［Ｊ］．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ　Ｇｒｏｗｔｈ　Ｆａｃｔｏｒ　Ｒｅｖ，２００６，１７（６）：４４１－４５０．［９］　Ｉｃｈｉｎｏｓｅ　Ｋ，Ｋａｗａｓａｋｉ　Ｅ，Ｅｇｕｃｈｉ　Ｋ．Ｒｅｃｅｎｔ　ａｄｖａｎｃｅｍｅｎｔ　ｏｆ

ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｏｆ　ｔｙｐｅ　１　ｄｉａｂｅｔｅｓ　ａｎｄ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌｒｅｌｅｖａｎｃｅ　ｔｏ　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｎｅｐｈｒｏｌ，２００７，２７（６）：５５４－５６４．

［１０］Ｔｓｉｏｔｒａ　ＰＣ，Ｔｓｉｇｏｓ　Ｃ，Ｙｆａｎｔｉ　Ｅ，ｅｔ　ａｌ．Ｖｉｓｆａｔｉｎ，ＴＮＦ－ａｌｐｈａａｎｄ　ＩＬ－６　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｓ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｉｎ　ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ　ｃｅｌｌｓｆｒｏｍ　ｔｙｐｅ　２　ｄｉａｂｅｔｉｃ　ｗｏｍｅｎ［Ｊ］．Ｈｏｒｍ　Ｍｅｔａｂ　Ｒｅｓ，２００７，３９（１０）：７５８－７６３．

［１１］殷俊，林宣，何汉武．２型糖尿病肾病患者外周血单个核细胞

Ｔｏｌｌ样受体４的表达及ＴＮＦα水平的研究［Ｊ］．临床内科杂志，

２００９，２６（５）：３１８－３２０．［１２］李国霞，蒋玲，李幸，等．ＴＮＦα、ＣＤ１１ａ在糖尿病大鼠肾组织中的

表达及意义［Ｊ］．山东医药，２００８，４８（２９）：４０－４１．［１３］熊狄，李赘．氟伐他汀对糖尿病大鼠ＴＮＦα表达的干预作用研

究［Ｊ］．江西医药，２００９，４４（５）：４３８－４４１．［１４］张丽娜，谢席胜，左川，等．人参皂甙 Ｒｇｌ对糖尿病肾病大鼠

ＴＮＦ－α、ＭＣＰ－１表达的影响［Ｊ］．四川大学学报（医学版），２００９，

４０（３）：４６６－４７１．［收稿日期］２０１１－０５－０３

［作者简介］陈敏纯，女，学士，药师，电话：１３９９１３２８４２５，Ｅ－ｍａｉｌ：ｍｉｎｃｈｕｎ．ｃｈｅｎ＠１６３．ｃｏｍ　［通讯作者］文爱东，男，硕士，主任药师，电话：０２９－

８４７７３６３６，Ｅ－ｍａｉｌ：ａｄｗｅｎ＠ｆｍｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ

液相色谱－串联质谱法测定人血浆氯吡格雷浓度及其生物等效性评价

陈敏纯，鹿成韬，贾艳艳，宋颖，李雪晴，杨静，丁莉坤，文爱东　（第四军医大学西京医院药剂科，陕西 西安７１００３２）

［摘要］　目的：建立液相色谱－串联质谱法（ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）测定人血浆中氯吡格雷的浓度，研究２种硫酸氢氯吡格雷片的人体药

动学及相对生物利用度。方法：血浆样品中加入内标美利曲辛，经乙腈沉淀蛋白提取，采用液相色谱－串联质谱法。用建立的

方法测定２０例健康男性受试者单剂量口服硫酸氢氯吡格雷受试制剂或参比制剂后的血药浓度，求得药动学参数，并对２种制

剂的生物等效性进行评价。结果：在０．０２～２０　ｎｇ·ｍＬ－１内呈良好的线性关系，方法回收率９８．４％～１０３．２％，日内、日间ＲＳＤ均小于１５％。单次口服７５　ｍｇ硫酸氢氯吡格雷受试制剂或参比制剂后的Ｃｍａｘ分别为（１．９±１．５）ｎｇ·ｍＬ－１和（１．８±１．１）ｎｇ·

