![Page 1: 土壤菌 Bacillus 之分離 與 木聚糖水解脢及纖維素水解脢活性分析 學 生:何季庭 指導教授:杜 鎮 研究員](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081415/56649d495503460f94a262f4/html5/thumbnails/1.jpg)
土壤菌 Bacillus 之分離與
木聚糖水解脢及纖維素水解脢活性分析
學 生:何季庭 指導教授:杜 鎮 研
究員
![Page 2: 土壤菌 Bacillus 之分離 與 木聚糖水解脢及纖維素水解脢活性分析 學 生:何季庭 指導教授:杜 鎮 研究員](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081415/56649d495503460f94a262f4/html5/thumbnails/2.jpg)
杜鎮
中研院植物所 425 室學經歷:德國慕尼黑大學博士
![Page 3: 土壤菌 Bacillus 之分離 與 木聚糖水解脢及纖維素水解脢活性分析 學 生:何季庭 指導教授:杜 鎮 研究員](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081415/56649d495503460f94a262f4/html5/thumbnails/3.jpg)
Introduction
Xylanase, CMCase廢料的處理資源回收再利用農業畜牧業的利用BacillusCloning Technique
![Page 4: 土壤菌 Bacillus 之分離 與 木聚糖水解脢及纖維素水解脢活性分析 學 生:何季庭 指導教授:杜 鎮 研究員](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081415/56649d495503460f94a262f4/html5/thumbnails/4.jpg)
Method—Sample preparation
土壤樣品的採取 Bacillus 分離單株分離 Congo red assay多糖類水解脢活性分析
Zymogram
![Page 5: 土壤菌 Bacillus 之分離 與 木聚糖水解脢及纖維素水解脢活性分析 學 生:何季庭 指導教授:杜 鎮 研究員](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081415/56649d495503460f94a262f4/html5/thumbnails/5.jpg)
Congo Red Assay
Xylan Congo red Acetate
![Page 6: 土壤菌 Bacillus 之分離 與 木聚糖水解脢及纖維素水解脢活性分析 學 生:何季庭 指導教授:杜 鎮 研究員](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081415/56649d495503460f94a262f4/html5/thumbnails/6.jpg)
Zymogram
Read protein size then calculate the gene size
Supernatant, pellet
![Page 7: 土壤菌 Bacillus 之分離 與 木聚糖水解脢及纖維素水解脢活性分析 學 生:何季庭 指導教授:杜 鎮 研究員](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081415/56649d495503460f94a262f4/html5/thumbnails/7.jpg)
Method—Cloning Technique
Insert :Chromosome DNA extractionPartial digest ( Sau3AI )Gel extraction ( 500bp-2kb )
Vector :Puc19Digested by HindIIIAlkaline phosphotaseGel extraction
![Page 8: 土壤菌 Bacillus 之分離 與 木聚糖水解脢及纖維素水解脢活性分析 學 生:何季庭 指導教授:杜 鎮 研究員](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081415/56649d495503460f94a262f4/html5/thumbnails/8.jpg)
pUC19
![Page 9: 土壤菌 Bacillus 之分離 與 木聚糖水解脢及纖維素水解脢活性分析 學 生:何季庭 指導教授:杜 鎮 研究員](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081415/56649d495503460f94a262f4/html5/thumbnails/9.jpg)
Partial Digestion
![Page 10: 土壤菌 Bacillus 之分離 與 木聚糖水解脢及纖維素水解脢活性分析 學 生:何季庭 指導教授:杜 鎮 研究員](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081415/56649d495503460f94a262f4/html5/thumbnails/10.jpg)
Puc19 digested by HindIII
![Page 11: 土壤菌 Bacillus 之分離 與 木聚糖水解脢及纖維素水解脢活性分析 學 生:何季庭 指導教授:杜 鎮 研究員](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081415/56649d495503460f94a262f4/html5/thumbnails/11.jpg)
Method—Cloning Technique
Ligation Electroporesis
![Page 12: 土壤菌 Bacillus 之分離 與 木聚糖水解脢及纖維素水解脢活性分析 學 生:何季庭 指導教授:杜 鎮 研究員](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081415/56649d495503460f94a262f4/html5/thumbnails/12.jpg)
Ligation
![Page 13: 土壤菌 Bacillus 之分離 與 木聚糖水解脢及纖維素水解脢活性分析 學 生:何季庭 指導教授:杜 鎮 研究員](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081415/56649d495503460f94a262f4/html5/thumbnails/13.jpg)
Method—Clones Assay
Ampicillin-IPTG-X-gal assay ( Blue-white assay )
Congo red assay Plasmid extraction, restriction enzyme chec
k Zymogram
![Page 14: 土壤菌 Bacillus 之分離 與 木聚糖水解脢及纖維素水解脢活性分析 學 生:何季庭 指導教授:杜 鎮 研究員](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081415/56649d495503460f94a262f4/html5/thumbnails/14.jpg)
Plasmid AssayDigested by PvyII, two cut sites on pUC19
![Page 15: 土壤菌 Bacillus 之分離 與 木聚糖水解脢及纖維素水解脢活性分析 學 生:何季庭 指導教授:杜 鎮 研究員](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081415/56649d495503460f94a262f4/html5/thumbnails/15.jpg)
Method—Further experiment
Subcloning Sequencing Protein purification Protein activity assay Commercial application Further research
![Page 16: 土壤菌 Bacillus 之分離 與 木聚糖水解脢及纖維素水解脢活性分析 學 生:何季庭 指導教授:杜 鎮 研究員](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081415/56649d495503460f94a262f4/html5/thumbnails/16.jpg)
Result
32 xylanase active bacilli were isolated 28 CMCasa active bacilli were isolated No xylanase or CMCase active clone was d
etected
![Page 17: 土壤菌 Bacillus 之分離 與 木聚糖水解脢及纖維素水解脢活性分析 學 生:何季庭 指導教授:杜 鎮 研究員](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081415/56649d495503460f94a262f4/html5/thumbnails/17.jpg)
Discussion
Partial digest Ampicillin affects congo red assay Blue-white assay efficiency is not so reliable
![Page 18: 土壤菌 Bacillus 之分離 與 木聚糖水解脢及纖維素水解脢活性分析 學 生:何季庭 指導教授:杜 鎮 研究員](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081415/56649d495503460f94a262f4/html5/thumbnails/18.jpg)
The reason of failure
Immature operating!! Bacillus anthracis str. KrugerB, unfinishe
d sequence Accession: NC_004126 Number of Contigs: 887Total Bases Sequenced: 10 mb
The gene we are seeking: 500-2000 bp Rate: get 1 positive clone in more than 1000
0 clones!!
![Page 19: 土壤菌 Bacillus 之分離 與 木聚糖水解脢及纖維素水解脢活性分析 學 生:何季庭 指導教授:杜 鎮 研究員](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022081415/56649d495503460f94a262f4/html5/thumbnails/19.jpg)
The EndThank you for your
attention