![Page 1: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/1.jpg)
การวเคราะหหาแอมเฟตามนในปสสาวะคนโดยใช HS- SPME และ GC
Determination of amphetamine in human urine
by headspace solid-phase microextraction and gas
chromatography
Presented By นายอนสรณ ดษฐสวรรค รหส 5
1312333
![Page 2: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/2.jpg)
สารเสพตด AMP = Amphetamine MA = Methamphetamine MDA= 3,4-methylenediamine
amphetamine MDMA= 3,4-methylenediamine
methamphetamine MDEA= 3,4-methylenediamine
ethylamphetamine
![Page 3: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/3.jpg)
กฎหมายยาเสพตด และ การออกฤทธ
ยาเสพตดใหโทษ (ตาม พ.ร.บ.ยาเสพตด 2522)
- ประเภทท 1 ยาเสพตดใหโทษชนดรายแรง เชน แอมเฟตามน , เมทแอมเฟตามน , ยาอ สารออกฤทธ
อนพนธของแอมเฟตามนส ( MDA MDMA MDE )
- เปนกลมออกฤทธกระตนระบบประสาทสวนกลาง คอ กระตนหรอ เพมการทำางานตอระบบประสาทสวนกลาง มฤทธทำาใหหวใจเตนเรว ความดนโลหตสง กระปรกระเปรา
![Page 4: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/4.jpg)
วธการวเคราะห
•Headspace (HS)•Solid-phase microextraction (SPME)
•Gas Chromatography ( GC )
![Page 5: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/5.jpg)
Headspace (HS) การนำาเอาไอของสารตวอยางทอยในชองวาง
H eadspace ไปวเคราะหหาองคประกอบตาง ๆ โดยเทคนคแกสโครมาโตกราฟ
วธ Headspace ตวอยางทเปนของแขง ของเหลว หรอ แกส จะถกใสใน vial และปดฝา
สนท หลงจากนนจงอน vial เพอทำาใหสารประกอบทระเหยไดแยกออกจากตวอยางในรป
ของแกสไปอยในชน headspace ซงอยเหนอชน ของแขงหรอของเหลว ตวอยางทเปนแกสจะเขาไป
อยในชน headspace มากนอยแคไหนขนอยกบ คา partition coefficient ของสารแตละชนด
![Page 6: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/6.jpg)
ใชในการวเคราะหหาสารระเหยงายและกงระเหยในสารและ
ของเหลวทางชววทยา เชน สารเสพตด ยาลดอาการเศราซม สเตย
รอยด แอลกอฮอล ยาแกปวด เปนตน
SPME(Solid-phase
microextraction)
![Page 7: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/7.jpg)
SPMEสาร polymer ท coated
บน silica fiber จะทำาหนาท absorb สารตวอยางทเปน Volatile Compounds ใน
ขวดเกบตวอยาง แลวนำา fiber ท absorb สารตวอยางแลว
มาฉดใน injector port ของ GC หรอ - GC MS
สาร polymer ท coatedบน fiber จะแตกตางกนโดยขนอยกบ สารตวอยางทเรา
ตองการวเคราะห
![Page 8: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/8.jpg)
ขอดของการใช SPMEใชงาย
คาใชจายตำา ไมตองใชตวทำาละลายในการสกด
ใชไดกบสารตวอยาง ทมคณสมบตเปนสารทระเหยได SPME ยงสามารถใชรวมกบเทคนค Liquid Chromatography ( LC )
![Page 9: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/9.jpg)
Gas Chromatography ( GC )ทำาหนาทในการแยกองคประกอบของสารทสามารถระเหยกลายเปนไอ (Volatile organic compounds)ไดเมอ
ถกความรอน กลไกทใชในการแยกองคประกอบตางๆ ในสารตวอยางอาศยหลกของความชอบทแตกตางกนขององคประกอบในตวอยางทมตอเฟส 2 เฟส คอ Stationary
phase และ Mobile phase
![Page 10: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/10.jpg)
