FeSBE 2012

Resumo: 08.001

COMPARISON BETWEEN ACUTE AND CHRONIC EXPOSURE TO SUBLETHAL DOSES OF MICROCYSTIN-LR

Autores

1CARVALHO, G. M. C.

1, OLIVEIRA, V. R.

1, CASQUILHO, N. V.

1, ARAUJO, A. C. P.

1,

SOARES, R. M. 1, AZEVEDO, S.

2, PIRES, K. M.

2, VALENCA, S. S.

1, ZIN, W.

1 CENTRO DE

CIENCIAS DA SAUDE, INSTITUTO DE BIOFISICA CARLOS CHAGAS FILHO - UFRJ, 2

CENTRO DE CIENCIAS DA SAUDE, INSTITUTO DE CIENCIAS BIOMEDICAS - UFRJ

Apoio Financeiro: FAPERJ, CNPq, MCT

Resumo Objetivos To compare pulmonary mechanics, lung and liver histology in mice acutely or chronically submitted to sublethal doses of microcystin-LR (MCLR). Métodos The experiments were approved by the Ethics Committee of the Health Sciences Center, Federal University of Rio de Janeiro (Protocol IBCCF 012). Male Swiss mice received intraperitoneally one dose of distillated water (ip, 100 µL, CA n=5) or sublethal doses of MCLR (5, 10, 15 and 20 μg/kg ip in 100 µL of distilled water, TOXA n=20, Acute group). Another batch of male Swiss mice received ten doses of distillated water ip (100 µL, CC n=7) or sublethal doses of MCLR (5, 10, 15 and 20 μg/kg ip in 100 µL of distilled water, TOXC n=28, Chronic group) every other day. 24 h after the last injection pulmonary mechanics [static elastance (Est), viscoelastic component of elastance (ΔE), resistive (ΔP1), viscoelastic (ΔP2), and total (ΔPtot) pressures] were determined, and lungs and livers were prepared for histopathology. T-test was used to evaluate differences between the acute or chronic exposure at each dose. Resultados All TOX mice (Acute and chronic groups) were statistically different from their respective control groups (CA and CC). The latter were similar in all instances. Est, ΔE, ΔP1, ΔP2 and ΔPtot did not differ between acute (TOXA5, TOXA10, TOXA15, TOXA20) and chronic (TOXC5, TOXC10, TOXC15, TOXC20) exposures. Functional residual capacity (FRC) was similar in acutely and chronically exposed groups. Alveolar collapse increased in all TOX chronically exposed (TOXC5=50.21%, TOXC10=57.91%, TOXC15=59.77% and TOXC20=62.31%) in relation to the same doses in the acute groups (TOXA5=17.74%, TOXA10=23.72%, TOXA15=22.18 and TOXA20=22.94%). The lung inflammatory cell content (cells/μm2) was higher in all chronic mice (TOXC5=7.54 x 10-3, TOXC10=10.7 x 10-3, TOXC15=11.4 x 10-3 and TOXC20=12.7 x 10-3) than in acute exposure (TOXA5=2.12 x 10-3, TOXA10=2.67 x 10-3, TOXA15=4.25 x 10-3 and TOXA20=4.98 x 10-3). The liver weight was significantly higher in TOXC5=2.07 g, TOXC10=2.13 g and TOXC15=2.20 g than in TOXA5=1.68 g, TOXA10=1.88 g and TOXA15=1.82 g, but TOXA20=1.85 g and TOXC20=2.13 g did not differ. All TOX mice showed a complete dysruption of liver architecture with hyalinization, steatosis, dilated sinusoidal spaces, inflammatory foci and a high degree of binucleated hepatocytes. Necrosis was present in TOXA15 and TOXA20, as well as in all doses in the chronic group. Hepatomegaly was observed only in the chronic animals. Conclusão Lung and liver histopathological analysis, but not lung mechanics, disclosed that chronically exposed mice were more seriously compromised by MCLR (sublethal doses) than the acute group.

FeSBE 2012

Resumo: 08.002

Rho Kinase Inhibition on Airway and Lung Tissue Inflammation, Extracellular Matrix Remodeling and Oxidative Stress Activation in Animals with Chronic Pulmonary Inflammation

Autores

1RIGHETTI, R. F.

1, PIGATI, P. A. S.

1, POSSA, S. S.

1, CHARAFEDDINE, H. T.

1, HABRUM, F. C.

2, ANTUNES, M. A.

2, XISTO, D. G.

1, REIS, R. A.

1, SARAIVA-ROMANHOLO, B. M.

2, ROCCO,

P. R. M. 3, PRADO, C. M.

1, LEICK, E.

1, MARTINS, M. A.

1, TIBÉRIO, I. D. F. L. C.

1 Department

of Medicine - FMUSP, 2 Laboratory of Pulmonary Investigation - UFRJ,

3 Department of Biological

Science - Unifesp

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq, LIM-20-HC-FMUSP

Resumo Objetivos In the present study, we evaluated if Rho kinase inhibition with Y-27632 modulates airway and distal lung inflammation, extracellular matrix remodeling and oxidative stress activation in guinea pigs (GP) with chronic pulmonary inflammation. Métodos This study were approved by the institutional review board of the University of São Paulo (number: 0250/09). GP were submitted to seven ovalbumin (OVA) or saline (SAL) inhalations (2x/wk/4wks). From 5th inhalation, the GP of Rho kinase groups were submitted to Y-27632 inhalation (1mM; 2min) 10 minutes before each inhalation with OVA or SAL. Afterwards, lungs were removed, samples of airway and distal lung were stained for eosinophils, IL-2, IL-4, IL-5, IL-13, iNOS, MMP-9, TIMP-1, TGF-beta, NFKappa B and IFN-gamma positive cells, beyond the content of collagen, elastic and 8-iso-PGF2alpha fibers, were counted using morphometry. Resultados There was an increase in eosinophils, IL-2, IL-4, IL-5, IL-13, iNOS, MMP-9, TIMP-1, TGF-beta, NFKappa B and IFN-gamma positive cells, as well as collagen, elastic and 8-iso-PGF2alpha fibers content, in OVA compared to control groups ( p < 0.05). The treatment with the Rho kinase inhibitor reduced all studied biomarkers in the airways and distal lung tissue of the OVA-exposed GP compared to the non-treated OVA-exposed GP ( p < 0.05). Conclusão The Rho kinase inhibition contributes to the control of airway and distal lung parenchyma inflammation, extracellular matrix remodeling and oxidative stress activation in an animal model of chronic allergic inflammation.

FeSBE 2012

Resumo: 08.003

O TRATAMENTO COM INIBIDOR ESPECÍFICO PARA SERINOPROTEASE ATENUOU O DESEQUILÍBRIO PROTEASE-ANTIPROTEASE EM UM MODELO EXPERIMENTAL DE ENFISEMA.

