czy chemia moŻe byĆ sucha? · ph kompleks zasadowe nadh + sól tetrazolowa dehydrogenaza nadh nad...
TRANSCRIPT
CZY CHEMIA MOŻE
BYĆ SUCHA?
dr Monika Skowron
Łódź, 10.02.2015
CUKIER OŁOWIANY - (CH3COO)2Pb
SÓL PRAWDY - Na2S
Starożytny Egipt ok. 3000 lat p.n.e. – papirus nasączony roztworem „soli prawdy”
„SÓL PRAWDY” – WYKRYWANIE OŁOWIU W ZATRUTYM WINIE
Pb2++ S2−⇄ PbS
WYKRYWANIE FAŁSZOWANIA MONET MIEDZIANYCH ŻELAZEM
Pliniusz Młodszy 23 r. n.e. – papirus nasączony roztworem otrzymanym z galasów
OHO
OH
OHOH
Fe3+ +
granatowo-fioletowe
zabarwienie kwas galusowy
WYKRYWANIE CUKRU W MOCZU
Francuski chemik Jules Maumené w 1850 r – pierwszy „współczesny test”
wełna merynosa nasączona
chlorkiem cyny (SnCl2)
po podgrzaniu w miejscu naniesienia
próbki zawierającej glukozę wełna
ciemniała
próbka moczu
MERK 1934r
PAPIERKI LAKMUSOWE
PAPIERKI WSKAŹNIKOWE
testy do analizy moczu
♦ pH, glukoza, białko – 1964r; ♦ azotany(III) – 1967r; ♦ bilirubina, krew – 1974r.
SUCHY TEST (DRY TEST)
Test składający się z łatwo nasiąkającego materiału nasączonego zestawem
odczynników zapewniających niezbędne warunki do wykrycia lub/i oznaczenia
badanego związku.
Test służący do wykrycia lub/i oznaczania badanego parametru w krótkim czasie,
najczęściej 2-3 min.
SZYBKI TEST (QUICK TEST)
SUCHA CHEMIA
TECHNIKA ANALITYCZNA WYKORZYSTUJĄCA DO JAKOŚCIOWEGO
I ILOŚCIOWEGO OZNACZANIA SUBSTANCJI TZW. SUCHE (SZYBKIE TESTY).
mocz
tkanki
ślina
łzy
krew
SUCHE
TESTY
ŚRODOWISKO
MEDYCYNA
PRZEMYSŁ mleko
soki
woda
CO MA WPŁYW NA BUDOWĘ TESTÓW?
rodzaj badanej próbki np. krew, mocz, sok
analit – mechanizm reakcji
test jakościowy, półilościowy czy ilościowy
wygoda i prostota używania
sposób odczytu wyników
indywidualna konstrukcja producenta
PAPIERKI WSKAŹNIKOWE
bibuła nasączona odczynnikiem np. papierek lakmusowy do pomiaru pH
jednopolowe np. do pomiaru pH
nośnik z naniesionym odczynnikiem
wielopolowe np. do pomiaru pH w płynach fizjologicznych
nośnik z „przymocowanymi” odczynnikami
TESTY DO OZNACZEŃ W ROZTWORACH WODNYCH
TESTY TYPU „CHROMATOGRAFICZNEGO”
TESTY TYPU KASETKOWEGO
TESTY TYPU KASETKOWEGO DO JEDNOCZESNEGO OZNACZANIA KILKU ANALITÓW
IMMUNOTEST
TESTY TYPU „LABIRYNT”
TESTY WIELOWARSTWOWE
TESTY DO OZNACZEŃ PRÓBEK BARWNYCH I MĘTNYCH
Testy do oznaczeń próbek barwnych muszą dawać możliwość odseparowania
składników próbki niebędących analitami od warstwy reakcyjnej testu
TESTY TYPU „SLAJD”
transparentna warstwa zabezpieczająca
warstwa nanoszenia próbki
warstwa filtrująca interferenty
warstwa zawierająca reagenty
warstwa „zbierająca” produkt reakcji
spektrometr
Fuji Film
Odczyt jakościowy lub półilościowy Stosowany do analizy moczu, testów
bakteriologicznych, testów do oznaczania anionów i kationów.
