Download - BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat
![Page 1: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/1.jpg)
BIOTECHNOLÓGIA D MsC gyakorlat
Tervezési feladat
![Page 2: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/2.jpg)
Ar1oriV
Ar1 oriV
vad típus mutáns poláris hatás ?
Deléciós mutagenezis a leolvasási keret sértése nélkül
oriV: szűk gazdaspecificitás
oriT
oriT
Ar: antibiotikum rezisztencia
![Page 3: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/3.jpg)
A FELADAT ÁLTALÁNOS MEGFOGALMAZÁSA
• A LEOLVASÁSI KERET MEGSÉRTÉSE NÉLKÜL KI KELL ÜTNI EGY GÉNT EGY BAKTÉRIUMBAN
• ÉS HELYETTE UGYANEBBEN A BAKTÉRIUMBAN KELL TERMELTETNI A KIÜTÖTT GÉN TERMÉKÉT FÚZIÓS FEHÉRJE FORMÁJÁBAN
![Page 4: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/4.jpg)
MEGOLDÁSI SÉMA
• 1. A megadott célgént tartalmazó genomi lókusz letöltése, a célgén és a környező gének pozíciójának kijelölése
• Eszköz: internet, adatbankok• pl. NCBI, Genbank• http://www.ncbi.nlm.nih.gov/sites/gquery
![Page 5: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/5.jpg)
![Page 6: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/6.jpg)
![Page 7: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/7.jpg)
![Page 8: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/8.jpg)
![Page 9: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/9.jpg)
![Page 10: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/10.jpg)
complement(1934864..1936042)
Csak a 1 933 000 – 1 938 000 régió kell
Ekkor a gén 3 043 bp-nál kezdődik és 1 485 bp-nál ér végetComplement!
![Page 11: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/11.jpg)
![Page 12: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/12.jpg)
![Page 13: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/13.jpg)
![Page 14: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/14.jpg)
![Page 15: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/15.jpg)
![Page 16: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/16.jpg)
![Page 17: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/17.jpg)
![Page 18: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/18.jpg)
![Page 19: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/19.jpg)
![Page 20: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/20.jpg)
![Page 21: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/21.jpg)
![Page 22: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/22.jpg)
![Page 23: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/23.jpg)
![Page 24: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/24.jpg)
![Page 25: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/25.jpg)
![Page 26: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/26.jpg)
![Page 27: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/27.jpg)
![Page 28: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/28.jpg)
![Page 29: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/29.jpg)
![Page 30: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/30.jpg)
![Page 31: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/31.jpg)
![Page 32: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/32.jpg)
![Page 33: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/33.jpg)
![Page 34: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/34.jpg)
![Page 35: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/35.jpg)
![Page 36: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/36.jpg)
Ar1oriV
Ar1 oriV
vad típus mutáns poláris hatás ?
Deléciós mutagenezis a leolvasási keret sértése nélkül
oriV: szűk gazdaspecificitás
oriT
oriT
Ar: antibiotikum rezisztencia
![Page 37: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/37.jpg)
500-1000 bp 500-1000 bp
DE! A két szakasznak nagyjából egyforma hosszúnak kell lennie,Hogy azonos legyen a rekombinációs valószínűség
![Page 38: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/38.jpg)
A VEKTOR KIVÁLASZTÁSA
Szempontok:
1.Az adott feladathoz szabad-e, kell-e replikálódnia a vektornak a célsejtben
2.Olyan antibiotikum rezisztenciát hordozzon, mely antibiotikumra a sejt érzékeny
3.Milyen módon lehet bejuttatni a célsejtbe DNS-t
![Page 39: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/39.jpg)
NÉHÁNY HASZNÁLATOS ANTIBIOTIKUM
antibiotikum működési mód a rezisztencia módja koncentráció
(µg/ml)
ampicillin bakteriocid, sejt fal szintézis inhibitor
a laktamáz elhidrolizálja az ampicillin laktám gyűrűjét
50 -100
klóramfenikol bakteriosztikus, fehérje szintézis inhibitor, kölcsönhat az 50S
riboszoma alegységgel
klóramfenikol acetiltranszferáz (cat) acetilálja a klóramfenikolt
20
kanamicin bakteriocid, fehérje szintézis inhibitor
aminoglikozid foszfotranszferáz illetve nukleotidtranszferáz
foszforilálja vangy adenilálja a kanamicint
30 - 500
tetraciklin bakteriosztatikus, proteinszintézis inhibitor, gátolja az aminoacil-tRNS kötődését a riboszómához
a sejt permeabilitásának csökkentésével a tetraciklin nem tud
bejutni a sejtbe
15
![Page 40: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/40.jpg)
PÉLDÁK PLAZMID REPLIKONOKRA PLAZMID INKOMPATIBILTÁSI CSOPORT KÓPIASZÁM GAZDASPECIFICITÁS
pBR322 ColE1 20 E. coli és még néhány
pUC19 ColE1 300 E. coli és még néhány
F plazmid FI 1-2 E. coli és még néhány
pRK356 (R1, R6)
FII 2 E. coli és még néhány
pRK2501 (RK2)
P 1-4 Gram-negatív
baktériumokban széles
RSF1010 Q 10 Gram-negatív
baktériumokban széles
pRK353 (R6K)
X 13-40 Gram-negatív
baktériumokban széles
P1 Y 1-2 Gram-negatív
baktériumokban széles
![Page 41: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/41.jpg)
![Page 42: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/42.jpg)
![Page 43: BIOTECHNOL ÓGIA D MsC gyakorlat](https://reader036.vdocuments.site/reader036/viewer/2022062315/5681502b550346895dbe1c46/html5/thumbnails/43.jpg)
PROKARIÓTA EXPRESSZIÓS VEKTOR ELEMEI
TT
-35 -10
SZF
-35 -10 SD kódoló szekvencia
Pr
TSZE
TTGACAN17TATAAT
5’ UAAGGAGGN(3-11)
START kodonAUGGUGUUG
STOP kodonUAAUUGAUAG
AR ORI
GS
Pr: promóterTT: transzkripciós terminációs szignál, SZF: szabályozó fehérje,, TSZE: transzlációt szabályozó elemek, SD: Shine-Dalgarno szekvencia,
AR: antibiotikum rezisztencia, ORI: replikációs origoGS: gazdasejt
Fúziós partner