Autores

1LOURENÇO, J. D.

1, OLIVO, C. R.

1, NEVES, L. D. P.

2, PRADO, C. M.

1, TIBÉRIO, I. C.

3,

TANAKA, A. S. 1, LOPES, F. D. T.

4, SASAKI, S. D.

1, MARTINS, M. D. A.

1, ALMEIDA, F. M. D.

1, LOPES, F. D. T.

1 Clínica Médica - USP,

2 Departamento de Ciências Biológicas - UNIFESP,

3

Departamento de Bioquímica - UNIFESP, 4 Centro de Ciências Naturais e Humanas - UFABC

Apoio Financeiro: FAPESP, Laboratório de Investigação Médica HCFMUSP

Resumo Objetivos Estudar os possíveis efeitos do tratamento com um inibidor específico para serinoprotease, sobre os mecanismos fisiopatológicos que contribuem para o desenvolvimento do enfisema pulmonar. Métodos Quarenta camundongos adultos machos C57BL/6 (Peso: 25-30 g) foram submetidos à instilação intranasal de 50µl (0,667 UI) de elastase pancreática de porco (PPE) ou solução salina (SF) para indução de enfisema pulmonar e 1 hora depois, os animais receberam uma segunda instilação nasal de 50 µl do inibidor de serinoprotease (r-BmTIA, 35,54 pmol) ou veículo (VE). Após 21 dias, os camundongos foram sacrificados com tiopental (50mg/kgi.p.). Os pulmões foram retirados e fixados com formol 10% sob pressão constante de 20 cmH2O por 24h para posteriormente serem confeccionadas lâminas para estudos histológicos. Usando morfometria e imuno-histoquímica, foi avaliado o diâmetro alveolar médio (Lm), número de macrófagos (MAC-2) e de células que expressam metaloprotease 12 (MMP-12) no parênquima pulmonar. CEUA nº 393/10. Resultados Observamos aumento de Lm (µm) nos dois grupos de animais que receberam instilação de PPE (PPE-VE= 72,336±5,094 e PPE-BMTIA= 60,894±6,921) comparados aos grupos que receberam SF (SF-VE=51,799±6,273 e SF-BMTIA=48,744±4,435), p=0.037. No entanto, o tratamento com BMTIA promoveu uma diminuição de Lm no grupo PPE-BMTIA comparado ao grupo PPE-VE (p= < 0 ,001). A análise de células positivas para MMP-12 (células positivas/µm2) revelou um aumento (p=0,024) destas células somente no grupo PPE-VE (2.579±0.235) comparado ao restante dos grupos experimentais (SF-VE=1.474±0.254; SF-BMTIA=1.609±0.180 e PPE-BMTIA=1.711±0.166), sugerindo uma redução da expressão de MMP-12 nos animais que receberam tratamento com inibidor após instilação de PPE. Observamos aumento no número de macrófagos no tecido nos grupos que receberam instilação de PPE (PPE-VE=2.607±0.307; PPE-BMTIA= 2.202±0.217) comparados aos grupos que receberam SF (SF-VE= 1.593±0.406; SF-BMTIA=1.854±0.287), p= 0,037. Conclusão A redução de Lm nos animais PPE que receberam tratamento, sugerem uma menor destruição tecidual, devido a uma diminuição na expressão de MMP-12 e consequentemente no desequilíbrio protease-antiprotease, um dos mecanismos envolvidos na patogênese do enfisema pulmonar.

FeSBE 2012

Resumo: 08.004

Endogenous Acetylcholine Deficiency Contributes To Lung Proinflammatory Cytokines Production In An Asthma Model

Autores

1,2MIRANDA, C. J. C. D. P.

1,2, MONTORO, N. P.

1,2, MONTANHEIRO, A. B. S.

1, PERINI, A.

1,

CÂMARA, N. O. S. 4,4

, COSTA, S. K. P. 1, TIBÉRIO, I. D. F. L. C.

5, PRADO, M. A. M.

1,

MARTINS, M. D. A. 5, PRADO, V. F.

2,1, PRADO, C. M.

1 Ciências Médicas - FMUSP,

2 Ciências

Biológicas - Unifesp, 3 Imunologia - USP,

4 Farmacologia - USP,

5 Fisiologia, Farmacologia, Anatomia

e Biologia Celular - UWO

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq, LIM20-HC-FMUSP

Resumo Objetivos Rationale: Asthma is a chronic airway inflammatory disease in which inflammatory cells, throughout the secretion of pro-inflammatory cytokines and molecules, play a major role. The cholinergic anti-inflammatory pathway controls inflammation by activation of α7 nicotinic receptor and reduction in translocation of NF-kB into the cell nucleus. The main mediator of cholinergic anti-inflammatory pathway is acetylcholine that is stored in synaptic vesicles by the vesicular acetylcholine transporter (VAChT), which is required for release. We previously showed that cholinergic deficiency induced airway inflammation and collagen deposition in a mice model of chronic allergic inflammation. However, whether the endogenous acetylcholine regulates lung cytokine production and metalloproteinase (MMP) and its tissue inhibitor (TIMP) is unknown. Objective: to evaluate if reduction in endogenous acetylcholine release influences the production of interleukinins, NF-kB and the expression of MMP-9 and TIMP-1 in an experimental asthma model. Métodos All experiments described were approved by the University of São Paulo Institutional Review Board (São Paulo, Brazil) number 0766/08. Cholinergic reduction was obtained by a genetic modification that decreases the levels of VAChT. Male wild-type (WT, n=16) and mutant mice (VAChT KD HOMO ,n=16), (6-8 weeks, 20-25μg) were subcutaneously sensitized and then inhaled with ovalbumin (OVA) or saline (SAL). On day 29 lung content of TNF-α, IL-4 and IL-10 was evaluated by ELISA. In addition, by immunohistochemistry we evaluated positive cells to IL-4, IL-10, IL-13, NF-kB, MMP-9 and TIMP-1. Statistical analysis was performed using Sigma Stat software and parametric data were analyzed by two-way ANOVA followed by the student Newman–Keuls post hoc test. Resultados WT sensitized (WT-OVA) animals presented an increase in lung homogenate IL-4 (3,01±1,14pg/µg of protein) and in positive cells to IL-4 (1,97±0,457/10 4 μm 2 ), IL-10 (6.45±0.84/10 4 μm 2 ), IL-13 (2,07±0,35/10 4 μm 2 ), NF-kB (3.81±0.50), MMP-9 (9.06±1.95/10 4 μm 2 ) and TIMP-1 (6.94±1.12/10 4 μm 2 ) compared to saline groups ( P < 0.05; for all comparisons). The sensitized mutant mice (VAChT KD- HOMO OVA) showed an augment in IL-4 in lung homogenate (6.58±1.0614pg/µg of protein) and in IL-4 (4.38±0.39/10 4 μm 2 ), IL-13 (4,11±0,747/10 4 μm 2 ), NF-kB (6.05±0.46), MMP-9 (13.40±1.08/10 4 μm 2 ) and TIMP-1 (12.73±2.90/10 4 μm 2 ) positive cells in airway wall compared to sensitized WT animals ( P < 0.05 for all comparisons). Conclusão These data suggest that endogenous acetylcholine secretion regulates the cholinergic anti-inflammatory pathway and this is involved in physiopathology of lung disease by interfering with pro-inflammatory cytokines and with MMP-9 and TIMP-1 expression, without interfere with IL-10, an anti-inflammatory cytokine. Regulation of the cholinergic anti-inflammatory pathway in asthma may provide a novel target to treat this disease.

