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OFICINA DE CENTROS DE DIAGNÓSTICO
Y PRODUCCIÓN
Unidad del Centro de Control de Insumos y
Residuos Tóxicos
MET-UCCIRT/Res05
DETERMINACIÓN DE METALES PESADOS EN
CACAO POR PLASMA INDUCTIVAMENTE
ACOPLADO A ESPECTROMETRÍA DE MASA
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Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:
Miriam Tames Aponte Especialista UCCIRT
Orlando Lucas Aguirre Director UCCIRT
Cesar De la Cruz Lezcano Director OCDP
Firma
Fecha 26/07/2021 27/07/2021 27/07/2021
Angie Cóndor Dominguez.
Especialista UCCIRT
Ana Ramos Moreno Especialista UCCIRT
Firma
Fecha 26/07/2021 27/07/2021
TABLA DE CONTENIDO:
Introducción
1. Objetivo.
2. Campo de aplicación.
3. Referencias.
4. Definiciones.
5. Metodología.
6. Antecedentes.
7. Anexos.
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INTRODUCCIÓN
Los metales se encuentran de manera natural en la corteza terrestre en forma de
minerales, de donde pueden ser absorbidos por las plantas y tomados de ellas por
el ser humano, lo que constituye un riesgo potencial para la salud. Diversos
estudios han determinado que la planta de cacao absorbe metales pesados del
suelo y los concentra en el fruto, hojas etc.
Este método de ensayo es utilizado para la determinación de metales pesados
(Cadmio, Arsénico y Plomo) en granos Cacao enteras o pulverizadas. Es un
método modificado a partir del método AOAC official Method 2015.01 Heavy
Metals in Food. Es un método instrumental de espectrometría de masas acoplado
a plasma inducido que ha sido validado en las condiciones actuales del Centro de
Control de Insumos y Residuos Tóxicos.
1. OBJETIVO
Describir el procedimiento de operación, para la determinación Zinc, Cadmio,
Plomo y Arsénico en cacao llevado a cenizas o por el método de digestión en vaso
cerrado y posteriormente por la técnica de espectrometría de masas acoplado a
plasma inducido.
2. CAMPO DE APLICACIÓN
2.1 Este método es aplicable a la determinación de trazas de metales (Zinc, Cadmio,
Plomo, Arsénico) en muestras de cacao.
2.2 Mediante este método espectrómetro de masa acoplado a plasma inducido puede
determinarse Zinc, cadmio, plomo y arsénico en el siguiente rango de
concentraciones:
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Tabla N° 1: Concentraciones determinadas para cacao y
concentraciones mayores por dilución.
Equipo ICPMS Agilent 7500
Equipo ICPMS THERMO iCAP RQ
Zinc 3.974 a 10.00 mg/Kg 4.863 a 10.00 mg/Kg
Arsénico 0.024 a 10.00 mg/Kg 0.026 a 10.00 mg/Kg
Cadmio 0.042 a 10.00 mg/Kg 0.065 a 10.00 mg/Kg
Plomo 0.018 a 10.00 mg/Kg 0.054 a 10.00 mg/Kg
2.3 Las actividades establecidas en el presente instructivo aplican tanto a las
colaboradoras como a los colaboradores del SENASA, promoviendo la
interculturalidad.
2.4 Este método es aplicado por las personas autorizadas según registro REG-
UCCIRT/Cal-11.
3. REFERENCIAS
3.1. Manuales de ICP-MS:
Agilent 7500 ICP- MS Hardware manual.
Agilent 7500 ICP- MS Customer Maintenance Parts List.
Agilent 7500 ICP- MS Integrated Simple Introduction System Manual.
Agilent 7500 ICP- MS Intelligent Sequence Software Manual.
Agilent 7500 ICP- MS Chemstation (G1834B) Operators Manual.
Agilent 7500 ICP- MS Installation Guide.
Agilent 7500 ICP- MS Aplication Handbook.
Agilent 7500 ICP- MS Option instruction Manual.
Agilent 7500 ICP- MS Maintenance Video (DVD).
UP Station GXT 6 &10 KVAU 230 V User Manual.
