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Recordando...HISTOLOGIA = é a ciência que estuda a estrutura
fina dos diferentes órgãos e tecidos vivos, tanto animais como vegetais.
PATOLOGIA = é o estudo das doenças Pathos= doença, sofrimento / logos= estudo- Patologia é o estudo da doença desde a causa
primária (etiologia) até seu mecanismo de produção ( patogenia)
HISTOLOGIA X HISTOPATOLOGIA
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Por que realizar o exame histopatológico?
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MATERIAIS RECEBIDOS
EXAMES REALIZADOS
PC (s) = Peça(s) cirúrgica(s)
Exame histopatológico
PN = Peças de Necropsia
Exame histopatológico
Cadáver + Peças coletadas na necropsia
Exame necroscópico + exame histopatológico
Esfregaços de punções, imprints...
Exame citopatológico
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ExamesHistopatológicoCitopatológicoNecroscópico
ToxicológicoComplementares
Histopatologia x citopatologia
Fragmento de tecidosVisualizar a arquitetura tecidual
Avaliar os critérios de malignidadeDiagnóstico definitivo
Demorado, mais caro, invasivo
Células esfoliadasNão analiso a arquitetura tecidual
Avalio alguns critérios de malignidadeExame de triagem
Rápido, barato, indolor e pouco invasivo
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Qual a importância da Anatomia Patológica??
- Auxílio ao Clínico / Cirurgião
- Diagnóstico (qual é o problema)
- Prognóstico (o que acontecerá)
- Tratamento – qual ?
- Diagnóstico “post-mortem”
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O que é isso??
Histotécnica
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Histotécnica - fases
1. Coleta ou Colheita do material2. Fixação 3. Clivagem4. Desidratação 5. Diafanização 6. Impregnação 7. Inclusão 8. Microtomia 9. Coloração de rotina 10. Montagem
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1. Coleta / Colheita do material
- Quem realiza esta fase?
- Tipos: in vivo (biópsia) x post-mortem
Biópsia = é a remoção de tecido de pacientes vivos para exame diagnóstico (amostra obtida por biópsia)
- Acondicionar o material, identificar e colocar a substância fixadora de modo adequado são fundamentais neste momento!
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1. Coleta / Colheita do material
- Erros nesta fase:
Fragmento não representativo da lesão Fragmento grandeDiversos fragmentos sem identificação do localFrasco impróprioMaterial em substância inadequadaSubstância fixadora mal preparada ou em pouco
volume
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-Exames prévios
Necropsia: Autorização do proprietário!!!
Requisição
-Dados do animal
-Histórico
-Localização/ descrição
-Suspeita clínica
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Clínica Escola de Medicina Veterinária Dr. Paulo Alfredo GissoniREQUISIÇÃO PARA ANATOMIA PATOLÓGICA - REG.UCB:_______
Policlínica no________________ Data:__________________Dados do animal:Espécie:_________ Idade:__________ Sexo:__________________ Raça:____________Nome:__________Proprietário:_____________________________________________
Material encaminhado/ Tipo de exame:( ) Peça Cirúrgica / Quantidade de peças: ______ / Histopatologia( ) Peças de necropsia / Quantidade de peças: ______ / Histopatologia( ) Cadáver / somente Necropsia (Macroscopia)( ) Cadáver / Necropsia (Macroscopia) com Histopatologia (Microscopia)
Suspeita clínica:__________________________________________
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Histórico:- Local da(s) peça(s) ou órgão (s) encaminhado (s):__________________- Evolução: ( ) horas ( ) dias ( ) meses ( ) anos - Exames prévios com resultados: (se relevantes): __________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
- Nas tumorações mamárias:- Usou anticoncepcional ? ( ) sim ( ) não - Castrado ? ( ) sim ( ) não- Pseudociese? ( ) sim ( ) não- Nas biópsias cutâneas: exames/ tratamentos anteriores? __________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
- Demais informações relevantes:
__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
.............................................................................................. Médico Veterinário Requisitante
(cont. no verso)
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Preencher pelo proprietário/responsável no caso de necropsia:Eu,________________________________, identidade n__________________
expedida por __________, responsável pelo presente cadáver , autorizo o exame de necropsia neste. Informo que o referido animal morreu às_____h. do dia_______, tendo sido trazido: ( ) fresco ( ) resfriado ( ) congelado.
