COMPARISON OF HUMAN AND SOIL

CANDIDA TROPICALIS ISOLATES WITH

REDUCED SUSCEPTIBILITY TO

FLUCONAZOLE Yun-Liang Yang, Chih-Chao Lin, Te-Pin Chang, Tsai-Ling Lauderdale, Hui-Ting Chen,Ching-Fu

Lee, Chih-Wen Hsieh, Pei-Chen Chen, Hsiu-Jung Lo

Sebastian Quijano MazoAna Milena Sanchez Henao

Medical Students 3 semester

Molecular Biology

INTRODUCTION

CANDIDA

Is a gener of unicelulars fungies yeast

Are into imperfect fungies ( deuteromycota) of the type blastomyceles and to the family criptococcacease

Have more or less 100 species and 10 causes frequently infections

Gram strain are gram-positive, aerobic

metabolism is primarily

It is part of the normal flora and

mucocutaneous

membranes

Asexual reproduction

4-6 um

CANDIDA TROPICALIS

To infect it should be in yeast form

Species are associated with vaginitis or bronchopulmonary candidiasis

Colonies white and smooth, globoid or ovoid

Produced true micelles

FLUCONAZOLE

AntifungalTreatment and prevention of superficial and systemic fungal infections

Inhibits of the fungal cytochrome P450 1 α demethylase enzyme

prevents the conversion of lanosterol to ergosterol

This inhibition

Is used to prevent or eliminate fungal growth

RELATION C. tropicalis is a fungal type blastoconidia that are in our organism for this reason they must suffer adaptability to suit the environment in which they live .

to survive had increased tolerance to stimuli that is generated, They investigated the possibility of presence in soil of such C. tropicalis strains by pulsed field gel electrophoresis (PFGE),

C. tropicalis exhibiting reduced susceptibility to fluconazole from the human hosts and environmental samples. Therefore, to prevent patients from acquiring C. tropicalis with reduced susceptibility to azoles, must be have a prudent use of them to increase the effectiveness of antifungal treatments

OBJETIVE Investigate the presence in soil of C.Tropicalis

strains exhibiting reduced susceptibility to fluconazole and perform a comparison with the human strains

MATERIALES Y METODOS Cepa Conjunto de especies bacterianas que comparten, al

menos, una característica

•NHUE10 NHUE11•NHUE28 NHUE27•NHUE33 NHUE36•NHUE40 NHUE42•NHUE48 NHUE52•NHUE56

Cepa suelo

•YM990275 YM990659•YM990490•YM990537•YM990579•YM990592•YM990649

Cepas humana

s

CEPA

1 gr de suelo

9 ml de agua esteril

0.2 ml de suspension se sembraron en YMA

Incubación por 3 dias a 24ºC

3 colonias fueron recogidas

Todas las cepas de levaduras fueron identificadas por la secuencias del dominio D1/D2 de los genes LSU rRNA

SUSCEPTIBILIDAD A LA DROGA

El crecimiento de cada cepa fue medida por la placa de Biotrak II lector espectrofotométrico después de incubación a 24 h para 35ºC y 48 h.

El MIC de anfotericina B se define como el mínimo concentraciones del fármaco capaz de inhibir la célula

crecimiento

Por la susceptibilidad a la anfotericina B, los aislamientos con MIC § 2 mg / l fueron considerados

resistentes y aquellos con MIC -1 Mg / l fueron susceptibles

La CIM para el fluconazol y voriconazol se define como la menor concentración capaz de la reducción de la turbidez de las células en más de un 50%

Los aislamietos con fluconazol MICs $ 64 mg / L se consideraron como haber reducido susceptibilidad y # 8 mg / L susceptible

Las cepas con CIM en el intervalo de 16-32 mg / L fueron consideradas sensibles a dosis dependiente (SDD).

Los aislamientos con CMI de 2 mg / L se conoce como SDD.

PFGE Es una técnica diseñada especialmente para la

separación de ADN de alto peso molecular (>100 kb). PFEG opera alternando dos diferentes campos eléctricos sobre una matriz de agarosa; de esta manera es posible alterar la migración del ADN hacia diferentes direcciones facilitando la separación de dos grandes moléculas de ADN.

7 humanas + 11 suelo = 18 total

Todos mostraron susceptibilidad reducida a fluconazol

Pulsos alternos en un ángulo de 120 grados en un 5-50 s pulso-tiempo de gradiente de 20 h

Una escalera de Salmonellase usó como marcador del peso molecular

El coeficiente de Dice se utilizó para analizar las similitudes de los patrones de bandas. La par no ponderado método grupo utilizando medias aritméticas(UPGMA) se utilizó para el análisis de conglomerados.