ｍＬ－１；ｔｍａｘ分别为（０．８±０．５）ｈ和（１．０±０．８）ｈ；ｔ１／２分别为（３．４±１．６）ｈ和（３．５±１．５）ｈ；ＡＵＣ（０－４８）分别为（４．４±４．３）ｈ·ｎｇ·

ｍＬ－１和（４．４±４．６）ｈ·ｎｇ·ｍＬ－１；ＡＵＣ（０－∞）分别为（４．７±４．４）ｈ·ｎｇ·ｍＬ－１和（４．７±４．７）ｈ·ｎｇ·ｍＬ－１。受试制剂对参比制剂的

相对生物利用度为（９８．２±３２．８）％。结论：该方法灵敏，无杂质干扰。测得的受试制剂与参比制剂的主要药动学参数之间无

明显差异，表明２种制剂在人体内生物等效。

［关键词］　硫酸氢氯吡格雷；液相色谱－串联质谱；药动学；生物等效性［中图分类号］Ｒ９６９．１　　［文献标识码］Ａ　　［文章编号］１００１－５２１３（２０１２）０６－０４２１－０４

Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｐｌａｓｍａ　ｂｙ　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｔｏ　ｂｉｏｅｑｕｉａｖａｉｌ－ａｂｉｌｉｔｙ

ＣＨＥＮ　Ｍｉｎ－ｃｈｕｎ，ＬＵ　Ｃｈｅｎｇ－ｔａｏ，ＪＩＡ　Ｙａｎ－ｙａｎ，ＳＯＮＧ　Ｙｉｎｇ，ＬＩ　Ｘｕｅ－ｑｉｎｇ，ＹＡＮＧ　Ｊｉｎｇ，ＤＩＮＧ　Ｌｉ－ｋｕｎ，

ＷＥＮ　Ａｉ－ｄｏｎｇ（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｘｉｊｉｎｇ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｆｏｒｔｈ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｘｉ　Ｘｉ＇ａｎ　７１００３２，Ｃｈｉｎａ）

ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｐｌａｓｍａ　ｂｙ　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ　ｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄ　ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｉｔｓ　ｐｈａｒｍａｃｏ－ｋｉｎｅｔｉｃｓ　ａｎｄ　ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｐｌａｓｍａ　ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｄ　ｂｙ　ｍｅｔｈｙｌ　ｃｙａｎｉｄｅｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅ－ｔｅｒｍｉｎａｔｅｄ　ｂｙ　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ．Ｔｈｅ　ｔｅｓｔ　ａｎｄ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ　ｗｅｒｅ　ｇｉｖｅｎ　ｔｏ　２０　ｈｅａｌｔｈｙ　ｍａｌｅ　ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ

ａｎｄ　ｂｉｏｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ　ｗｅｒｅ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ．ＲＥＳＵＬＴＳ　Ｔｈｅ　ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ　ｃｕｒｖｅ　ｗａｓ　ｌｉｎｅａｒ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．０２－２０　ｎｇ·ｍＬ－１．Ｔｈｅ

ｍｅｔｈｏｄ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　９８．４％－１０３．２％．ＲＳＤｓ　ｏｆ　ｉｎｔｒａ－ｄａｙ　ａｎｄ　ｉｎｔｅｒ－ｄａｙ　ｗｅｒｅ　ｌｅｓｓ　ｔｈａｎ１５％．Ａｆｔｅｒ　ａ　ｓｉｎｇｌｅ　ｏｒａｌ　ｄｏｓｅ　ｏｆ　７５　ｍｇｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ　ｈｙｄｒｏｇｅｎ　ｓｕｌｐｈａｔｅ　ｔｅｓｔ　ｏｒ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｔａｂｌｅｔｓ，ｔｈｅ　ｍａｉｎ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ａｓ　ｆｏｌｌｏｗｓ：Ｃｍａｘ（１．９±１．５）

