corso di laurea in biotecnologie - e-learning università
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Università degli Studi di Teramo
CORSO di LAUREA inBIOTECNOLOGIE
Corso Integrato di CITOLOGIA e ISTOLOGIA
ModuloLABORATORIO TECNICHE CITOLOGICHE
ED ISTOLOGICHE
Dr.ssa A. MAURO
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Tes
suti
Tes
suti C
onne
ttivi
Con
netti
viPROPRIAMENTE DETTIPROPRIAMENTE DETTI
DI SOSTEGNO (DI SOSTEGNO (solidisolidi))
LASSOLASSO
ReteRete fibrosafibrosa lassalassa,,
abbondanteabbondante matricematrice amorfaamorfa
DENSODENSO
FibreFibre densamentedensamente impacchettateimpacchettate, ,
relativamenterelativamente pocapoca matricematrice amorfaamorfa
LIQUIDILIQUIDI
SANGUESANGUE
ContenutoContenuto nellnell’’apparatoapparato circolatoriocircolatorio
LINFALINFA
ContenutaContenuta nelnel sistemasistema linfaticolinfatico
CARTILAGINECARTILAGINE
MatriceMatrice gelatinosagelatinosa solidasolida
OSSOOSSO
MatriceMatrice cristallinacristallina
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i tessuti di origine i tessuti di origine mesenchimalemesenchimale::
•• derivano tutti dal medesimo tessuto embrionale derivano tutti dal medesimo tessuto embrionale (mesenchima)(mesenchima)
•• pur nelle notevoli differenze individuali, pur nelle notevoli differenze individuali, condividono una serie di importanti caratteristiche condividono una serie di importanti caratteristiche istologiche:istologiche:–– cellule relativamente radecellule relativamente rade
–– abbondante matrice extracellulare la cui composizione abbondante matrice extracellulare la cui composizione caratterizza il tipo di tessutocaratterizza il tipo di tessuto
cos’hanno in comune tessuti così
diversi fra loro?
coscos’’ hanno in hanno in comune tessuti coscomune tessuti cosìì
diversi fra loro?diversi fra loro?
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OrigineOriginedelledellecellule cellule connettivaliconnettivaliDerivanoDerivanotuttetutte, , direttamentedirettamenteo o indirettamenteindirettamentedurantedurantelo lo svilupposviluppoembrionaleembrionale, , dalladallacellulacellulamesenchimalemesenchimalepluripotentepluripotente..
SiSi ritieneritienechecheun un piccolo piccolo numeronumerodiditalitali cellule cellule persistapersistanellnell’’ adultoadulto
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E' UN TESSUTO CONNETTIVO LIQUIDO COSTITUITO DA :
•CELLULE : -GLOBULI ROSSI (ERITROCITI) •
-GLOBULI BIANCHI (LEUCOCITI)
-PIASTRINE
•SOSTANZA INTERCELLULARE LIQUIDA: PLASMA
-E' IN EQUILIBRIO CON TUTTI I TESSUTI DEGLI ORGANI
SANGUE
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�Principali funzioni del sangue
�Trasporto dei gas respiratori�Trasporto e distribuzione di sostanze nutrienti�Trasporto di sostanze di rifiuto e tossiche�Trasporto di ormoni�Regolazione del pHed elettroliti�Difesa contro agenti patogeni (immunità) �Prevenzione di perdita dei fluidi (coagulazione)�Termoregolazione
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COMPOSIZIONE DEL SANGUE
45%
55%
~1%
plasma
Globuli rossi
globuli bianchie piastrine
Neutrofili 50-70%Linfociti 20-35%Monociti 5 - 8%Eosinofili 1 - 4%Basofili 0 - 1%
AcquaProteineLipidiGlucosioAminoacidiIoni
AlbumineGlobulineFibrinogeno
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Elementi figurati del sangue
•Eritrociti o globuli rossi
•Globuli bianchio leucociti linfociti
monocitigranulociti neutrofili
basofilieosinofili
•Piastrine sono frammenti citoplasmaticiderivati dal megacariocita che è localizzato nel midollo osseo.
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CELLULE DEL SANGUE
ERITROCITI LINFOCITI NEUTROFILI EOSINOFILI BA SOFILI MONOCITI PIASTRINETIPO CELLULARE
6-8 µµµµm 6-15 µµµµm 12-14 µµµµm 12-17 µµµµm 14-16 µµµµm 16-20 µµµµm 1.5-3.5 µµµµmDIAMETRO
4.5–5.5 x106 1500-2500 3500-7000 150-400 50-100 200-800 200.000-500.000
NUMERO/mm 3
20-40% 50-70% 1-6% < 1% 3-10% _% DEI LEUCOCITI
VITA MEDIA 120 GIORNI ? 6 ORE- 8-12 GIORNI ? MESI - 8-12 GIORNIPOCHI ANNIGIORNI
LEUCOCITI
GRANULOCITI
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I leucociti sono cellule che svolgono un ruolo essenziale nei meccanismi di difesa dell’organismo attraverso due processi principali
fagocitosi
produzione di anticorpi
I leucociti sono cellule capaci di movimenti ameboidi che consentono loro di fuoriuscire e rientrare nel circolo sanguignoattraverso un meccanismo detto diapedesi.
