![Page 1: Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022051214/568141fd550346895daddcef/html5/thumbnails/1.jpg)
Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce
chorób dziedzicznych
![Page 2: Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022051214/568141fd550346895daddcef/html5/thumbnails/2.jpg)
Choroba dziedziczna
• schorzenie spowodowane przez mutacje jednego lub więcej genów lub też aberrację chromosomalną przekazywane w rodzinie w kolejnym pokoleniu
• zmiany w DNA zostają przekazane w gametach rodziców bądź też pojawiają się we wczesnych etapach rozwoju zarodkowego (jako mutacje de novo)
![Page 3: Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022051214/568141fd550346895daddcef/html5/thumbnails/3.jpg)
Test genetyczny
• analiza ludzkiego DNA, RNA, chromosomów, białek i określonych metabolitów
• umożliwia identyfikację odpowiednich genotypów, mutacji, fenotypów lub kariotypu
• wykonywany do celów klinicznych i poradnictwa genetycznego
![Page 4: Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022051214/568141fd550346895daddcef/html5/thumbnails/4.jpg)
Cel wykonywania testu genetycznego
• zdiagnozowanie genetycznej przyczyny choroby
lub• wykazanie, że osoba posiada jedna lub więcej zmian
genetycznych:– mogących spowodować rozwój choroby lub– mogących wywołać chorobę u potomstwa lub– mających znaczenie dla postępowania leczniczego.
![Page 5: Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022051214/568141fd550346895daddcef/html5/thumbnails/5.jpg)
Testy genetyczne oparte na analizie DNA
• niezależne od znajomości patogenezy choroby
• niezależne od ekspresji badanego genu
• wynik testu niezależny od momentu wystąpienia objawów klinicznych czy zmian w środowisku mogących wpływać na ujawnienie się kliniczne genotypów
• wynik testu stały w ciągu całego życia
![Page 6: Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022051214/568141fd550346895daddcef/html5/thumbnails/6.jpg)
Materiał do badań DNA
- krew obwodowa,- hodowla fibroblastów skóry,- plamy krwi, - komórki nabłonka jamy ustnej,- cebulki włosowe,
do badań prenatalnych:- komórki płynu owodniowego,- komórki trofoblastu (możliwość analizy w I trymetrze
ciąży)
Specyficzność analizy nie zależy od rodzaju tkanki użytej do badania.
![Page 7: Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022051214/568141fd550346895daddcef/html5/thumbnails/7.jpg)
Strategie metodyczne w diagnostyce molekularnej
bezpośrednia
analiza mutacji
analiza sposobu dziedziczenia danego genu (analiza sprzężeń)
![Page 8: Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022051214/568141fd550346895daddcef/html5/thumbnails/8.jpg)
Analiza sposobu dziedziczenia (analiza sprzężeń)
• polega na na śledzeniu w rodzinie przekazywania określonego markera genetycznego sprzężonego ze zmutowanym genem
• wykorzystuje fakt kosegregacji loci markera i genu powodującego chorobę – marker i gen ze względu na bliskie położenie na chromosomie dziedziczą się wspólnie
![Page 9: Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022051214/568141fd550346895daddcef/html5/thumbnails/9.jpg)
Markery genetyczne stosowane w analizie sprzężeń
Marker genetyczny – dowolna sekwencja DNA możliwa do identyfikacji, występująca w co najmniej dwóch formach allelicznych
1. SNP - Southern blotting, - PCR-RFLP,- PCR-ASO, - sekwencjonowanie,- mikromacierze
2. Sekwencje powtórzone (np. mikrosatelitarne) - ocena wielkości produktu PCR w żelu
poliakrylamidowym
![Page 10: Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022051214/568141fd550346895daddcef/html5/thumbnails/10.jpg)
Analiza sposobu dziedziczenia (analiza sprzężeń)
• możliwa nawet przy brak znajomości/możliwości bezpośredniej identyfikacji mutacji chorobotwórczej
• konieczność badania rodziców chorego
• nie służy do weryfikacji rozpoznania klinicznego(opiera się na nim)
• umożliwia wykrycie nosicielstwa u krewnych chorego
• obciążona ryzykiem błędu wynikającego ze zjawiska rekombinacji (badanie co najmniej dwóch markerów)
![Page 11: Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022051214/568141fd550346895daddcef/html5/thumbnails/11.jpg)
Analiza sposobu dziedziczenia markera XV2C sprzężonego z genem CFTR w rodzinie ryzyka mukowiscydozy.
