25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI
TEKNIK PEMBUATAN PREPARAT HISTOPATOLOGI
Prof.Dr.drh. I Ketut Berata, MSi
25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI
PEMBUATAN PREPARAT HISTOLOGI
25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI
PEMBUATAN PREPARAT HISTOLOGI
HISTOLOGI - NORMAL
• Sesuai komponen jaringan hewan yang sehat
HISTOPATOLOGI- PATOLOGIS
• Jaringan/sel yang mengalami perubahan patologis diantaranya : degenerasi, nekrosis, peradangan, gangguan sirkulasi, gangguan pertumbuhan, neoplasia, imunopatologis, parasitik
25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI
• Nekropsi • Pengambilan jaringan • Ketepatan fixative • Ketepatan proses pembuatan preparat
Pembacaan preparat Interpretasi hasil -
Diagnosa
25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI
25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI
TAHAP PEMBUATAN PREPARAT 1. FIXASI – neutral buffer formalin 10% (NBF)
2. TRIMING – diperkecil – masuk di tissue cassete
3. DEHIDRASI- Tissue procesor
4. EMBEDING –BLOKING - parafin
5. CUTTING - mikrotom
6. STAINING – Hematoxylin-Eosin (HE)
7. MOUNTING– cover slip - EXAMINED
1. FIKSASI
Tujuan dari fiksasi : 1. Mempertahankan bentuk dan integritas kimiawi
sel sesuai pada saat hidup. 2. Mencegah kerusakan bentuk, struktur dan
hubungan antar sel akibat dari pembusukan dan perpindahan dari satu tempat ke tempat lain.
3. Memperkeras jaringan agar terhindar dari traumatik atau akibat handling.
25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI
Pertimbangan fixative: 1. Kecepatan – ukuran jaringan 2. Penetrasi – Jenis jaringan 3. Volume – volume 10-20 ukuran jaringan 4. Lama fixasi – pilih fixative sesuai kebutuhan
Fixative ………..
NBF: Formalin 10% ............................... 1000 ml Sodium acid phosphate ................ 4 g Anhidrous disodium phosphate ...6,5 g
25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI
Target Fixative of choice Fixative to avoid
Proteins Neutral buffered formalin, paraformaldehyde
Osmium tetroxide
Enzymes Frozen sections Chemical fixatives
Lipids Frozen sections*, glutaraldehyde/osmium tetroxide
Alcoholic fixatives, neutral buffered formalin
Nucleic acids Alcoholic fixatives Aldehyde fixatives
Mucopolysaccharides Frozen sections Chemical fixatives
Biogenic amines Bouin solution, neutral buffered formalin
Glycogen Alcoholic based fixatives Osmium tetroxide
Fiksasi …..
25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI
2. TRIMING
• Triming berarti mengiris-iris jaringan menjadi lebih kecil yang bertujuan agar bisa dimasukkan dalam tissue cassete untuk proses dehidrasi
• Dalam melakukan triming sangat penting
diperhatikan bagian jaringan yang mana akan dipilih, sehingga menunjang akurasi diagnosa
25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI
2. TRIMING
25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI
3. DEHIDRASI
Proses dehidrasi meliputi : Perendaman dalam alkohol 70% - 2 jam
Alkohol 80% - 2 jam Alkohol 90% 2 jam Alkohol 96% - 2jam
Alkohol absolut I – 2 jam Alkohol absolut II – 2 jam
Toluena I – 2 jam Toluena II – 2 jam
Xylol 1 – 2 jam Xylol 2 – 2 jam
Parafin cair I – 2 jam Parafin cair II- 2 jam
25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI
Tissue processor
25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI
4. Embeding + Blocking
25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI
5. CUTTING/SECTIONING
• Menggunakan mikrotom – berbagai merk
• Ketebalan pemotongan : 4-6 µm
• Dekat dengan waterbath 56oC, untuk tempat pengembangan potongan jaringan
• Jika sudah mengembang, tangkap jaringan dengan objek glas.
• Dikeringkan dalam suhu kamar, kemudian masukkan dalam inkubator sebelum diwarnai.
5. CUTTING/SECTIONING ……
Ketajaman pisau mikrotom
Pisau ada 2 jenis tgt pada type mikrotom • Pisau yang tebal – diasah secara periodic • Pisau yang tipis – diganti langsung jika
hasil potongannya tdk bagus.
Cutting dg Mikrotom …
25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI
Cutting dg Mikrotom
25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI
6. STAINING (PEWARNAAN ROUTINE – HE)
STAINING
• preparat pada direndam dalam xylol I , II dan III selama masing-masing 5 menit • dehidrasi dengan etanol I dan II masing-masing 5 menit • Cuci dengan aquades 1 menit • Rendam dalam larutan Hematoksilin selama 15 menit, selanjutnya dibilas dengan air
mengalir, lalu dicuci dengan Lithium karbonat selama 15-30 detik, dibilas dengan aquades 1 menit
• Celupkan dalam acid alkohol 4 celupan, kemudian bilas dengan akuades 1 menit & 15 menit
• diwarnai dengan Eosin selama 4 menit. • Sediaan dimasukkan ke dalam alkohol 70%, 80%,dan 96% masing-masing selama 3
menit. • Selanjutnya rendam ke dalam etanol III dan IV masing-masing selama 3 menit • Selanjutnya dalam xylol IV dan V masing-masing 3 menit • Sediaan dikeringkan dan diteteskan dengan perekat permount dan ditutup dengan
gelas penutup
25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI
25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI
Staining
25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI
7. PEMBACAAN PREPARAT
25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI
DIAGNOSA MORFOLOGIK
MAKROSKOPIK
• Pembesaran
• Mengecil
• White spot
• Perdarahan
• Cacing
MIKROSKOPIK
• Degenerasi, nekrosis, imflamasi, neoplasia
• Atrofi, fibrosis, fisiologis
• Nekrosis, infark, migrasi larva
• Fokal, multifokal, difusa
• Larva migran, edema
25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI
PEWARNAAN KHUSUS
25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI
Pewarnaan Khusus …..
Lemak :
• Oil red O
• Sudan III
• Sudan Black
25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI
25/02/2018 Seminar Nasional ROTHSCHILDI