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Diagnostic microbiologique
encéphalite à tique et ehrlichioses
CHUV 2013 Reto Lienhard FAMH, Collaborateur CNRT
Tiques (CH)
Borrelia MEVE - FSME Francisella Ehrlichia Anaplasma Rickettsia Babesia Bartonella
10-35% 0-3% 0.1 % 6.4 % 1.5 % 10% 1.9 %
Lommano E. et al Appl. Environ. Microbiol. 2012
Wicky et al Eur.J.Clin. Microb. Inf. Dis 2000
FSME -Diagnostic
Diagnostic sérologique exclusivement
Infection aiguë si les IgM sont positifs (6-8 sem.)
Intervalle de 7-10 jours avant d’exclure FSME
Sérum suffisant pour un diagnostic
Test ELISA (pas Fixation Complément !)
Sensibilité > 95% très bonne au stade neurologique
Spécificité >95% selon présence d'autres IgM
Absence d’UI
FSME –Coffrets disponibles (2012)
Fabricant Sensibilité (notice)
Spécificité (notice)
utilisé
FSME IgG
Sekisui/Virotech >99.8% 95.60% +++
Virion/serion 97-98.9% 90.3-98.3% ++
Siemens 96.80% 99.50% ++
Progen Biotechnik 95% 98% 0
NovaTec Immunodiagnostica >98% >98% 0
FSME IgM
Sekisui/Virotech >99.8% 99.80% +++
Virion/Serion 97->99% >99% ++
Siemens 98.80% 99.90% ++
Progen Biotechnik 99% 99% +
NovaTec Immunodiagnostica 80% 95% 0
Sens. 95-99%
Spéc. 90-98%
LR+ = 10-100
LR- = 0.01- 0.06
FSME – phase aiguë
FSME IgM : négatif FSME IgG : négatif En cas d’état grippal ou fièvre après piqûre de tique et en
tout début de symptômes
Contrôle sérologique après quelques jours (3-7j) suffit pour la séroconversion.
PCR dans le sérum peut être positive à ce stade En tout début de signe neurologique un contrôle à 1-3 j. En cas de probabilité pré-test faible : Stop.
FSME – phase aiguë
FSME IgM : positif FSME IgG : négatif Tout début de symptômes neurologiques
Contrôle sérologique après quelques jours (<5j) pour preuve de l’infection par la séroconversion en IgG (Preuve sérologique)
PCR dans le sérum négative En cas de probabilité pré-test très élevée : Stop.
FSME – phase aiguë
FSME IgM : positif FSME IgG : positif Tout début de symptômes neurologiques
>90 % des résultats Probabilité pré-test élevée = MEVE
Vaccination récente ? Immunoglobulines ? Infection possible avant administration de doses complètes PCR dans le sérum ou LCR inutile Test de neutralisation ?
FSME – phase aiguë
FSME IgM : négatif FSME IgG : positif Tout début de symptômes neurologiques
Rare !! Vaccination récente ? Immunoglobulines ? Contrôle sérologique à 10j pour apparition retardée des IgM Test avidité ? Prod.intrathécale ?
FSME – les pièges
Réactions croisées avec autres flaviviridés
Retour de voyage - zones à risque ? Pensez au virus
West Nile, Dengue, encéphalite japonaise, Fièvre
jaune
IgM croisés = autres origine ou persistance des IgM
( plusieurs mois post infection ou vaccination)
= Diagnostic différentiel nécessaire
FSME – les pièges
LCR: Réponse humorale 50% puis 100% à J10
Production intrathécale pas utile au diagnostic
RT-PCR permet identification au stade virémique,
sérologies les jours suivant.
