dna recombinante e ingienier Í a gen É tica
DESCRIPTION
DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA. INGENIERÍA GENÉTICA. MANIPULACIÓN DEL DNA DE LOS ORGANISMOS VIVOS 1) INVESTIGACIÓN BÁSICA (ESTUDIO DE LA ORGANIZACIÓN, EXPRESIÓN Y FUNCIÓN DE GENES EN LOS ORGANISMOS VIVOS). - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
![Page 1: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/1.jpg)
DNA RECOMBINANTE E DNA RECOMBINANTE E INGIENIERINGIENIERÍAÍAGENÉTICAGENÉTICA
![Page 2: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/2.jpg)
INGENIERÍA GENÉTICA
MANIPULACIÓN DEL DNA DE LOS ORGANISMOS VIVOS
1) INVESTIGACIÓN BÁSICA (ESTUDIO DE LA ORGANIZACIÓN, EXPRESIÓN Y FUNCIÓN DE GENES EN LOS ORGANISMOS VIVOS).
2) APLICACIÓN DE ESTE CONOCIMIENTO EN LA MANIPULACIÓN CONSCIENTE DE LOS GENES EN SALUD, EN LA INDUSTRIA DE ALIMENTOS, EN LA AGRICULTURA, ETC.
![Page 3: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/3.jpg)
PIEDRAS ANGULARES DE LA INGIENIERÍA GENÉTICA
1. CONSTRUCCIÓN DE LIBRERÍASDE cDNA Y GENÓMICAS
2. DESCUBRIMEINTO DE LAS ENDONUCLEASAS DE RESTRICCIÓN (ENZIMAS DE RESTRICCIÓN)
3. DESCUBRIMIENTO DE LA REACCIÓNDE POLIMERIZACIÓN DE CADENA OPCR (POLYMERASE CHAIN REACCTION)
![Page 4: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/4.jpg)
Técnicas de DNA Recombinante
![Page 5: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/5.jpg)
El problema: ¿Qué material genético vamosa manipular y cómo lo vamos a hacer?
![Page 6: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/6.jpg)
![Page 7: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/7.jpg)
• Aislar secuencias de DNA
• Obtener múltiples copias de ellos
TECNICAS
• Clonamiento Molecular
• PCR (reacción en cadena de la polimerasa)
ANALISIS DE GENES
Se requiere:
![Page 8: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/8.jpg)
CLONAMIENTO MOLECULAR HERRAMIENTAS BASICAS
• Enzimas de restricción
• Vectores
• DNA ligasa
• Células huésped
*
![Page 9: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/9.jpg)
Enzimas de Restricción
![Page 10: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/10.jpg)
DIGESTION DEL DNA POR ENDONUCLEASAS DE RESTRICCION
Sitio de corte
![Page 11: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/11.jpg)
ESENZIMAS de RESTRICCION Sitio de corte de enzimas de restricción Sitios de corte de endonucleasas de restricción
Las flechas indican los enlaces fosfodiester sobre los que actúa cada enzima
![Page 12: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/12.jpg)
CLONAMIENTO MOLECULAR HERRAMIENTAS BASICAS
• Enzimas de restricción
• Vectores
• DNA ligasa
• Células huésped
![Page 13: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/13.jpg)
Características básicas de un vector de clonamiento
• Origen de replicación autónomo
• Gen marcador de selección
• Sitios únicos de restricción
![Page 14: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/14.jpg)
Componentes básicos de un vector de clonamiento plasmidial que puede replicar en una célula de E.coli
Caja de clonaje múltiple
codifica proteína de resistencia a
ampicilina
Origen de replicación
Región de inserción de DNAExógeno
![Page 15: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/15.jpg)
CromosomaFragmento de
DNA libre
1» divisi—n celular
2» divisi—n celular
Fragmento de DNA insertado en un plasmidio
1ª división celular
2ª división celular
¿PORQUE EL USO DE UN VECTOR ?