METODY ODCZYTÓW SUCHYCH TESTÓW
PORÓWNANIE ZE SKALĄ BARW LUB WZORCEM
TESTY PASKOWE DO OZNACZANIA SKŁADNIKÓW MOCZU
OZNACZANIE pH MOCZU W ZAKRESIE 5-9
czerwień metylowa - pH 4.2-6.3
błękit bromotymolowy – pH 6.0-7.6
fenoloftaleina - pH 8.2-10.0
OZNACZANIE JONÓW AZOTANOWYCH(III) W MOCZU
sulfonamid sól diazonowa
odczynnik sprzęgający czerwony barwnik azowy
odczynniki na polu testowym
TESTY PASKOWE DO OZNACZANIA PARAMETRÓW WODY AKWARIOWEJ
• NO3-
• NO2-
• twardość ogólna
• twardość węglanowa
• pH
• Cl2
TESTY PASKOWE DO OZNACZANIA PARAMETRÓW WODY AKWARIOWEJ
TEST WYKRYWAJĄCY CHOLESTEROL W PEŁNEJ KRWI - test enzymatyczny
cholesterol + O2
cholestenon + H2O2
ester cholesterolu + H2O
cholesterol + kwas tłuszczowy
H2O2 + 4−aminoantypiryna + DAOS
niebieski chromogen
DAOS – sól sodowa 3,5-dimetoksy-N-etylo-N(2-hydroksy-sulfopropylo)-aniliny
esteraza cholesterolowa
oksydaza cholesterolowa
peroksydaza
OZNACZANIE ETANOLU W ŚLINIE - test enzymatyczny
NAD, NADH – forma utleniona i zredukowana dinukleotydu nikotynoamidoadeninowego
etanol + NAD
aldehyd octowy + NADH dehydrogenaza alkoholowa
aldehyd octowy + trapping agent
kompleks pH zasadowe
NADH + sól tetrazolowa
NAD + barwnik formazanowy dehydrogenaza NADH
NADH + elektrofil
NAD + elektrofil zredukowany dehydrogenaza NADH
OZNACZANIE ETANOLU W WYDYCHANYM POWIETRZU
C2H5OH + 2K2Cr2O7+ 8H2SO4 ⟶ Cr2(SO4)3 + 2K2SO4 + 3CH3COOH + 11H2O
rozpoznawany
ANTYGEN - An
paratop S-S
inne antygeny obecne
w próbce
ciężkie łańcuchy
polipeptydowe lekkie łańcuchy
polipeptydowe
PRZECIWCIAŁO - Ab
epitop
Ab + An Ab-An
IMMUNOTESTY
wykrywanie gonadotropiny kosmówkowej (hCG)
IMMUNOLOGICZNY TEST CIĄŻOWY
wynik +
IMMUNOLOGICZNY TEST CIĄŻOWY
wykrywanie gonadotropiny kosmówkowej (hCG)
hCG – gonadotropina kosmówkowa (oznaczany antygen);
PC● – przeciwciało monoklonalne znakowane np. enzymem lub barwnikiem
wychwytujące hCG;
PC – przeciwciało immobilizowane na nośniku wychwytujące hCG;
PC – przeciwciało unieruchomione w polu kontrolnym wychwytujące niezwiązane
przeciwciała monoklonalne;
pole kontrolne pole testowe
wynik -
IMMUNOLOGICZNY TEST CIĄŻOWY
wykrywanie gonadotropiny kosmówkowej (hCG)
hCG – gonadotropina kosmówkowa (oznaczany antygen);
PC● – przeciwciało monoklonalne znakowane np. enzymem lub barwnikiem
wychwytujące hCG;
PC – przeciwciało immobilizowane na nośniku wychwytujące hCG;
PC – przeciwciało unieruchomione w polu kontrolnym wychwytujące niezwiązane
przeciwciała monoklonalne;
pole kontrolne pole testowe
COC - kokaina (crack i pochodne kokainy),
AMP - amfetamina (speed, uppers, base),
mAMP - methamfetamina (meth, ice, e, ecstasy),
THC - marihuana,
OPI - opiaty (morfina, opium, heroina).
