I V I ANSTITUTO ALENCIANO DE NVESTIGACIONES GRARIAS

Antonio OLMOS Lab. Virología e Inmunología. Centro de Protección Vegetal y Biotecnología

Instituto Valenciano de Investigaciones Agrarias (IVIA). Moncada, Valencia

AVANCES EN EL DIAGNÓSTICO Y DETECCIÓN

SANEAMIENTO DE MATERIAL VEGETAL

DESARROLLO DE ESTRATEGIAS DE CONTROL DE VIRUS Y FITOPLASMAS

EN VID

XIII Foro INIA “Retos de la I+D+i en viticultura y enología: nuevas demandas y cambio climático”

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Instituto Valenciano de Investigaciones Agrarias (IVIA). Centro de Protección Vegetal

Laboratorio de Virología e Inmunología

Experiencia: - Desarrollo y validación de métodos y protocolos serológicos y moleculares para la detección de patógenos de plantas. -  Control de virus de especies leñosas mediante métodos convencionales y biotecnológicos.

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INCURABLES (No sistema inmune) IMPOSIBLE CONTROL QUÍMICO TRANSMISIBLES: vegetativamente (injerto, multiplic. vegetativa), semilla, polen,

vectores ...

CARACTERÍSTICAS DE LAS VIROSIS DE VEGETALES

SELECCIÓN SANITARIA DE PLANTAS MADRE

I V I ANSTITUTO ALENCIANO DE NVESTIGACIONES GRARIASCARACTERÍSTICAS DE LAS VIROSIS DE VEGETALES

FRECUENTES (Fácil infección, tiempo exposición largo especialmente en plantas leñosas ...) GRANDES POBLACIONES HOMOGÉNEAS DE PLANTAS CULTIVADAS (Inmóviles)

NUMEROSAS MUESTRAS

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El movimiento de material vegetal infectado (con o sin síntomas) y el comercio legal e ilegal, han sido y

continúa siendo la principal causa de dispersión de agentes patógenos a larga distancia.

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Demostración del poder patógeno •  Valoración de la agresividad •  Detec. enfermedades etiología desconocida

(a pesar de sus inconvenientes)

Métodos biológicos:

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La técnica ELISA convencional ha hecho posible la

realización de millones de muestras de forma rutinaria.

Su único inconveniente: la necesidad de realizar extractos

Tecnicas serologicas:

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TÉCNICAS MOLECULARES •  Métodos de amplificación isoterma:

•  3SR, NASBA (Nucleic acid sequence based amplification) •  SDA (Strand displacement amplification) •  LAMP (Loop-mediated isothermal amplification) •  MDA (Multiple displacement amplification)

•  Amplificación enzimática mediante variantes de PCR: •  PCR and RT-PCR •  Immunocaptura PCR (IC-PCR) •  Print y squash-capture PCR (PC or SC-PCR) •  Heminested or nested PCR en un solo tubo cerrado •  PCR cooperativa (Co-PCR) •  PCR cuantitativa a tiempo real

I V I ANSTITUTO ALENCIANO DE NVESTIGACIONES GRARIASPCR CUANTITATIVA A TIEMPO REAL PARA LA DETECCIÓN DE DIANAS

VIRALES EN PLANTAS Y VECTORES

TaqMan probes

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VIROSIS DE VID Las enfermedades causadas por virus ocasionan pérdidas importantes en el cultivo de la vid en todo el mundo.

"   Las cepas producen menos y con peor calidad.

"   Se reduce la longevidad de las plantas. Se han descrito 61 virus que infectan vid. Alrededor de 30 enfermedades se asocian a virus (20 de ellas con agente etiológico identificado)

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Entrenudo corto infeccioso Grapevine fanleaf virus

Pérdidas de 30-90% en producción

Transmitidos por Xiphinema y Longidorus spp

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Enrollado Grapevine leafroll associated virus -1 a -11

Provoca importantes pérdidas en todo el mundo (30-40% producción)

Transmitidos por Planococcus y Psuedococcus spp

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Distribución mundial

Efecto sinérgico con otros virus

El complejo de la madera rizada 1. Ahoyado del rupestris (Rupestris stem pitting) Rupestris stem pitting associated virus 2. Acanalado del Kober 5BB (Kober stem grooving)Grapevine vitivirus A 3. Acanalado del LN 33 (LN33 stem grooving) Sin identificar agente etiológico 4. Madera acorchada (Corky bark disorder)Grapevine vitivirus B

Jaspeado Grapevine fleck virus

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Fitoplasmas Candidatus Phytoplasma vitis (Grapevine flavescence dorée o fitoplasma de la flavescencia dorada) Fitoplasma causante de “bois noir”

I V I ANSTITUTO ALENCIANO DE NVESTIGACIONES GRARIAS•  Diseño y validación en métodos de detección basados en multiplex PCR a tiempo real

•  Secuenciación masiva para caracterización de virosis establecidas y

emergentes, y búsqueda de nuevos virus en material de vid •  Detección de virosis en diversas áreas vitivinícolas de Cataluña,

Comunidad Valenciana, Galicia, Aragón, La Rioja y Extremadura. Caracterización de los aislados virales

•  Secuenciación completa del genoma de los nuevos aislados

españoles del virus del mosaico del arabis •  Seguimiento de especies de insectos pertenecientes a familias

potencialmente transmisoras de fitoplasmas identificados en Extremadura, Valencia, Galicia y Cataluña

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Programa para la producción de vid libre de virus mediante termoterapia y cultivo de ápices caulinares in vitro

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Muchas gracias por su atención