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UP Station GXT 6 &10 KVAU Optional Battery Use Manual.
Microwave Digestion System Operators Manual Microondas.
3.2. Manuales de ICP-MS THERMO iCAP-RQ:
Thermo ICP- MS operator training modelo iCAP-RQ.
Thermo ICP- MS operating manual iCAP-RQ
Thermo ICP- MS Software manual iCAP-RQ
UP Station GXT 6 &10 KVAU 230 V User Manual.
UP Station GXT 6 &10 KVAU Optional Battery Use Manual.
3.3. Manuales de ICP-MS Agilent 7900:
Agilent 7900 ICP- MS Hardware Maintenance Manual.
Agilent 7900 ICP- MS Familiarization Guide.
Masshunter Workstation User Guide.
PrepFAST 2 User´s Guide - Agilent-MassHunter.
3.4. User Guidelines. CEM modelo MARS 6. (2016). General Guidelines to
Assist With Microwave Digestion Method Development.
3.5. MarsXpress. Microwave Digestion Vessel. Manual.
3.6. CEM-MARS 6. (2019). Microwave Acid Digestion. Method Note
Compendium.
3.7. MA176-002-SK15-USER MANUAL ( MILLESTONE)
3.8. Guía de operación del digestor microondas modelo Ethos up con rotor Maxi
44
3.9. ITR-UCCIRT/Res-02: Limpieza y mantenimiento del espectrómetro de masas
acoplado al plasma inducido.
3.10. ITR-UCCIRT/Lab06: Manejo del sistema de gases y de la unidad de vacío de
la UCCIRT.
3.11. ITR-UCCIRT/Res-09 Instructivo de manejo de horno mufla.
3.12. ITR-UCCIRT/Lab-08 “Verificación y uso de las balanzas de la UCCIRT”.
3.13. ITR-UCCIRT/Lab-07 Lavado de materiales de la UCCIRT.
3.14. Presencia de metales pesados en cultivo de cacao (Theobroma cacao L.)
orgánico. Hugo Alfredo Huamaní Yupanqui, Miguel Angel Huauya-Rojas, Luis
German Mansilla Minaya.
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3.15. Reglamento (CE) N° 488/2014, Niveles máximos de cadmio en productos
alimenticios.
3.16. AOAC official Method 2015.01 Heavy Metals in Food, Inductively Coupled
Plasma – Mass Spectrtometry. First Action 2015. (AOAC OFFICIAL
METHODS OF ANALYSIS (2016)
4. DEFINICIONES
ICP-MS: Plasma inductivamente acoplado con detector de masas
m/z : Relación de masa /carga.
RPS: Porcentaje relativo de desviación.
RPD: Diferencia porcentual relativa
5. METODOLOGÍA
El método es ejecutado por especialista o técnico autorizado en el registro
Listado de Personal Autorizado para Realizar Ensayos REG-UCCIRT/Cal-11.
5.1 Principio del método
La porción analítica es analizada por vía húmeda o vaso cerrado en Microondas
a las condiciones específicas del método, es filtrada y analizada usando el
espectrómetro de masas con plasma inducido. En el caso de Digestión por
vaso cerrado en microondas, se adiciona 6ml HNO3 ultrapuro y 2 ml de
peróxido, posteriormente asignar el tiempo de digestión en el microondas
según el rotor a utilizar.
Los compuestos de interés extraídos de la matriz mediante la digestión son
introducidos a través de una bomba de nebulización a una cámara spray en la
radio frecuencia del argón plasma, La temperatura en el plasma de disociación,
atomización e ionización es aproximadamente 10.000 ºC.
Se presenta una desolvatación, atomización e ionización, donde los iones de
carga positiva son conducidos en un sistema de vacío al espectrómetro, pasan
por los conos de interface y son analizados en el cuádruplo.
Cada ion existente en el cuádruplo es identificado por el detector que almacena
una señal de masa/carga (m/z), produciéndose un pico proporcional a la
concentración del elemento.
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5.2 Precauciones
5.2.1 Precauciones de seguridad
5.2.1.1 Se requiere mandil, mascarillas para ácidos, guantes y anteojos de
protección y reductores de ruido.