![Page 12: Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022051214/568141fd550346895daddcef/html5/thumbnails/12.jpg)
Strategie metodyczne w diagnostyce molekularnej
bezpośrednia
analiza mutacji
analiza sposobu dziedziczenia danego genu (analiza sprzężeń)
![Page 13: Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022051214/568141fd550346895daddcef/html5/thumbnails/13.jpg)
Bezpośrednia analiza mutacji
• weryfikuje rozpoznanie kliniczne
• brak ryzyka błędu diagnostycznego wynikającego ze zjawiska rekombinacji
• konieczna znajomość mutacji powodującej chorobę
Współczesna rutynowa diagnostyka molekularna
– głównie analiza znanych mutacji.
![Page 14: Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022051214/568141fd550346895daddcef/html5/thumbnails/14.jpg)
Bezpośrednia analiza mutacji
przeszukiwanie genu poszukiwanie konkretnej mutacji/grupy mutacji
![Page 15: Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022051214/568141fd550346895daddcef/html5/thumbnails/15.jpg)
• nie wiadomo, która z licznych mutacji powoduje defekt genu
• w populacji brak mutacji specyficznych o dużej częstości występowania
sekwencjonwanie, poprzedzone badaniem metodą przesiewową (SSCP, HA, DGGE)
Przeszukiwanie genu
![Page 16: Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022051214/568141fd550346895daddcef/html5/thumbnails/16.jpg)
Bezpośrednia analiza mutacji
przeszukiwanie genu poszukiwanie konkretnej mutacji/grupy mutacji
![Page 17: Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022051214/568141fd550346895daddcef/html5/thumbnails/17.jpg)
Poszukiwanie konkretnej mutacji - mutacje punktowe
1) analiza restrykcyjna
- PCR-RFLP
- Southern blotting
2) PCR-ASO
3) sekwencjonowanie
4) mikromacierze DNA
![Page 18: Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022051214/568141fd550346895daddcef/html5/thumbnails/18.jpg)
Analiza mutacji punktowej w genie -globiny powodującej anemię sierpowatokrwinkową (Southern blotting).
![Page 19: Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022051214/568141fd550346895daddcef/html5/thumbnails/19.jpg)
Poszukiwanie konkretnej mutacji
– insercje, delecje, duplikacje
1) analiza wielkości produktu PCR – małe delecje
2) Southern blotting – duże delecje lub duplikacje,
– duże powtórzenia trójnukleotydowe,
![Page 20: Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022051214/568141fd550346895daddcef/html5/thumbnails/20.jpg)
Analiza delecji 508 w rodzinie ryzyka mukowiscydozy (analiza długości produktu PCR)
![Page 21: Zastosowanie technik biologii molekularnej w diagnostyce chorób dziedzicznych](https://reader034.vdocuments.site/reader034/viewer/2022051214/568141fd550346895daddcef/html5/thumbnails/21.jpg)
1. Czym spowodowane są choroby dziedziczne?
2. Co to jest test genetyczny i do czego służy?
3. Jaki materiał stosuje się do badania DNA w diagnostyce chorób dziedzicznych?
4. Na czym polega i do czego służy analiza sposobu dziedziczenia?
5. Na czym polega przeszukiwanie genu? Jakie techniki się tu wykorzystuje?