ｎｇ·ｍＬ－１　ａｎｄ（１．８±１．１）ｎｇ·ｍＬ－１；ｔｍａｘ（０．８±０．５）ｈ　ａｎｄ（１．０±０．８）ｈ；ｔ１／２（３．４±１．６）ｈ　ａｎｄ（３．５±１．５）ｈ；ＡＵＣ（０－４８）（４．４±

４．３）ｈ·ｎｇ·ｍＬ－１　ａｎｄ（４．４±４．６）ｈ·ｎｇ·ｍＬ－１；ＡＵＣ（０－∞）（４．７±４．４）ｈ·ｎｇ·ｍＬ－１　ａｎｄ（４．７±４．７）ｈ·ｎｇ·ｍＬ－１，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．

Ｒｅｌａｔｉｖｅ　ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ　ｗａｓ（９８．２±３２．８）％．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｗｉｔｈ　ｎｏ　ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ　ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ．Ｎｏ　ｓｉｇ－ｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ｅｘｉｓｔｓ　ａｍｏｎｇ　ｔｈｅ　ｍａｉｎ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｔｅｓｔ　ａｎｄ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｔａｂｌｅｔｓ．Ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ

ａｒｅ　ｂｉｏｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ．

ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ　ｈｙｄｒｏｇｅｎ　ｓｕｌｐｈａｔｅ；ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ；ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ；ｂｉｏｅｑｕｉａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ

　　氯吡格雷是噻吩并吡啶类衍生物，作为一种前 体药物，该药在体内经肝脏代谢生成活性代谢产物，

·１２４·中国医院药学杂志２０１２年第３２卷第６期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１２　Ｍａｒ，Ｖｏｌ　３２，Ｎｏ．０６

可选择性地、不可逆地与血小板膜表面嘌呤二磷酸腺苷（ＡＤＰ）受体结合，使纤维蛋白原无法与糖蛋白

ＧＰⅡｂ／Ⅲａ受体结合，从而抑制血小板相互聚集。临床上被广泛应用于心肌梗死、脑梗死和周围动脉缺血等动脉血栓性疾病的治疗［１］。氯吡格雷经胃肠道吸收后在人体内迅速代谢，其原型药物的血药浓度极低，较难测定，目前国外仅有几篇文献报道［２－４］。本研究建立了ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法测定氯吡格雷在人血浆中的药物浓度，该方法简单，最低定量下限为０．０２ｎｇ·ｍＬ－１，且具有血浆用量少，分析时间短等优点，并采用该法对中国健康受试者单次口服７５　ｍｇ硫酸氢氯吡格雷片剂后的药动学参数和生物等效性进行了研究，为临床用药提供依据。

１　材料

１．１　仪器　Ａｇｉｌｅｎｔ　１２００液相色谱－串联质谱联用仪，含：双高压泵、自动进样器、柱温箱、电喷雾离子化接口、三重四极杆质谱检测器；色谱工作站：Ａｇｉ－ｌｅｎｔ　ＣｈｅｍＳｔａｔｉｏｎ；ＤＡＳ统计软件。

１．２　药品与试剂　受试制剂：硫酸氢氯吡格雷片（南京正大天晴制药有限公司，规格：７５　ｍｇ／片，批号１００６０１）；参比制剂：硫酸氢氯吡格雷片［波立维，赛诺菲安万特（杭州）制药有限公司，规格：７５　ｍｇ／片，批号２６３２］；硫酸氢氯吡格雷化学对照品（江苏正大天晴药业股份有限公司，批号２０１００５０１２，含量

１００．０％，干燥失重０．０％）；内标物：盐酸美利曲辛（江苏恩华药业股份有限公司，批号为２０１００４２８）；乙腈为色谱级，甲醇、甲酸均为分析纯试剂；纯净水：自制。

２　方法与结果

２．１　试验对象　２０名男性健康受试者，体质量５８～６８　ｋｇ，年龄３２～４０岁，经体检证明肝、肾功能正常，心电图正常。试验方案和知情同意书经医院伦理委员会审批同意后，受试者均了解所进行试验的目的、方法和意义，并书面签署知情同意书。试验期间统一饮食。试验期间禁止剧烈活动，禁止吸烟、饮酒或含药物、酒精的饮料等。给药方案与血样采集试验方案经中国人民解放军第四军医大学第一附属医院药物临床试验机构伦理委员会（ＩＥＣ或ＩＲＢ）审核批准实施，试验采用标准二阶段交叉设计（Ｔｗｏ－ｐｅｒｉｏｄ　Ｃｒｏｓｓｏｖｅｒ　Ｄｅｓｉｇｎ）自身对照试验方法，按自身交叉对照试验方案将２０名受试者随机分为试验组（Ｔ）和参比组（Ｒ）。第一阶段Ｔ组口服受试制剂