SECUENCY 18 cepas exhiben sensibilidad reducida a

fluconazol

El ADN fragmentos de seis genes: ICL1, MDR1, SAPT2, SAPT4, XYR1 y ZWF1a se secuenciaron para los análisis. Las secuencias resultantes se alinearon con BioNumerics 3,0 y se compararon con los de la base de datos de C. tropicalis para obtener los identificadores

CURVAS DE CRECIMIENTO

Bioscreen C se utiliza para volver a evaluar el crecimiento

de diferentes aislam

Aproximadamente 16104 células en 200 ml de medio RPMI 1640 (Gibco BRL31800-022) se cultivaron en ausencia o en la presencia de diferentes drogas, incluyendo el fluconazol, fluquinconazol,penconazol, tebuconazol, y tridimenol, en 35ºC

Las neoplasias de células se determinaron cada 15 minutos.

Debido a la solubilidad de fluquinconazol, la concentración más alta de este fármaco en el

presente estudio fue 16 mg / Len lugar de 64 mg / L

2 veces

CURVAS DE CRECIMIENTO

RESULTADOS Se analizaron 56 aislados de 26 muestras de

suelo de 477 muestras recogidas de los suelos entre 2006 y 2008 en Taiwán

Suelo contaminado de petróleo, campo de agricultura, suelo pantanoso y bosques

Para diferenciar las múltiples cepas de una muestra se tomaron 3 colonias individuales representativas para el estudio

RESULTADOS 10 solo tenia 1 aislado de C. tropicalis

8 tenían 2 aislados de C. tropicalis

5 tenían 3 aislados de C. tropicalis

2 tenían 4 aislados de C. tropicalis

1 tenia 7 aislados de C. tropicalis

RESULTADOS Todos fueron susceptibles a amfotericin B

Se uso fluconazol en 18 muestras

De estas 18, 17 recibieron voriconazol después de 48 h

Para determinar si los aislados con susceptibilidad reducida de muestras de suelo se relacionaban genéticamente con las humanas se uso PFGE

RESULTADOS 18 muestras: 11 del suelo y 7 humanas

11 de suelo: 6 susceptibilidad reducida y 5 susceptibles

7 humanas: todos susceptibilidad reducida

Humanas: YM990275, 490, 537, 579, 592, 649 and 659

RESULTADOS

DISCUSSION

Was said by They said Right or wrong

. Cheng MF, Yu KW, Tang RB, Fan YH, Yang YL, et al. 10. Pfaller MA, Jones RN, Doern GV, Sader HS, Messer SA, et al. Lord AT,.

Candida tropicalis is one of the most frequently isolated nonalbicansCandida species from patients

Barchiesi F, Calabrese D, Sanglard D, Falconi DF, Caselli F, et al. Calvet HM, Yeaman MR, Filler SG

Furthermore,C. tropicalis develops drug resistance in the presence of fluconazolemuch more rapidly than other Candida species

28. Cowen LE (2001) Predicting the emergence of resistance to antifungal drugs.FEMS Microbiol Lett 204: 1–7.29. Cowen LE, Sanglard D, Calabrese D, Sirjusingh C, Anderson JB, et al.

In fungi, drug resistanceis more likely to be the outcome of sequential accumulation ofadaptive mutations in the chromosomes

. Chen FJ, Lo HJ (2003) 34. McDonald LC, Chen FJ, Lo HJ, Yin HC, Lu PL, et al. (2001)35. Yang YL, Lauderdale TL, Lo HJ (2004) 36. Akins RA (2005) 37. White TC, Marr KA, Bowden RA (1998) 38. Yang YL,

The observation that azole-resistant Aspergillus fumigatus isolates recovered from soil and compost were genetically related to clinical resistant isolates suggests the existence of an environmental route for developing drug resistance in fungi. Similar to some antibiotic resistance in bacteria, fluconazole resistance in fungi also involves step-wise mutations affecting more than one

Muller FM, Staudigel A, Salvenmoser S, Tredup A, Miltenberger R, et al

Previous study has shown that in human immunodeficiency virus infected patients, C. albicans and other yeast species were cross-resistant to medical and agricultural azole drugs

CONCLUSIONS Isolates with reduced suceptibility grow

better under influence of azole drugs

The human isolates share an electroforetic pattern with soil isolates with reduced suceptibility

The suceptibles one didn’t have similar electroforetic patterns with soil or human isolates with reduced suceptibility

CONCLUSIONES All humans strains shown reduced

suceptibility to fluconazo

Don't do treatments with long exposures to azoles because it can cause a reduced suceptibility to the treatment and bad results to it

MAPA

Ana Sanchez

Comparison of Human and Soil Candida tropicalis

Isolates with Reduced Susceptibility to Fluconazole

Del sueloHumanos

Aislamientos

Con susceptibilidad reducida al fluconazol

Susceptibles al fluconazol

Con susceptibilidad reducida al fluconazol

Mismo patrón electroforético

97% de similitud Resistentes a fluconazol y azoles

Crecimiento luego de exposición a droga

Inhibición de crecimiento por

azoles

No comparten patrón

electroforético

Manejo prudente de azoles en clínica y agricultura

Sebastian Quijano

http://www.slideshare.net/anasanchezh/comparison-of-human-and-soil-candida-tropicalis-isolates2

GRACIAS