5.2.1.2 Cada reactivo debe ser considerado como un peligro potencial a la salud
y la exposición a estos compuestos debe ser minimizada por buenas
prácticas de laboratorio.
5.2.1.3 Lavarse escrupulosamente las manos después del trabajo en el
área.
5.2.1.4 El argón líquido es un criogénico y sofocador riesgoso potencial al
momento de ser utilizado o manipulado, proceder con cuidado.
5.2.1.5 Las muestras o reactivos derramados se limpian rápidamente con
cuidado, utilizando gránulos de adsorbentes para sustancias químicas.
5.2.2 Precauciones de operación
5.2.2.1 El lavado del material de trabajo debe realizarse siguiendo el instructivo
de lavado de materiales (ITR-UCCIRT/Lab-07).
5.2.2.2 Se deben utilizar reactivos de grado analítico o superior, que cumplan las
normas internacionales de calidad (ACS, ISO).
5.2.2.3 Todos los reactivos se deben almacenar en recipientes adecuados,
provistos de etiquetas indicando el nombre del reactivo, fecha de
preparación e iniciales del analista.
5.2.2.4 El área de digestión y análisis de las muestras deben estar libre de
partículas de polvo debido a que las trazas de metales se pueden
encontrar en el medio ambiente y puede existir contaminación externa.
5.2.2.5 Verificar siempre el correcto funcionamiento del sistema de gas Argón
con el instructivo ITR-UCCIRT/Lab-06 (Manejo del sistema de gases y
de la unidad de vacío de la UCCIRT)
5.2.2.6 Se debe realizar la limpieza y mantenimiento de los equipos de
Espectrometría de Masas acoplado con plasma inductivamente según el
instructivo ITR-UCCIRT/Res-02 (Limpieza y mantenimiento del
equipo ICPMS Agilent 7500) e ITR-UCCIRT/Res-25 (Limpieza y
mantenimiento del equipo ICP-MS iCAP-RQ Thermo).
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5.2.2.7 El correcto manejo de los equipos ICP-MS se realiza de acuerdo al
instructivo ITR-UCCIRT/RES-12 (Manejo del espectrómetro de masa
acoplado inductivamente ICP-MS 7500ce) e ITR-UCCIRT/RES-24
(Manejo del espectrómetro de masa acoplado inductivamente ICP-
MS iCAP-RQ Thermo)
5.2.3 Precauciones analíticas (Interferencias).
Existen cuatro diferentes fuentes de interferencias por ICP-MS.
5.2.3.1 Interferencias espectroscópicas: son interferencias causadas por la
presencia de compuestos o elementos espectroscópicos los cuales tienen
la misma masa nominal carga /masa (m/z), ellos pueden ser isobáricos, poli
atómicos, óxidos refractómetros y iones de doble carga.
5.2.3.2 Interferencias isobáricas: son causadas por isótopos de otros elementos o
especies poliatómicas, cual tienen la misma masa nominal masa/carga como
el analito elemental. Esto puede ser administrado por la selección de un
isótopo alternativo para el análisis o por el uso de ecuaciones de
interferencias.
Las ecuaciones usadas provienen de los isótopos de la mayoría de los
elementos estimados y permite la sustracción de interferencias isobáricas.
Un ejemplo de una interferencia isobárica es Argón 40 por Calcio 40, en
este caso el uso de 43Ca o, 44Ca es recomendado. Una interferencia
Isobárica es 40 Ar 35Cl en 75As. En este caso el uso de ecuaciones
basado en las abundancias isotópicas de 35Cl/37Cl se puede usar. Las
ecuaciones usadas para este método son:
V 51 : (51) x 1 – (53) x 3
As 75 : (75) x 1 – (77) x 3
Mo 98 : (98) x 1
Cd 111 : (111) x 1 – (108) x 1
In 75 : (115) x 1
Pb 208 : (208) x1 + (206) x1 + (207) x1
5.2.3.3 Interferencias Físicas: son asociadas con los procesos físicos que
gobiernan el transporte de la muestra al plasma, el proceso de conversión en
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el plasma y la transmisión de iones a través de la interfase del espectrómetro
plasma-masa.
