Download - cursus LC-MS 2001
![Page 1: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/1.jpg)
1AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
![Page 2: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/2.jpg)
2AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Cursus LC-MS-2001
1. Introductie massaspectrometrie2. Problematiek LC-MS3. Historisch overzicht LC-MS4. Electrospray5. APcI6. Bespreking MS toepassing AO-MO-CHROM7. Aanhalen praktische problemen
![Page 3: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/3.jpg)
3AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Sir Joseph John Thomson (1856 - 1940)
‘I feel sure that there are many problems in chemistry which could be solved with far more greater ease by this than by any other method. The method is surprisingly sensitive, requires an infinitesimal amount of material and does not require this to be specially purified…’
Statement about the technique of mass spectrometry, made by J.J.Thomson in 1913
![Page 4: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/4.jpg)
4AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Deel 1
1.1 Wat is MS?1.2 Instrumentatie1.3 Ionisatie1.4 Quadrupoolfilter1.5 Tandem massaspectrometrie
![Page 5: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/5.jpg)
5AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
1.1 Wat is MS?
MS is een analysetechniek die ionen in de gasfase bestudeert.Toepassingen:
Kwalitatief en kwantitatiefOrganisch en anorganischStructuuropheldering van onbekende verbindingen
Eerste massaspectrometersir Francis William Aston (1877-1945)Cambridge, 1919
![Page 6: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/6.jpg)
6AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Eerste MS in 1919
![Page 7: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/7.jpg)
7AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Eerste MS spectrum
![Page 8: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/8.jpg)
8AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
1.2 Opbouw MS
InlaatsysteemBronMassa-analysator in vacuümsysteemDetector
![Page 9: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/9.jpg)
9AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Inlaatsystemen
Doel: moleculen introduceren in de bronHoe:
Direct Insertion ProbeGCCE, CECLC
![Page 10: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/10.jpg)
10AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Bron
Doel: moleculen ioniserenHoe:
Electron Impact (EI)Chemische Ionisatie (CI)Desorptie Chemische Ionisatie (DCI)Field Desorption (FD)Fast Atom Bombardment (FAB)Fast Ion Bombardment (FIB)Thermospray (TSP)Thermal Desorption Laser Desorption (LD)Matrix Assisted Laser Desorption (MALDI)
![Page 11: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/11.jpg)
11AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Bron
Electrospray (ES)Atmospheric Pressure Chemical Ionisation (APcI)
Atmospheric Pressure Photon Ionisation (APPI)Sonic Spray Ionisation (SSI)
![Page 12: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/12.jpg)
12AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Analysator
Doel: ionen scheiden op basis van m/zm/z = massa over lading = Thomson (Th)
Hoe:Quadrupoolfilter (Q of q)Iontrap (IT)Magneet Sector (M)Time of Flight (TOF)Fourrier Transform Ion Cyclotron (FTMS)
![Page 13: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/13.jpg)
13AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Parameters van de analysator
Resolutie (R) R= m/∆m10% valley ofwel 50% (FWHM)
Massa-accuraatheidMassa-bereikGevoeligheidScan snelheidPrijs
![Page 14: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/14.jpg)
14AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Vacuümsysteem
Waarom vacuümsysteem?Ionen in de gasfase botsen met luchtmoleculenfragmentatie, verlies van gevoeligheid, verlies van resolutie
Hoe?Vacuümpompen
Voorvacuümpompen (tot 10-3 mb)– rotatievoorvacuümpompen
Hoogvacuümpompen (tot 10-9 mb)– Turbomoleculaire pompen
– Oliediffusiepompen
– Cryogene pompen
![Page 15: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/15.jpg)
15AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Detectoren
Doel: omzetten van ionen in een meetbare stroomHoe?
