DNA recombinante

La tecnología de DNA recombinante genera herramientas para estudiar los genes y sus productos

Insertar en vector de expresión

Transformar E. coli u otro hospedero

Deducir secuencia de aminoácidos

Preparar péptidos sintéticos

Preparar anticuerpos específicos para una proteína

Secuencia de aminoácidos

Anticuerpo específico

Sintetizar sonda específica

Escrutinio de una biblioteca de DNA por Southern blot

Escrutinio de una biblioteca de expresión por Western blot

Plásmidos de expresión

Caracteristicas adicionales: -  Promotor regulable -  Terminador de la transcripcion -  Sitio de reconocimiento por el ribosoma

Transformacion en celulas eucariontes

Transformación directa

Biobalística

Microinyección

Virus

Métodos de transfección Permeabilización química de las membranas Electroporación Liposomas

Vectores

Vectores derivados de virus animales SV40 Retrovirus Vacuna Vectores mixtos

Métodos de selección

Detección de actividades enzimáticas Resistencia a inhibidores Resistencia a antibióticos

Integración dirigida

Clonación en células animales

Vectores de expresión para células animales

Promotor inducible para animales

El resto de características de los vectores de expresión son similares

Promotor del gen X Gen reportero

5’UTR X 3’UTR X

Construcción de Reporteros

Proteínas reporteras

Proteína verde fluorescente (GFP)

Beta-glucoronidasa (GUS)

Luciferasa de luciérnaga (LUC)

Creando ratones Knockout

Bancos de mutantes en los organismos modelos

Transformación de células vegetales

Agrobacterium tumefaciens

Transformación mediada por Agrobacterium tumefaciens

Transformación por biobalística

¡ Suerte en el examen !