DIAGNÓSTICO INMUNOLOGICO

Dra Ma Elena Tosello

El diagnóstico inmunomicológico :

diagnóstico presuntivo de la infección

seguimiento de terapia antifúngica

en las micosis oportunistas ayuda a dar

significado clínico del hallazgo del agente

en Ex. directo y Cultivos

Del estado inmunológico del

hospedador

TECNICAS INMUNOLÓGICAS

Ac

Ag

Hongos patógenos u oportunistas

Histoplasma capsulatum

Paracoccidioides brasiliensis

Coccidioides posadasii

Coccidioides immitis

Cryptococcus neoformans

Aspergillus fumigatus y

otras especies

Candida albicans y otras

especies

Otros hongos emergentes

TECNICAS INMUNOLÓGICAS

Con un hospedador inmunocompetente

Inmunodifusión (ID)

Contrainmunoelectroforesis (CIE)

TECNICAS

MAS

USADAS

Con un hospedador inmunocomprometido

Ac

SE HAN DESARROLLADO

DISTINTAS TECNICAS

ESPECÍFICAS DE ESPECIES

Ag

TECNICAS INMUNOLÓGICAS

SIMILITUDES Y DIFERENCIAS

ID CIE

Ambas se realizan a TEMPERATURA AMBIENTE

Agar precipitinas Agarosa

Resultado en 72 hs Resultado en 2 hs

Económica Menos económica

Se pueden realizar en cualquier Laboratorio

TIPOS DE ANTIGENOS USADOS

EXOMETABOLITOS

Cultivos en medio líquido en reposo

CITOPLASMATICOS

Histoplasma capsulatum

Paracoccidioides brasiliensis

Coccidioides posadasii / C. immitis

Aspergillus fumigatus / A. flavus /

A. niger / A. terreus

Antígenos que pueden ser proteínas o glicoproteínas que son excretadas en el medio de cultivo

Antígenos que son obtenidos por ruptura de la pared celular fúngica

Candida albicans

S AS

Ag

S AS

Ag

S

AS

Ag

INTERPRETACION DE RESULTADOS EN INMUNODIFUSIÓN

IDENTIDAD

NO IDENTIDAD

IDENTIDAD

PARCIAL

Paracoccidioidomicosis

Detección de componentes antigénicos de pared

ELISA Distintas fracciones

43kDa

27kDa

HSP60

Reacciones

cruzadas con

histoplasmosis

TECNICAS INMUNOLOGICAS

Histoplasmosis

Detección de componentes antigénicos de pared

ELISA Detecta Ag polisacárido de

Histoplasma capsulatum

suero

orina Reacciones cruzadas Falsos positivos

TECNICAS INMUNOLOGICAS

Coccidioidomicosis

Detección de componentes antigénicos de pared

Elguezabal 2005

ELISA Proteína de 47kDa con epitopes de fijación del

complemento y actividad quitinasa

Reacciones cruzadas Histoplasmosis

Blastomicosis

TECNICAS INMUNOLOGICAS

Criptococosis

Detección de Ag

Reacción de

aglutinación de

partículas de latex

Detecta en forma cualitativa o semicuantitativa de

antígeno polísacárido de pared de Cryptococcus

neoformans

LCR

SUERO

TECNICA DE GRAN ESPECIFICIDAD Y SENSIBILIDAD

TECNICAS INMUNOLOGICAS

Criptococosis

Falsos positivos

Falsos negativos

Pacientes con septicemia

Pacientes con infección

diseminada por otros hongos

Pacientes con artritis

reumatoidea

Inmunocomplejos circulantes

Fenómeno de prozona

Se corrige con

pronasa

TECNICAS INMUNOLOGICAS

Infecciones fungicas invasivas (IFI)

1,3 β D glucano MARCADOR PANFUNGICO

Aspergillus

Fusarium

Scedosporium

Acremonium

Candida

UBICUA Contaminación en el laboratorio

Material descartable libre de

hongos y endotoxinas de bacterias

Detección de componentes no antigénicos

TECNICAS INMUNOLOGICAS

Aspergilosis invasiva

Detección de componentes antigénicos de pared

Detección de galactomanano Antígeno de pared celular del

género Aspergillus

Platelia Aspergillus

BioRad Francia ELISA doble sandwich que utiliza

Ac monoclonales EB-A2

TECNICAS INMUNOLOGICAS

Candidiasis invasiva

Detección de componentes antigénicos de pared

Platelia Candida Ag ELISA que detecta α-manano- Ag

mayoritario de pared celular de Candida-

Para fines diagnóstico la detección de Ag se combina con la de Ac

ELISA β-manano

Candida albicans IFA IgG (Lab Vircell)

Detecta Ac anti-micelio de C. albicans

Detección de anticuerpos

Enolasa recombinante del Candida enolasa ELISA Ig G kit (Lab Vircell)

TECNICAS INMUNOLOGICAS

TEST DE EXOANTIGENO

Cuando en los cultivos no desarrollan

estructuras de fructificación específicas

Cultivo del

hongo

P. brasiliensis

H. capsulatum

Aspergillus spp

Coccidioides spp

Sporotrix schenckii

merthiolate 0,02% o

azida sódica 0,02%

24 hs en heladera

Se repica e incuba

a 28°C

por 7 a 10 días

Se extrae el

líquido, se

concentra 25 a

50 veces

EXOANTÍGENO

Inmunodifusión con

Ag y Ac específicos

Banda de Identidad

a las 72 hs

Inmunoidentificación

de especie fúngica