Electron multipliers (EM)Korte levensduur (enkele jaren)
Photonmultipliers (PM)Lange levensduur (10 jaar)Vnl Q
![Page 16: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/16.jpg)
16AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Werking Detector
![Page 17: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/17.jpg)
17AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Detectoren
Array detectoren (AD)Uiterst gevoeligKlein lineair bereikKwetsbaar en duurMagneet SectorTOFVb: MCP (Q-TOF)
![Page 18: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/18.jpg)
18AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Detectoren: MCP
![Page 19: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/19.jpg)
19AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Detectoren: MCP
![Page 20: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/20.jpg)
20AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Schema electrospray bron
![Page 21: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/21.jpg)
21AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Schema ES bron
![Page 22: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/22.jpg)
22AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Schema APcI bron
![Page 23: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/23.jpg)
23AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
1.3 Ionisatie
Gemiddeld Moleculair Gewicht (Average MW)MW berekend met behulp van de gewogen gemiddelden van de natuurlijke isotopen van elk atoom (bvb zoals vermeld in MI, stoechiometrische berekeningen, ed)
Mono-isotopische Moleculair Gewicht (Nominal MW)
MW berekend met behulp van de massa van het meestvoorkomend isotoop van elk atoom (zoals gemeten met een Q)
![Page 24: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/24.jpg)
24AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Moleculair gewicht (MW)
Exacte Moleculair Gewicht (Exact MW)Is het mono-isotopisch MW, rekening gehouden met de massa-defecten (wordt gemeten via een hoge resolutie MS)
Voorbeeld voor 3 moleculen:Azijnzuur (C2H4O2; 60.0211)Ureum (CH4N2O; 60.0324)2-propanol (C3H8O; 60.0575)
![Page 25: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/25.jpg)
25AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Moleculair gewicht (MW)
Isobaren zijn moleculen met hetzelfde mono-isotopisch MW
Massa-eenheid: u of Da=1/12 van de massa van het 12C atoom=1/NA (NA=6.022 1023 mol-1)=1.66043 10-27 kg
12C = 12.000u
![Page 26: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/26.jpg)
26AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Moleculair gewicht (MW)
N
O
N
N
N
NOO
O
N
Cl
N N
Cl R051211 C-06.79.19.00 MW 705.64 Factor 1C35H38Cl2N8O4(+-)-(CIS)CDU : 3906 mg, 3 unitsITRACONAZOLE
![Page 27: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/27.jpg)
27AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Moleculair gewicht (MW)
Voorbeeld R051211Average MW: 705.6436Mono-isotopisch MW: 704Exact MW: 704.2393
![Page 28: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/28.jpg)
28AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Stikstofregel
Even MW: geen of een even aantal N-atomenOneven MW: oneven aantal N-atomenVoorbeeld R051211:mono-isotopisch MW 704, dus even aantal N-atomen (8)
![Page 29: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/29.jpg)
29AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Ionisatie (beperkt tot ES)
Positief of negatief:M → (M+H)+
M → (M-H)-
Nevenreacties (clustervorming)[M+NH4]+, [M+Na]+, [M+K]+
![Page 30: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/30.jpg)
30AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Fragmentatie (zeer beperkt)
Ion → ion + neutraal door toevoegen van extra inwendige energie
Extra spanningsveldBotsingsenergie (CID, CAD, …)
![Page 31: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/31.jpg)
31AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Massa spectrum
Curve van relatieve intensiteit (RI) in fuctie van m/z
Voorbeeld: R051211MW=704
[M+H]+=705m/z=705
![Page 32: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/32.jpg)
32AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Massa spectrum R051211
![Page 33: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/33.jpg)
33AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Isotopen
Hoofdpiek → mono-isotopisch→ alleen meest voorkomende isotopen
Koolstof: 12C (98.9%) en 13C (1.1%)Voorbeeld: R051211 (C35H38Cl2N8O4)
1x 13C in het skelet →signaal bij 704+1+1=706intensiteit: 1.1% x #C-atomen
2x 13C in het skelet →signaal bij 704+1+1+1=707intensiteit: 1.1% x 1.1% x 35 →verwaarloosbaar
![Page 34: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/34.jpg)
34AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Isotopen
Wat met Cl?35Cl (75.77%) en 37Cl (24.23%)algemeen 3:1voor R051211: piek bij 707Intensiteit: 3:1 x 3:1 = 9:6:1
![Page 35: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/35.jpg)
35AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Isotopen R051211
![Page 36: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/36.jpg)
36AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Isotopen
Wat met Br?79Br (50.69%) en 81Br (49.31%)algemeen 1:1twee Br-atomen in de moleculeIntensiteit: 1:1 x 1:1 = 1:2:1
![Page 37: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/37.jpg)
37AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Isotopen
![Page 38: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/38.jpg)
38AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Isotopen
![Page 39: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/39.jpg)
39AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Clustervorming
Naast [M+H]+
soms ook[M+NH4]+, [M+Na]+, [M+K]+
Voor- en nadeelvoordeel: duidt gemakkelijk MW aannadeel: verlies intensiteit [M+H]+
![Page 40: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/40.jpg)
40AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Massa spectrum R051211
![Page 41: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/41.jpg)
41AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Quizvraag
![Page 42: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/42.jpg)
42AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Meervoudig geladen ionen
OorsprongVoorbeeld R051211: [M+2H]2+
m/z bij (704+1+1)/2 = 353Scheiding 12C en 13C 0.5 uScheiding 35Cl en 37Cl 1 u
![Page 43: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/43.jpg)
43AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Meervoudig geladen ionen
15:19:4502-Oct-1998
AdministratorOpl1
150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800 850 900 950 1000m/z0
100
%
FKC-222-001-002 621 (32.117) Cm (619:625-(610:611+632:633)) 1: Scan ES+ 9.15e7705.5
91495072
353.418687148
256.44453118
325.53254019
354.513249136
671.55920441
707.570918080
708.527327742
727.418685352
729.513366653
730.55518147
![Page 44: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/44.jpg)
44AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Interpretatie MS
API gekendMeten onbekende
verschil → info over onbekendevb: verschil=+16hydroxy of N-oxF → Cl[M+Na]+ → [M+K]+
vb: verschil=+14methyleringCH2 →C=O
Verschil discrete waardenvb: verschil 11?