FeSBE 2012

Resumo: 08.005

REDUCTION OF ENDOGENOUS ACETYLCHOLINE CONTRIBUTES TO PULMONARY INFLAMMATION IN A MODEL OF EMPYSEMA IN MICE

Autores

1BANZATO, R.

1, PINHEIRO, N.

1, OLIVO, C.

1, SANTANA, F.

3, TIBÉRIO, I.

3, PRADO, V.

3,

PRADO, M. A. 1, MARTINS, M.

1, LOPES, F.

2,1, PRADO, C.

1 Clínica Médica - FMUSP,

2

Department of Biological Science - UNIFESP, 3 Robarts Research Institute - UWO

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq, LIM 20-HC-FMUSP

Resumo Objetivos To investigate the role of the cholinergic system on emphysema in mice with reduced levels of ACh release. Métodos All experiments described were approved by the University of São Paulo Institutional Review Board (São Paulo, Brazil) number 0766/08. Thirty-two male mice (6-8 week/25g) with decreased expression of VAChT (VAChT KDHOM 70%) and littermate wild-type mice (WT) received intranasal elastase or saline on day 0. On day 28, pulmonary mechanics, bronchoalveolar lavage fluid (BALF), mean linear intercept (Lm), elastic and collagen fibers in alveolar septa were evaluated. Resultados WT-treated elastase animals presented a reduction in tissue elastance (Htis) (41.35±3.39) and an increase in Lm (79.39±2.66AU), total cells (2.34±0.16x104/mL), and macrophages (2.21±0.16x104/mL) in BALF, and collagen (9.98±0.79%) and elastic fibers (6.35±0.76%) in lung parenchyma compared to saline groups [(Htis: 50.19±3.92), (Lm: 45.66±3.01AU), (total cell: 0.78±0.20x104/mL), (macrophage: 0.78±0.21 x104/mL), (collagen: 6.68±0.72%), (elastic: 4.86±0.84%), ( p < 0.05)]. The elastase treated VAChT KDHOM animals presented high values of total cells (3.41±0.22x104/mL), macrophages (3.06±0.23x104/mL), lymphocytes (0.10±0.02x104/mL), and neutrophils (0.16±0.03 x104/mL) in BALF compared to WT-elastase treated group ( P < 0.05). There were no differences between WT elastase treated and VAChT KDHOM elastase treated groups in Htis, Lm, collagen and elastic fibers content. Conclusão Reduction of endogenous ACh worsens pulmonary inflammation in mice with emphysema without changing pulmonary function and remodeling, suggesting that inflammation per se is not the major determinant of pulmonary function in this model. Our results suggest however, a major role of the cholinergic anti-inflammatory system in the control of inflammatory response induced by elastase.

FeSBE 2012

Resumo: 08.006

Analysis of systemic and pulmonary inflammatory response induced by ultrasonic nebulizer using distilled water and saline solution in adult rats

Autores 1LEAL, S. F.

1, DINIZ, M. F.

1, MURTA, G. L.

1, LIMA, L. F.

1, LIMA, W. G. D.

1, BEZERRA, F. S.

1

Departamento de Ciências Biológicas - UFOP

Apoio Financeiro: PIBIC-CNPq, UFOP

Resumo Objetivos Acute or chronic respiratory failure requiring mechanic ventilation to maintain physiological respiratory function. This patient also needs a periodic suction to remove secretions from the lower airways. The airway clearance using substances containing distilled water or saline which could induce changes in ionic and osmotic secretion by activating inflammatory cells that produce reactive oxygen species often associated with tissue damage. The aim of this study was to analyze the effects of ultrasonic nebulization with distilled water or saline solution on the pulmonary inflammatory response in rats. Métodos This project was approved by Animal Ethics Committee of Federal University of Ouro Preto-MG (#2011/07). Twenty one male Fisher rats with tree months old at first exposure, weighing 300-400g, were divided into three groups of seven animals: Control group that was exposed to ambient air (CG), Saline group (SG) exposed 9% NaCl and group exposed to Distilled Water (DWG). The exposure occurred with an ultrasonic inhaler chamber coupled to duration of 20 minutes, three times daily for six months. Twenty four hours after the last exposition all animals were euthanized. Bronchoalveolar lavage (BAL), peripheral blood and lung fragments were collected in order to realize biochemistry, morphological and morphometrical analysis. The dates were analyzed by Kolmogorov-Smirnov normality test and One-Way ANOVA followed by Student-Newman-Keuls multiple comparison test. All dates were expressed by mean ± standard error and the significance level was 5%. Resultados BAL showed increase of white cells in DWG (338.31±18.15 x10³/mL) compared with CG (213.31±13.82 x10³/mL; p=0.0351). DWG also showed higher total number of polymorphonuclear cells (149.90±3.84 x10³/mL) compared with SG (53.26±7.35 x10³/mL) and CG (61.72±3.83 x10³/mL; p < 0.0001). DWG and SG showed increase of NADPH oxidase activity (385.70±115,00 and 405.10±81,01 URL/min, respectively) compared with CG (113.80±31.26 URL/min; p=0.0411). Alveoli of volume density (Vv) was higher in DWG (37.64±1.4%/mm²) than SG (32.38±1.06%/mm²) and GC (30.36±1.04%/mm²; p < 0.0001). Moreover DWG (42.85±1.18%/mm²) showed Vv of collagen fibers increased compared with SG (20.60±0.81%/mm²) and CG (17.74±0.49%/mm²; p < 0.05). The thiobarbituric acid reactive substance assay in pulmonary tissue showed increase in DWG (0.52±0.05 nmol/mg) compared with SG (0.24±0.03 nmol/mg) and CG (0.21±0.02 nmol/mg; p=0.0028). Conclusão The ultrasonic nebulization with distilled water increased the influx of inflammatory cells, oxidative damage and promoted histological changes in the lung parenchyma. We are performing other analyzes to best evaluate the redox imbalance, and the inflammatory levels of cytokines to elucidate the pulmonary effects of chronic exposure of this substance.

