curso validacion de metodos analiticos

VALIDACIN DE MTODOS VALIDACIN DE MTODOS ANALTICOS, FISICOQUMICOS Y

MICROBIOLGICOSMICROBIOLGICOS

Licda. Lucrecia ArriolaGuatemala, 11 de septiembre de 2012

1

VALIDACIN DE MTODOS ANALTICOS

I. GENERALIDADES

2Licda. Lucrecia Arriola 2

OBJETIVOS DEL CURSOOBJETIVOS DEL CURSOy 1. Intentamos contestar las siguientes preguntas:

Q lid ?Qu es validar?Por qu valido?Para qu valido?Para qu valido?Cundo valido?Cmo valido? mo val do?

y 2. Conocer la diferencia entre Validacin yVerificacin3 C l d ly 3. Conocer los requisitos de las normasinternacionales sobre la validacin de mtodos

3

VALIDACIN??

4Licda. Lucrecia Arriola

LA VALIDACIN DE MTODOS

Por qu es necesaria lavalidacin analtica?validacin analtica?

Cul es el propsito dela validacin analtica?la validacin analtica?


Qu es validacin de mtodos analticos?

y Validacin: Confirmacin mediante el suministrode evidencia objetiva de que se han cumplido losde evidencia objetiva de que se han cumplido losrequisitos para una utilizacin o aplicacinespecfica prevista.p p

y Validacin de un procedimiento analtico:Procedimiento para establecer pruebasProcedimiento para establecer pruebasdocumentales que demuestren cientficamente queun mtodo analtico tiene las caractersticas dedesempeo que son adecuadas para cumplir losrequerimientos de las aplicaciones analticaspretendidas


pretendidas.

Qu es validacin de mtodos analticos?Qu es validacin de mtodos analticos?

y Es realizar un conjunto de pruebas de manera de:a) Comprobar varios aspectos del comportamiento del mtodo.b) E bl i l fi ib) Establecer que sirve para el fin previsto.

L lid i i li l d t i d ly La validacin implica la demostracin de ladeterminacin de las fuentes de variabilidad y delerror sistemtico y al azar de un procedimiento noerror sistemtico y al azar de un procedimiento, noslo dentro de la calibracin sino en el anlisis demuestras reales.


Qu es verificacin de mtodos?Qu es verificacin de mtodos?

y Verificacin: Confirmacin mediante laaportacin de evidencia objetiva de que se hancumplido los requisitos especificados.

y Indicar el proceso que lleva a cabo ellaboratorio con el fin de demostrar sucapacidad para ejecutar correctamente unmtodo normalizado cuando lo realiza

d i lexactamente como est descrito en la norma.


Para qu valido un mtodo analtico?Para qu valido un mtodo analtico?Para cumplir con requisitos de lasnormas internacionales:normas internacionales:a) BPM (Industria Farmacutica)b) Norma ISO 17025 (Acreditacin) m (de Laboratorios de Ensayo y deCalibracin)) N ISO 15189 (A dit ic) Norma ISO 15189 (Acreditacin

de Lab. Clnicos)d) Organismos Internacionales comod) Organismos Internacionales comoFAO, USP y otras farmacopeas,OMS, ICH (ConferenciaInternacional Tripartita sobre


Internacional Tripartita sobreArmonizacin)

Para qu valido un mtodo analtico?Para qu valido un mtodo analtico?

Para emitir resultados exactos y Para emitir resultados exactos y

precisos que sean reproducibles precisos, que sean reproducibles

para generar la confianza en p g

nuestros clientes.


Cules son los tipos de mtodos?1.Mtodos Normalizados:

p

Mtodo analtico desarrolladopor un organismo de

li i t isnormalizacin u otro organismoreconocido cuyos mtodos songeneralmente aceptados por elgeneralmente aceptados por elsector tcnico correspondiente.(Ref. ILAC-G18).

NOTA: El desarrollo del mtodoincluye la etapa de su validacin.


Cules son los tipos de mtodos?

2. Mtodos No Normalizados:

p

Mtodo analtico desarrollado porun tercero o que ha sido adaptadoun tercero o que ha sido adaptadopor el laboratorio a partir de unmtodo normalizado. (Ref. ILAC-G18)G18).NOTA: El desarrollo del mtodo,

d i i l las como su adaptacin, incluyen laetapa de su validacin.


Cules son los tipos de mtodos?

3. Mtodos Desarrollados por

p

pel Laboratorio:

Mtodo analtico que no seMtodo analtico que no seencuentra en normas u otrascolecciones de mtodos, ni enpublicaciones de terceros,habiendo sido desarrollado porel propio laboratorioel propio laboratorio.NOTA: El desarrollo del mtodoincluye la etapa de su validacin

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incluye la etapa de su validacin.