Vaccination ?! = Diagnostic difficile - Tests
complémentaires: contrôle à 10j, Prod.intrathécale
« Ehrlichioses humaines »
JS Dumler, Villars 2013 modifié de Dumler et al Int J Syst Evol Microbiol 2001
Anaplasmose humaine
Anaplasmose granulocytaire humaine (HGA)
Anaplasma phagocytophilum
Vecteur =Ixodes spp
Nord – Est USA (1000 cas en 2012)
env 65 cas décrits en Europe, aussi en Asie orientale
intracellulaire des neutrophiles
incidence = 0,5 à 7 /106
risque augmente avec l âge et chez le sexe masculin
mortalité 0.5 %
Ehrlichioses humaines
Ehrlichiose monocytaire humaine (HME)
Ehrlichia chaffeensis
Amblyomma americanum
USA Sud centre et S-E (),
Absente en Europe mais cas en Amer. Sud, Asie
intracellulaire des monocytes, macrophages
1000 cas/an 2007-2012. Incidence = 1- 4 /106
risque augmente avec âge et sexe masculin
mortalité 1.9 %
Ehrlichioses humaines rares
Ehrlichia ewingii
Amblyomma
8 cas aux USA,
absente en Europe
Ehrlichia canis (USA)
Ehrlichia muris (USA - Russie)
Ehrlichia ruminantium (Venezuela)
Ehrlichiose humaine émergente
Candidatus Neoehrlichia mikurensis Ixodes
6 cas Europe
Cas en Chine mais non décrite ailleurs
Distributions
E.muris Neoehrlichia mikurensis
E.chaffeensis
HME
Anaplasma phagocytophilum HGE
E.ewingii
E.canis
Modifié de www.uptomed.ir
Aspects cliniques
Anaplasma Ehlichia Neoerhlichia Lyme
fièvre ++++ +++ +++ (0)
céphalée +++ ++ ++ ++
myalgie ++ ++ + ++
arthralgie ++ ++ +++ ++
A. neurologique 0 + +
A. respiratoire + + + 0
nausée + ++ + (0)
rash 0 0 + EM
thrombocytopénie +++ +++ 0
ASAT/ALAT +++ +++ 0
leucopénie ++ ++ (+)
Diagnostic microbiologique
En tout début de la phase aiguë de la maladie.
Observation minutieuse des frottis sanguins (Giemsa)
Chercher la présence d'inclusions (morulae) dans les
neutrophiles ou monocytes.
Différenciation possible au type mais pas à l'espèce
Diagnostic direct
des anaplasmoses humaines
Cet examen doit être complété par une PCR sur le
sang complet pour l'identification de la bactérie
intracellulaire.
PCRrt spécifique gène msp2 A.phagocytophilum
PCR multiplex Anaplasmataceae/rickettsiales
PCR et séquençage de l’amplicon (GroEL, arn16S)
Culture de cellules pas disponible en CH
Diagnostic indirect
Sérologie IF A.phagocytophilum
Lame Anaplasma phagocytophilum en culture de
cellule
Sérum en phase aiguë et 2-4 semaines après
IFI en IgG sensibilité >95% à 30jours
IgM possible mais peu sensible, pas utile
Preuve par mise en évidence de la séroconversion IgG
Sérologie A.phagocytophilum
Etudes 23 patients avec culture positive USA (JCM2000).
Délai de séroconversion = 0 à 36 jours
95% obtiennent un titre <1/640
Titre maximal = 1/2'500
Pic obtenu après 7 j à 4 mois
Pour 90% titre maximal à < 30 jours
Séropositivité chez 50% des patients après 11 mois
Cas de transmission par transfusion 2007 (Canada)
Sérologie A.phagocytophilum
Littérature.
1985 séroprévalence à 13 %Neuchâtel (Brouqui et al
Lancet)
1997 1er cas en Europe
Actuellement env. 65 cas décrits
Séroprévalences
zone endémique (USA) 15 à 36 %
moyenne en Europe 6% (max.21%)
Diagnostic microbiologique
E.chaffeensis
Frottis sanguin (difficile et peu sensible !)
Sérologie par IF en IgG sur 2 sérums, titre
seuil 32 ou 64 à définir,
Actuellement pas disponible en Suisse
(ADMed en 2014 ?)