FeSBE 2012

Resumo: 08.007

MORPHOLOGICAL AND MORPHOMETRICAL EVALUATIONS IN LUNG OF NEWBORN MICE EXPOSED TO CIGARETTE SMOKE IN UTERINE LIFE

Autores 1DOURADO, V. A.

1, DINIZ, M. F.

2, SILVA, M. E.

1, BEZERRA, F. S.

1, LIMA, W. G.

1, LIMA, W.

G. D. 1 Departamento de Ciências Biológicas - UFOP,

2 Escola de Nutrição - UFOP

Apoio Financeiro: PROBIC/UFOP

Resumo Objetivos The percentage of female smokers has increased in Brazil. Some women continue to smoke during pregnancy and this act has considerable consequences to fetus during a neo and postnatal life. We aim to evaluate morphological and morphometrical changes in lungs of C57BL6 mice exposed to cigarette smoke during uterine life. Métodos This project was approved by Animal Ethics Committee of Federal University of Ouro Preto-MG (#2010/47). Fifteen C57BL6 mice 3 months old, weighing approximately 20g, were placed in two females per male in 5-day for mating. The female pregnancy was confirmed by vaginal plug and vaginal smear. Pregnant females were divided in two groups. The first group (CS) of five female was exposed three times a day to four cigarettes during 21 days. The exposition was performed in inhalation chamber for six minutes by cigarette, tree times by day. The second, control group (CG), was composed of five female exposed to ambient air. Six newborn mice of CS and CG were weighed after 24 hours life and euthanized. Were performed biometrical analysis and lung was collected. Tissues fragments were processed by histological routine and Hematoxylin and Eosin staining was performed. Morphometrical analysis were performed in Leica Application Suite associate a Leica qWin plus software. Were determined the total of inflammatory cells, thickness of the alveolar septa and area of alveolar lumen. The dates were statistically analyzed by T-student test in Prims software and the statistical significance level was 5%. Resultados We not found differences in total mass of lung between CS and CG. CS animals (2.044±0.17cm) showed decrease rostro-anal length than CG (2.260±0.12cm; p < 0.05). Morphological alterations were observed in CS animals. Increase of alveolar septa (100%) and alveolar lumen (100%), hemorrhagic areas (100%), lung atelectasis (83%), pneumonitis (83%) and hyperemia (17%) were most important observed damage. The histological damage was present in different intensity ranging between mild to moderate. The thickness of alveolar septa was increased in CS (12.16±2.57µm) compared with CG (8.80±1.20µm; P < 0.05). Moreover the area of alveolar lumen was higher in CS (2.5±0.30 µm2) than CG (2.0±0.23 µm2; p < 0.05). Was observed increase of total inflammatory cells in CS (0.49±0.05 cells/ microscopic field) compared with CG (0.37±0.08 cells/ microscopic field; p < 0.05). Conclusão Our results appoint the potential of cigarette smoke in promotes changes in histological architecture of lung during the neonatal development.

FeSBE 2012

Resumo: 08.008

ANALYSIS OF OXIDATIVE EFFECTS IN THE INFLAMMATORY RESPONSE OF DIAPHRAGM MUSCLE IN RATS EXPOSED TO DIFFERENT FORMALDEHYDE CONCENTRATIONS.

Autores

1,2LIMA, L. F.

1, MURTA, G. L.

1,2, DINIZ, M. F.

1,2, LEAL, S. F.

3, SILVA, M. E.

1, LIMA, W. G.

1,

BEZERRA, F. S. 1 Departamento de Ciências Biológicas (DECBI) - UFOP,

2 Departamento de

Ciências Médicas (DECME) - UFOP, 3 Escola de Nutrição (ENUT) - UFOP

Apoio Financeiro: PIP / UFOP - MG.

Resumo Objetivos Aim: The current study aimed to evaluate inflammatory process and oxidative damage of the diaphragm muscle (MD) in animals exposed to different formaldehyde solutions. Métodos Methods: This study was approved for the Commission of Ethics in the Use of Animals of the Federal University of Ouro Preto (CEUA 2011/01), MaleFischer rats (n = 28), adults, 300 – 400 grams were divided in four groups: control (GC), exposed to ambient air and groups with the following formaldehyde solutions: 1% (FA1), 5% (FA5) and 10% (FA10). A ultrasonic nebulizer (Ultra-Relief Inhaler Multipower - Unique Group) coupled to a chamber was used to produce formaldehyde 1%, 5% and 10% air suspension during twenty minutes, three times per day during five days. After 24 hours to last exposition animals were sacrificed and MD collected to analyze oxidative damage by dosage of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) and protein carbonyls (PC), as well as semi-quantitative histological analysis of cell influx. The normality of all data has been tested using the test Kolmogorv-Smirnov test. Data were expressed as mean ± SEM and analyzed by Prism 5.0 software. For statistical analysis were used table of variance ANOVA and post Tukey test. Resultados Results: The TBARS analysis on MD showed increased in FA1 (0.53 ± 0.08 nmol / mg protein) and FA5 (0.59 ± 0.10 nmol / mg protein) compared to GC (0.23 ± 0 02 mol / mg protein) and FA10 (0.15 ± 0.01 nmol / mg protein) (p = 0.00058). Semi-quantitative histological analysis showed minor inflammatory focus in animals exposed to formaldehyde. Conclusão Conclusion: Preliminary results indicate the potential inflammatory and oxidative formaldehyde in MD, however other analyzes such as activity of antioxidant enzymes are being conducted to understand the inflammatory mechanisms associated with exposure to formaldehyde.

FeSBE 2012

Resumo: 08.009

A IMPORTÂNCIA DA POLISSONOGRAFIA PARA A IDENTIFICAÇÃO DE ALTERAÇÕES DO PADRÃO DE SONO NOS PACIENTES COM DISTROFIA MUSCULAR DE DUCHENNE

Autores 1NOZOE, K. T.

1, TOLINO, J. R. C.

1, MOREIRA, G. A.

1, TUFIK, S.

1, ANDERSEN, M. L.

1,

ANDERSEN, M. L. 1 Psicobiologia - UNIFESP

Apoio Financeiro: FAPESP ⟨CEPID #98⁄14303-3⟩, CNPq e AFIP.