Licda. Lucrecia Arriola

Qu mtodos se validan?

1. Los Mtodos No Normalizados.


2. Los Mtodos diseados por el Laboratorio.

3.Los Mtodos Normalizados que han sidomodificados por el Laboratorio o utilizados fuera delalcance previsto.



La validacin de los mtodos de ensayo debe:


La val dac n de los mtodos de ensayo debe Reflejar las condiciones reales de ensayo.

L xt si d l lid i s i d p d La extensin de la validacin necesaria dependerdel mtodo y su aplicacin.L d b li p s n l lifi d p s La debe realizar personal calificado para esa

actividad.En t d s l s c s s un p rm tr p r l v lid cin En todos los casos un parmetro para la validacinde ensayos es la descripcin del mtodo de ensayo.


Qu mtodos se verifican?1.Los Mtodos Normalizados.

Qu mtodos se verifican?

2. Los Mtodos Oficiales.

3 Los Mtodos de Org Nacionales o Internacionales3. Los Mtodos de Org. Nacionales o InternacionalesReconocidos.

Es d bl l tili i d t d s li d sEs recomendable la utilizacin de mtodos normalizadoscuando stos estn disponibles y sean apropiados.El l b t i d b fi m d li"El laboratorio debe confirmar que puede aplicarcorrectamente los mtodos normalizados antes de laspruebas o calibraciones. Si el mtodo normalizado cambia,

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pla confirmacin se repetir ". USPLicda. Lucrecia Arriola

Cmo se dividen los mtodos segn el RTCA 11 03 39: 06 ?

C I

RTCA. 11.03.39: 06?

1. Categora I

2 Categora II2. Categora II

3 Categora III3. Categora III

4. Categora IV. g V

5. Mtodos Microbiolgicos


Qu procedimientos analticos se validan segn el RTCA 11 03 39: 06 ?

Se deben validar los siguientes procedimientos analticos

segn el RTCA. 11.03.39: 06 ?

g pqumicos, fsicos y microbiolgicos:

Categora I: pruebas cuantitativas del contenido deld principio activo, son procedimientos qumicos o

microbiolgicos que miden el analito presente en unamuestra determinada.m m



Categora II: pruebas para

segn el RTCA. 11.03.39: 06 ?

la determinacin delcontenido de impurezas o devalores lmites para el controlvalores lmites para el controlde impurezas. Pueden serpruebas cuantitativas o unapruebas cuantitativas o unaprueba cualitativa paradeterminar si la impurezapest presente en la muestrapor encima o por debajo de un

l l it ifi d1919

valor lmite especificado.Licda. Lucrecia Arriola


Las categoras I y II miden con exactitud las

segn el RTCA. 11.03.39: 06 ?

Las categoras I y II miden con exactitud lascaractersticas de pureza de la muestra. Losparmetros de validacin requeridos por una

b tit ti dif t l dprueba cuantitativa son diferentes a los de unaprueba cualitativa de cumplimiento de lmite.


Qu procedimientos analticos se validan segn el RTCA. 11.03.39: 06 ?

Categora III: son pruebas fisicoqumicas que midencaractersticas propias del desempeo del

segn el RTCA. 11.03.39: 06 ?

caractersticas propias del desempeo delmedicamento, por ejemplo la prueba de disolucin. Lascaractersticas de la validacin son diferentes a las del t b l d i l ilas otras pruebas, aunque las pueden incluir.



Categora IV: pruebas de identificacin. Aquellas que seli s l id tid d d lit

segn el RTCA. 11.03.39: 06 ?

realizan para asegurar la identidad de un analito en unamuestra. Esto normalmente se realiza por comparacin deuna propiedad de la muestra, contra la de un estndar dep preferencia, por ejemplo espectros, comportamientocromatogrfico, reactividad qumica y pruebasmicrocristalinasmicrocristalinas.



Pruebas microbiolgicas: aquellas que se realizan para

segn el RTCA. 11.03.39: 06 ?

Pruebas microbiolgicas aquellas que se realizan paraasegurar la calidad microbiana del medicamento.


Cmo seleccionar e implementar un mtodo analtico nuevo?

1. De preferencia, que sea un mtodon rmalizad de versin reciente

analtico nuevo?

normalizado de versin reciente.

