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PROF. MARCELO TEIXEIRA PACHECO
UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SULFACULDADE DE AGRONOMIA
DEPARTAMENTO DE PLANTAS DE LAVOURA
PARTE II
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TRANSFERÊNCIA DOS GENES CLONADOS PARA A PLANTA
PRINCIPAIS MÉTODOS
Transformação via Agrobacterium tumefaciens
Biolística ou pistola de genes
Eletroporação (descarga elétrica)
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VETOR (veículo) DE TRANSFORMAÇÃO DE TRANSGENES
GALHA DA COROA
Sintoma infecção por A. tumefaciens Plasmídeo Ti
A. tumefaciens
TRANSFORMAÇÃO VIA Agrobacterium tumefaciens
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Agrobacteriumtumefaciens
A. tumefaciens
Plasmídio Ti
T-DNADNAcromossômico
T-DNA
Célula vegetaltransformada
Tumor dagalha
Cromossomo
TRANSFORMAÇÃO VIA Agrobacterium tumefaciens
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TRANSFORMAÇÃO VIA Agrobacterium tumefaciens
Célula vegetal
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Co-cultivo de células da planta com Agrobacterium
“desarmada”
Transferência para meiode cultura com antibiótico, herbicida ou outro método
de seleção
Regeneração da planta transgênica
Testes da planta transgênica em laboratório e mais tarde
a campo
PRINCIPAIS ETAPAS DA TRANSFORMAÇÃO VIA Agrobacterium tumefaciens
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Bombardeamento de partículas ou Biolística
GENE DE INTERESSE
MICROPARTÍCULASDE OURO
DNA ADERE ÀSPARTÍCULAS
ACELERAÇÃODAS PARTÍCULAS
LIBERAÇÃODO DNA NO
NÚCLEO
SELEÇÃO DASCÉLULAS
TRANSFORMADAS
REGENERAÇÃODAS PLANTAS
TRANSGÊNICAS
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TIPOS DE PISTOLAS DE GENES
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PISTOLA DE GENES EM AÇÃO
CLICAR AQUI PARA VER ANIMAÇÃO
(após a animação recarregar a apresentação)
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EXEMPLO DE TESTE A CAMPO
Milho transgênico Bt
(Resistente a diferentes insetos)
Milho não transgênico
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Gene de seleçãoResistência a antibiótico,
Resistência a herbicida, …Gene Bt
CASSETE DO GENE Bt
UM GENE SIMPLIFICADO
Promotor Seqüência de terminação
Seqüência codificando gene Bt
Controla quando, como e quanto o
gene vai ser expresso
Contém a informação do que o gene faz
Diz onde termina o gene
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GENES DEVEM SER “CONSTRUÍDOS” ANTES DE SEREM USADOS NA TRANSFORMAÇÃO DE PLANTAS
PROMOTOR, GENE E SEQÜÊNCIA DE TERMINAÇÃO PODEM VIR DE ORGANISMOS DIFERENTES
PORQUE A EFICIÊNCIA DE TRANSFERÊNCIA DO TRANSGENE É BAIXA (1 A 5%) É NECESSÁRIO USAR UM GENE MARCADOR PARA SELEÇÃO.
(RESISTÊNCIA A ANTIBIÓTICOS E A HERBICIDAS MAIS COMUMENTES USADOS, MAS EXISTEM OUTRAS TÉCNICAS)
NECESSÁRIOS VÁRIOS EVENTOS DE TRANSFORMAÇÃO PARA SELECIONAR UM TRANSGÊNICO COM AS CARACTERÍSTICAS DESEJADAS
NEM TUDO É TÃO SIMPLES
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EXEMPLOS DE DIFERENTES EVENTOS DE TRANSFORMAÇÃO
BATATA RESISTENTE AO FUNGO Verticillium dahliae
Transgênico
Não-transgênico Transgênico
Transgênico