Resumo Objetivos Avaliar a arquitetura do sono em adolescentes do sexo masculino diagnosticados com DMD e ainda sem o uso de suporte ventilatório. Métodos Foi analisado o banco de dados de polissonografia do Instituto do Sono (São Paulo) referente ao período de 2004-2009, no qual foram selecionados 62 pacientes com DMD com idade média de 13,13 ± 2,87 (encaminhados pelo Centro de Tratamento de Doença Neuromuscular) e 62 controles com idade média de 11,24 ± 3,52 (encaminhados por queixas de parassonia e randomicamente selecionados, porém sem doença neuromuscular). Resultados Após análise estatística controlando as variáveis para idade, sexo e Índice de Massa Corpórea, os resultados mostraram que pacientes com DMD possuem comprometimento tanto da qualidade, quanto da quantidade de sono. Houve redução da eficiência de sono (71,3±1,9 % vs 78,9±1,4 %) e do número de mudanças de estágio (56,4±2,1 vs 69,1±2,4), bem como aumento do Índice de apneia e hipopneia-IAH (3,3±0,6/h vs 0) nos pacientes com DMD comparados ao controle. Entretanto, as maiores alterações foram observadas durante o sono REM, sendo elas o aumento na latência do sono REM (184,3±10,7 min vs 153,6±7,5 min), a redução do sono REM (13,7±0,9 % vs 18,4±0,9%), a exacerbação do IAH (12,3±2,3/h vs 0), o aumento do índice de dessaturação da oxi-hemoglobina (14,0±2,6/h vs 0,2±0,1/h) e a redução da saturação média da oxi-hemoglobina (94,9±0,4/h vs 96,7±0,1/h) durante o sono REM. Com relação à parte respiratória, observou-se importante aumento no número total de apneias, em especial as obstrutivas, e de hipopneias, principalmente quando associadas à bradicardia e à dessaturação. Além disso, verificou-se aumento na frequência respiratória média durante o sono REM e NREM e aumento da frequência cardíaca apenas no sono REM. Conclusão Estes achados sugerem que as grandes alterações encontradas durante o sono REM refletem a condição dos efeitos provocados pela fraqueza muscular, inerente a DMD e evidenciada durante essa fase do sono em que ocorre a atonia muscular. Essas alterações relacionadas ao sono podem aumentar o risco de morte nesses pacientes. Assim, o diagnóstico polissonográfico é essencial como uma ferramenta para identificar precocemente o momento de introduzir o suporte ventilatório, proporcionando assim uma melhor qualidade e expectativa de vida.

FeSBE 2012

Resumo: 08.010

Treatment with proteinase inhibitor, BbCI, modulates inflammatory response, mechanic alterations, and remodeling on elastase-induced emphysema in mice

Autores

1ALMEIDA-REIS, R.

1, OLIVEIRA, B. T. M.

1, THEODORO-JUNIOR, O. A.

1, OLIVA, L. V.

3,

PINHEIRO, N. 2, BRITO, M. V.

1, LOPES, F. D. Q. T.

3, PRADO, C. M.

1, MARTINS, M. A.

2,

OLIVA, M. L. V. 1, TIBÉRIO, I. D. F. L.

1 Clínica Médica - FMUSP,

2 Bioquímica - UNIFESP-EPM,

3 Ciências Biológicas - UNIFESP

Apoio Financeiro: FAPESP, CnPQ, LIM20 HCFMUSP

Resumo Objetivos Bauhinia bauhinioides Cruzipain Inhibitor (BbCI) is a proteinase inhibitor that neutralizes neutrophil elastase and cathepsin G. The present study evaluated the capacity of BbCI in the treatment of elastase-induced emphysema. Métodos Mice received elastase intratracheally (ELA group) or saline (SAL group). Afterwards, mice were treated with BbCI (2 mg/kg) at days 1, 15 and 21 after elastase (ELABI group) or saline instillation (SALBI group). At day 28, mice were ventilated and respiratory resistance (Rrs), elastance (Ers), tissue elastance (Htis), tissue damping (Gtis), airway resistance (Raw), and exhaled nitric oxide (ENO) were analyzed, and BALF was obtained. We also quantified, mean linear intercept (Lm), elastic and collagen fibers. CEUA 244/2009. Resultados In ELA group, there was a significant increase in the Ers, Rrs, Raw, Htis, Lm, ENO, total cells, macrophages, neutrophils and lymphocytes in BALF, elastic and collagen fibres compared to controls ( p < 0.05). In ELABI group, we observed a decrease in Ers (37.08± 1.6 cmH2O.mL.-1), Rrs (0.76± 0.1 cmH2O/mL.-1.s), Raw (0.27 ± 0.1 cmH2O/mL/s), Htis (39.47 ± 1.7 cmH2O/mL/s(1-α)), Lm (58.2 ± 2.7 µm), elastic content (0.34 ± 0.02 %), total cells (1.17 ± 0.1 104 cells/mL) and neutrophils (0.00 ± 0.0 104 cells/mL) in BALF compared to ELA group ( p < 0.05). Conclusão The treatment with BbCI reduced inflammatory, mechanics and extracellular matrix remodeling alterations induced by elastase. Although more studies need to be performed to elucidate the mechanisms involved in this process, but we may considerate BbCI as a therapeutic tool for COPD management.

FeSBE 2012

Resumo: 08.011

Antioxidants effects of N-acetylcysteine in pulmonary inflammatory response of mice exposed to hyperoxia.

Autores

1FLAUSINO, G. D. F.

2, TRAJANO, E. T. L.

2, NETO, L. A. S.

3, OLIVEIRA, V. R.

1, BANDEIRA,

A. C. B. 1, LIMA, W. G.

3, ZIN, W. A.

2, VALENÇA, S. S.

4, PORTO, L. C.

1, BEZERRA, F. S.