wynik + wynik -
TEST WYKRYWAJĄCY NARKOTYKI W MOCZU
N + PC-E → N-PC-E
N-PC-X + PC* → PC*-N-PC-X
N - narkotyk (antygen);
PC-E – przeciwciało monoklonalne znakowane enzymem;
N-PC-E – kompleks przeciwciało-antygen;
PC* - przeciwciało immobilizowane na nośniku;
PC*-hCG-PC-E – barwny kompleks przeciwciało unieruchomione-antygen-przeciwciało
Odczyt ilościowy – pomiar światła odbitego od powierzchni pola testowego
współczynnik odbicia rozproszonego o
rI
IR
I
Io
Rc
METODY ODCZYTÓW SUCHYCH TESTÓW
ODCZYT REFLEKTOMETRYCZNY
REFLEKTOMETRYCZNY ANALIZATOR PRÓBEK MOCZU Miditron Junior 2 - ROCHE®
parametr długość fali [nm]
Ciężar właściwy 620
pH 557 i 620
leukocyty 557
NO3- 557
białko 557
glukoza 557
keton 557
urobilinogen 557
bilirubina 557
erytrocyty 557 i 620
REFLEKTOMETRYCZNY ANALIZATOR TESTÓW TYPU SLAJD FUJIFILM NX 500
GLUKOMETR DO OZNACZANIA GLUKOZY W KRWI PEŁNEJ Z
ODCZYTEM EFLEKTOMETRYCZNYM
glukoza + O2
H2O2 + glukolakton oksydaza glukozowa
H2O2 + chromogen
niebieski barwnik + H2O peroksydaza
membrana
warstwa zawierająca enzymy i chromogen
TEST REFLEKTOMETRYCZNY DO OZNACZANIA GLUKOZY WE KRWI
podłoże i folia zabezpieczająca
TEST WYKRYWAJĄCY CHOLESTEROL W PEŁNEJ KRWI
DAOS – sól sodowa 3,5-dimetoksy-N-etylo-N-(2-hydroksy-3-sulfopropylo)-aniliny
ester cholesterolu + H2O
cholesterol + kwas tłuszczowy esteraza cholesterolowa
cholesterol + O2
cholestenon + H2O2 oksydaza cholesterolowa
H2O2 + 4−aminoantypiryna + DAOSl
niebieski chromogen peroksydaza
POTENCJOMETRYCZNY
Pod wpływem analitu zawartego w matrycy obserwujemy zmianę siły
elektromotorycznej ogniwa jonoselektywnego.
METODY ODCZYTÓW SUCHYCH TESTÓW
ODCZYT ELEKTROCHEMICZNY
AMPEROMETRYCZNY
Odczyt tego typu polega na zmianie wartości prądu w wyniku reakcji w warstwie
odczynnikowej.
TEST POTENCJOMETRYCZNY - ELEKTRODA JONOSELEKTYWNA DO
OZNACZANIA JONÓW POTASU
1 – mostek elektrolityczny,
2 – otwór do nanoszenia próbki,
3 – otwór do nanoszenia roztworu
wzorcowego
4 - hydrofobowa warstwa zawierająca
walinomycynę
5 - bibuła nasycona KCl o znanym stężeniu
6- warstwa AgCl
7 - warstwa Ag
8 – wartswa nośnika
9 - potencjometr
K+
walinomycyna Eastman Kodak Ektachem
APARAT DO ODCZYTU TESTÓW POTENCJOMETRYCZNYCH
EASTMAN KODAK EKTACHEM DT 60 II
GLUKOMETR DO OZNACZANIA GLUKOZY W KRWI PEŁNEJ
Z ODCZYTEM AMPEROMETRYCZNYM
TEST AMPEROMETRYCZNY – ELEKTRODA DO OZNACZANIA GLUKOZY WE KRWI
4
1
3
3 2
zmiana wartości prądu
H2O2 + → + H2O
glukoza + O2 H2O2 + glukolakton oksydaza glukozowa
Fe2+ Fe3+
OTRZYMYWANIE SUCHYCH TESTÓW
ETAP I – otrzymywanie pola testowego
ETAP II – otrzymywanie finalnej postaci testu
ETAP III – kontrola jakości gotowego testu