Ｔ，Ｒ组口服参比制剂 Ｒ，剂量均为单剂量口服７５ｍｇ；经２周清洗期后２组交换品种进行第２阶段试验。受试者禁食１２　ｈ后，早晨空腹给药，用２５０　ｍＬ

温开水吞服药物，服药后４　ｈ进统一食谱的标准餐。受试者口服药物前和服药后１５，３０，４５　ｍｉｎ，１．０，

１．５，２．０，３．０，４．０，６．０，８．０，１２．０，２４．０，３６．０，

４８．０ｈ分别采集静脉血４　ｍＬ，血样置肝素化的离心管中离心５　ｍｉｎ（４　０００　ｒ·ｍｉｎ－１），分离血浆，置－２０℃保存待测。

２．２　血药浓度测定

２．２．１　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ条件　色谱条件：色谱柱：Ｄｉａ－ｍｏｎｓｉｌ　Ｃ１８（２）（１５０　ｍｍ×４．６　ｍｍ，５μｍ，Ｄｉｋｍａ）；流动相：０．１％甲酸甲醇（Ａ）－０．１％甲酸溶液（Ｂ）；洗脱梯度：０ｍｉｎ（７０％Ａ）－０．７５　ｍｉｎ（９５％Ａ）－４．５　ｍｉｎ（９５％Ａ）－４．６　ｍｉｎ（７０％Ａ）－６．０ｍｉｎ（７０％Ａ）；流速１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１，柱后分流７∶３进行质谱测定；柱温：３０℃；质谱条件：电喷雾离子化正离子 ＭＲＭ检测（ＥＳＩ＋），毛细管电压３．５０　ｋＶ，脱溶剂温度３５０℃，脱溶剂气５００　Ｌ·ｈ－１，反吹气４０　Ｌ·ｈ－１，检测氯吡格雷和美利曲辛锥孔电压依次为２４，２４　Ｖ；碰撞能量依次为１６，２４　ｅＶ。用于定量分析的离子反应氯吡格雷［Ｍ＋Ｈ］＋离子为ｍ／ｚ　３２２．０→２１２．１；内标美利曲辛［Ｍ＋Ｈ］＋离子为ｍ／ｚ２９２．１→２３２．１。

２．２．２　血样预处理　精密吸取血浆０．４　ｍＬ置１．５ｍＬ聚塑离心管中，精密加入甲醇溶液（或在标准曲线与质量控制样品制备时加入相应标准溶液）４０

μＬ，再精密加入内标溶液４０μＬ（４０　ｎｇ·ｍＬ－１），涡

旋混匀３０　ｓ，精密加入乙腈溶液８００μＬ，涡旋混匀１ｍｉｎ后，１６　０００　ｒ·ｍｉｎ－１离心１０　ｍｉｎ，取上清液３０

μＬ进行ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ分析。

２．２．３　标准曲线的制备　取空白血浆０．４　ｍＬ，精密吸取各浓度氯吡格雷标准溶液４０μＬ，分别置１．５ｍＬ的聚塑离心管中，配制成含氯吡格雷分别０．０２，

０．０５，０．２，１．０，２．０，５．０，２０．０ｎｇ·ｍＬ－１的溶液，按“２．２．２”项下的方法操作，记录氯吡格雷峰面积（Ａｓ）与内标色谱峰面积（Ａｒ）。以峰面积比Ｒ（Ｒ＝Ａｓ／Ａｒ）对质量浓度（Ｃ，ｎｇ·ｍＬ－１）进行权重回归（１／Ｃ×Ｃ）。求得直线回归方程Ｒ＝０．４９５　９　Ｃ ＋０．００７　９４３，ｒ＝０．９９９　３，表明氯吡格雷血浆质量浓度在０．０２～２０．０ｎｇ·ｍＬ－１范围，色谱响应线性关系良好。