ดเทคเตอรทใชในการตรวจ สารประกอบอนทรย ประกอบดวย
แกสไฮโดรเจนจะถกจดใหตดไฟ ดวย heater ไฟฟาทอยใกลๆ กบ
Flame jet
แกสพาและสารตวอยางทออก จากคอลมนจะเขาสเปลวไฟ ทำาให
สารเกดไอออนไนเซชน ไดเปน อเลกตรอนจะวงไปยง Flame jet
ไอออนบวกจะเคลอนทไปยงอเลกโท รด สญญาณทเกดถกสงไปยง อ
เลกโทรมเตอร และบนทกสญญาณดวยเครองบนทกโครมาโทแกรม
Flame ionization detector (FID)
![Page 11: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/11.jpg)
Introductionการศกษาของการทดลองใช SPME ในชวง 10 ป
ทผานมาเปนทยอมรบกนวา SPME มสมรรถนะสงในการเตรยมตวอยางโดยเรมพฒนาขนครงแรกใน
ป ค.ศ.1989 มการวเคราะหสารโมเลกลใหญในตวอยางชวภาพทหลากหลาย เชน ปสสาวะ เลอด
และเสนผม
การศกษางานวจยในครงนประเมนและหาปจจยบางตวทมผลตอคา recovery เพอนำาไปในการสกด
แอมเฟตามนจากปสสาวะโดย HS-SPME
![Page 12: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/12.jpg)
สารเคมทใชในการทดลอง
สารเคม ( Methanol , K2CO3 , NaCl และKOH ) สารละลาย AMP , MA , MDA , MDMA และMDEA จาก United Nations International Drug Control Programme
- เตรยมในเมทานอลทความเขมขน062. , 0.65 , 0.69 , 0.71 และ 072 mg/ml ตามลำาดบ
![Page 13: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/13.jpg)
อปกรณสำาหรบการทดลอง
อปกรณ SPME และไฟเบอร100 µm polydimethylsiloxane
( 100 µm PDMS) สำาหรบสาร Volatiles
ตวอยางปสสาวะทปราศจากยา เกบจากผชายสขภาพด สำาหรบเตรยมสารมาตรฐานในปสสาวะและปสสาวะ
ควบคม
ขวดสกดตวอยาง เปนขวดแกวปรมาตร 9ml พรอมฝาปดแบบยางซลโคน และฝาอลมเนยมสำาหรบปดผนก
![Page 14: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/14.jpg)
สภาวะของเครอง Gas Chromatography ( GC )
การวเคราะหใชเครอง GC 8000 Top ของ ThermoQuest Italy
คอลมนชนด AT-5 ขนาด30m .x 0.25m. I.D. ซงเปน (ความหนาของฟลม 025. µm)
ตวตรวจวด FID แกสตวพาใชฮเลยม ทอตราการไหล 1 ml/min.
อณหภมสำาหรบแยกสาร เรมตน 40ºc เปนเวลา 1 นาท และเพมขน 220ºc ไปจนถง 280ºc ทอตรา 20ºc/นาท และคงทเปนเวลา 5 นาท
วเคราะหดวยโปรแกรม C-R6A Chromatopac
![Page 15: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/15.jpg)
การเตรยมตวอยางดวย SPMEนำาขวดแกวสำาหรบสกด ชงเกลอใสลงไปในขวด
ตามดวยตวอยางปสสาวะและรบปดผนกฝาทนท ใหความรอนทอณหภมเหมาะสมตามเวลาทกำาหนด
นำาไปฉดเขาเครอง GC โดยสารถกดดซบเปนเวลา 1 นาท
ทำาความสะอาดไฟเบอรโดยใหความรอนท 250ºc เปนเวลา 1 ชวโมง เปนประจำาทก
วน
![Page 16: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/16.jpg)
ผลการทดลองและการอภปราย
จากการทดลองขนตนโดยการใช HS-SPME จากงานวจยทอางองพบขอแตกตางของคา recovery ระหวาง ตวอยาง
ปสสาวะท spiked ดวย AMP หรอ MA และท spiked ดวย MDA หรอ MDMA หรอ MDEA
ดงนนจงแยกพฒนาวธการสกดสำาหรบ AMP และ MA ออกจาก
MDA , MDMA และ MDEA
![Page 17: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/17.jpg)
การพฒนากระบวนการของ HS-SPME สำาหรบ AMP และ MA
พบวาทอณหภม 60 ºc ใหคา recoveries ทดทสด จงใชอณหภมนในการศกษาพารามเตอรตวตอ
ไป
เตรยมขวดแกวตวอยาง และชง K2CO3 นำาหนก 1 กรม ใสลงในขวดไป ใสปสสาวะท spiked
ดวย AMP (1559 ng/ml) ปรมาตร 1ml