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GLOBULI ROSSI
-CELLULE PRIVE DI NUCLEO E ORGANULI CELLULARI (vita media 4 mesi)-FORMA A DISCO BICONCAVO, DEFORMABILITA’-CONTENGONO EMOGLOBINA
IL DIFFERENZIAMENTO DEGLI ERITROCITI (ERITROPOIESI) AVVIENE NEL MIDOLLO OSSEO. ERITROCITI IMMATURI (RETICOLOCITI)SONO IMMESSI NEL CIRCOLO SANGUIGNO (0.8-1%)CONTENGONO ANCORA I RIBOSOMI E POSSONO SINTETIZZARE EMOGLOBINA
GLI ERITROCITI INVECCHIATI SONO RIMOSSI DAL CIRCOLO SANGUIGNO A LIVELLO DELLA MILZA , MIDOLLO OSSEO E FEGATOL’invecchiamento riduce la quantità di acido sialico(cariche negative di superficie) e rende gli eritrociti più agglutinabili , aderenti alle pareti dei vasi dove sono fagocitate dai macrofagi
MICROSCOPIA OTTICA
MICROSCOPIA ELETTRONICA
TEM SEM
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Eritrociti
Colorazione Giemsa
Eritrociti al SEM
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Proteine di Membrana degli Eritrociti
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-Nucleo polilobato (2-5 lobi), -Granulazioni: piccole, al di sotto del potere di risoluzione della microscopia ottica,con poca affinitàtintoriale
GRANULOCITI NEUTROFILI
N
NN
N
I°
II°
Negli individui di sesso femminile si osserva la cromatina condensata del cromosoma X inattivo (drumstick)
drumstick
Granuli primari (azzurrofili (0.5 µµµµm)-simili ai lisosomi, contengono: IDROLASIACIDE, LISOZIMA, COLLAGENASI ePROTEINE CHE AUMENTANO LA PERMEABILITA’ VASALE.
Granuli secondari (0.3 µµµµm)-specifici contengono GELATINASI, LISOZIMA, LATTOFERRINAsono i più numerosi e sono necessari per la funzione antibatterica.
Granuli terziari Alto contenuto di GELATINASI eGLICOPROTEINE DI ADESIONE
Perossidasi Positivi
Perossidasi Negativi
CLASSIFICAZIONE DEI GRANULI
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1 2
34
pseudopodo
FUNZIONI DEI GRANULOCITI NEUTROFILI
-SONO LA PRIMA LINEA DI DIFESA DELL’ORGANISMO CONTR O INFEZIONI BATTERICHE:
-MIGRANO DAL SANGUE NEI SITI D’ INFEZIONE -MOTILITA’ (pseudopodi) -CHEMIOTASSI POSITIVA VERSO IL FOCOLAIO INFIAMMATOR I
-AZIONE ANTIBATTERICA:FAGOCITOSI MEDIATA DA ANTICORPI E DA PROTEINE DEL C OMPLEMENTO
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Granulociti neutrofili in movimento
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GRANULOCITI EOSINOFILI
Cristalli
Granuli specifici
CARATTERISTICHE MORFOLOGICHE:
-12-17 mm DI DIAMETRO-NUCLEO BILOBATO -GRANULI contengono: cristalli centrali (proteina basica maggiore)
idrolasi lisosomiali, arilsolfatasi, istaminasi, collagenasi, fosfatasi acida, perossidasi
proteina cationica degli eosinofili
FUNZIONI:
-MODULANO LE REAZIONI ALLERGICHE mediate dai basofili e dai mastociti-FAGOCITOSI (COMPLESSI ANTIGENE-ANTICORPO)-DISTRUZIONE DI PARASSITI
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GRANULOCITI BASOFILI
CARATTERISTICHE MORFOLOGICHE:
-14-16 mm DI DIAMETRO-NUCLEO BILOBATO -GROSSI GRANULI BASOFILI: eparina, istamina, SRS-A, ECF-A e METACROMATICI altri mediatori vasoattivi coinvolti n ei processi infiammatori
FUNZIONI:
-RESPONSABILI DELLE REAZIONI ANAFILATTICHE (Esocitos i dei Granuli)-MEDIANO LE RISPOSTE IMMUNITARIE VERSO PARASSITI
Granulocita basofilo
eritrocito
cellule simili per struttura e funzione ai MASTOCIT I del tessuto connettivo lasso.
GRANULI SPECIFICI
SS
NN
S S
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LINFOCITI2 CLASSI : LINFOCITI B 20-30%
LINFOCITI T 60-80%- PRODOTTI NEGLI ORGANI LINFOIDI PRIMARI ( MIDOLLO OSSEO , TIMO )
SVOLGONO UN RUOLO CENTRALE IN TUTTI I MECCANISMI DI DIFESAIMMUNITARIA CONTRO: -ANTIGENI SOLUBILI-ANTIGENI DI MEMBRANA DI CELLULE ESTRANEE (VIRUS, B ATTERI, FUNGHI, CELLULE INVECCHIATE O TUMORALI.