![Page 45: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/45.jpg)
45AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
1.4 Quadrupoolfilter
º1953, Paul ( Nobelprijs 1989) en SteinwedelRelatief goedkoopEenvoudig en gebruiksvriendelijkResolutie = eenheidScan, gebaseerd op electrostatische velden
![Page 46: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/46.jpg)
46AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Quadrupoolfilter
![Page 47: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/47.jpg)
47AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Quadrupoolfilter
![Page 48: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/48.jpg)
48AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Quadrupoolfilter
DC en RF spanningEnkel DC: blokkageEnkel RF: geen filtering, wel focusScannen?
![Page 49: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/49.jpg)
49AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Scan technieken
Twee verschillende: full-scan en SIR(M)Full-scaninstelling scan van laag naar hoogideaal voor identificatie werkSIRslechts 1 ion, voor- en nadeelvoordeel: enorm gevoelig (100x)nadeel: geen structuur informatie
Te vergelijken met Single Wavelength en PDA
![Page 50: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/50.jpg)
50AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
1.5 Tandem massaspectrometrie
Combinatie van ‘2 MS’Techniek waarbij fragmentatie spectrum bekomen wordt van een ‘precursor’
Precursor ion (parent ion)Product ion (daughter ion)
Zowel in space als in timeVoorstelling:
MS1 selecteert precursorBotsingscel (fragmenten opwekken)MS2 bepaald fragmentatie spectrum
Voorbeelden zijnQqQ, QqTOF, BqQ, BqB, BqTOF, BqIT, IT, FTMS, QqQqQ, …
![Page 51: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/51.jpg)
51AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
1.5 Tandem massaspectrometrie
Gebruik:Structuur ophelderingQuantificatie!!!!
Voordeel:Uitzonderlijk selectiefZeer gevoelig
Nadeel:Bijzonder duur (uitgenomen IT)Ingewikkeld?
![Page 52: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/52.jpg)
52AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
1.5 Tandem massaspectrometrie
Enkele voorbeelden:Zonder noemenswaardige voorscheiding:
Geef het zuivere massa spectrum van verbinding ZGeef alle verbindingen die fragment Y bevatten (Precursor Scan)Geef alle verbindingen die X verliezen (Constant Neutral Loss scan)vb: alle Cl-verbindingen opsporen, verlies van water, verlies van MeOH, …
![Page 53: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/53.jpg)
53AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
1.5 Tandem massaspectrometrie
![Page 54: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/54.jpg)
54AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
1.5 Tandem massaspectrometrie
Kwantificatie:Kiezen twee ionen (overgang)
![Page 55: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/55.jpg)
55AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Deel 2: Problematiek LC-MS
2.1 Waarom koppeling HPLC met MS?
2.2 Vloeistof → gas2.3 Polaire moleculen2.4 Niet-vluchtige buffers
![Page 56: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/56.jpg)
56AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
2.1 Waarom koppeling met MS?
![Page 57: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/57.jpg)
57AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
2.2 Vloeistof →gas
Algemene gaswet leert:0.1 mL/min →135 cm3 gas bij 1 atmMS onder hoog vacuumvacuumpompen maar 5 cm3 gas bij 1 atmOplossingionisatie bij atmosferische drukdifferentieel pompen!Vloeistofstroom splitten!
![Page 58: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/58.jpg)
58AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
2.3 Polaire moleculen
HPLC = ideale scheidingstechniek voor polaire moleculenPolaire moleculen zijn meestal thermolabiel Zachte ionisatie techniek gebruikenES, APcI, (APPI, SSI), …
![Page 59: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/59.jpg)
59AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
2.4 Niet-vluchtige buffers
Worden gebruikt om HPLC methode te optimaliserenTe vermijden bij LC-MS
contaminatie ionenbron en MSsignaal onderdrukking (ion supression) MS spectrum
Beter met moderne ionenbronnen (Z-spray)Vluchtige buffers te prefereren
![Page 60: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/60.jpg)
60AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Niet-vluchtige buffersystemen
Vluchtige buffers:Ammonium acetaat, ammonium formiaat, ammonium carbonaatMierenzuur, azijnzuur, TFA
Te vermijden bij LC-MSAlle fosfaten, boraten en sulfatenZwavelzuur, fosforzuur
Opletten met modifiers, zoalsHPβCD, DEA, TEA, TRIS, …
![Page 61: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/61.jpg)
61AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Deel 3
Historisch overzicht LC-MS
![Page 62: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/62.jpg)
62AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Historisch overzicht LC-MS
Koppeling met gaschromatografie en massaspectrometrie reeds in 1958(gas, apolaire moleculen, laag moleculair gewicht, geen buffers, …)Vanaf ’70 koppelingspogingen HPLC en MSMeest succesvol en meest verbreid: ES (’90)
![Page 63: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/63.jpg)
63AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Historisch overzicht LC-MS