２．２．４　方法专属性　在本试验条件下，测得空白血浆、空白血浆加入对照品和内标及实测血浆样品的典型色谱图见图１。结果表明，氯吡格雷和内标的保留时间分别是４．９，４．８　ｍｉｎ。空白血浆中内源性物质不干扰样品峰的测定，本方法具有较高的特异性，能准确测定血浆中氯吡格雷的浓度，灵敏度较高。

·２２４· 中国医院药学杂志２０１２年第３２卷第６期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１２　Ｍａｒ，Ｖｏｌ　３２，Ｎｏ．０６

图１　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法测定血浆中氯吡格雷的色谱图

Ａ．空白血浆；Ｂ．空白血浆加入氯吡格雷（２．０ｎｇ·ｍＬ－１）对照品和内标；Ｃ．受试者Ｅ单次服药（Ｔ）３０　ｍｉｎ后的血浆样品

Ｆｉｇ　１　ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌＡ．ｂｌａｎｋ　ｐｌａｓｍａ；Ｂ．ｂｌａｎｋ　ｐｌａｓｍａ　ｓｐｉｋｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ（ｐｌａｓｍａｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ：２．０ｎｇ·ｍＬ－１）ａｎｄ　ＩＳ；Ｃ．ｐｌａｓｍａ　ｓａｍｐｌｅ　ａｔ　３０　ｍｉｎ　ａｆ－ｔｅｒ　ａｎ　ｏｒａｌ　ｄｏｓｅ　ｏｆ　７５　ｍｇ　ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ　ｔｏ　ａ　ｈｅａｌｔｈｙ　ｖｏｌｕｎｔｅｒ

２．２．５　方法精密度与准确度　取空白血浆０．４ｍＬ，按“２．２．２”项下的方法制成含氯吡格雷分别为

０．２，２．０，１５．０ｎｇ·ｍＬ－１的质控（ＱＣ）样品，每一浓度进行５样本分析，连续测定３　ｄ，根据当日标准曲线，求算ＱＣ样品浓度，根据ＱＣ样品结果计算方法的日内、日间精密度和准确度，精密度用ＲＳＤ（％）表示，准确度用ＲＥ（％）表示，结果见表１。

２．２．６　提取回收率　取空白血浆０．４　ｍＬ，按“２．２．２”项下的方法制成含氯吡格雷分别为０．２，

２．０，１５．０ｎｇ·ｍＬ－１的质控（ＱＣ）样品，每一浓度进行５样本分析。同时另取空白血浆０．４　ｍＬ，除不加标准系列溶液和内标溶液外，按“２．２．２”项下操作，残留物加入相应浓度的氯吡格雷系列溶液和内标溶液，每一浓度进行３样本分析，获得相应峰面积。比较２种测定结果，计算提取回收率，结果见表１。表１　方法精密度和准确度及提取回收率试验测定结果（ｎ

＝５，珚ｘ±ｓ）

Ｔａｂ　１　Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ，ａｃｃｕｒａｃｙ　ａｎｄ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａ－ｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ　ｉｎ　ｐｌａｓｍａ（ｎ＝５，珚ｘ±ｓ）

加入量／ｎｇ·ｍＬ－１

提取回收率／％氯吡格雷 内标

准确度／％ＲＳＤ／％

日间 日内０．２　 ８３．８±３．８　 １０３．２　 １４．０　 １０．１２．０　 ８０．１±５．２　 ８２．６±４．４　 ９８．５　 ７．３　 ５．２１５．０　 ７５．２±１．４　 ９８．４　 １３．８　 ５．９

２．２．７　血浆样品稳定性试验　取空白血浆０．４ｍＬ，按“２．２．２”项下的方法制成氯吡格雷分别为

０．２，１５．０ｎｇ·ｍＬ－１的血浆样品数份（每一浓度３样本分析），１份样品立即进行分析，１份室温放置２４　ｈ后进行分析，１份在冰冻（－２０℃）条件下保存２４　ｈ后于室温中融解进行分析，１份冻融２次后进行测定，１份冻融３次后进行分析，确定冻融稳定性。１份冰冻３０　ｄ后进行分析，１份冰冻６０　ｄ进行分析，结果表明，氯吡格雷血浆样品具有良好的稳定性，结果见表２。