Estas interferencias pueden resultar con diferentes respuestas entre
muestras y los estándares de calibración.
Interferencias físicas pueden ocurrir al transferir la solución al nebulizador
(ejemplo efecto de viscosidad), en el punto de formación y transporte al
plasma (ejemplo efecto de la tensión superficial), durante el proceso de
atomización y ionización entre el plasma, o durante la trasferencia de iones a
través de la interfase al espectrómetro de masas (efecto de carga espacial).
Para minimizar algunos de estos efectos como composición y concentración
de los ácidos se requiere que se incluyan en todos los estándares, blancos y
muestras.
El estándar interno puede ser efectivo usando la compensación para muchos
efectos de interferencias. Idealmente es necesario usar estándares internos
similarmente al método analítico de los elementos a determinar, el cual
estará muy cerca de la masa del elemento a analizar, potencial de ionización,
solubilidad, punto de ebullición reactividad varios compuestos en el sistema
de introducción de la muestra.
5.2.3.4. Interferencias de memoria: cuando el elemento proviene de una muestra
previa y contribuye con una señal medible a una muestra posterior. El efecto
memoria puede resultar de la deposición de muestra de varios componentes
del sistema de introducción de muestra, incluyendo el automuestreador, la
bomba peristáltica, la cámara spray, la antorcha y los conos interfase.
El sitio donde se deposita depende del tipo de muestra, esto se minimiza a
través de enjuagues de blancos entre muestras. Una rutina de mantenimiento
(limpieza y/o cambios) de los componentes de introducción de muestra son
necesarios para minimizar el efecto memoria.
5.3 Equipos y Materiales
5.3.1 Equipos
a) Plasma acoplado inductivamente con espectrómetro de masa Agilent
7500ce.
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b) Plasma acoplado inductivamente con espectrómetro de masa Thermo
iCAP-RQ.
c) Automuestreador automático ASX 520 Cetac.
d) Automuestreador automático prepFAST 4DX.
e) Balanza Analítica con sensibilidad 0.1 mg.
f) Plancha de calentamiento, con controlador de temperatura que no debe
superar los 300ºC.
g) Mufla programable con termostato que mantenga temperaturas de 450º C +
25 º C.
h) Congeladora.
i) Procesador de muestras (blixer Robot Coupe).
j) Licuadora eléctrica.
k) Sistemas de digestión por Microondas Millestone Modelo Ethos UP con
rotor MAXI 44 y SK15.
l) Sistemas de digestión por Microondas CEM Modelo MARS 6 con rotor
Xpress 40.
5.3.2 Material
a) Crisoles de cuarzo de 100 ml.
b) Tubos de centrífuga de polipropileno de 50 ml.
c) Gas Argón de alta pureza (99.99 %).
d) Micropipetas variables de:10-100 ul,100-1000 ul,1000-5000 ul.
e) Lunas de reloj de 6.5 cm aproximadamente.
f) Frascos volumétricos entre 10 y 100 ml.
g) Embudos de filtración.
h) Papel de filtración lenta.
i) Porta Embudos.
j) Tubos de Teflón para rotor Maxi-44.
k) Tubos de teflón para rotor SK-15.
l) Tubos de teflón para rotor Xpress 40.
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5.3.3. Reactivos y Soluciones
a) Ácido Nítrico ultra puro.
b) Hidrógeno peróxido 30% Suprapur
c) Agua ultrapura tipo I, conductividad menor a 0.055 µS/cm.
d) Solución de sintonización para equipo Agilent 7500 (Tunning) 10 ppb; diluir
100ul de solución de sintonización de 10 ug/ml (Li, Y, Ce, Tl , Co) en una fiola
de 100ml y llevar a volumen.
e) Solución de sintonización para equipo THERMO iCAP RQ (Tunning) 1
ug/L; solución multielemental de (Ba, Bi, Ce, Co, In, Pb, Li, U) en medio
de HNO3 al 2% y 0.5% HCl.