Moving belt: EI en CI (MacFadden, 1976)(Janssen 1983 -1986)Direct Liquid Introduction (1974)Thermospray (Marvin Vestal, 1983)(Janssen 1986 -1994)Particle Beam (Willoughby, 1984, EI en CI)Dynamic FAB (Caprioli, 1986)(Janssen 1994 -1996)
![Page 64: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/64.jpg)
64AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Historisch overzicht LC-MS
Electrospray (1984, Doyle & Fenn)(Janssen 1994 - )APcI (1974, Horning, opvolger thermospray, doorbraak ’90)(Janssen 1997-)APPI en SSI (eind ’90)nog niet commercieel
![Page 65: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/65.jpg)
65AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Deel 4: Electrospray
4.1 Algemene kenmerken4.2 Reden van succes4.3 Principe4.4 Experimentele gegevens
![Page 66: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/66.jpg)
66AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
4.1 Algemene kenmerken
Electrospray is een fysisch verschijnsel beschreven in 1917 door Zeleny:door het aanleggen van een hoog-electrisch veld op een vloeistof in een capillair wordt een spray van geladen druppels gevormdWordt dagdagelijks toegepast in de verfindustrie (autolak)Dole, 1968, ionisatie-techniekFenn, 1984, introductie electrospray
![Page 67: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/67.jpg)
67AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
4.1 Algemene kenmerken
Ionisatie gebeurt bij atmosferische druk en in de vloeistof faseZachte ionisatie techniek
Weinig inwendige energieLage kinetische energieDus weinig kans op fragmentatie
Ionisatie gebeurt bij lage temperatuur (<100°)Ideaal voor polaire, thermolabiele producten
![Page 68: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/68.jpg)
68AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
4.1 Algemene kenmerken
Debiet vanaf 30 nL/min (nano-ES) tot 1 mL/minES is een ‘concentratiegevoelige’ detector, zoals UV, dus splitten mag!Bepalen van kleine moleculen (MW<100) tot macromoleculenrecord is het tetrameer van een hemoglobineachtige verbindingMW~4 000 000
![Page 69: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/69.jpg)
69AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
4.1 Algemene kenmerken
Bij grotere moleculen meervoudige ladingen mogelijkKan gecombineerd worden met alle MS analysatorenZowel + als –Vb: HHM
![Page 70: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/70.jpg)
70AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
4.1 vb: HHM
![Page 71: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/71.jpg)
71AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
4.2 Reden van succes
Analyse van proteïnenZeer gevoeligGebruiksvriendelijkRobuustRelatief goedkoop
![Page 72: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/72.jpg)
72AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
4.3 Principe
Aanleggen van een hoog electrisch veld (106 V/m, 3kV op een metalen tip van 100 µm)Spray van geladen druppels wordt gevormd Analyt-ion wordt gevormd in de vloeistoffase (klassieke zuur-base chemie)Geladen druppels verkleinen door solvent evaporatie
![Page 73: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/73.jpg)
73AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
4.3 Principe
![Page 74: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/74.jpg)
74AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
4.3 Theorie
Ion-evaporation model (Iribarne and Thomson)Druppel verkleint, Coulomb afstoting vergrootRaleigh limiet overschreven, druppel explodeert: ion in de gasfase (alleen kleine moleculen)
Mechanisme van Doyledoor solvent-evaporatie blijft uiteindelijk alleen ion over (alleen grote moleculen)
![Page 75: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/75.jpg)
75AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
5.0 APcI
5.1 Algemene kenmerken5.2 Principe
![Page 76: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/76.jpg)
76AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
5.1 Algemene kenmerken
Toepasbaar voor moleculen die apolairder zijn en minder ioniseerbaar dan deze voor ESMW<2000Vloeistof debiet 1 tot 2 mL/minMassa-gevoelig (kolom splitting reduceert gevoeligheid)In combinatie met alle massa-analysatorenIonisatie bij hoge temeratuur (~400°C)dus geen zachte ionisatie techniek
![Page 77: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/77.jpg)
77AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
5.1 Algemene kenmerken
Ionisatie gebeurt in de gasfase, echte CIIonisatie gebeurt bij atmosferische druk+ en - ionenToepasbaar voor pesticiden, hormonen, …
![Page 78: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/78.jpg)
78AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
5.2 Principe
Er wordt geen electrisch veld aangelegd aan de tipHoog vloeistofdebiet (1 mL/min – 2 mL/min)Een spray wordt gevormd door het eluens sterk te verhittenIonisatie van de solvent moleculen gebeurt dmv een onladingselectrodeDe geïoniseerde solvent moleculen ondergaan zuur – base reacties in de gasfase
![Page 79: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/79.jpg)
79AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
5.2 Principe
![Page 80: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/80.jpg)
80AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
5.2 Principe
![Page 81: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/81.jpg)
81AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
6 Algemene toepassingen
6.1 Methode Ontwikkeling: SCM6.2 Methode Validatie: specificiteit6.3 Forced Degradation Studies6.4 Troubleshooting: identificatie onzuiverheden/afbraakproducten6.5 Gebruik van MS als supportieve techniek
![Page 82: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/82.jpg)
82AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
6.1 Overzicht HPLC MO
Pro-Active Method
Development - Method Validation
Phase 1- Phase 2 methods
"Locked method"
Phase 3 Method
Development and validation
Supportive methods
Final Method
Development and
Validation
Secondarymethods
![Page 83: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/83.jpg)
83AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Gedetailleerd overzicht
(4)InitialBatchStress
samples (17)Placebo Stability
Excipients (9) ReportStress
(1) (5) solutionNotification of Method screening Optimization Optimization Method descriptionDevelopment Experiments Phase 1 - 2 Method Method is "Locked"
(6) Stress MV level 1 - 2 (16)dry (12)
Peak purity (10) Selectivity SamplesLC-MS/PDA
(7) (15)Retain
Plan PMD the samples Identification/Peak purity ID Sheetstudy (11) LC-MS/PDA/NMR/Others
(3) (13) (14)
(8) Supportive method(s) HPLC CE TLC LC-MS CE-MS etc…
(2)
"Teamleader" co-ordinates the Method Development Process
![Page 84: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/84.jpg)
84AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Screeningsmodule deel 1
![Page 85: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/85.jpg)
85AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Purity bepalingen
Op basis van PDAOp basis van MS
![Page 86: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/86.jpg)
86AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Purity met PDA
Via MassLynx routineEerst integrerenPeak Purity berekenen
0<P<100
Interpretatie P !!!P > 95 OK?
![Page 87: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/87.jpg)
87AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Purity met PDA
Visueel (via overlay)Op basis van 3 PDA spectra
Up-slopeApexDown-slope
![Page 88: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/88.jpg)
88AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Purity met MS
Visueel (via overlay)Op basis van 3 MS spectra
Up-slopeApexDown-slope
![Page 89: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/89.jpg)
89AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Purity met MS
Via MassLynxBepalen van RIC/TIC
![Page 90: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/90.jpg)
90AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
RIC/TIC
RIC = som van alle ionen die product gerelateerdzijnproduct + fragmenten + clustersTIC = som van alle ionenook achtergrond ionen + onbekende ionen + ...
RIC/TIC ≅ 1 (of 100%)
![Page 91: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/91.jpg)
91AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
BPI
BPI = curve van alle basis ionen in de spectraIs soms beter dan TICVb: R149524
![Page 92: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/92.jpg)
92AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
BPI
![Page 93: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/93.jpg)
93AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Identificatie
Beperkte mogelijkhedenInstrumentatieAfspraak spectro
![Page 94: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/94.jpg)
94AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Toepassing SCM deel 1
PurityVoorbeeld R184798
![Page 95: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/95.jpg)
95AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Chemische structuur R184798
HO
O
NO O
O
Cl
HN
OH
![Page 96: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/96.jpg)
96AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Voorbeeld van een sample list in SCM deel I
![Page 97: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/97.jpg)
97AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
R184798 chromatogram
AO-053017:54:37
05-Oct-2000pH=10; 70 gradenSample stress WJAN
0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00Time-1
100
%
MO-90-R184798-1-1-4-16 2: Diode Array 230 1.00Da
1.06e612.35
13.27
![Page 98: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/98.jpg)
98AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
R184798 purity
AO-053017:54:37
05-Oct-2000pH=10; 70 gradenSample stress WJAN
12.00 12.10 12.20 12.30 12.40 12.50 12.60 12.70 12.80 12.90Time0
100
%
MO-90-R184798-1-1-4-16 Sm (Mn, 2x3) 2: Diode Array 230 1.00Da
1.01e6Area
Area%100.00
Area220117.77
Height1005566
Time12.36
12.36;99%;220118
![Page 99: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/99.jpg)
99AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
R184798 PDA-spectra
AO-053017:54:37
05-Oct-2000WJANpH=10; 70 gradenSample stress
200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 350 360 370 380 390 400nm0
100
%
0
100
%
0
100
%
MO-90-R184798-1-1-4-16 1490 (12.568) Cm (1490-1441) 2: Diode Array 6.26e5210.0
MO-90-R184798-1-1-4-16 1465 (12.360) Cm (1465-1441) 2: Diode Array 2.11e6214.0
296.0
MO-90-R184798-1-1-4-16 1454 (12.268) Cm (1454-1441) 2: Diode Array 5.60e5210.0
![Page 100: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/100.jpg)
100AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
R184798 PDA-spectra overlay
AO-053017:54:37