2. Que el mtodo sea apropiado para eltipo de muestra a analizartipo de muestra a analizar.

3. Determinar si el Laboratorio cuentacon personal capacitado para elcon personal capacitado para elanlisis a realizar.

4 Determinar si el Laboratorio cuenta4. Determinar si el Laboratorio cuentacon las instalaciones y condicionesambientales requeridas para el

lisis

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anlisis.



5. Descripcin del procedimientoincluyendo el alcance del mtodo

analtico nuevo?

incluyendo el alcance del mtodo(aplicabilidad, tipo), tipo decompuestos y de matriz.

6. Detalle de reactivos, estndares dereferencia que se utiliza.

7. Lista de equipos y requisitos defuncionamiento y rendimiento.

8. Definir los parmetros del mtodo.

9. Detalle de condiciones ei l t i d l t d i l d

2525

implementacin del mtodo, incluyendola preparacin de la muestra.



10. Definir los procedimientosestadsticos y clculos

analtico nuevo?

estadsticos y clculosrepresentativos.

11 Definir los procedimientos para11. Definir los procedimientos parael control de calidad en la rutina.

12. Definir los grficos12. Definir los grficosrepresentativos, cromatogramas,espectros y curvas de calibracin.

13. Definir los criterios deaceptacin / rechazo de los datos.

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14. Consideraciones de seguridad.


Etapas para desarrollar un mtodo analticoEtapas para sarro ar un m to o ana t co


Qu requisitos debo cubrir antes de validar qun mtodo analtico?


Qu son los parmetros del desempeo delQu son los parmetros del desempeo del mtodo analtico

S l s i d d s t sti s id d sSon las propiedades, caractersticas o capacidadescuantificables del mtodo que indican su grado decalidad; incluyen exactitud, efecto matricial,cal dad; ncluyen exact tud, efecto matr c al,repetibilidad, precisin intermedia, reproducibilidad,especificidad, lmite de deteccin, lmite de

tifi i li lid d ibilid dcuantificacin, linealidad, rango, sensibilidad,robustez, fortaleza y otras caractersticasrelacionadas con los resultados obtenidos por elrelacionadas con los resultados obtenidos por elmtodo.


Qu parmetros del desempeo se determinan en cada mtodo analtico?

Parmetros de los procedimientos analticos fisico-qumicos y potencia microbiolgica, segn ICH.q y p g g



Segn la USP 34:



Parmetros de desempeo de los procedimientos microbiolgicosg


Extensin de la ValidacinExtensin de la Validacin


Qu son los parmetros del desempeo del t d ltimtodo analtico

S l s i d d s t sti s id d sSon las propiedades, caractersticas o capacidadescuantificables del mtodo que indican su grado decalidad; incluyen exactitud, efecto matricial,cal dad; ncluyen exact tud, efecto matr c al,repetibilidad, precisin intermedia, reproducibilidad,especificidad, lmite de deteccin, lmite de

tifi i li lid d ibilid dcuantificacin, linealidad, rango, sensibilidad,robustez, fortaleza y otras caractersticasrelacionadas con los resultados obtenidos por elrelacionadas con los resultados obtenidos por elmtodo.


EXACTITUD DE LOS RESULTADOS ANALTICOS

EXACTITUD: P ximid d d l n d n i nty EXACTITUD: Proximidad de la concordancia entreel resultado de una medicin y un valor verdaderodel mensurandom u


Estimacin de la ExactitudEstimacin de la Exactitud


Estimacin de la Exactitud1. Agregando cantidad conocida del estndar al

producto

a. Determinar por duplicado el contenidopromedio del analito en la muestra con elpromedio del analito en la muestra con elmtodo a validar.

b Enriquecer las muestras con estndar: parab. Enriquecer las muestras con estndar: parapreparar las soluciones, se mantieneconstante la cantidad de muestra tomada yc nstant a cant a mu stra t ma a yse agregan cantidades variables delestndar.


Estimacin de la ExactitudAgregando cantidad conocida del estndar al producto

c. La exactitud es evaluada utilizando un mnimo de nueveL m mdeterminaciones, tres concentraciones y tresdeterminaciones de cada concentracin. (por ejemplo:concentraciones de 80% 100% y 120% de laconcentraciones de 80%, 100% y 120% de laconcentracin normal de trabajo del mtodo; o 100%,125% y 150% cuando no se puede reproducir la matrizd l li )del analito)

d. Calcular el % de Recuperacin con la frmula:

% Rec.= (valor encontrado / valor verdadero o de referencia) * 100%

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referencia) 100%


Estimacin de la ExactitudAgregando cantidad conocida del estndar al productoproducto

y Criterio de Aceptacin y Documentacin:El porcentaje de recuperacin puede estar entre90 y 110% del valor terico. Una recomendacines usar +/ 4 veces la desviacin estndares usar +/- 4 veces la desviacin estndarrelativa.Para Disolucin: 97% - 103%Para Disolucin: 97% 103%Para Muestras biolgicas: 15% del valor verdadero


Estimacin de la ExactitudAgregando cantidad conocida del estndar al producto

y Criterio de Aceptacin y Documentacin:p yPara Trazas: Menor a 100 ppb: 60% - 110% de

recuperacinMayor a 100 ppb: 80% - 110% de Mayor a 100 ppb: 80% 110% de recuperacinMenos de 1 ppb: 70% - 120% de recuperacinp

y Para cada muestra, reportar el valor terico, el valor delensayo y el porcentaje de recuperacin. Calcular el

di l d i i t d d i i t dpromedio, la desviacin estndar, desviacin estndarrelativa (coeficiente de variacin) y el porcentaje derecuperacin para todas las muestras. Llevar un registrode los resultados en una hoja de datos.

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de los resultados en una hoja de datos.


Estimacin de la Exactitud2. Comparando los resultados de un estndar o Material

de Referencia Certificado

y Determinar por duplicado el valor promedio del estndaro material de referencia certificado por el mtodo a

lid C l lt d bt id l lvalidar. Comparar el resultado obtenido con el valordeclarado.

y Tomar en cuenta la disponibilidad y estabilidad dely Tomar en cuenta la disponibilidad y estabilidad delestndar o MRC, as como la incertidumbre que tenga elvalor verdadero.

y La exactitud es evaluada utilizando un mnimo de 30determinaciones: 5 concentraciones y 6 determinacionesde cada concentracin

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de cada concentracin.


Estimacin de la Exactitud2. Comparando los resultados de un estndar o Material de

Referencia Certificado Criterio de Aceptacin y Documentacin:

y El porcentaje de recuperacin puede estar entre 98 y 102%del valor terico o 2% de error relativo. Se calcula con lasiguiente frmula:siguiente frmula:

% Rec.= (valor encontrado / valor verdadero o dereferencia) * 100%referencia) 100%

y Para cada muestra, reportar el valor terico, el valor delensayo y el porcentaje de recuperacin Calcular elensayo y el porcentaje de recuperacin. Calcular elpromedio, la desviacin estndar, desviacin estndarrelativa (coeficiente de variacin) y el porcentaje derecuperacin para todas las muestras. Llevar un registro del s s lt d s n n h j d d t s

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los resultados en una hoja de datos.


Estimacin de la Exactitud3. Comparando los resultados con un mtodo oficial

con exactitud bien definidacon exact tud b en def n da

y La muestra debe ser analizada utilizando el mtodoa validar y un segundo mtodo bien caracterizadoa validar y un segundo mtodo bien caracterizado,el cual debe tener una exactitud bien definida yestablecida.

y Se analizan 6 muestras por duplicado a laconcentracin normal de trabajo por ambosconcentracin normal de trabajo por ambosmtodos.


Estimacin de la Exactitud3. Comparando los resultados con un mtodo oficial con

exactitud bien definida

Criterio de Aceptacin y Documentacin:y Se lleva a cabo un anlisis de varianza, del porcentaje de

recuperacin o del error relativo en porcentaje, paradeterminar si hay o no diferencia significativa entre laexactitud de los mtodos comparados.p

y Para cada muestra, reportar el valor terico, el valor delensayo y el porcentaje de recuperacin. Calcular el

di l d i i d d i i dpromedio, la desviacin estndar, desviacin estndarrelativa (coeficiente de variacin) y el porcentaje derecuperacin para todas las muestras. Llevar un registro de

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los resultados en una hoja de datos.


PRECISIN DE LOS RESULTADOS ANALTICOSANALTICOS

y PRECISIN: Es el grado de concordancia entrelos resultados independientes de una medicinlos resultados independientes de una medicin,obtenidos en condiciones estipuladas, ya sea derepetibilidad o de reproducibilidad y depende dep p y pla distribucin de los resultados sin estarrelacionada con el valor verdadero.


PRECISIN DE LOS RESULTADOS ANALTICOSHay 3 niveles para determinar la Precisin del Mtodo:1.REPETIBILIDAD: Coincidencia entre los resultados de

di i i li d l imediciones sucesivas realizadas en las mismascondiciones de medicin.

2.REPRODUCIBILIDAD: Coincidencia entre losresultados de mediciones realizadas en diferentescondiciones de medicin en un mismo laboratorio oentre 2 laboratoriosentre 2 laboratorios.