1

DECBI - UFOP, 2 Instituto de Ciências Biomédicas - UFRJ,

3 Instituto de Biofísica Carlos Chagas

Filho - UFRJ, 4 Departamento de Histologia e Embriologia - UERJ

Apoio Financeiro: FAPERJ, CNPQ, FAPEMIG e UFOP

Resumo Objetivos Supplementary medicinal oxygen (O2) in higher concentrations has been routinely used in treatment of pulmonary and cardiovascular diseases attempting to reverse tissue hypoxia. Hyperoxia can be defined as excess supply of O2 to tissues and organs causing increase of reactive oxygen species (ROS). N-acetylcysteine (NAC) is a mucolytic drug used to prevents pulmonary injury in chronic airway diseases. We aim to evaluate effects antioxidants of NAC in inflammatory response of mice BALB/c exposed to hyperoxia. Métodos This project was approved by Animal Ethics Committee of Federal University of Ouro Preto-MG (#2010/17). Animas were previously treated with NAC with 200mg/kg daily for seven days and after exposed to O2 100%. 60 male BALB/c weighing 20-25g were divided in 6 groups: Control (CTR) exposed to ambient air, Group supplied with NAC (CTR+NAC), Group supplied with NAC exposed to hyperoxia for 12 hours (NH+12), 24 hours (NH+24), 48 hours (NH+48) and 96 hours (NH+96). After exposition time all animals were euthanized. Lung fragments were collected to biochemistry, morphometric and morphological analysis. Were realized assays to determinate lipid hydroperoxides (FOX), Catalse (CAT), Peroxidase glutathione (GPX), relation of total and disulfide glutathione (GSH/GSSG). Also were performed stereological analysis of volume density (Vv) of pulmonary alveoli and septum. Resultados FOX dosage showed decrease of lipid hydroperoxides (nmol lipid hydroperoxides/ mg ptn) in NH+24 (0.65±0.08) compared with NH+12 (1.34±0.20; p < 0.05). Also was observed decrease of CAT (U/mg ptn) in NH+24 (20.15±1.95) compared with CTR (48.20±7.95) and NH+48 (47.36±4.35; p < 0.01). NAC administration promotes an increase of GPX (mM/mg ptn) in CTR+NAC (0.4±0.03), NH+12 (0.4±0.05) and NH+24 (0.4±0.04) compared with CTR (0.02±0.001; p < 0.001). Also GPX was decreased in NH+48hs (0.02±0.01) compared with NH+12hs, NH+24hs and CTR+NAC ( p < 0.001). Also was observed increase in relation GSH/GSSG in NH+24 (1.21±0.06) compared with NH+12 (0.86±0.08; p < 0.05). Hyperoxia promotes increase of Vv (%/mm 2 ) of pulmonary septum in NH+12 (53.57±1.07), NH+24 (47.97±1.21), NH+48 (59.23±0.89) and NH+96 (76.69±0.84) compared with CTR (43.14±0.89; p < 0.05). The Vv pulmonary septum was increased in NH+24, NH+48 e NH+96 compared with NH+12 ( P < 0.05) and in NH+48 e NH+96 compared with NH+24 ( P < 0.05). The Vv (%/mm2) of pulmonary alveoli decrease in NH+12 (46.88±1.10), NH+24 (52.08±1.21), NH+48 (40.77±0.89) and NH+96 (23.18±0.88) compared with CTR (56.86±0.89; p < 0.05). The same result was observed in NH+48 and NH+96 compared with NH+12 and (55.32±1.29; p < 0.05). Moreover we observed the Vv of pulmonary alveoli decreased in NH+48 e NH+96 compared with NH+24 ( p < 0.05) and NH+96 compared with NH+48 ( p < 0.05). Conclusão Our results demonstrate that hyperoxia promotes redox imbalance in lung of BALB/c mice and the preventive treatment with NAC was able to change the antioxidants activity and avoiding histoarchitectural damage.

FeSBE 2012

Resumo: 08.012

Oxidative stress on pulmonary inflammatory response in rats exposed to formaldehyde in different concentrations

Autores

1MURTA, G. L.

1, LIMA, L. F.

1, DINIZ, M. F.

1, LEAL, S. F.

2, SILVA, M. E.

1, COSTA, D. C.

1,

PEDROSA, M. L. 1, LIMA, W. G. D.

1, BEZERRA, F. S.

1 Departamento de Ciências Biológicas -

UFOP, 2 Escola de Nutrição - UFOP

Apoio Financeiro: UFOP

Resumo Objetivos This work aims to evaluate the pulmonary inflammatory process in rats exposed to air suspension of formaldehyde in order to understand potential injury of this chemical compound in respiratory system organs. Métodos Seven Fischer female rats were accommodated in a closed glass chamber. A ultrasonic nebulizer (Ultra-Relief Inhaler Multipower – Unique Group) coupled a chamber was used to produce formaldehyde 1%, 5 % and 10% air suspension during twenty minutes, three times per day. The formaldehyde exposition occurred for a five day period. Similarly, time and procedure occurred with seven Fischer female rats to exposition to ambient air (control group: CG). After exposition time, CG and exposed groups rats were euthanized. The bronchoalveolar lavage (BAL) fluid of all animals was collected to perform inflammatory cell quantifications. Also, fragments of pulmonary tissue were collected to quantify thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) and protein carbonyl. Blood was collected to evaluate the NADPH oxidase activity. Kolmogorov-smirnov was performed to evaluate the normality of dates. Data are expressed as mean ± SEM. One-way ANOVA was used in the inferential statistical analysis and Tukey post test was used in compare all pairs of columns. CEUA 2011/01. Resultados The BAL fluid showed that exposition to formaldehyde for 5 days was able to improve inflammatory cells in the lungs of rats exposed to formaldehyde 10% (240±24.3x10 3 to CG, 244.3±39.6x10 3 to FA1, 334.3±45.3x10 3 to FA5 and 607.1±85.9x10 3 cells/mL to FA10; p= 0.0285). Also was observed changes in functional profile in FA5 and FA10 with a increase in proportion of macrophages in FA10 (11.7±5.2x10 3 to CG, 32.8±7.6x10 3 to FA1, 37.5±12.6x10 3 to FA5 and 37.9±6.1x10 3 cells/mL to FA10; p=0.0409) and lymphocytes in FA5 (219.3±29.7x10 3 cells/mL) and FA10 (371±54.4x10 3 cells/mL) in relation the other groups (25.5±5.1x10 3 to GC and 124.2±17.1x10 3 cells/mL FA1; p=0.0001). The NADPH oxidase activity were higher in FA5 (3.5±0.45x10 2 RLU/min) and FA10 (4.8±0.23x10 2 RLU/min) than in FA1 (1.5±0.32x10 2 RLU/min) and CG (2.2±0.2x10 2 RLU/min; p˂0.05). The values of TBARS to FA10 was increased in relation the other groups (0.30±0.05 to GC, 0.18±0.01 to FA1, 0.18±0.008 to FA5 and 0.54±0.04 nmol/mg ptn to FA10; p=0.0005). The levels of protein carbonyl also were increased in FA10 in relation the other groups (0.90±0.09x10 2 to GC, 1.0±0.07x10 2 to FA1, 0.85±0.08x10 2 to FA5 and 1.33±0.09x10 2 nmol/mg ptn to FA10; p˂0.05). Moreover, was observed an increase in alveolar lumen area in FA5 (7.8±0.3x10 2 μ 2 ) compared to GC (5.8±0.2x10 2 μ 2 ), FA1 (6.4±0.5x10 2 μ 2 ) and FA10 (4.9±0.3x10 2 μ 2 ; p˂0.05). Conclusão The results appoint to potential of formaldehyde in promote the respiratory injury by increase of pulmonary inflammatory process and oxidative damage. Also appoint to dose dependent level of injuries. We carried out news histological and biochemical analyses in order to clarify the mechanism involved in pulmonary alterations induced by formaldehyde air exposition.

FeSBE 2012

Resumo: 08.013

EFEITO DO TRATAMENTO COM N-ACETILCISTEÍNA SOBRE A MECÂNICA RESPIRATÓRIA EM CAMUNDONGOS EXPOSTOS À HIPERÓXIA

Autores

1OLIVEIRA, V. R.

