaan antara kelompokperlakuan dan kelompoknormal. Hal ini sesuaidengan teori "angmen"atakanbah.a setelahdilakukan ovorektomi makaakan ter)adi peningkatanekspresiTHdankemudiansetelah diberikan estrogenmaka ekspresi TH akanturun &Monia dkk., *22=(.KESIMPULAN 3kspresi CGRPpadaepitel mukosavaginatikus Wistar "ang dilakukanovorektomi pada kelompokperlakuan "ang diberikanestrogen lebih rendahdibandingkan dengankelompok kontrol "angtidak diberikan estrogen.3kspresi PGP 9.5padaepitel mukosavaginatikus Wistar "ang dilakukanovorektomi pada kelompokperlakuan "ang diberikanestrogen lebih rendahdibandingkan dengankelompok kontrol "angtidak diberikan estrogen.3kspresi TH padaepitel mukosavaginatikusWistar "ang dilakukanovorektomi pada kelompokperlakuan "ang diberikanestrogen lebih rendahdibandingkan dengankelompok kontrol "angtidak diberikan estrogen.3kspresi CGRP"ang paling terpengaruhdengan pemberian estrogenpada kelompok perlakuandibandingkan denganekspresi PGP9.5danTHpada kelompok "ang sama.SARAN#ilakukan penelitian lebihlan)ut padamanusiauntukmelihat apakah ovorektomidan pemberian estrogenakan memberikan pengaruhsama.#ilakukan penelitian lebihlan)ut untuk melihatbagaimana pengaruhhormonsteroidlainsepertiprogesteron dan testoteronpada epitel mukosa vagina.#ilakukan penelitian lebihlan)ut untuk melihatekspresi "ang palingberpengaruh terhadap epitelmukosa vagina manusia.#ilakukan penelitian lebihlan)ut untuk mendapatkanpemeriksaan "ang lebihsederhana dan bia"a lebihmurah sehingga bisadipakai sebagaipemeriksaan rutin.RE2ERENSI-nderson, A.R., Rene,G. *22,.Sec. II!asic Principles. "#apter$natomy and%m&ryology. 8erekB'ovakCsG"neolog". +%th3d. p1+2+7+2=. DippinotWilliam B Wilkin.8laklok, -. #., 5mithP.G. *22%.%strogenIncreases "alcitonin'ene-(elatedPeptide-Immunoreactive Sensory Innervation )* (at +ammary 'land. #04 +2.+22*Eneu. +2$+2. Wile" Periodials 4n. p.1 +9*7*2%.8uhanan#avid, D., !uritaTakeshi, Ta"lor Aulia, -., Dubahn#ennis, 8., CunhaGerald, R., CookePaul, 5. *22/.(oleo* Stromal $nd%pit#elial %strogen(eceptors In ,aginal %pit#elial Proli*eration- Strati*ication- $nd "orni*ication.3ndor"nolog" @ol +$9. 'o. +2. The 3ndor"nolog" 5oiet". p.1 %$%57%$5*.Chalar, C., Riheri, -., @iettro, D., Chave;7Genaro, R., 8ianhimano, P., Marmol, '.M., Cruther, !., 8urnstok, G., Co.en, T.,8rauer, M. M. *22$. Plasticity InDeveloping(atUterineSensory.erves/#e(oles)*.'0 $nd/rk$.CellTissue Res &*22$( $+%. 5pringer7@erlag. p.1 +9+7*25.Cunningham, :.G.,Deveno, !.A., 8loom, 5.D.,Haut, A.C.,Rouse, #.A., 5pong, C.F.*2+2. 5e441$natomyandP#ysiology. Chap*1+aternal anatomy.William0bstetri. *$rd 3d. 'e. Fork1 MGra.7Hill.Creative 8ioMart.(ecom&inant 1uman U&i2uitin "ar&o3yl-/erminal %sterase456u&i2uitin t#iolesterase7. *2++. -vailable 6rom1http1EE....reativebiomart.netEdesriptionG$5*$+G/.htm. -kses Aanuari *2+%.#mitrieva, '., 8erkle", !.A. *225.In*luence o* %stradiol on +icturition /#res#old in/#e (atInvolvement o* /#e 1ypogastric .erve. -merian Aournal Ph"siolog".p1+,*%7+,*/. 3dd"5antoso, Moh4stiad)id. *222. 8uku -)ar3tikPenelitian!esehatan. !omisi'asional 3tik Penelitian !esehatan. Penerbit >niversitas 4ndonesia.3lena @. H., Peter G. 5. *222.$3onal Degeneration $nd (egeneration In (at UterusDuring/#e%strous"ycle. -utonomi'eurosiene18asi -ndClinial/%.3lsevier. p1+,=7+/5. ....elsevier.omEloateEautneu. -kses Maret *2+5.:rit;, M.-., 5pero66, D. *225. Chapter1Postmenopausal 1ormone/#erapy.Part 441Clinial 3ndorinolog". 4n 1 Clinial g"neologi 3ndorinolog" B 4n6ertilit".,th 3d.Dipinott William B Wilkins.:rit;,M.-.,5pero66, D.*225b. Chapter1/#e)vary %m&ryology andDevelopment.Part 41 ReprodutivePh"siolog". 4n1 Clinial G"neologi3ndorinolog"B4n6ertilit". ,th 3d.Dipinott William B Wilkins.:ortner, !imberl", 8., 5;"manski. *22,.