3.PRECISIN INTERMEDIA: Medida de la precisin delos resultados de un mtodo en condiciones diferentesd li t d i l t d ti d tde analista, da, equipo y lote de reactivos, dentrodel mismo laboratorio. No es necesario determinarprecisin intermedia, cuando se ha determinado


p ,reproducibilidad.

PRECISIN- REPETIBILIDADPara determinar la precisin entre ensayos o

repetibilidad, se trabaja con submuestras de unamuestra homognea, bajo las mismas condicionesmedicin: el mismo procedimiento de medicin, elmismo observador el mismo instrumento de medicinmismo observador, el mismo instrumento de medicin,en un perodo corto de tiempo. Hay 2 formas dedeterminarla:

1.Hacer un mnimo de 9 determinaciones: 3rplicas a 3 concentraciones diferentes o 9determinaciones al 100% de la concentracindeterminaciones al 100% de la concentracinnormal de trabajo.

2. hacer un mnimo de 6 determinaciones a una

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2. hacer un mnimo de 6 determinaciones a unaconcentracin que corresponda con la de lamuestra problema.Licda. Lucrecia Arriola

PRECISIN- REPETIBILIDAD

Criterio de Aceptacin y Documentacin:

Se establece de acuerdo a un valor mximoaceptable para el parmetro escogido, segn elaceptable para el parmetro escog do, segn eltipo de anlisis y su propsito especfico.

Registrar los resultados en el formato de datos,as como los clculos de la media y losparmetros de dispersin escogidos: s SDRparmetros de dispersin escogidos: s, SDR,CV o intervalo de confianza.


PRECISIN INTERMEDIA

Se determina realizando un mnimo de seisdeterminaciones al 100% de la concentracin esperada.determinaciones al 100% de la concentracin esperada.(Diferentes das, analistas y equipo).

Criterio de Aceptacin y Documentacin:p yRSD < 2,0% para macrocomponentesRSD < 10,0% para componentes menoresRSD 3 0% t d l d di l iRSD < 3,0% para mtodos empleados en disolucinRSD < 10% para muestras biolgicas

Registrar los resultados, as como los clculos de la media,la desviacin estndar, la desviacin estndar relativa(coeficiente de variacin) y el intervalo de confianza

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(coeficiente de variacin) y el intervalo de confianza.


PRECISIN- REPRODUCIBILIDAD

Se determina realizando un mnimo de seisdeterminaciones al 100% de la concentracin esperada.( li l d i i li d dif(Se realiza las determinaciones analizando en diferentesdas, por diferente analista, horas del da, equipos).Criterio de Aceptacin y Documentacin:Criterio de Aceptacin y Documentacin:

Se espera una variabilidad mayor, que para el caso de larepetibilidadrepetibilidad.Registrar los resultados, as como los clculos de la media,la desviacin estndar, la desviacin estndar relativa(coeficiente de variacin) y el intervalo de confianza.No se realiza precisin intermedia cuando se estima la

d ibilid d

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reproducibilidad.


ERROR EN LOS RESULTADOS ANALTICOS

y ERROR: Resultado de una medicin menos unvalor verdadero del mensurando.


Determinacin de Exactitud y de Precisin del mtodo analticoPrecisin del mtodo analtico

y La norma ISO- 5725 nos describe lasconsideraciones que se deben tomar en cuenta paracons derac ones que se deben tomar en cuenta paradeterminar la exactitud y la precisin de unamedicin:9 Contar con un mtodo establecido.9El nmero de factores que cambiarn en la

d t min indeterminacin.9El alcance de medicin.9El nmero de puntos a realizar9El nmero de puntos a realizar.9La disponibilidad de los materiales y quipos.9El nmero de repeticiones

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9El nmero de repeticiones.9Cronograma para realizar las mediciones.Licda. Lucrecia Arriola

ESPECIFICIDADESPECIFICIDADEs la habilidad que muestra un mtodo paradistinguir entre un analito e impurezas conocidasdistinguir entre un analito e impurezas conocidas,precursores sintticos, metabolitos, o productosde degradacin. Esta se muestra en su resolucinhacia estos componentes.y Documentacin

Imprimir cromatogramas o datos que muestren laresolucin de un mtodo.y Criterio de Aceptaciny Criterio de Aceptacin

Los componentes contaminantes no debeninterferir con el anlisis del analito en cuestin

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interferir con el anlisis del analito en cuestin. .