2, SILVA, F. B.

2, FLAUSINO, G. F.

1, BARRIENTOS, G. P.

3, PORTO, L. C. D.

M. S. 1, ZIN, W. A.

1, ZIN, W. A.

1 Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho - UFRJ,

2 Departamento

de Ciências Biológicas - UFOP, 3 Departamento de Histologia e Embriologia - UERJ

Apoio Financeiro: CNPq, FAPERJ, MCT, FAPEMIG

Resumo Objetivos O oxigênio medicinal é rotineiramente utilizado nas doenças pulmonares e cardíacas na tentativa de reverter a hipoxemia, sendo comum sua prescrição sem uma avaliação cuidadosa dos seus potenciais efeitos colaterais, uma vez utilizado em altas concentrações. A hiperóxia pode induzir, no tecido pulmonar, danos oxidativos à matriz extracelular, às células epiteliais e endoteliais, além de induzir a inflamação pulmonar. A N-acetilcisteína (NAC) é uma droga sintética com ação antioxidante. Objetivamos avaliar o efeito do pré-tratamento com NAC sobre a mecânica respiratória de camundongos expostos à hiperóxia. Métodos Este estudo foi aprovado pela Comissão de Ética no Uso de Animais da Universidade Federal de Ouro Preto (CEUA/UFOP) sob o código 2010/17. Camundongos BALB/c machos (20-25 g) foram tratados durante 7 dias consecutivos com NAC (200 mg/kg/dia, volume de 0,2 mL por gavagem) ou salina (0,2 mL por gavagem). Decorridas 24 h da última gavagem, foi iniciada a exposição à hiperóxia, numa caixa de vidro, com O2 a 100 %, durante 12 h. Os animais que receberam tratamento com NAC foram expostos (grupo NH12, n=7), ou não, à hiperóxia (grupo CTN, n=7), bem como os animais que receberam tratamento com salina puderam ser expostos (grupo H12, n=8), ou não, à hiperóxia (grupo CT, n=7). A mecânica respiratória (pressão resistiva, ∆P1; viscoelástica/inomogênea, ∆P2; elastância estática, Est; e componente viscoelástico da elastância, ∆E) e a capacidade residual funcional (CRF, expressa em mililitros) foram medidas 24 horas após o término da exposição à hiperóxia. Utilizamos ANOVA de uma entrada (p < 0,05) seguida pelo teste de Tukey para avaliar diferenças entre os grupos. Resultados Houve aumento significativo em Est e ∆P2 no grupo H12 (31,9±0,7 cmH2O/mL e 0,8±0,1 cmH2O, respectivamente) comparado ao grupo CT (27,6 ± 0,6 cmH2O/mL e 0,6±0,1 cmH2O, respectivamente). O grupo NH12 mostrou diminuição dos parâmetros de mecânica respiratória (29,7±1,1 cmH2O/mL e 0,7±0,1 cmH2O, Est e ∆P2, respectivamente) em relação ao grupo H12, porém não diferiram do grupo CT. O grupo CTN também foi semelhante ao grupo CT em todos os parâmetros (29,9±2,0 cmH2O/mL e 0,7±0,1 cmH2O; Est e ∆P2, respectivamente). Não foi observada diferença significativa entre os grupos nos parâmetros de ∆E, ∆P1 e CRF. Conclusão A exposição à hiperóxia durante 12 horas foi capaz de alterar os componentes elásticos e viscoelásticos/inomogêneos pulmonares, sugerindo lesão periférica das vias aéreas. Além disso, o tratamento com NAC foi capaz de reverter tais alterações funcionais produzidas pela exposição à hiperóxia com 100 % de O2.

FeSBE 2012

Resumo: 08.014

MECÂNICA PULMONAR DE CAMUNDONGOS C57BL/6 SADIOS EXPOSTOS A DIFERENTES DOSES DE MATERIAL PARTICULADO FINO (PM2,5) ORIUNDO DO RIO DE JANEIRO

Autores

1RIVA, D. R.

1, CASQUILHO, N. V.

1, ASSIS, L. L.

1, MAGALHÃES, C. B.

1, OLIVEIRA, V. R.

1,

ALVES, J. L. C. R. 1, ZIN, W. A.

1, BARRIENTOS, G. P.

2, SALDIVA, P. H. D. N.

1, ZIN, W. A.

1

Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho - UFRJ, 2 Departamento de Patologia - USP

Apoio Financeiro: PRONEX/FAPERJ, FAPERJ, CNPq, MCT

Resumo Objetivos Estudos epidemiológicos e experimentais vêm ganhando foco nos últimos anos devido à relação com a morbimortalidade induzida pela poluição ambiental. Objetivamos avaliar o efeito de diferentes doses de material particulado fino (PM2,5) administrado por via intranasal na mecânica pulmonar de camundongos. Métodos Este estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Uso de Animais (CEUA/UFRJ) sob o número IBCCF 046. Camundongos C57BL/6, com 6 semanas de vida, pesando 20-30 g, machos, foram anestesiados com sevoflurano e receberam instilação intranasal de 30 µl de água destilada (CTRL, n = 6) ou 0,3; 1; 3; 10 ou 30 µg de PM2,5 proveniente da cidade do Rio de Janeiro, diluídos em 30 µl de água destilada, originando os grupos P03 (n = 8), P1 (n = 7), P3 (n = 8), P10 (n = 11) e P30 (n = 13) respectivamente. 24 horas depois, determinou-se a mecânica pulmonar [elastância estática (Est), componente viscoelástico da elastância (ΔE), ambos em cmH2O/ml, e pressões resistiva (ΔP1), viscoelástica (ΔP2) e total (ΔPtot) em cmH2O] pelo método de oclusão ao final da inspiração. Resultados Ao avaliarmos a mecânica pulmonar, os valores encontrados foram: Est (33,3; 33,5; 32,6; 39,9; 38,2; 37,7), ΔE (4,2; 3,9; 3,7; 4,1; 4,2; 4,1), ΔP1 (0,48; 0,52; 0,44; 0,54; 0,51; 0,52), ΔP2 (0,86; 0,81; 0,79; 0,84; 0,86; 0,86) e ΔPtot (1,3; 1,3; 1,2; 1,3; 1,3; 1,3) respectivamente para os grupos supracitados. Não houve diferença significativa entre os grupos. Conclusão Os resultados preliminares não demonstraram diferença significativa entre os grupos. Novos experimentos serão realizados a fim de aumentarmos a amostragem experimental.

FeSBE 2012

Resumo: 08.015

ESTRESSE OXIDATIVO E NITROSATIVO PARTICIPAM EM DIFERENTES FASES DO ENFISEMA PULMONAR

Autores

1,2LANZETTI, M.

3, COSTA, C. A. D.

2, NESI, R. T.