05-Oct-2000WJANpH=10; 70 gradenSample stress
200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 350 360 370 380 390 400nm0
100
%
MO-90-R184798-1-1-4-16 1490 (12.568) Cm (1490-1441) 2: Diode Array 6.26e5210.0
![Page 101: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/101.jpg)
101AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Screeningsmodule deel 2
![Page 102: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/102.jpg)
102AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Toepassing SCM deel II
Purity en IdentificatieVoorbeeld R184798
![Page 103: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/103.jpg)
103AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Voorbeeld van een sample list in SCM deel II
![Page 104: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/104.jpg)
104AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
R184798 chromatogram peak purity
AO-053019:36:29
14-Nov-2000stress pH 2, 70C, 28 dagensample LVOS
12.00 12.10 12.20 12.30 12.40 12.50 12.60 12.70 12.80 12.90 13.00Time0
100
%
MO-90-009-008 Sm (Mn, 2x3) 3: Diode Array 230 1.00Da
8.47e5Area
Area%100.00
Area181795.14
Height845203
Time12.44
12.44;100%;181795
![Page 105: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/105.jpg)
105AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
R184798 PDA overzicht
AO-0530stress pH 2, 70C, 28 dagensample LVOS 15-Nov-2000
200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 350 360 370 380 390 400nm0
100
%
0
100
%
0
100
%
MO-90-009-030 1497 (12.582) Cm (1497-1451) 3: Diode Array 7.25e5210
MO-90-009-030 1474 (12.390) Cm (1474-1451) 3: Diode Array 2.00e6212
295
MO-90-009-030 1462 (12.290) Cm (1462-1451) 3: Diode Array 8.08e5210
![Page 106: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/106.jpg)
106AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
R184798 PDA overlay
AO-0530stress pH 2, 70C, 28 dagensample LVOS 15-Nov-2000
200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 350 360 370 380 390 400nm0
100
%
MO-90-009-030 1497 (12.582) Cm (1497-1451) 3: Diode Array 7.25e5210
![Page 107: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/107.jpg)
107AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Overzicht massa spectra
AO-0530stress pH 2, 70C, 28 dagensample LVOS 15-Nov-2000
200 300 400 500 600 700 800 900 1000m/z0
100
%
0
100
%
0
100
%
MO-90-009-030 340 (12.739) Cm (340-326x2.000) 2: Scan ES+ 1.78e6427
411409130
171 213229
294 341
429
430 465 875853
569500585
669663693
837775728
877 998995921
MO-90-009-030 332 (12.434) Cm (332-326x2.000) 2: Scan ES+ 3.63e6427
409130
294182 186213393
296
429
430
853449 487 569528
747693571674
758 855 891 997975
998
MO-90-009-030 329 (12.320) Cm (329-326x2.000) 2: Scan ES+ 2.01e6427
409130
154 258193 296 341391
429
430 853465 569500 571 689679704
757772
819875
899 995939 997
![Page 108: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/108.jpg)
108AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Overlay massaspectra
AO-0530stress pH 2, 70C, 28 dagensample LVOS 15-Nov-2000
200 300 400 500 600 700 800 900 1000m/z0
100
%
MO-90-009-030 340 (12.739) Cm (340-326x2.000) 2: Scan ES+ 1.78e6427
411409130171 213
229294 341
429
430449
465 875853
467 569500585
669663693
837775728
877 998995921
![Page 109: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/109.jpg)
109AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
RIC/TIC
Via MassLynx(vrij ingewikkelde) procedure
![Page 110: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/110.jpg)
110AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
RIC/TIC
AO-053019:44:24
15-Nov-2000LVOSstress pH 2, 70C, 28 dagensample
150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800 850 900 950 1000m/z0
100
%
MO-90-009-030 331 (12.396) Cm (327:331-317:322x2.000) 2: Scan ES+ 1.97e5427.2
409.2
294.2186.2 217.2267.8
393.3378.9
302.4
428.2
449.1
853.3
451.1
465.1
467.1
487.1 500.1 569.0 689.3586.6
822.6770.0
855.3
875.3
877.3
878.4
995.1900.1
![Page 111: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/111.jpg)
111AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
RIC/TIC
Sample Name: MO-90-009-030 Sample ID: sample
# Name RT Area1 RIC4 12.396 540242 RIC3 12.473 1787453 RIC2 12.396 1722274 RIC1 12.473 35829655 TIC 12.473 3955590
![Page 112: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/112.jpg)
112AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Opstellen van ID-sheets
Doel: bundelen van gegevensOnzuiverheden APIAfbraakproducten
Start bij AO-MO-CHROMAO server-Applications-ID-sheetsVroeger: overdracht SpectroNu: MO-CHROM blijft verantwoordelijk
Voorbeeld: R184798
![Page 113: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/113.jpg)
113AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Voorbeeld ID-sheet R184798
![Page 114: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/114.jpg)
114AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Voorbeeld ID-sheet R184798
![Page 115: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/115.jpg)
115AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Voorbeeld ID-sheet R184798
![Page 116: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/116.jpg)
116AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Eindresultaat R184798
![Page 117: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/117.jpg)
117AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
6.2 Methode validatie: Specificiteit