LMITE DE DETECCIN Determinar la menor concentracin a la que se detecte elanalito en la matriz de la muestra.D t iy DocumentacinImprimir el cromatograma o registrar la menorconcentracin detectable en una hoja de registro.concentracin detectable en una hoja de registro.y Criterio de Aceptacin

No hay un lmite de deteccin mnimo. Sin embargo, paray g pmtodos cromatogrficos el lmite superior suele ser unvalor de al menos tres veces la lnea base (o nivel deruido) Para otros instrumentos puede ser el lmite deruido). Para otros instrumentos puede ser el lmite deoperacin del instrumento, segn lo haya establecido elfabricante.

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Canadian Health Protection Branch (CHPB) establece unarazn de 3:1 entre la seal y el ruido.


LMITE DE DETECCIN

Para Mtodos No Instrumentales:

y Se preparan 10 blancos independientes y 10 blancosenriquecidos a la concentracin ms baja aceptada.Una vez preparadas las soluciones se llevan a caboUna vez preparadas las soluciones, se llevan a cabolas mediciones de cada una y posteriormente secalcula la desviacin estndar de cada grupo deg pdatos.

y Con estos datos se puede calcular el lmite deCon estos datos se puede calcular el lmite dedeteccin:

LD = Valor promedio del blanco + 3S

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LD = Valor promedio del blanco + 3S


LMITE DE CUANTIFICACIN

Determinar la menor concentracin en la que unanalito en la matriz/muestra puede ser determinadaanal to en la matr z/muestra puede ser determ nadacon la exactitud y precisin requeridas para elmtodo en particular. Este valor puede ser la menor

t i l d l t concentracin en la curva del patrn.

y Documentaciny Imprimir el cromatograma o anotar el dato de la

menor concentracin cuantificable en la hoja dejdatos. Proveer datos que demuestren exactitud yprecisin requeridas en el criterio de aceptacin.


LMITE DE CUANTIFICACIN

y Criterio de Aceptacin

El lmite de cuantificacin para mtodos cromatogrficoses la concentracin que proporciona una razn seal aruido con una relacin de 10 a 1 y que es menor o igual aruido, con una relacin de 10 a 1 y que es menor o igual a10% de la precisin, o una relacin de 20 a 1 y es menor oigual a 5% de la precisin.

En el lmite de cuantificacin, se deben cumplir loscriterios de aceptacin de exactitud y linealidad. CHPB

bl l l i d ifi i l jestablece que el lmite de cuantificacin es el mejorestimado de una concentracin baja, que derive en unadesviacin estndar relativa de aproximadamente 10%,

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p ,en, al menos, seis rplicas.


LINEALIDAD Capacidad de un mtodo analtico para generar resultadosdirectamente proporcionales a la concentracin delanalito o valor del parmetro de la muestra dentro de unanalito o valor del parmetro de la muestra, dentro de unrango.

H 2 f d d t i l li lid dy Hay 2 formas de determinar la linealidad:

1. Preparar soluciones patrn de por lo menos cinco diferentes concentraciones del estndar, que estn

distribuidas regularmente y que cubran del 80%-120% o50%-150%, del intervalo de trabajo esperado, con5 5 , nt r a o tra ajo sp ra o, condiluciones a partir de una misma solucin madre yanalizando en duplicado para cada dilucin, o realizandopor duplicado la solucin madre y analizando 1 vez cada

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por duplicado la solucin madre y analizando 1 vez cadadilucin.


LINEALIDAD

2)Usar seis rplicas por concentracin. Analizar lassoluciones conforme el mtodo en cuestin.

y Criterio de Aceptacin y Documentacin:

L d lib i fi l d lLa curva de calibracin se grafica colocando lasconcentraciones de las soluciones en el eje horizontal (x)y las respuestas del instrumento en el eje vertical (y),y p j (y),esta relacin debe ser lineal con un coeficiente dedeterminacin (r2) de por lo menos 0.98. (Es preferible0 99) Los valores deben caer dentro de una zona0.99). Los valores deben caer dentro de una zonahorizontal angosta, los que queden fuera no sonaceptables para ser incluidos en el intervalo normal det b j

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trabajo.En donde:


LINEALIDAD

y CV menor o igual a 2.0% (desviacin estndar relativa ocoeficiente de variacin)y r mayor o igual a 0.99 (el coeficiente de correlacin es

una medida del grado de asociacin entre las mediciones yla concentracin del analito)la concentracin del analito)y r2 mayor o igual a 0.98 (el coeficiente de determinacin

mide la exactitud con la que se ajusta la curva deregresin a los valores experimentales de y)y b aproximadamente igual a 0 (intercepto de la lnea)y m igual a la sensibilidad del sistema (pendiente de lay m igual a la sensibilidad del sistema (pendiente de la

lnea)