f) Solución estándar interno de 10 ppb : Diluir 100ul de solución de
sintonización de 10 ug/ml (Analitos recomendados Li6 Sc, Ge, Y, In, Tb,
Bi y Ho).
g) Solución multielemental de calibración Standard de 10 mg/L (Ag, Al, As, Ba,
Be, Ca, Cd, Co, Cr, Cs, Cu, Fe, Ga, K, Li, Mg, Mn, Na, Ni, Pb, Rb, Se, Sr, Tl,
U, V, Zn).
h) Solución multielemental Standard de verificación de 100 mg/L) (Ag, Al, As, Ba,
Be, Ca, Cd, Co, Cr, Cs, Cu, Fe, Ga, K, Li, Mg, Mn, Na, Ni, Pb, Rb, Se, Sr, Tl,
U, V, Zn
i) Ácido Nítrico a 2 %; diluir 10 ml. de ácido nítrico ultra puro en un matraz
volumétrico de 500 ml y llevar a volumen.
j) Ácido Nítrico a 5 %, diluir 25 ml. de ácido nítrico concentrado en un matraz
volumétrico de 500 ml y llevar a volumen.
5.4. Optimización del método
5.4.1. Sintonización del Equipo:
Es importante el chequeo y la sintonización del equipo mediante la
solución de sintonización (Tunning) en los cuales es necesario conocer
la sensitividad la cual se verifica a través del número de cuentas que se
detecta.
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El Tunning se realiza según el Instructivo ITR-UCCIRT/Res-12 para manejo
del espectrómetro de masa acoplado inductivamente ICP-MS 7500ce e
ITR-UCCIRT/RES-24 para manejo del espectrómetro de masa
acoplado inductivamente ICP-MS iCAP-RQ Thermo.
Los resultados obtenidos después de realizar el Tunning deben estar dentro de
los valores indicados en la siguiente tabla:
Tabla N° 2: Criterios óptimos de sintonización equipo AGILENT 7500
Especificaciones Resultados
Sensibilidad (7)Li (89)Y
(205)Tl
>25.5 Mcps >68.0 Mcps >34.0 Mcps
Óxidos Ce 156 / Ce 140
<1.8%
Doble Carga Ce 70 / Ce 140
<3.5%
Resolución de masa Li @10% Y @10% Tl @10%
0.65 a 0.80 0.65 a 0.80 0.65 a 0.80
Tabla N° 3: Criterios óptimos de sintonización equipo THERMO
iCAP-RQ.
ESPECIFICACIONES CONDICIO
N
MODO
STD
CONDICION MODO
KED
Bkg4.5 Less than 1.0 CPS Less than 0.5 CPS
Bkg220.7 Less than 2.0 CPS Less than 2.0 CPS
59Co/35Cl.16O (KED) ------- ------- Greater than 18.0
7Li Greater
than
55 000
CPS
------- -------
59Co Greater
than
100 000
CPS
Greater than 30 000
CPS
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238U Greater
than
330 000
CPS
Greater than 85 000
CPS
209Bi Greater
than
165 000
CPS
Greater than 42 500
CPS
140Ce.16O/140Ce Less than 0.02 Less than 0.02
137Ba++/137Ba Less than 0.03 Less than -------
115In Greater
than
240 000
CPS
Greater than 35 000
CPS
5.4.2. Parámetros del método
Las condiciones del método se crean según el Instructivo Manejo del espectrómetro
de masa acoplado inductivamente ICP-MS 7500ce (ITR-UCCIRT/Res-12) e ITR-
UCCIRT/RES-24 (Manejo del espectrómetro de masa acoplado
inductivamente ICP-MS iCAP-RQ Thermo), en los cuales se determina las
condiciones operativas del equipo y de la curva de calibración.
El método se denomina CACAO 6 para el equipo Agilent 7500 y “CACAO
AOAC” para el equipo THERMO iCAP RQ. Seguidamente se crea una
secuencia de análisis para las muestras que se van a leer.