![Page 16: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/16.jpg)
TIPOS DE VECTORES
kpb
inserto
Plasmidios 3-5bacteriofagos 15BACS 300 YACS 2000
![Page 17: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/17.jpg)
CLONAMIENTO EN PLASMIDIO
EcoRI PvuII
Sitio de corte Sitio de corte
Extremos cohesivos Extremos romos
Vector plasmidial cortado con EcoR1 y PvuII
DNA cromosomal cortado con EcoR1 y PvuII
![Page 18: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/18.jpg)
CLONAMIENTO MOLECULAR HERRAMIENTAS BASICAS
• Enzimas de restricción • Vectores
• DNA ligasa
• Células huésped
![Page 19: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/19.jpg)
Unión de fragmentosde restricción que poseen extremos cohesivos
Fragmentos de DNA genómico
b + c
![Page 20: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/20.jpg)
CLONAMIENTO EN PLASMIDIO
EcoRI PvuII
Sitio de corte Sitio de corte
Extremos cohesivos Extremos romos
Vector plasmidial cortado con EcoR1 y PvuII
DNA cromosomal cortado con EcoR1 y PvuII
![Page 21: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/21.jpg)
CLONAMIENTO MOLECULAR HERRAMIENTAS BASICAS
• Enzimas de restricción • Vectores
• DNA ligasa
• Células huésped
![Page 22: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/22.jpg)
PROPAGACION EN CELULA HUESPED
![Page 23: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/23.jpg)
RESUMEN DE CLONAMIENTO
Enzimas de restricción
DNA Ligasa
Vector
Célula huésped
![Page 24: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/24.jpg)
CLONES que contienen diferentes fragmentos del genoma = GENOTECA
![Page 25: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/25.jpg)
CONSTRUCCIÓN DE LIBRERÍAS DE cDNAY DE DNA GENÓMICO
USO DE VECTORES -PLASMIDIOS-DNAs DE FAGOS-OTROS (BACs, COSMIDIOS, YACs, ETC).
GENOTECAS O LIBRERÍAS
![Page 26: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/26.jpg)
![Page 27: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/27.jpg)
Genoteca de cDNA
Obtención :
Clonamiento de cDNA obtenido mediante transcripción reversa de mRNA total.
![Page 28: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/28.jpg)
![Page 29: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/29.jpg)
![Page 30: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/30.jpg)
![Page 31: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/31.jpg)
![Page 32: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/32.jpg)
vectores
+
ligación
transformación
![Page 33: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/33.jpg)
Genoteca de DNA genómico
Obtención :
1. Fragmentación de todo el genoma mediante enzimas de restricción
2. Clonamiento de fragmentos en vectores
![Page 34: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/34.jpg)
![Page 35: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/35.jpg)
¿Cómo aislar un fragmento de DNA
de interés?
Aislamiento de un clon
-Uso de sondas radiactivas
- PCR
![Page 36: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/36.jpg)
Identificación de un fragmento de DNA específico en las colonias transformadas
mediante HIBRIDIZACION CON SONDAS
MARCADAS
![Page 37: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/37.jpg)
Clonamiento por PCR
![Page 38: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/38.jpg)
![Page 39: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/39.jpg)
CLONAMIENTO DE UN PRODUCTO DE PCR
libreria
![Page 40: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/40.jpg)
Combinación de la transcripción reversa con PCR
RT-PCR
![Page 41: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/41.jpg)
![Page 42: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/42.jpg)
Cloning by RT-PCR
TTTTTTT PCR
cDNA
Corte con enzimas de restricción y ligación a un plasmidio
![Page 43: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/43.jpg)
CLONAMIENTO DE UN PRODUCTO DE PCR
libreria
![Page 44: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/44.jpg)
SECUENCIACION DEL DNA
![Page 45: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/45.jpg)
Estudio de la función de un gen
Vectores de expresión
![Page 46: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/46.jpg)
Vector de expresión en bacteriasVector de expresión en bacterias
![Page 47: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/47.jpg)
![Page 48: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/48.jpg)
Vectores de expresión en eucariotes
![Page 49: DNA RECOMBINANTE E INGIENIER Í A GEN É TICA](https://reader035.vdocuments.site/reader035/viewer/2022062517/568135f8550346895d9d68e6/html5/thumbnails/49.jpg)
FUNCIÓN DE UN GENFUNCIÓN DE UN GEN
Herramientas de Estudio:
1. Análisis computacional en banco de datos: homología de secuencia con un gen de otro organismo cuya función se conoce.
2. Animales transgénicos y knock out.