$natomy o* 0emale Pelvis. The AohnsHopkins Manual o6 G"neolog" and 0bstetris, $rd3d. p1*=/7*,2. DippinottWilliams B Wilkins.:u)isa.a, H., 0kuno, 5. *22,.(egulatory +ec#anismo* /yrosine 1ydro3ylase$ctivity. 8iohemial and 8ioph"sial Researh Communiation $$/. p1 *,+7*,=. -vailable 6rom1 ....sienediret.om. -kses Aanuari *2+%.Ganong, W. *22$. Sec. I,%ndocrinology- +eta&olism 8 reproductive. "#apter 9: 'onadDevelopment 80unction o* (eproduction. Revie.o6 MedialPh"siolog". *+st 3d. 'e. Fork1 MGra.7Hill.Ghatei, M. -., Gu, A., Mulderr", P. !., 8lank, M. -., -llen, A. M., Morrison A. :. 8.,Polak A. M., 8loom 5. R. *225."alcitonin 'ene-(elated Peptide 6"'(P7 in/#e0emale(atUrogenital/ract.Peptides,@ol. =.-nkho4nternational4n.printed in >5-. p.1 /297/+5.Ghatta, 5., 'immagadda, #. *22=."alcitonin 'ene-(elated Peptide UnderstandingIt;s (ole. 4ndian A Pharmaol. @ol. $=&5(, p1 *,,7*/$. Geneti Home Re6erene. *2+*."#romosome 55.-vailable 6rom1http1EEghr.nlm.nih.govEhromosomeE++. -kses Auni *2+%.Heather 8. 8radsha., !aren A. 8erkle". *22*.%strogen (eplacement (everses)variectomy-Induced,aginal 1yperalgesiaIn/#e (at.Maturitas %+1 The3uropean Menopause Aournal. 3lsevier. p.1 +5,7+=5.Hirsh, :R9 #;iad;ius;ko, R9 Thather, '9 Mann, H9 Watkins, Claire9 Parums, #inah@9 5peake, G9 Hollo.a", 8rian9 8unn, Paul -9 :ranklin, W-. *22/. %pidermal'ro5-. p.1 5/$75/9.5la"eden, 0. #., !evin, H., Rebea, C.5. *225.%strogen%n#ances "ystatin"%3pression In /#e +aca2ue ,agina.The Aournal o6 Clinial 3ndorinolog" BMetabolism. @ol. /9&*(, p1//$7/9+. 5hmittgen, T.#. BDivak, !.A. *22/.$nalyzing real-time P"( data &y t#ecomparative "6/7 met#od.'ature Protools. @ol. $=(, p1++2+7++2/. -kses0ktober *2+%.5ong, F.8., H.ang, !., !im, #.A. *229.Inervation o* ,agina+icrodissection andImmuno#istoc#emical Study.Aournal o6 5eJ B Marital Therap" $5&*( p1 +%%7+5$. 5mith Peter G., Houbina 3lena @. *2+2. $3onal Degeneration $nd (egeneration In (atUterus During /#e %strous "ycle.-utonomi 'eurosiene1 8asi -ndClinial /%. 3lsevier. p.1 +,=7+/5.5mith P. G., -lper R. H., Mi;e -. D., Houbina 3. @. *2++. $cute $nd "#ronic %strogenSupplementation Decreases Uterine Sympat#etic Innervation In)variectomized$dult ,irgin(ats.Histopatholog"1 Cellular -ndMoleular8iolog". >niversidad #e Muria #ibliotea Cienti6ia. http1E....ehu.esEhistol7histopathol. -kses -pril *2+5.5u;uki,-.,Watanabe, H., Mi;utani, T.*22/.'lo&al %3pressionin+ouse,aginae%3posed to Diet#ylstil&estrol.5oiet" 3Jperimental 8iologi and Mediine. p1=$*7=%2. -vailable 6rom1 ebm.rsm)ournals.om. -kses Aanuari *2+%.Ting,-.F., 8laklok,-.#.,5mith, P.G.*225.%strogen(egulates,aginalSensoryand $utonomic .erve Density in (at. 8iolog" o6 reprodution ,+. p1+$9,7+%2%.-vailable 6rom1 ....biolreprod. 0rg. -kses #esember *2+$.Thomas,M.P.,Potter, 8.@.D. *2++./#e Structural!iology o* %strogen +eta&olism.Aournal o6 5teroid 8iohemistr" and moleular 8iologi. p1+7*$. 3lsevier.-vailable 6rom1 ....elsevier.omEloateE)sbmb. -kses #esember *2+$.Wi;menn 4nstitute o6 5iene. *2++./#e 1uman 'ene "ompendium. -vailable 6rom1http1EE....geneards.orgEgi7binEarddisp.plKgeneL>CHD+. -kses #esember*2+$.Mavier, G., Aullen, -., Ghislaine, 3. *22/.%stradiol Increases Uret#ral /one t#roug#/#e 4ocal in#i&ition o* .euronal .itric )3ide Synt#ase %3pression. The-merian Aournal o6 Ph"siolog". p1/5+7/5,.Haidi. M., 8reimer, D.H., Ma4nt"re, 4. *222.!iology o* Peptides *rom /#e calcitonin'enes. ?uarterl" )ournal o6 3Jperiment Ph"siolog". p1$,*7$9,.Houbina 3lena, @., :an ?in, 5mith Peter, G. *22/.,ariation In Uterine InnervationDuring /#e %strous "ycle In (at. The Aournal 06 Comparative 'eurolog" $9,.Wile"74ss, 4n. p.1 5=+75,+. Hhang, H., Gong, :., Guang7Miu, D. *2+*.Plasma 4evel o* "alcitonin 'ene-relatedPeptidainpatients