表２　稳定性试验结果（ｎ＝３）

Ｔａｂ　２　Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ　ｉｎ　ｐｌａｓｍａ（ｎ＝３）

贮藏条件质量浓度／ｎｇ·ｍＬ－１　 ＲＳＤ／％ ＲＥ／％加入量 测得量

立即分析 ０．２　 ０．２　 ７．２　 ３．６１５．０　 １５．１　 ２．７　 ２１．３

室温放置２４　ｈ　 ０．２　 ０．２　 ７．２　 ３．６１５．０　 １５．３　 １３．１　 ６．５

冰冻－解冻１次 ０．２　 ０．２　 １５．０　 ７．９１５．０　 １５．１　 １０．８　 ５．２

冰冻－解冻２次 ０．２　 ０．２　 １．８　 ９．８１５．０　 １４．８　 ６．６　 ３．０

冰冻－解冻３次 ０．２　 ０．２　 ６．６　 １４．１１５．０　 １５．０　 ６．９　 ３．４

冰冻３０　ｄ　 ０．２　 ０．２　 ４．６　 ４．３１５．０　 １４．５　 ９．１　 １１．５

冰冻６０　ｄ　 ０．２　 ０．２　 ３．２　 ５．７１５．０　 １４．３　 ６．３　 ３．６

２．２．８　基质效应　取空白血浆０．４　ｍＬ，除不加标准系列溶液和内标溶液外，按“２．２．２”项下操作，残留物以相应浓度的氯吡格雷系列溶液和内标溶液，每一浓度进行５样本分析，获得相应峰面积。同时比较相同浓度的氯吡格雷和内标标准溶液的峰面积，每一浓度进行５样本分析，计算基质效应。试验结果显示采用本方法时，样品各浓度点与内标的基质效应在８５％～１１５％范围内，无明显基质效应，表明基质效应不影响测定的精密度和准确度。

２．２．９　血浆样品测定与质量控制　测定血浆样品时，每天建立一条标准曲线，并随行测定低、中、高３浓度的 ＱＣ样品。根据当日标准曲线，求算 ＱＣ样品和未知样品的浓度，当 ＱＣ样品 ＲＳＤ≤１５％时，

当日数据方可接受。

２．２．１０　数据处理方法　以梯形法求算２种硫酸氢氯吡格雷片的 ＡＵＣ（０－４８）和 ＡＵＣ（０－∞），Ｃｍａｘ和ｔｍａｘ取实测值，Ｃｍａｘ和ＡＵＣ经对数转换后，将受试制剂Ｔ的Ｃｍａｘ和ＡＵＣ分别与参比制剂Ｒ的Ｃｍａｘ和 ＡＵＣ作双单侧ｔ检验统计处理，将受试制剂 Ｔ的ｔｍａｘ实测值与参比制剂Ｒ的ｔｍａｘ实测值采用非参数 Ｗｉｌｃ－ｏｘｏｎ法统计处理，分析药物间、个体间及周期间变异的统计学意义。

２．３　结果

２．３．１　药动学参数　２０名受试者单剂量口服２种硫酸氢氯吡格雷片制剂中氯吡格雷的平均药时曲线见图２，主要药动学参数见表３。

２．３．２　生物等效性　将主要药动学参数ＡＵＣ（０－４８）、

ＡＵＣ（０－∞）、Ｃｍａｘ进行方差分析和生物等效性评价。结果显示受试制剂和参比制剂的药动学参数Ｃｍａｘ、

ＡＵＣ（０－４８）、ＡＵＣ（０－∞）经对数转换后进行方差分析，并进一步采用双向单侧ｔ检验和［１－２α］％置信区间法进行生物等效性评价，其中ｔｍａｘ采用非参数法

·３２４·中国医院药学杂志２０１２年第３２卷第６期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１２　Ｍａｒ，Ｖｏｌ　３２，Ｎｏ．０６