![Page 18: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/18.jpg)
เวลาทเหมาะสมสำาหรบการดดซบสาร คอ 15 นาท หลงจากการทดสอบทเวลาตางกน 3 เวลา (5 , 10 และ 15 นาท) จงถกมานำาใชเพอปรบปรงความ
แมนยำาตอไป
สารกลมแอมเฟตามนส การระเหยขนอยกบปจจยพนฐานบางตว เชน pH หรอความอมตวของเกลอ คา recoveries ของการสกดใหผลคงทหากมการปรบ
พารามเตอรเหลานใหเหมาะสม
![Page 19: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/19.jpg)
พบวาผล recovery ของ AMP ทใช K2CO3 (1g/ml, จดอมตว) อณหภม60 ºc และเวลาท การดดซบสารทดทสด 15 นาท ใหคา
recoveries ทดทสด
![Page 20: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/20.jpg)
Calibration curves , คาrecoveries และขดจำากดตำาสดของ
วธ HS-SPME สำาหรบวเคราะห AMP และ MA
![Page 21: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/21.jpg)
Chromatogram AMP
Fig. 1. GC-FID Chromatogram of AMP. A urine sample containing 5000 ng AMP analysed by the HS-SPME method Conditions are in the text.
0 18
![Page 22: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/22.jpg)
การพฒนาขนตอนการเตรยมตวอยางดวย วธ HS-SPME สำาหรบ MDA , MDMA
และ MDEA วธขางตนทใชกบ AMP และ MA เมอนำามาใชกบ
MDA , MDMA และ MDEA จะใหคา recovery ท ตำาเหมอนกนทง 3 สาร
ตวอยางปสสาวะท spiked ดวย MDA สกดทสภาวะ แตกตางจากทใชกบ AMP และ MA ( อณหภมทใช และปรมาตรตวอยาง )
![Page 23: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/23.jpg)
เนองจาก MDA ใหคา recovery ตำามาก เมอใชอณหภม 60ºc ดงนนจงใช ปสสาวะท spiked ทมความเขมขนสงกวาคอ
2760 ng/ml อณหภม 70ºc คา recoveries กยงคงตำา จงเพมอณหภมใหสงขน คอ 80 ,90 และ 100ºc เปนเวลา
45 นาท พบวาท 90ºc ใหผลทดทสด ดงตาราง
![Page 24: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/24.jpg)
สำาหรบปรมาตรของตวอยางถกทดสอบเพอปรบปรง sensitivity ของวธ โดยการเปรยบเทยบปสสาวะท spiked ดวย MDA (2760
ng/ml) เปน 90ºc นาน 45 นาท และ 1 5 นาทสดทายใหทำาการดดซบ แตละปรมาตรใหม
การทำาซำาสองครง คาเฉลยของคา recoveries ของ MDA แสดงดงตาราง ปรมาตรตวอยางท
เหมาะสมคอ 4ml เนองจากใหคา sensitivity สง
![Page 25: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/25.jpg)
Calibration curves , คาrecoveries และขดจำากดตำาสดของวธ
HS-SPME ในการวเคราะห MDA , MDMA และ MDEA
![Page 26: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/26.jpg)
สรปผลการทดลอง
SPME เปนเทคนคทเรว ไมใชตวทำาละลายใน การสกด ซงเปนทางเลอกหนงของการเตรยม
ตวอยางสำาหรบวเคราะหกลมแอมเฟตามนสใน ตวอยางชววตถ นอกเหนอจากวธดงเดมคอการ
สกดดวยตวทำาละลาย และของแขง วตถประสงค ในการศกษานเพอใหไดคา recovery ทสงทสด
โดยใช HS-SPME ดงนนวธการหา AMP และMA ในปสสาวะจงถกพฒนาแยกกบวธสำาหรบหา
MDA , MDMA และ MDEA
![Page 27: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/27.jpg)
THANKS FOR
ATTENTION
![Page 28: Presented By นายอนุสรณ์ ดิษฐสวรรค์ รหัส 51312333](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022061612/56814bfe550346895db8feb7/html5/thumbnails/28.jpg)
Question?