5.4.3. Condiciones que se verifican el ICP-MS
El equipo de ICP-MS se verifica cada vez que se realiza una lectura de muestra,
las condiciones del equipo no son constantes en el tiempo. Los principales
parámetro que se verifican, controlan y modifican para obtener una verificación
intermedia, estos pueden varias según la antigüedad del equipo. Los
parámetros del equipo Thermo iCAP RQ son ajustados automáticamente,
no son manipulables.
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Tabla N° 4: Condiciones sugeridas de verificación intermedia del equipo Agilent
7500
Condiciones de Plasma
RF Power RF Matching Sample Dept.H Torch-V Carrier Gas Makeup Gas Optional Gas Nebulizador pump Sample pump S/C
1500 W autotunning 7.0 mm a 10mm autotunning ajuste 0.1 a 3.0 L/min ------ ajuste 0.1rps Ajuste
Reaction Cell
Reaction Mode H2 Gas
OFF 0 ml / min
Ion Lenses
Extract 1 Extract 2 Omega Bias-Ce Omega Lens-Ce Cell Entrance QP Focus Cell Exit
0 a 6.0 V -157 a -70 V -24 V a -10V 0 a 4.5 V -40 a -20 V 2 a 5 V -40 a -20 V
Octopole Parameters
Octp RF Octp Bias
140 a 200 V Ajuste
Q-Pole Parameters
AMU Gain AMU OffSet Axis Gain Axis Offset QP Bias
126 125 1.0002 -0.05 -3 V
Detector Parameters
Discriminator Analog HV Pulse HV
8 mv 700 a 2000 V
a. 500 V
5.4.4 Secuencia de análisis:
La secuencia de análisis es el orden de lectura de las muestras programadas,
este se establece en el software ChemStation del ICP-MS según el instructivo
manejo del Espectrómetro de Masa acoplado Inductivamente ICP-MS 7500CE
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(ITR-UCCIRT/Res-12) e ITR-UCCIRT/RES-24 (Manejo del espectrómetro
de masa acoplado inductivamente ICP-MS iCAP-RQ Thermo) en el
software QTEGRA, el orden general es el siguiente:
Tabla N° 5: Secuencia recomendada para el análisis
1 Estándar 0 ppb
2 Estándar 1 ppb
3 Estándar 5 ppb
4 Estándar 10 ppb
5 Estándar 50 ppb
6 Estándar 100 ppb
7 Blanco lavado 01
8 Blanco reactivo
9 Control estándar
10 Blanco lavado 02
11 Blanco digestado 1
12 Blanco digestado 2
13 Muestras
14 Muestras duplicadas
15 Muestras fortificada
16 Control de digestión
5.5. Análisis de la muestra
5.5.1 Preparación de la Muestra
La muestra se tritura en un blixer, Robot Coupe o Licuadora, se almacena en
una bolsa de polietileno de primer uso.
5.5.2 Digestión Vía Seca (Mufla)
5.5.2.1. Pesar aproximadamente 1.0 gr + 0.01 de muestra en crisoles y registrar en
REG-UCCIRT/Res-10, Registro de toma de muestra disponible en PRO-
UCCIRT/Lab-08 (Manejo de Reactivos, Insumos y Materiales de
referencia).
5.5.2.2. Colocar las muestras en la mufla a una temperatura de 50°C durante una
hora, luego realizar incrementos de temperatura de 50°C /h hasta 450°C,
permitiendo que el crisol se encuentre en este proceso mínimo 8 horas
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según instructivo ITR-UCCIRT/Res-09 (Instructivo de manejo de horno
mufla) y las cenizas presente un color blanquecino.
5.5.2.3. Retirar las muestras de la mufla y dejar que se enfríen en un desecador por
20 minutos aproximadamente luego humedecer las cenizas con 2 ml de
HNO3 2N y llevar a la plancha de calentamiento para evaporar a sequedad.
Cuando las muestras estén totalmente secas retornar a la mufla por 1-2 h
a 450°C, repetir el proceso hasta que las cenizas estén de un color
blanquecino.
5.5.2.4. Adicionar a las muestras 20 ml de HNO3 0.1N, asegurándose que todas
las cenizas estén en contacto con el ácido.