Confirmation nécessaire par PCR ou sérologie
dans un centre de Référence
Diagnostic microbiologique
Neoehrlichia mikurensis
PCR du sang et moelle
Amorces et sondes spécifiques
arn 16S et séquençage
Suivi du traitement par PCR
Sérologie absente
Fièvre d’origine inattendue Dr M.Gallachi (SSMTP 08)
Femme 67 ans secrétaire
3 semaines de fièvre, frissons, anémie, hépatopathie
thrombocytopénie, leucopénie
Voyage en Europe
et 2,5 mois New-York
Piqûre de tique
Fièvre d’origine inattendue
Laboratoire.
forme en anneau intra-érythrocytaire (1%) et test
rapide malaria négatif
PCR malaria négative
Babesia microti
Séroprévalence NE 1,5 % - Europe 2 - 8 %
Cas clinique Babesia divergens chez splénectomisés
1er cas publié en 2007 par Hildebrandt et al (2004 ?)
Tiques CH – B.divergens, B.venatorum
MTT: Message Transmis via Tiques
Patient présentant un état fébrile après piqûre de
tiques peut présenter plusieurs pathogènes.
MEVE
Anaplasma phagocytophilum
Neoehrlichia mikurensis
Babésiose
Ehrlichiose X
F.tularensis
Babésioses humaines
Babesia
B.microti, B.divergens,
+ souches WA1, MO1 et EU1
En Europe rares cas, B.divergens chez patients
splénectomisés
Aux USA endémie locale B.microti tout patient
EF, frissons, myalgies, fatigue, hépatosplénomégalie
intracellulaire erythrocyte
mortalité peut être très élevée
Cas asymptomatiques
Diagnostic direct des babésioses
Phase aiguë de la maladie.
Observation des frottis sanguins colorés au Giemsa
Observation de gouttes épaisses
Présence de piroplasmes dans les érythrocytes
Ressemble aux Plasmodium
Mesure de la parasitémie
Diagnostic direct des babésioses
Culture de cellules en laboratoire spécialisé
Différenciation au genre selon expérience
Différenciation définitive seulement par PCR au genre
ou espèce
Diagnostic indirect des babésioses
Phase aiguë et convalescente de la maladie.
Indiquée si parasitémie faible
Différenciation avec plasmodium
Diagnostic rétrospectif après traitement
Diagnostic indirect des babésioses
IF avec B.microti mais réactions croisées faibles ou
inexistantes ! IF sur les autres souches utiles si nég.
Titre à 1/1024 en 2 - 6 semaines
Diminution en 6 mois (1/125), persistance possible
Séroprévalence NE 1,5 % - Europe 2 - 8 %
Etude NE piqûres de tiques
(D.Hügli pour une thèse chez Dr Lise Gern, Unine)
2003-05
tique amenée chez médecin
questionnaire
sérologie faite à la piqûre de tique et 2 mois plus tard
Analyse des 2ème sérums
Reprise du sérum de contrôle en cas de positivité
Piqûres de tiques - Etude NE
474 personnes participantes
15 Erythèmes migrants
14 sérologies faite
0 confirmée positive en WB
2 séroconversions
Piqûres de tiques - Etude NE
100 sérums dépistés (2005)
dont 3 érythèmes migrants
16% sérologies positives
9% dépistages confirmées (WB)
3% de séroconversions
1 seul érythème migrant
2 asymptomatiques
Piqûres de tiques - Risques
100 sérums dépistés pour la Lyme(2005)
avec 3 érythèmes migrants
16% sérologies positives
9% dépistages confirmées (WB)
3% de séroconversions
1 seul EM avec séroconversion
2 EM séronégatives
Sur 474 personnes 14 EM avec sérologie
0 confirmé en WB
2 séroconversions
Sérums de l’étude piqûre de tique, Thèse de D.Hügli, Unine + diplômes TAB, ECLM
Suivi IgG anti-VlsE
0
1000
2000
3000
4000
5000
6000
sym
tom
e 1 3 5 7 9 11 13 15 17 20 22 24 26 52
NEU1 NEU2 ACA1 ACA2
Suivis des IgG anti-VlsE