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COLORAZIONI ISTOCHIMICHE
ALDEIDI E CHETONI
Viene utilizzato il reattivo di Schiff (leucofucsina o acido bis-N-
aminosolfonico), che in presenza di aldeidi o chetoni, in
ambiente acido e in presenza di SO2 in eccesso, dà luogo a un
prodotto colorato (rosso magenta).
Ambiente acido > produzione di aldeidi > legame con la
leucofucsina
Questa reazione viene sfruttata principalmente in 2 tipi di
colorazioni: FEULGEN (DNA) e PAS (carboidrati)
ACIDI NUCLEICI
REAZIONE FEULGENIl DNA è in grado di legare il reattivo di Schiff formando un
composto colorato dopo una leggera idrolisi acida.
Questa idrolisi separa le basi azotate dallo zucchero (il cui gruppo
aldeidico è ora libero di reagire con il reattivo di Schiff). Il
risultato è la colorazione del DNA in rosso magenta.
VERDE DI METILEIl verde di metile, come tutti i composti
derivati dal trifenilmetano, si lega stabilmente
al DNA.
REAZIONE DI FEULGEN:FEULGEN
VERDE DI METILE
CARBOIDRATI
Per la dimostrazione dei glucidi si utilizzano la REAZIONE PAS
(acido periodico-Schiff) o l’ ALCIAN BLU.
REAZIONE PAS
Polisaccaridi (semplici e anche i mucopolisaccaridi), quando
ossidati a mezzo dell'acido periodico (H5IO6), danno origine ad
aldeidi. I gruppi aldeidici vengono quindi rivelati istologicamente a
mezzo del reattivo di Schiff con una colorazione rosso magenta.
ALCIAN BLU
Specifico per i mucopolisaccaridi acidi. E’ una ftalocianina rameica
idrosolubile che si lega ai polianioni dei mucopolisaccaridi acidi,
dando un prodotto colorato in blu.
PAS INTESTINO TENUE
PAS CARTILAGINE
PAS INTESTINO TENUE
PAS RENE
ALCIAN BLU INTESTINO CRASSO
ALCIAN BLU POLMONE
LIPIDI- Coloranti liposolubili (lisocromi)
- Fissazione blanda in formalina
- Taglio direttamente al criostato
I coloranti lisocromi più usati sono:
Oil red O
Sudan rossi (Sudan III e Sudan IV)
Sudan nero B
OIL RED O T. ADIPOSO
OIL RED O
OIL RED O
Sudan IVSUDAN IV
Sudan nero BSUDAN NERO
COLORAZIONIISTOCHIMICHE
Tecniche speciali
MEMBRANA BASALEGomori metenamina silver
E’ il metodo di elezione per lo studio della membrana basale nella biopsia renale.
Si basa sul principio che l’acido periodico agendo su gruppi glicolici e glicoaminici presenti nei mucopolisaccaridi delle membrane basali li ossida a gruppi aldeidici.
Il cloruro di argento è quindi ridotto da questi gruppi aldeidici e precipita come argento metallico.
Pertanto si tratta di una impregnazione argentica.
MEMBRANA BASALEGomori metenamina silver
E’ il metodo di elezione per lo studio della membrana basale nella biopsia renale.
Si basa sul principio che l’acido periodico agendo su gruppi glicolici e glicoaminici presenti nei mucopolisaccaridi delle membrane basali li ossida a gruppi aldeidici.
Il cloruro di argento è quindi ridotto da questi gruppi aldeidici e precipita come argento metallico.
Pertanto si tratta di una impregnazione argentica.
GOMORI METENAMINA SILVER RENE
GOMORI METENAMINA SILVER RENE
PIGMENTI
EMATOGENI- emoglobina- emosiderina- pigmenti biliari
NON–EMATOGENI- melanina- pigmenti lipidici (lipofuscina)- urati
MINERALI Ferro, rame, calcio, amianto
MELANINAFontana-Masson
Metodo di elezione per questo pigmento.
Si tratta di una impregnazione argentica.
Reazione argentaffine: capacità di alcune componenti
tessutali di agire quali sostanze riducenti sui sali di
argento, facendolo precipitare come argento metallico.
FONTANA-MASSON
FONTANA-MASSON
FERRO Metodo di PERLS (Blu di Prussia)
Rivelazione del ferro che si localizza nelle cellule sotto
forma di granuli di emosiderina.
Reazione di Perls: l’HCl libera gli ioni Fe associati alle
proteine, che reagiscono con il ferrocianuro di potassio
formando un precipitato blu detto ferrocianuro ferrico
o Blu di Prussia.
MINERALI
REAZIONE DI PERLS FEGATO
REAZIONE DI PERLS MACROFAGO
REAZIONE DI PERLS MILZA
RAMERodanina
È un metodo usato per determinare il rame nei tessuti. Il suo
accumulo nel fegato e in altri distretti (cornea, SNC) è una
caratteristica del morbo di Wilson, malattia ereditaria
caratterizzata da un eccesso di rame provocato da una ridotta
escrezione biliare del rame.
La tecnica si basa sulla capacità della Rodanina di legarsi sia al
rame libero che a quello associato a proteine.
MINERALI
RODANINA FEGATO
RAME Acido rubeanico
Altro metodo usato per determinare il rame nei
tessuti. L’acido rubeanico reagisce con il rame e
forma dei precipitati nero-verdastri
(Rubeanato di rame)
MINERALI
ACIDO RUBEANICO FEGATO
CALCIOAlizarin Red S (Metodo di Dahl)
Il Rosso di Alizarina (Alizarin Red S) è un
colorante antrachinonico in grado di formare
complessi con il calcio.
MINERALI
ALIZARIN RED S EMBRIONI DI TOPO
CALCIOVon Kossa
E’ una impregnazione argentica.
Il nitrato d’argento (AgNO3) viene ridotto ad argento metallico (per esposizione alla luce
solare o ultravioletta), il quale viene fissato dai sali di calcio presenti nel campione.
MINERALI
VON KOSSA EMBRIONI DI TOPO
VON KOSSA RENE
AMIANTOFibre di amianto: composte da diversi silicati (crisotile, tremolite,
crocidolite, actinolite) che contengono anche silicio, ferro, calcio
e magnesio.
L’inalazione prolungata provoca l’ ASBESTOSI polmonare.
Fibrosi alveolare e pleurica diffusa, che provoca dispnea
progressiva, tosse (presenza nell'espettorato di "corpi
asbestosici“, complessi ferruginosi) e insufficienza
cardiorespiratoria.
I corpi asbestosici vengono rivelati con il Blu di Prussia (ferro)
MINERALI
BLU DI PRUSSIA POLMONE
TECNICHE IMMUNOISTOCHIMICHE
Le tecniche immunoistochimiche sfruttano la capacità degli anticorpi di legarsi all’antigene specifico.
- anticorpo coniugato con l’enzima perossidasi- incubazione con la sezione, dove si legherà all’antigene- incubazione con un substrato dell’enzima (diamminobenzidina) - la perossidasi trasforma la diamminobenzidina in un prodotto colorato nel punto esatto ove si era legato l’anticorpo, rivelando così la localizzazione dell’antigene.
P DAB
P DABprodotto colorato
prodotto colorato
METODODIRETTO
METODOINDIRETTO
Localizzazione immunoistochimica di Cellule epiteliali e macrofagi bronchiali
Localizzazione immunoistochimica di Cellule della lamina propria
TECNICHE IMMUNOISTOCHIMICHE