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Tratamentos
§ IIU - Inseminação intra-uterina
§ FIV - Fertilização in vitro convencional
§ ICSI - Intracytoplasmic sperm injection
Qual tratamento escolher???
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Inseminação Intra-uterina
Indicações
§ Integridade tubária § Concentração de espermatozóides móveis pós-processamento > 5 milhões § Não ter como antecedente terapêutico falhas de 4 ou mais ciclos de IIU
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Inseminação intra-uterina
Volume inseminado: 0,5 mL de sêmen processado
Gradientes
Pellet sptz
Espermatozóides em meio de cultura
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Fertilização in vitro
Fertilização in vitro convencional
ICSI
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§ Punção folicular via transvaginal com auxílio da ultra-sonografia
§ Localizar, classificar e preparar os ovócitos recuperados sob a lupa simultaneamente a punção folicular
FIV – Coleta de Ovócitos
§ O líquido folicular é examinado no estereomicroscópio à 37°C e 5 % CO2;
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Indicações
Fertilização in vitro convencional
§ Fator tubário
§ Oligozoospermia moderada
§ ESCA
§ Fator ovulatório
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Fertilização in vitro Convencional
Inseminação dos ovócitos
§ Os ovócitos são colocados em microgotas de 30µl em
placa de Petri sob óleo mineral;
§ Cada microgota deve receber 100.000
espermatozoides móveis por ovócito;
§ Estufa 5% CO2 à 37°C;
§ Verificação da fertilização
em 16-18h.
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Injeção Intracitoplasmática de Espermatozoide
Indicações
§ Fator masculino grave § Falha de fertilização in vitro convencional § Falha de IIU
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Preparação do oócito para ICSI
§ Incubação de 2-8 h a 37º C e 5% CO2.
§ Denudação: mecânica e hyaluronidase
§ Classificação de acordo com a maturação nuclear: GV, MI, MII
Injeção Intracitoplasmática de Espermatozoide
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GV
MI MII
Classificação Ovocitária
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Injeção Intracitoplasmática de Espermatozoide
Micromanipulador
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§ Os ovócitos são transferidos para placa de
Petri com meio de cultura, colocados
na estufa 5% CO2 a 37°C;
§ Verificar a fertilização depois de 16-18h
da injeção intracitoplasmática.
Injeção Intracitoplasmática de Espermatozóide
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Verificação da Fertilização Etapa Pronuclear
1PN 2PN
3PN
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Classificação embrionária
Número de Blastômeros
Dia 2 – embriões de 2-4 células
Dia 3 – embriões de 6-9 células
Dia 4 – mórula (células compactadas)
Dia 5 - Blastocisto
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Avaliação dos embriões
Morfologia embrionária
§ Simetria e tamanho dos blastômeros § Presença de fragmentos citoplasmáticos
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Classificação Embrionária
Grau I Sem fragmentação;
blastômeros simétricos.
Grau II < 10% fragmentação;
blastômeros simétricos.
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Classificação Embrionária
Grau III Fragmentação variável;
blastômeros com tamanhos irregulares.
Grau IV > 10% fragmentação;
blastômeros assimétricos.
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Classificação Embrionária
Veeck, 1999
Grau V > 50% de fragmentação;
blastômeros de tamanhos diferentes.
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Blastocistos
Expandido Hatching Inicial
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Morfologia dos Blastocistos § Blastocele expandida § Massa celular interna bem definida § Células da trofectoderme regulares e lisas
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Assisted Hatching
§ Químico : Ácido Tyrode’s § Laser
§ Esta técnica foi introduzida em 1980 § Realiza-se um furo artificial na zona pelúcida antes da transferência intra-uterina § Aumenta a taxa de implantação
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Critérios de avaliação para indicação do AH
Assisted Hatching
§ idade da paciente § nº de tentativas feitas sem implantação § grau de fragmentação do embrião § espessura da zona pelúcida
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Transferência embrionária
§ Idade Materna
§ Número de falhas
§ Causa da infertilidade
§ Qualidade embrionária
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Criopreservação
Sêmen Indicações:
§ Pré-tratamento: quimio e radioterapia
§ Ausência do paciente
§ Sêmen de doador
§ Pré-vasectomia
§ Profissões de alto risco
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Criopreservação Oócitos Histórico 1986, Chen - Primeira gravidez de oócito descongelado
Indicações
§ Mulheres sem parceiro
§ Pré-tratamento quimioterápico
§ Banco de oócitos
Técnicas
§ Congelamento lento (Fabbri, 2001)
§ Vitrificação (Kuwayama, 2005)
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CRIOPRESERVAÇÃO
Embriões
Histórico
§ 1984, Trounson - Primeira gravidez de embrião descongelado
Indicações
§ Embriões excedentes
§ Síndrome do Hiperestímulo Ovariano
§ Pesquisa de células-tronco
§ Doação
Técnicas
Congelamento lento
Congelamento Ultra-rápido
Vitrificação
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Criopreservação
MECANISMO DE DESIDRATAÇÃO
H2O
CRIOPROTETOR
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Armazenamento
Palheta
Cryotop - 196o C
Criotubo
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Preimplantation genetic diagnosis (PGD)
Indicações: § Idade materna
§ Histórico de doença familial
§ Aborto de repetição
§ Falhas de implantação
Direcionamento § Doenças mendelianas
§ Doenças cromossômicas
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Preimplantation genetic diagnosis (PGD)
Análise genética aCGH
Embrião: 45,XY,-16