5.5.2.5. Llevar a plancha de calentamiento durante 1-2 h, los crisoles deben estar
tapados con lunas de reloj para permitir una disolución por reflujo, dejar
que enfríe y filtrar, finalmente transferir a tubos de 50 ml y analizar en el
equipo.
5.5.3. Digestión en horno microondas
Pesar no más de 0.5gr de muestra homogenizada en los tubos de digestión
del rotor a utilizar (MAXI-44, SK-15 o XPRESS-40), se registra los pesos en
REG-UCCIRT/Res-10 (Registro de toma de muestra).
Añadir 6ml de ácido nítrico ultrapuro (HNO3), con pre digestión de 30
min, y luego 2 ml de peróxido de Hidrogeno (H2O2) suprapur. Cerrar
los tubos de digestión y se llevan al digestor por microondas, el cual
tiene los siguientes parámetros:
Tabla N° 6: Condiciones de digestión en microondas Millestone up
MÉTODO
EQUIPO ROTO
R N° DE
VASOS
TIEMPO DE
RAMPA
TIEMPO DE
DIGESTIÓN
TEMPERATURA
(°C)
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CACAO
Millestone ETHOS
UP
SK-15 Cantidad indistinta de vasos
00h:25 min
00h :15 min 200
CACAO
Millestone ETHOS
UP
MAXI-44
Menor a 15
00h:50 min
00h :40 min 200
CACAO
Millestone ETHOS
UP
MAXI-44
Mayor a 15
01h :10 min
00h :30 min 200
CACAO
CEM
MARS 6 EXPRESS 40
Cantidad indistinta de vasos
00h :30 min
00h :20 min 200
5.5.4. Calibración del método
Preparar la curva de calibración haciendo diluciones del estándar
multielementos de 10 mg/l de la siguiente forma:
Tabla N° 7 Volúmenes de soluciónes ( 50 ml de cada uno)
Estándar de
calibración y el
equivalente en
concentración ( )
Cantidad usada
por
concentración
de estándar
Cantidad
de
Ácido
nítrico
Cantidad de
estándar interno
(10 ppb)
Blanco (0 ppb) Solo HNO3 1ml
Ingreso continuo
por tunning de
0.19mm (D. interno)
1ppb 5ul x 10 mg/l 1ml
5 ppb 25 ul x 10 mg/l 1ml
10 ppb 50 ul x 10 mg/l 1ml
50 ppb 250 ul x 10 mg/l 1ml
100 ppb 500 ul x 10 mg/l 1ml
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5.5.4.1. Usando el análisis de regresión lineal se determina el coeficiente de
correlación (r) el cual tiene debe ser mayor o igual a 0.995; si sucede lo
contrario se repite la calibración.
5.5.4.2. La concentración de estándar Interno sugerida es de 10.0 ppb, el
cual es usado para corregir las interferencias físicas, se recomienda el
uso de un estándar interno, con siete elementos (6Li, Sc, Ge, Y, In, Ho,
Tb, y Bi).
El estándar interno está presente en todas las muestras, estándares y
blancos a idénticos niveles, esto es alcanzado por ingreso continuo de
la solución estándar.
5.5.5. Aseguramiento de la calidad
El aseguramiento de calidad para el presente método se basa en los criterios
establecidos en el PRO-UCCIRT/Lab-03 (Control y aseguramiento de la
calidad).El cual comprende dos tipos de control de calidad:
5.5.5.1. Control de Calidad Interno.
Según la naturaleza del método se considera los siguientes: a) Blanco de reactivo: Se obtiene a través de un análisis completo realizado
únicamente a los solventes y/o reactivos sin la presencia de la muestra.
