ISOLAMENTO DE MICRO-
ORGANISMOS COM ATIVIDADE
LIPOLÍTICA A PARTIR DE AMOSTRAS
AMBIENTAIS
André Dalcin Salvagni1, Marcelo Zimmerman1 , Joana Wagner Oliveira, Janaina Tibola,
Débora Vom Endt2
1Graduando em Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia, Uergs, Novo Hamburgo – RS, [email protected]
2Docente da Universidade Estadual do Rio Grande do Sul, Uergs, Novo Hamburgo – RS, [email protected]
INTRODUÇÃO
Microorganismos lipolíticos Produtores de Lipase
O biodiesel é uma interessante alternativa de
combustível de fonte renovável e menos poluente.
Enzima envolvida na produção de biodiesel
Produção de Biodiesel
Catalizador inorgânico
Hidróxido de sódio
• alto consumo de energia
• grande quantidade de rejeitos
industriais (transesterificação
química)
Catalizador enzimático
A lipase catalisa a reação de
transesterificação, produzindo ésteres
de ácidos graxos (biodiesel) e glicerol
não contaminado com álcali.
INTRODUÇÃO
(Fonte: Castro H. F. 2004)
INTRODUÇÃO
Reação de Transesterificação
OBJETIVO
Isolar e caracterizar micro-
organismos com atividade
lipolítica obtidos a partir de
amostras ambientais.
PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
Coleta das amostras
ambientais.
Amostras
líquidas
500ml
Amostras
Sólidas
500g
Preparo de cinco
diluições seriadas em
solução salina 0,1%.
Semeadura de 0,1 mL para
cada diluição seriada em placa
contendo meio NA.
Semeadura de 0,5 mL com
em placa contendo meio
NA.
As amostras foram
incubadas por 48horas
à 28°C
Repicagem das colônias com
diferênças macroscópicas com a
técnica de esgotamento em placas de
petri contendo meio NA.
Amostras: Compostagem doméstica.
Óleo utilizado para
coocção.
Conserva de tomate seco.
Isolamento
Repicagem por esgotamento.
PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
Coloração com cristal violeta e
avaliação microscópica para
distinguir fungos de bactérias.
Fungos crescidos em
meio BDA. Bactérias crescidas em
meio NA.
Separação entre fungos e bactérias
Visualização microscópica de bactérias.
Visualização de hifas de fungo.
PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
Crescimento em
erlenmeyes de 125 ml, à
temperatura ambiente por
24 horas no shaker à 150
rpm.
Crescimento dos
fungos em 5 ml de
caldo de batata.
Preparo para o meio de identificação
Crescimento das
bactérias em 5 ml
de Circle Grow.
Erlenmeyer contendo meio circle grow
PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
Observação em
transiluminador UV
302nm.
Fungo Rhizopus
cepa 6150 usado com
controle.
Meios mínimos (1% de tryptona, 0,5% de
extrato de levedura, 0,5 % NaCl )
suplementados com 0,001% de Rhodamina B e
2,5% de azeite de oliva.
As amostras foram
incubadas por 48horas à
28°C
Seleção de micro-organismos produtores de lipase
Controle positivo (Rhizophus 6150, visualizado em luz uv 302 nm
Controle positivo (Rhizophus 6150, vizualizado em luz ambiente.
Alíquota de 20 μl do
inoculo.
RESULTADOS
• Foram Isolados 66 micro-organismos.
– 47 de bactérias e 19 de fungos.
• 32 apresentaram atividade lipolítica.
– (26 de bactérias e 6 de fungos).
Resultado positivo , visualizado em luz uv 202 nm
CONCLUSÃO
• Das 66 colônias, 32 apresentaram atividade
lipolítica, correspondendo a 48,5% do total.
• Maiores estudos serão realizados para
determinar a morfologia micro e macroscópica,
e a quantidade de lipase produzida será
avaliada através de titulação ácido-base.
REFERÊNCIAS
1. Choo DW, Kurihara T, Suzuki T, Soda K, Esaki N. A cold-adapted lipase of an Alaskan psychrotroph, Pseudomonas sp. strain B11-1: gene cloning and enzyme purification and characterization. Appl Environ Microbiol 1998;64(2):486–91..
2. HASAN, F., SHAH, A. A., HAMEED, A. Methods for detection and characterization of lipases: A comprehensive review. Biotechnology Advances, 27 (2009), 782–798.
3. TORTORA, G.J.; FUNKE, B.R.; CASE, C.L. Microbiologia.
Editora Artmed, 6ª edição. 2003.
OBRIGADO