　　

图２　２０名健康受试者单次口服７５　ｍｇ硫酸氢氯吡格雷片受试或参比制剂后的平均药－时曲线（珚ｘ±ｓ，ｎ＝２０）

－●－受试制剂；－▲－参比制剂

Ｆｉｇ　２　Ｍｅａｎ　ｐｌａｓｍａ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ－ｔｉｍｅ　ｃｕｒｖｅｓ　ｏｆ　ｔｅｓｔ　ｏｒ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ　ａｆｔｅｒ　ａ　ｓｉｎｇｌｅ　ｏｒａｌ　ｄｏｓｅ　ｏｆ　７５　ｍｇ　ｉｎ２０　ｈｅａｌｔｈｙ　ｍａｌｅ　ｖｏｌ－ｕｎｔｅｅｒｓ（珚ｘ±ｓ，ｎ＝２０）

－●－ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ；－▲－ｔｅｓｔ

表３　单剂量口服硫酸氢氯吡格雷片受试或参比制剂７５　ｍｇ后的主要药动学参数（珚ｘ±ｓ，ｎ＝２０）

Ｔａｂ　３　Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ａｆｔｅｒ　ｔｈｅ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ

ｏｆ　ａ　ｓｉｎｇｌｅ　ｄｏｓｅ　ｏｆ　７５　ｍｇ　ｔｅｓｔ　ｏｒ　ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ　ｔａｂｌｅｔｓ（珚ｘ±ｓ，ｎ＝

２０）

参数 受试制剂 参比制剂Ｃｍａｘ／ｎｇ·ｍＬ－１　 １．９±１．５　 １．８±１．１ｔｍａｘ／ｈ　 ０．８±０．５　 １．０±０．８ｔ１／２／ｈ　 ３．４±１．６　 ３．５±１．５

ＡＵＣ（０－４８）／ｈ·ｎｇ·ｍＬ－１　 ４．４±４．３　 ４．４±４．６ＡＵＣ（０－∞）／ｈ·ｎｇ·ｍＬ－１　 ４．７±４．４　 ４．７±４．７

Ｆ／％ ９８．２±３２．８

（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ符号秩检验）检验法。结果表明：Ｃｍａｘ、

ＡＵＣ（０－４８）、ＡＵＣ（０－∞）均拒绝生物不等效假设。受试制剂中Ｃｍａｘ、ＡＵＣ（０－４８）、ＡＵＣ（０－∞）的９０％置信区间分别为７７．７％～９４．３％、８７．２％～９８．４％、８８．１％～９９．４％；两制剂的ｔｍａｘ经非参数法检验无显著性差异（Ｐ＞０．０５），表明两制剂生物等效。

２．３．３　不良反应观察　本次试验中２０名健康受试

者单剂量口服用药后未见明显不良反应。

３　讨论国外仅有几篇文献报道［２－４］，均为采用液质联用

方法测定，样品分离富集均采用液－液萃取的方法，本试验所建立的方法采用乙腈沉淀蛋白提取血浆中药物，血浆处理简单易操作；血浆用量少（０．４　ｍＬ）；流动相采用梯度洗脱，分析时间短，氯吡格雷和内标的保留时间分别是４．９，４．８　ｍｉｎ，可满足临床大批量生物样品的测定和药动学研究。

氯吡格雷在人体中血药浓度较低，仪器条件要求高，本实验采用ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ方法，最低检测限为

０．０２　ｎｇ·ｍＬ－１，能够满足实验条件，可用于血药浓度监测、群体药动学／药效学和临床个体化给药的研究。参考文献：［１］　Ｇｅｉｇｅｒ　Ｊ，Ｂｒｉｃｈ　Ｊ，Ｌｉｅｄｌ　Ｐ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ　ｏｆ　ｈｕ－

ｍａｎ　ｐｌａｔｅｌｅｔ　Ｐ２Ｙ（ＡＣ）ＡＤＰ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｂｙ　ｔｈｅａｎｔｉｐｌａｔｅｌｅｔ　ｄｒｕｇ　ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ［Ｊ］．Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ　Ｔｈｒｏｍｂ　ＶａｓｃＢｉｏｌ，１９９９，１９：２００７－２０１１．