( ) Autorizo sua utilização em aulas práticas. ( ) Não autorizo sua utilização em aulas práticas.
______________________________________Assinatura do responsável
Para preencher no laboratório: Data de entrada / responsável pelo recebimento : _________ / __________
- Macroscopia da(s) peça(s) cirúrgica(s): Data da clivagem:________- Clivado por:________ n° frag.:_____n° cassetes:____ n° blocos:______
________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
- Microscopia: ________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
- Conclusão:_______________________________________________________
__________________________ ____________________________
Assinatura do patologista Data de liberação do laudo
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2) FixaçãoConceito: É o tratamento dado a um tecido a fim de se evitar a deteriorização do mesmo por suas próprias enzimas (autólise) ou por microrganismos. Preserva a morfologia e a composição química do tecido através da insolubilidade das proteínas.
XSangueO2
MitocôndriasBomba Na/K
Lisossomos
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Fixadores químicos: Formol a 10 % Bicromato de potássio-Simples Bicloreto de mercúrio Etanol Metanol
Líquido de Bouin-Compostos Líquido de Zenker Líquido de Helly
Fixadores físicos:
-Frio (congelamento/câmaras frigoríficas)-Calor (fixação de esfregaços)
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Formol a 10%
Fórmula: 100ml de formol 40% (solução estoque)900 ml de água corrente
Ou
1 litro de formol 40% (solução estoque)9 litros de água corrente
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Bom fixador
- agir rapidamente, matando a célula
- não interferir na coloração, aumentando a afinidade
do tecido pelo corante
- preservar morfologia e composição química
teciduais
- evitar a autólise e o crescimento de bactérias e
fungos
- não produzir arterfatos ou estruturas artificiais
- ter alto poder de penetração
- endurecer sem deformar
- ser de baixo custo / "atóxico"
-ter ação conservante
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Requisitos para uma boa fixação
- intervalo mínimo entre a colheita e a fixação
- contato superfícies/ substância fixadora
- fixador = 20x o volume da peça
- espessura da peça = 1-6 mm
-boa colheita
Cadáver12h48h1 semana
FrescoResfriadoCongelado
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2. Fixação
- Cuidados nesta fase:
- Relação tamanho / quantidade do material com o volume da substância fixadora – 20 x o vol da peça
- Substância fixadora: bem preparada
- Relação material x frasco adequado – boca larga
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2. Fixação
- Erros nesta fase:
Fragmento grandeFrasco impróprio - pequenoMaterial em substância inadequadaSubstância fixadora mal preparada ou em pouco
volume
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Descalcificação
- Quando realizar esta fase adicional ?
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3. Clivagem
- É a secção da peça histológica fixada, selecionando a área de maior interesse para estudo
- Nesta fase é feita uma descrição macroscópica do material
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3) Clivagem
Descrição macroscópica de PC
1- Local da (s) peça (s)
2- Quantidade: peça única/ retalho/ fragmentos
3- Formato: irregular/ arredondado/ ovalado
4- Tamanho: ...x...x... cm / .... cm diâmetro
5- Superfície externa
6- Consistência aos cortes
7- Superfície de corte
- São consideradas as seguintes características:
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- Superfície externa
TonalidadeLisa / rugosaRecoberta por pele (parcial, total, tricotomizada)Úlcera/ íntegraEnvolta por tecido (do tipo adiposo, conjuntivo)Nodular/papilomatosa/deprimida/ulcerada/crostosaCoberta de sujidades/sangue/muco/pusPresença de ectoparasitas- Consistência aos
cortesFriável/ gelatinosa/ bem macia/ macia/ esponjosaElástica/ firme-elástica/ firme/ rangente/ pétreaOra macia, ora firme/ deixando fluir líquido
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-Material: Navalha, faca,
bisturi
-Tamanho: 2 a 6 mm
- Finalidade
- Superfície de cortesTonalidade
Irregular/ lisa (compacta)/ fasciculada/ marmóreo/Aspecto fibroso/ untuosa/ lobada ou multilobadacística ou policística (...cm de diâmetro)
Conteúdo dos cistos: consistência (líquido, gelatinoso, caseoso, purulento...)
