DNA-Hybridisierung

nach

Sibley & Ahlquist

DNA

1. Biomolekül

2. Träger der Erbinformationen

3. Doppelhelix1. Adenin-Guanin

2. Thymin-Cytosin

4. nahverwandte Arten ähnliche DNA

Methode der DNA-Hybridisierung

1. 2x DNA Extrahierung und Reinigung

2. 2x DNA Sequenzschaffung

3. 2x „single-copy“-Bildung

4. 2x DNA Markierung

5. Vermischung

6. Ermittlung der Schmelzpunkte

1. DNA Extrahierung und Reinigung

1. DNA wird aus den Zellen entfernt

2. RNA-Moleküle und Proteine entfernt

2. DNA Sequenzschaffung

1. 500 Basenpaare

2. durch Enzyme

3. „single-copy“-Bildung

1. Erhitzung der Doppelstränge auf 95°C

2. Wasserstoffbrückenbindungen schmilzen

4. DNA Markierung

1. DNA wird radioaktiv gekennzeichnet

2. Iod als Markierung

5. Vermischung

1. beide Lösungen mit Sequenzen werden vermischt/ 1 zu 1000

2. Abkühlung auf 50°C

3. einige Stunden Wartezeit

6. Ermittlung der Schmelzpunkte

1. Erhitzung auf 95°C

2. 2,5°C Schritte

3. Auswaschen bei jedem Schritt

4. Hydroxlapatit als „Sieb“

7. Schmelzpunkt

1. 50% Hybrid-DNA ausgewaschen

=> Schmelzpunkt

2. Parallelversuch nur mit einer DNA

3. Differenz der beiden Schmelzpunkte = ∆T50H-Wert