Evaluacin de la Linealidad


RANGO O INTERVALORANGO O INTERVALOIntervalo entre la concentracin mxima y mnima de analito en la cual se puede determinar al analito con anal to en la cual se puede determ nar al anal to con un nivel adecuado de precisin, exactitud y linealidad utilizando el mtodo en cuestin.

y a) Procedimiento:

V ifi l t d lti i y Verificar que el mtodo analtico proporciona linealidad, precisin y exactitud aceptables cuando se aplica a muestras que contienen el analito en los se aplica a muestras que contienen el analito en los extremos y dentro del intervalo.


RANGO O INTERVALORANGO O INTERVALOy Deben considerarse los rangos especificados mnimos

que se indican a continuacin:que se nd can a cont nuac n

y Valoracin de macrocomponentes 80-120% de la concentracin de pruebaconcentracin de prueba

y Uniformidad de contenido 70-130% o el i t l i d l M fintervalo ms apropiado segn la Monografa.

y Prueba de disolucin 20% por encima pdel intervalo especificado.

y Cuantificacin de impurezas LC o 50%- 120%


Cuantificacin de impurezas LC o 50% 120%

RANGO O INTERVALORANGO O INTERVALOCriterio de Aceptacin y Documentacin:

y Determinar que los niveles de precisin, exactitud ylinealidad de las mediciones utilizando el mtodo avalidar, en el rango de las concentraciones del analitocumple con su respectivo criterio de aceptacin.


VALIDACIN DE MTODOS MICROBIOLGICOS



Validar mtodos microbiolgicos requiere:Validar mtodos microbiolgicos requiere:

1. Comparar con un MTODO DE REFERENCIA.1. Comparar con un MTODO DE REFERENCIA.2. Usar cepas de referencia y cepas de referenciacertificadas.(Material de referencia).

3. LA EVALUACIN SISTEMTICA DE FACTORES.4 Ensayos Interlaboratorios4. Ensayos Interlaboratorios.5. La estimacin de la incertidumbre.



Lmite de deteccinLmite de deteccinEl nmero ms bajo de microorganismos quepueden ser detectados, pero en nmeros que nopueden ser detectados, pero en nmeros que nopueden ser estimados exactamente.

Lmite de cuantificacinAplicado a pruebas microbiolgicas cuantitativas. Elnmero ms bajo de microorganismos dentro denmero ms bajo de microorganismos, dentro deuna variabilidad definida, que pueden ser contadosbajo las condiciones experimentales del mtodo bajo


bajo las condiciones experimentales del mtodo bajoevaluacin.


Cultivos de referenciaCultivos de referenciaTermino colectivo para la cepa de referencia y losstocks de referencia.stocks de referencia.

Material de referenciaMaterial suficientemente homogneo y estable enrelacin a una o ms propiedades especificadas, elcual ha sido establecido como idneo para el usocual ha sido establecido como idneo para el usoprevisto, en un proceso de medicin.



SensibilidadSensibilidadLa fraccin del nmero total de cultivos positivos ocolonias correctamente asignadas en una presuntacolonias correctamente asignadas en una presuntainspeccin (7).

Especificidad (selectividad)La habilidad del mtodo para detectar el rangorequerido de microorganismos que podran estarrequerido de microorganismos que podran estarpresentes en la muestra.



Los mtodos de ensayos estandarizados seLos mtodos de ensayos estandarizados seconsideran validados. Sin embargo, el mtodo deensayo especfico para ser utilizado por unensayo especfico para ser utilizado por undeterminado laboratorio para el anlisis de unproducto especfico necesita mostrar que esadecuado para su uso en la recuperacin debacterias, levaduras y mohos en la presencia delproducto especficoproducto especfico.



El laboratorio debe demostrar que los criterios deEl laboratorio debe demostrar que los criterios dedesempeo del mtodo de ensayo estndar puedenser satisfechos por el laboratorio antes de introducirser satisfechos por el laboratorio antes de introducirel ensayo con propsitos de rutina (mtodo deverificacin) y que el mtodo de ensayo especficopara el producto especfico es adecuado(adecuacin del mtodo de ensayo incluyendocontroles positivos y negativos)controles positivos y negativos).