SpecificiteitVoorbeeld Galantamine
![Page 118: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/118.jpg)
118AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Specificiteit
Specificity is the ability to assess unequivocally the analyte in the presence of components which may be expected to be present. Typically, these might include impurities, degradation products, matrices, etc…
![Page 119: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/119.jpg)
119AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Acceptatie criteria
All placebo and blank peaks should be separated from degradants, impurities and the main compoundAll specified and selectivity related substances should be separated from the main compoundAll specified degradants should be separated from each otherAll selectivity degradants and impurities should be separated from the specified degradants and impurities
![Page 120: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/120.jpg)
120AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Acceptatie criteria
All specified impurities should be separated from the degradants and preferably be separated from each otherThe PDA spectra and the ES-MS peak purity analysis should confirm that the API peak is indeed pureThe PDA spectra are comparableThe ES-MS spectra are comparable
![Page 121: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/121.jpg)
121AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Sample list van de specificiteitsstudie van
Galantamine
![Page 122: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/122.jpg)
122AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
6.3 Forced Degradation Study(FDS)
Momenteel nieuwe richtlijnen op komst
![Page 123: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/123.jpg)
123AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
6.3 Forced Degradation Study (FDS)
FDS is an experiment in which the stability indicating power of the assay/purity method for DP has to be demonstrated
![Page 124: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/124.jpg)
124AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
6.3 Forced Degradation Study (FDS)
Wordt meestal uitsluitend toegepast voor HPLC Is geen stabiliteitstudie!Wordt uitgevoerd door de ontwikkelaar zelf
![Page 125: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/125.jpg)
125AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
6.3 Forced Degradation Study(FDS)
Zowel placebo als DP in oplossingTijdsduur experiment: 7 dagen4 meetpunten:
0 en 7 dagenTwee intermediairen
Maximale afbraak 15% na 7 dagenWelke condities?
![Page 126: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/126.jpg)
126AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
6.3 Forced Degradation Study (FDS)
0.01N HCl 70°C 0.01N NaOH 70°C0.03% H2O2 25°CLicht Xe-lamp (cfr. ICH)
![Page 127: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/127.jpg)
127AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
6.3 Forced Degradation Study (FDS)
Peak purity APIPeak purity gespecifieerdeonzuiverheden/afbraakproductenIdentificatie ‘belangrijkste’ onbekenden
![Page 128: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/128.jpg)
128AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
6.3 Forced Degradation Study(FDS)
LC-MS apparatuurPDA 200 - 400 nmMS:
ES ⇔ APcI+ ⇔ -Enkel Q
![Page 129: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/129.jpg)
129AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
6.4 Troubleshooting
Identificatie van onzuiverheden, afbraakproducten, ….
Relatief beperkt (Q) ⇒ hulp SpectroLC-MS niet afhankelijk van UV-chromofoor!
![Page 130: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/130.jpg)
130AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
6.5 Supportieve methode LC-MS
Bepaling van palmitinezuur in project R092670 d.m.v. ES negatief
![Page 131: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/131.jpg)
131AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
R092670
ProbleemPalmitinezuur geen UV-absorptiePalmitinezuur ES neg respons
Aantonen mogelijk?Semi-kwantitatief?
Afbraakproduct na bestraling?Afbraak in stabiliteit DP?
![Page 132: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/132.jpg)
132AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
UV + MS chromatogram palmitinezuur
AO-039517:17:57
22-Jun-20000.5% palmitinezuur lot 00310275
WJAN
5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00 65.00Time1
100
%
-9
100
%
palm_40 2: Diode Array 275 1.00Da
9.59e31.13
palm_40 1: Scan ES- TIC
4.86e651.86
![Page 133: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/133.jpg)
133AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
UV + m/z 255 van MR092670PUA021
AO-039502:06:36
23-Jun-2000MR092670PUA021
WJAN
5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00 65.00Time-5
100
%
0
100
%
R092670B 1: Scan ES- 255 1.00Da
1.26e351.98
19.5314.01
11.319.335.691.51
7.71
18.24
34.8623.28
26.13
30.83
29.01
44.8537.11
39.50
46.4350.07
58.3754.0355.38
60.72
R092670B 2: Diode Array 275 1.00Da
6.47e3
11.85
8.732.40
24.88
17.8441.31
37.53
55.95
48.16
![Page 134: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/134.jpg)
134AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
UV + m/z 255 van ZR092670EXA002
AO-039503:22:30
23-Jun-2000ZR092670EXA002
WJAN
5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00 65.00Time-3
100
%