Permiten detectar errores positivos debidos a sustancias interferentes del
sistema analítico El blanco de reactivo no debe originar señales interferentes
que sugieran contaminación esporádica.
b) Muestras fortificadas: Es la muestra que se ha fortificado con el analito de
interés, para este método se le adiciona 25 ul de estándar multielemental de
100 mg/L y se obtiene una concentración de 50 ppb. La fortificación permite
el incremento en la respuesta del analito que se va a medir y calcular una
cantidad equivalente a la cantidad agregada, bajo el supuesto del 100% de
recuperación.
c) Muestra duplicada: Mediante los análisis de duplicados se controlan los
cambios en la precisión de un proceso analítico que pueden afectar
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negativamente el resultado. La precisión del método se documenta y controla
mediante, diferencia porcentual relativa (RPD)o la respuesta positiva para
los análisis cualitativos.
d) Blanco digestado: Es una muestra incluida en el proceso de digestión se
utiliza para determinar interferencias que están presentes en el entorno del
laboratorio, reactivos o aparatos, solo contiene reactivos.
e) Control de estándar: Se prepara una solución de 50 ppb del analito de
interés, se recomienda que el estándar de control sea de un lote diferente al
utilizado para la construcción de la curva, el valor obtenido estará muy
cercano a la concentración añadida.
f) Control de muestra Digestado: es una muestra que tiene reactivos, adición
de estándar de verificación y se coloca al final del lote de digestión.
5.5.5.2. Control de Calidad Externo
Según la programación interna del laboratorio
La frecuencia y criterios de aceptación para los controles de calidad son
los siguientes:
Tabla N° 8 Control de Calidad
Parámetro de calidad
interno Frecuencia
Criterio de aceptación
Acción inmediata
Acciones en casos
reiterativos
Muestra duplicada
Por cada 11 muestras
analizadas como máximo
RPD <20% Repetir la muestra analizada
Verificar la homogeneidad de la muestra y repetir el análisis de los duplicados
Muestra fortificada
Por cada 11 muestras
analizadas como máximo
Recuperación (80-120%)
Repetir la muestra analizada
Verificar la homogeneidad de la muestra y repetir el análisis de la muestra fortificada
Blanco digestado
2 como mínimo por cada lote
analizado < LoD
Repetir la muestra analizada
Verificar procesos de análisis de muestra
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Blanco Reactivo
1 después de un grupo de
análisis < LoD
Corroborar la lectura, nuevamente, verificar parámetros de tunning
Verificar calidad de agua usada. Repetir lote analizado.
Control estándar
1 al inicio y 1 al final de un grupo de muestras
analizadas.
Recuperación (80-120%)
Repetir la muestra analizada
Verificar estándares y fechas de vencimiento, calibrar nuevamente y repetir corrida de análisis del lote analizado
Control de muestra digestado
Al final del lote de digestión
Recuperación (80-120%)
Repetir lote analizada
Verificar proceso de digestión de muestra
5.6. Cálculo y expresión de resultados.
5.6.1. Los cálculos se registran en la hoja de trabajo REG-UCCIRT/Lab-61, disponible
en el procedimiento PRO-UCCIRT/Lab-02
5.6.2. Los resultados de las concentraciones del análisis se obtienen en el
software Chem Station del equipo ICPMS Agilent 7500 y Qtegra del
equipo ICPMS THERMO iCAP RQ.Si se han realizado diluciones es
necesario considerar los factores involucrados en el cálculo final.
5.6.3. El Cálculo de la concentración del metal de interés en la muestra es de acuerdo
a :
CE = (a-b) x V
m
Donde:
CE = Concentración de la solución de la muestra en (mg/Kg)
a = Concentración de la muestra (mg/L)
b = Concentración de la solución de los blancos (mg/L).
V = Volumen de la solución en (ml).
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m = Peso de la porción de muestra (g).
5.6.4. Cálculo de la recuperación de las muestras fortificadas
R = Cs – C x 100
S
Donde:
R = Porcentaje de recuperación
Cs= Concentración de la muestra fortificada
C = Concentración de la muestra
S = Concentración equivalente de la adición de la muestra
5.6.5. Calculo del RPD
𝑅𝑃𝐷 % =|𝐷1 − 𝐷2|
(|𝐷1 + 𝐷2|
2 )× 100
Donde:
𝑅𝑃𝐷 = Diferencia porcentual relativa.
𝐷1 = Valor de la primera muestra
𝐷2 = Valor de análisis de muestra duplicado
6. ANTECEDENTES
Método Oficial AOAC 999.11 Plomo, Cadmio, Cobre, Cinc y Hierro en alimentos.
7. ANEXOS
No aplica.