Tonalidade (brancacenta, pardacenta, rósea, enegrecida, ora.... ora...)
Odor (pútrido, inodoro, amoniacal...)
Planos de corte
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3. Clivagem - Cuidados nesta fase: - Material afiado – não “serrar”
- Tamanho adequado do material – cassetes/lamínula
- Área representativa do que se quer estudar- planos de corte
- Acondicionamento adequado nos cassetes – mesma consistência dos fragmentosErros nesta fase ?
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4) Desidratação (6h)
5) Diafanização (3h) (clarificação)
6) Impregnação pela parafina (2h) - 56 a 58o C
Remoção da água do tecido por substâncias miscíveis com a água
Remoção do álcool por substâncias miscíveis com o álcool e com a parafina
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4. Desidratação
- Cuidados nesta fase: - Desidratação gradual em Álcool etílico...
evitar artefatos- Substituição periódica do álcool- Tempo de permanência do álcool
- Obs. Nesta fase ocorre retração tecidual
Erros nesta fase ?
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5. Diafanização
- Cuidados nesta fase: - - Substituição periódica do Xilol (xileno)
- Tempo de permanência no Xilol
- Obs. Nesta fase os fragmentos ficam translúcidos (diáfanos)
Erros nesta fase ?
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6. Impregnação pela parafina
- Cuidados nesta fase: - Substituição periódica da Parafina
- Tempo de permanência na Parafina
- Temperatura adequada
Erros nesta fase ?
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7) Inclusão em parafinaParafina fundida .... 56o C .... solidificar à temperatura
ambiente
- molde apropriado
- altura = 1,5 cm
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7. Inclusão em parafina
- Cuidados nesta fase ?
- Obedecer critérios de consistência e tamanho dos fragmentos, de acordo com a lamínula
- Erros nesta fase ?
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8. Microtomia
- Cuidados nesta fase ?
- Navalha afiada- Espessura dos cortes- Técnico com experiência- Temperatura do banho-maria- Temperatura da estufa
- Erros nesta fase ?
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9) Coloração de rotina: H. E.
- corantes: Hematoxilina e Eosina
- Hematoxilina ..... corante básico ..... cora estruturas
(natural / vegetal) ácidas Por ex. núcleo
- Eosina ..... corante ácido ..... cora estruturas
(artificial) básicas Por ex. citoplasma
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9. Coloração de rotina
- Cuidados nesta fase ?
- Preparo adequado dos corantes- Respeitar os tempos de cada sub-fase da
coloração- Substituição periódica das substâncias
utilizadas
- Erros nesta fase ?
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-Colorações especiais (histoquímicas)- exemplos:
- reações que evidenciam a natureza química das substâncias contidas nos tecidos - Azul de Toluidina
- PAS
-Tricrômico de Masson
- Impregnação pela prata (Gomori)
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- Colorações para citopatologia- exemplos:
-Hematoxilina e Eosina
-Romanowsky (Diff-Quick, Giemsa, Wright)
-Papanicolau
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10) Montagem
-Bálsamo do Canadá / Goma de Damar
CitológicaHistológica
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10. Montagem
- Cuidados nesta fase ?
- Cobrir adequadamente os cortes histológicos com as lamínulas
- Utilizar o Bálsamo na diluição correta – evitar bolhas
- Erros nesta fase ?