［２］　Ｒｏｂｉｎｓｏｎ　Ａ，Ｈｉｌｌｉｓ　Ｊ，Ｎｅａｌ　Ｃ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｂｉｏａｎ－ａｌｙｔｉｃａｌ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ

ｐｌａｓｍａ［Ｊ］．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ　Ｂ，２００７，８４８：３４４－３５４．［３］　Ｎｉｒｏｇｉ　ＲＶＳ，Ｋａｎｄｉｋｅｒｅ　ＶＮ，Ｓｈｕｋｌａ　Ｍ，ｅｔ　ａｌ．Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ

ｏｆ　ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｐｌａｓｍａ　ｂｙ　ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇ－ｒａｐｈｙ／ｔａｎｄｅｍ　ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ［Ｊ］．Ｒａｐｉｄ　Ｃｏｍｍｕｎ　ＭａｓｓＳｐｅｃｔｒｏｍ，２００６，２０：１６９５－１７００．

［４］　Ｂｅｏｍ　ＳＳ，Ｓｕｎ　ＤＹ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｌｏｐｉｄｏｇｒｅｌ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ

ｐｌａｓｍａ　ｂｙ　ｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ／ｔａｎｄｅｍ　ｍａｓｓ　ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ：

ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｔｏ　ａ　ｃｌｉｎｉｃａｌ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ　ｓｔｕｄｙ［Ｊ］．ＢｉｏｍｅｄＣｈｒｏｍａｔｏｇｒ，２００７，２１：８８３－８８９．

［收稿日期］２０１１－０９－０３

［作者简介］舒成仁，男，博士，副主任药师，电话：０７１４－６２６５５３９，Ｅ－ｍａｉｌ：３９７１１２６１５＠ｑｑ．ｃｏｍ　［通讯作者］黎维勇，男，主任药师，教授，Ｅ－ｍａｉｌ：

Ｌｉｗｅｉｙｏｎｇ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ

硫酸氢氯吡格雷片的人体生物等效性

舒成仁１，２，卫乐乐２，黄露２，黎维勇２　（１．黄石市中心医院药剂科，湖北 黄石４３５０００；２．华中科技大学附属协和医院药剂科，湖北 武汉４３００２２）

［摘要］　目的：研究硫酸氢氯吡格雷片受试制剂与参比制剂的人体生物等效性。方法：３０名健康男性志愿者随机交叉单剂量

口服硫酸氢氯吡格雷试验片或对照片１５０　ｍｇ，采用高效液相色谱－串联质谱（ＨＰＬＣ－ＭＳ／ＭＳ）法测定血浆中氯吡格雷羧酸代

谢产物浓度。用ＤＡＳ软件计算两者的药动学参数，并评价其生物等效性。结果：受试制剂与参比制剂的ｔｍａｘ分别为（０．９８±

０．３４）、（０．８６±０．３６）ｈ；Ｃｍａｘ分别为（８　９９４．７±３　５１５．６）、（９　６７７．０±３　８３８．１）ｎｇ·ｍＬ－１；ｔ１／２分别为（７．０±２．４）、（７．０±１．８）ｈ；

ＡＵＣ０→２４分别为（３１　６７０．１±１３　５４５．７）、（３２　８８７．４±１４　９０７．５）ｎｇ·ｈ·ｍＬ－１；ＡＵＣ０→ ∞ 分别为（３４　０９６．８±１４　４８２．３）、

（３５　５５０．４±１６　４５５．５）ｎｇ·ｈ·ｍＬ－１。受试制剂的相对生物利用度为（９７．７±１６．６）％。结论：２种制剂具有生物等效性。

［关键词］　硫酸氢氯吡格雷片；高效液相色谱－串联质谱法；羧酸代谢产物；生物等效性［中图分类号］Ｒ９６９．１　　［文献标识码］Ａ　　［文章编号］１００１－５２１３（２０１２）０６－０４２４－０４

·４２４· 中国医院药学杂志２０１２年第３２卷第６期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，２０１２　Ｍａｒ，Ｖｏｌ　３２，Ｎｏ．０６