VALIDACIN DE MTODOS MICROBIOLGICOSMICROBIOLGICOS

Los mtodos de ensayo no basados en compendiosu otras referencias reconocidas deben ser validadosu otras referencias reconocidas deben ser validadosantes de su uso. La validacin debe incluir, cuandosea apropiado, determinacin de la exactitud,sea apropiado, determinacin de la exactitud,precisin, especificidad, lmite de deteccin, lmite decuantificacin, linealidad y robustez. Potencialesefectos inhibitorios de la muestra deben ser tomadosen cuenta al ensayar los diferentes tipos demuestra Los resultados deben ser evaluados conmuestra. Los resultados deben ser evaluados conmtodos de estadstica apropiados, como sedescribe en las farmacopeas nacionales regionales


describe en las farmacopeas nacionales, regionaleso internacionales.


Control de calidad interna

El laboratorio debe contar con un sistema deaseguramiento de calidad interna o control deaseguramiento de calidad interna o control decalidad (por ejemplo: manejo de desviaciones, usode muestras adicionadas, rplicas de ensayos,participacin en ensayos de aptitud) para asegurar laconsistencia de resultados rutinarios y suconformidad de acuerdo a un criterio establecidoconformidad de acuerdo a un criterio establecido.



Control de calidad interna

La validacin de mtodos microbiolgicos se realizaespecialmente utilizando los resultados del controlespecialmente utilizando los resultados del controlinterno de la calidad, se estima la repetibilidad y lareproducibilidad.



Validar mtodos microbiolgicos requiere:Validar mtodos microbiolgicos requiere:

1. Comparar con un MTODO DE REFERENCIA.1. Comparar con un MTODO DE REFERENCIA.2. Usar cepas de referencia y cepas de referenciacertificadas.(Material de referencia).

3. LA EVALUACIN SISTEMTICA DE FACTORES.4 Ensayos Interlaboratorios4. Ensayos Interlaboratorios.5. La estimacin de la incertidumbre.


Definiciones y Frmulas usadas en la Validacin de Mtodos

1 Desviacin Estndar 1. Desviacin Estndar Es la medida de cmo se dispersan los valores alrededor de la media en la distribucin de valores.alrededor de la media en la distribucin de valores.Se calcula con la frmula:

( ) x-x11 = s i 2n=i

En donde: n es el nmero de valores

( )x1-n i=0i77Licda. Lucrecia Arriola


2 DESVIACIN ESTNDAR DE LA REPETIBILIDAD2. DESVIACIN ESTNDAR DE LA REPETIBILIDADEs la desviacin estndar de los resultados de los anlisis obtenidos bajo condiciones de repetibilidad.

( ) = k iiI snkNs 211En donde n es el nmero de valores

=ikN 1En donde n es el nmero de valores

N es el nmero de repeticionesk es el factor de cobertura, se utilizar k = 2, con

i l d fi d l 95%


un nivel de confianza del 95%es el cuadrado de la desviacin estndar 2is


3 DESVIACIN ESTNDAR DE LA REPRODUCIBILIDAD (total)3. DESVIACIN ESTNDAR DE LA REPRODUCIBILIDAD (total)La desviacin estndar de los resultados de anlisis obtenidos bajo condiciones de reproducibilidad.

( ) ( )1

1 22 +=N

skskNs ZI

En donde N es el nmero de repeticiones

1Nk es el factor de cobertura, se utilizar k = 2, con un nivel

de confianza del 95%es el cuadrado de la desviacin estndar

2is


es el cuadrado de la desviacin estndar entre las repeticiones o series

2Zs


4 DESVIACIN ESTNDAR RELATIVA (RSD)4. DESVIACIN ESTNDAR RELATIVA (RSD)Es la comparacin de la desviacin estndar con respecto a la media, generalmente se expresa en % y se denomina como Coeficiente de Variacin Se calcula con la siguiente frmula:Variacin. Se calcula con la siguiente frmula:

%sCV 100=x

En donde es la desviacin estndar

es el promedio de las mediciones

sx



5 PRECISIN INTERMEDIA5. PRECISIN INTERMEDIAMedida de la precisin de los resultados de un mtodo de ensayo en condiciones diferentes de analista, da, equipo y lote de reactivos, dentro del mismo laboratorio con la misma muestra homogneadel mismo laboratorio con la misma muestra homognea.

( ) = k iiZ xxns 21En donde

( )= i iiZ k 11

n es el nmero de valores k es el factor de cobertura, se utilizar k = 2, con un nivel

de confianza del 95%l d i i t d t l ti i is


es la desviacin estndar entre las repeticiones o series

es el promedio de las medicionesxZs

Protocolo de ValidacinProtocolo de Validacin


Componentes de la Calidad de los anlisisanlisis


MUCHAS GRACIAS MUCHAS GRACIAS


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