Cromatografía de Líquidos

M. en C. Elba Rojas Escudero.

Separación

Para separar se emplean básicamente tres alternativas:

Separaciones mecánicas

Procesos cinéticos y electrocinéticos

Equilibrios de distribución entre dos fases

Cromatografía

Sólido Líquido Sólido Líquido

Gas Líquido

CGS CGL CLS CLL

Gas Líquido

Columna Plano

CLS CLL CFE CII CE

CPG CFG

CCF CP

Cromatografía

Proceso Cromatográfico

La fase móvil fluye, arrastrando consigo los solutos

Los solutos se reparten entre ambas fases

MuestraFase móvil Fase estacionaria

Muestra

ObjetivosSeparación

Mezcla de compuestos

Cuantitativo

PurificaciónCualitativo

Cromatografía

Fase Normal FE → Polar FM → No polar

Fase Inversa FE → No polar FM → Polar

Elución La muestra se aplica al principio de la

columna como una banda fina El eluyente tiene menor afinidad por la fase

estacionaria que los solutos Los solutos avanzan por el sistema a

velocidades diferentes, menores a la de la fase móvil

Los solutos se separan en bandas que eluyenal final de la columna

Requisitos de la muestra

Presión de vapor baja

Compuestos iónicos

Compuestos de peso molecular elevado

Termolábil

Instrumentación

Fase móvil Bomba de alta presión

Inyector

Columna

Detector

Muestra

Control de temperatura

Gradientede elución

Registrador

Fase móvil

0.73Metanol

0.50Acetonitrilo

0.32Cloruro de metileno

0.22Éter isopropílico

0.01Isoctano

0.00HexanooDisolvente

Fase móvil

Disolventes grado cromatográfico Agua de 18 m Baja viscosidad No volátil Miscibilidad Filtrada Sin oxígeno disuelto (degasificada) Solubilidad de los analitos Compatible con el detector

Cromatografía Fase Inversa

F E Sílica químicamente modificada con

grupos no-polares: hidrocarburos saturados: C2 dimetil, C4 tetrametil, C8 octil, C18 octadecil

F M Mezclas: acuosos / orgánicos

H2O + (CH3OH, CH3CH2OH, CH3CN)

Fase estacionaria (columna)

Empaque Sílica gel, C8, C18, Ciano, Amino,

Resinas, Polímeros Carga de Carbón 5-20 % w/w Intervalo de pH = f (FE) Límite de presión de trabajo Compatible con la fase móvil

Cromatografía Fase Inversa

Efecto solvofóbico fuerte:

Parte apolar de la molécula del soluto es mayor

% C en la FE es mayor Polaridad de la FM es alta (mayor % de

H2O)

Cromatografía Fase Inversa

Ventajas

Reproducibilidad en las separaciones

Estabilidad de la FE (pH 7)

Mezclas: acuosos/orgánicos H2O + (CH3OH, CH3CH2OH, CH3CN)

Gradiente de Elución

Problema general de la elución

Elución

InstrumentaciónFase móvil Bomba de

alta presión

Inyector

Columna

Detector

Muestra

Control de temperatura

Gradientede elución

Registrador

Proceso Cromatográfico

El lecho cromatográfico puede ser abierto (placa) o cerrado (columna)

La fase móvil fluye a lo largo del lecho cromatográfico en contacto con la fase estacionaria

Separación de los solutos

Ventajas

Análisis de compuestos iónicos, de alto peso molecular

Diversidad de columnas y detectores Formación de derivados pre-columna y

post-columna Separaciones con control de pH Separaciones preparativas

Limitantes

Muestras “relativamente” limpias Solubilidad de la muestra en la fase móvil Viscosidad de la fase móvil Dimensiones de la columna Presión de trabajo Intervalo de pH Utilizar un filtro (pre-columna)

Equipo para la formación de derivados

FMFE

Inyector Reactor Detector

FMFE

Inyector Reactor Detector