0
100
%
R092670C 1: Scan ES- 255 1.00Da
4.48e351.98
16.7812.93
7.144.732.21 9.63
34.3319.4932.0828.7623.11
44.8337.20 40.65 50.5648.25 54.18 56.90
R092670C 2: Diode Array 275 1.00Da
8.04e3
24.8413.38
2.38 8.5317.77
19.52
37.53
34.78
29.35
41.30
39.42
46.55
48.15
55.91
54.31
52.49
![Page 135: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/135.jpg)
135AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
UV + m/z 255 van 00J16/F10
AO-053019:17:43
24-Nov-200000J16/F10 start
LVOS
5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00 65.00Time-1
100
%
1
100
%
MO-8-003-004 1: Scan ES- 255 1.00Da
6.61e651.90
4.191.03 9.036.69 14.5611.76 21.7918.16 43.7025.66 33.1329.16 37.56 40.13 47.56 49.9060.9054.67 57.63 64.03
MO-8-003-004 2: Diode Array 275 1.00Da
1.09e4
13.29
11.618.37
40.9634.60
23.6419.8237.26
46.24
54.4647.67
![Page 136: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/136.jpg)
136AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
SIR m/z 255
![Page 137: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/137.jpg)
137AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
UV van ZR92670EXA005 + SIR m/z 255
![Page 138: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/138.jpg)
138AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
7. Enkele praktische problemen
![Page 139: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/139.jpg)
139AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Voorbeeld 1
Opletten met het gebruik van cyclodextrinen in stabiliteitsstalen
![Page 140: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/140.jpg)
140AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
HPβCD
![Page 141: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/141.jpg)
141AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Voorbeeld 1:UV-chromatogramR160371
AO-053014:48:38
12-Oct-2000pH=6; 70 graden
WJAN
2.50 5.00 7.50 10.00 12.50 15.00 17.50 20.00 22.50 25.00 27.50 30.00 32.50 35.00Time-20
100
%
MO-R160371-1-1-005-3 2: Diode Array 230 1.00Da
5.00e424.04
1.14
![Page 142: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/142.jpg)
142AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Voorbeeld 1:UV+MS chromatogram R160371
Stress sample
AO-053014:48:38
12-Oct-2000pH=6; 70 graden
WJAN
2.50 5.00 7.50 10.00 12.50 15.00 17.50 20.00 22.50 25.00 27.50 30.00 32.50 35.00Time8
100
%
-81
100
%
MO-R160371-1-1-005-3 2: Diode Array 230 1.00Da
1.25e424.041.14
MO-R160371-1-1-005-3 1: Scan ES+ TIC
5.09e97.03
6.13
4.781.28
3.43
2.83
8.088.48
24.08
23.7317.98
34.08
![Page 143: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/143.jpg)
143AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Voorbeeld 1: MS spectrum
AO-053014:48:38
12-Oct-2000WJANpH=6; 70 gradenStress sample
150 200 250 300 350 400 450 500 550 600 650 700 750 800 850 900 950 1000m/z0
100
%
MO-R160371-1-1-005-3 140 (7.026) 1: Scan ES+ 6.18e7279.1
221.0
203.0
185.0
155.2
222.0
441.1
383.1
280.1337.0
325.0
384.0
385.1
603.0
545.0
499.0
442.1
487.2
500.1546.1
557.0
823.2661.2
604.1
605.0
765.1
662.2
719.3
663.4
766.2
767.0
985.3
881.2824.2
927.4
882.2928.2
986.2
![Page 144: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/144.jpg)
144AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Voorbeeld 2: fosfaat buffer
Opletten met het gebruik van fosfaatbuffer in stabiliteitsstalen
![Page 145: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/145.jpg)
145AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Voorbeeld 2: fosfaat buffer massaspectrum
![Page 146: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/146.jpg)
146AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Voorbeeld 3: polymeren
Gebruik van polymeren in formuleringen, zoals OpaDry (PEG)
![Page 147: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/147.jpg)
147AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Voorbeeld 3: polymeren
![Page 148: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/148.jpg)
148AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Voorbeeld 4: modifiers en zouten
Modifiers beperken in concentratieS/N daalt (ion supression)Organische zouten kunnen bepaald worden
![Page 149: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/149.jpg)
149AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Voorbeeld 4: modifiers en zouten
Voorbeeld: T002187DEA gebruikt in de HPLC methode
![Page 150: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/150.jpg)
150AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Voorbeeld 4: modifiers en zouten
![Page 151: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/151.jpg)
151AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Voorbeeld 4: modifiers en zouten
![Page 152: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/152.jpg)
152AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Voorbeeld 4: modifiers en zouten
![Page 153: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/153.jpg)
153AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Voorbeeld 4: Na-acetaat
![Page 154: cursus LC-MS 2001](https://reader033.vdocuments.site/reader033/viewer/2022051515/552556b9550346936e8b47d4/html5/thumbnails/154.jpg)
154AO-MO-CHROM - 14 februari 2001 – cursus LC-MS 2001 - WJAN
Besluit
MS toegevoegde waarde MO-CHROMOnafhankelijk van UV-chromofoorZeer gevoeligSemi-kwantitatief (Q)Koppeling met GC,LC,CE,CEC,…MS/MS
identificatiekwantificatieverhoogde selectiviteit (HR)