NEL CIRCOLO SANGUIGNO I LINFOCITI SONO IN UNA FORMA INATTIVA SIA METABOLICA CHE FUNZIONALE(PICCOLI LINFOCITI ).
NEL CORSO DI REAZIONI IMMUNITARIE (TESSUTI CONNETTIVI O ORGANI LINFOIDI SECONDARI) VENGONO ATTIVATI E SI TRASFORMANO IN MEDI E GRANDI LINFOCITI (3% DEI LINFOCITI CIRCOLANTI).
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MONOCITI
CARATTERISTICHE MORFOLOGICHE:
-16-20 mm DI DIAMETRO-NUCLEO RENIFORME-PICCOLI GRANULI CITOPLASMATICI (LISOSOMI I°): id rolasi acide, fosfatasi acide, SIMILI AI GRANULI AZZURROFILI DEI Gr. NEUTROFILI arilsolfatasi, perossidasi.
FUNZIONI:
-MOTILITA’: MIGRANO DAL SANGUE NEI SITI D’INFEZIONE-PRECURSORI DEI MACROFAGI-PRESENZA DI RECETTORI PER LE IgG E PER IL COMPLEME NTO-A DIFFERENZA DEI NEUTROFILI SONO DOTATI DI UNA CON TINUA ATTIVITA’ LISOSOMALE (sono in grado di “rigenerare” i Lisosomi)
Pseudopodi
Granuli
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20 µµµµm
10 µµµµmGlobulirossi
Globulo rossoCellula endoteliale
Lume di un sinusoide
Prolungamento di megacariocitada cui originano le piastrine
Megacariocita
Prolungamenti di megacariociti
piastrine
Cellule ematiche in via di sviluppo
MEGACARIOCITI
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PIASTRINE
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Emopoiesiè il processo che porta alla formazione di cellule delsangue mature.Le sedi dell’emopoiesi sono diverse nel feto, rispetto all’adulto.
Nel fetosono organi emopoietici:il sacco vitellino, il fegato, la milza, il timo, il midollo osseo.
Nell’adulto il principale organo emopoietico èil midollo osseo delle ossa piatte e delle estremità delle ossalunghe che produce tutti gli elementi figurati del sangue.Tutti derivano da una cellula capostipite denominata emocitoblasto, capace di differenziarsi poi nelle differenti linee.
Emocateresiè il processo che porta alla distruzione dellacellule del sangue. Principali organi che svolgono questo ruoloSono il fegato e la milza
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ERITROPOIESI
proeritroblasto EritroblastoBasofilo
EritroblastoPolicromatofilo
EritroblastoOrtocromatico
Reticolocita Eritrocito
GRANULOCITOPOIESI
NEUTROFILI
BASOFILI
EOSINOFILI
MielocitaEosinofilo
MetamielocitaEosinofilo
Cellula Eosinofila
Eosinofilo
Promielocita MielocitaBasofilo
Cellula Neutrofila
NeutrofiloMieloblasto MetamielocitaNeutrofilo
MielocitaBasofilo
Cellula Basofila
BasofiloMetamielocitaBasofilo
PRECURSORI COMUNI PERI 3 TIPI DI GRANULOCITI
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Normalmente gli elementiimmaturi di qualunque seriesono localizzati nel midolloosseo, quando giungono a maturazione sono liberati
nel sangue.
Se elementi immaturi vengonorinvenuti nel sangue periferico
vuol dire che il soggetto presentauna malattia del sangue che
prenderà il nome dall’elementocaratterizzante lo striscio.
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IN BASE ALL'AFFINITA' TINTORIALE DEI VARI ORGANULI CELLULARI SI DISTINGUONO DIVERSE CARATTERISTICHE DI COLORAZIONE:
-BASOFILIA (BLU SCURO) AFFINITA' PER IL BLU DI METILENE (basico) CHE COLORA IL NUCLEO E I GRANULI CITOPLASMATICI DEI GRA NULOCITI BASOFILI.
-AZZURROFILIA (VIOLETTO) AFFINITA' PER GLI AZUR CHE COLORANO ILISOSOMI.
-EOSINOFILIA (ROSA) AFFINITA' PER L’EOSINA ( acido) CHE COLORA L’EMOGLOBINA (DEI GLOBULI ROSSI) E I GRANULI DEI GR ANULOCITI EOSINOFILI
- LE COLORAZIONI PIU’ USATE SONO MISCELE DI COLORANTI (ACIDI E BASICI) : ROMANOVSKY, WRIGHT, GIEMSA
- BLU BRILLANTE DI CRESILE: COLORA I RETICOLOCITI.
ALLESTIMENTO STRISCIO DI SANGUE