2, BARROSO, M. V.

1,2, PIRES, K. M. P.

5,

VICTONI, T. 2, VALENÇA, S. D. S.

3, MARTINS, V.

5, LAGENTE, V.

1, PORTO, L. C.

3,

RESENDE, Â. C. 4, BENJAMIM, C. F.

2, VALENCA, S. D. S.

1 Departamento de Histologia e

Embriologia - UERJ, 2 Instituo de Ciências Biomédicas - UFRJ,

3 Farmacolgia - UERJ,

4 Instituo de

Ciências Biomédicas - UFRJ, 5 INSERM U991 - Université de Rennes

Apoio Financeiro: CAPES-COFECUB, FAPERJ, CNPq

Resumo Objetivos Investigar o papel do estresse oxidativo e nitrosativo no enfisema pulmonar induzido por elastase. Métodos Esse projeto de pesquisa foi aprovado pelo Comitê de Ética em Experimentação Animal do ICB da UFRJ (DAHEICB 063). Instilações intratraqueais de elastase (PPE) foram realizadas em camundongos machos C57BL/6 com 8 semanas de vida e peso médio de 24 g. A PPE foi instilada nas doses de 0,05 U ou 0,5 U (n = 6 por grupo). Um grupo extra de animais foi tratado com aminoguanidina (AMG) 1% na água de beber. Os grupos controles foram submetidos à instilação de salina (50 µL). Lavado broncoalveolar, análises bioquímicas de estresse oxidativo e ensaios morfométricos foram realizados nos pulmões de animais sacrificados 7, 14 e 21 dias após a instilação. Análise estatística foi feita usando o teste ANOVA seguido pelo pós-teste de Bonferroni e a diferença estatística foi considerada quando encontrado P < 0,05. Os valores representados são (Média±EPM). Resultados O enfisema foi histologicamente observado 21 dias após PPE 0,5 U, evidenciado pelo aumento do diâmetro alveolar médio – Lm (285.0 ± 21.59**) e da densidade de volume dos espaços alveolares - Vvalv (0.67 ± 0.03**) em comparação ao grupo controle (153.8 ± 4.01 e 0.46 ± 0.01, respectivamente). TNF-α foi aumentado em 7 (10,65 ± 0,61) e 14 (10,86 ± 0,48) dias após PPE 0,5 U comparados ao controle (5,59 ± 0,96), concomitante com a redução de IL-10 (7 dias – 1,72 ± 0,43 / 14 dias 2,52 ± 0,55) comparados ao controle (6,43 ± 0,26). O estresse oxidativo foi observado na fase inicial do enfisema, com aumento dos níveis de nitrito (31,06 ± 4,86), malondialdeído (0,32 ± 0,04) e atividade de superóxido dismutase (34,94 ± 6,18) no grupo 7 dias após PPE 0,5 U quando comparados ao controle (13,76 ± 1,41; 0,17 ± 0,03; 11,40 ± 0,90, respectivamente). Atividade da glutationa peroxidase foi aumentada em todos os grupos PPE 0,5 U. A exposição à PPE 0,5 U induziu o aumento da expressão de iNOS (562,9 ± 2,9), eNOS (230,2 ± 0,15) e nitrotirosina (1,33 ± 0,14), sendo revertido no grupo PPE+AMG (67,45 ± 9,45; 71,20 ± 15,80; 0,72 ± 0,13, respectivamente). O tratamento com AMG 1% atenuou histologicamente o enfisema, mantendo o Lm (57.24 ± 6.47) e o Vvalv (57.33 ± 2.96) no grupo PPE+AMG semelhantes aos do grupo controle (45.53 ± 1.79 e 50.80 ± 1.53, respectivamente). Conclusão Nossos resultados sugerem que as vias de estresse oxidativo e nitrosativo são disparadas pela produção de óxido nítrico via expressão de iNOS no enfisema pulmonar. Modular a expressão da iNOS parece uma estratégia promissora contra o estabelecimento do enfisema pulmonar.

FeSBE 2012

Resumo: 08.016

INFLUÊNCIA DO EXERCÍCIO AERÓBICO SOBRE AS LESÕES PULMONARES EXPERIMENTAIS INDUZIDAS PELA BLEOMICINA.

Autores

1PRATA, L. O.

1, OLIVEIRA, F. M. S.

1, RIBEIRO, T. M. D. S.

2, ALMEIDA, P. W. M.

1,

CARDOSO, J. A. 2, MACHADO, M. D. G. R.

1, CALIARI, M. V.

1 Patologia Geral - UFMG,

2

Fisiologia e Biofísica - UFMG

Apoio Financeiro: FAPEMG e CNPq

Resumo Objetivos Investigar os efeitos do exercício aeróbico sobre o parênquima pulmonar de animais com fibrose pulmonar induzida por bleomicina. Métodos Todos os procedimentos foram conduzidos de acordo com as normas do Comitê de Ética em Experimentação Animal da UFMG (CETEA – UFMG), protocolo 262/2008. Trinta e quatro camundongos machos Balb/c (20–25 g) com aproximadamente 10 semanas de vida, receberam 6,25 U/Kg de bleomicina (BLM, n=20) via instilação intratraqueal. O grupo controle (C, n=14) recebeu salina em volume correspondente à bleomicina. Posteriormente os grupos foram subdivididos em grupos sedentários (C-SED, n=6 e BLM-SED, n=8) e treinados (C-EXE, n=6 e BLM-EXE, n=8). Os animais dos grupos C-EXE e BLM-EXE foram submetidos a uma avaliação da capacidade funcional na piscina, para obtenção da sobrecarga do treinamento a partir da sobrecarga máxima alcançada. Após a avaliação, os animais foram submetidos à adaptação ao exercício realizado na piscina, com sobrecarga de 60% da carga máxima obtida na avaliação. Os animais nadaram durante 10, 20 e 40 minutos/dia durante 5 dias/semana, respectivamente na 1ª, 2ª, e 3ª semanas. Posteriormente, foram treinados 5 vezes/semana, 1 hora/dia com a mesma sobrecarga, por 4 semanas. A necropsia foi feita 48 horas após o último dia de treinamento para coleta dos pulmões, fixação em formol tamponado e análise do tecido conjuntivo fibroso pelo Tricrômico de gomori, H&E, imuno-histoquímica para SP-A e colágeno tipo I. Os resultados foram expressos em média ± erro padrão da média (EPM). Resultados Nos animais dos grupos C-SED e C-EXE foram encontrados respectivamente, 179,83 ± 51,27µm 2 e 262,29 ± 54,81µm 2 de tecido conjuntivo fibroso. Já no grupo BLM-SED (4.647,61 ± 939,69µm 2 ; p < 0,05), a área mensurada foi significativamente superior à dos grupos controles. O treinamento físico em piscina a que foram submetidos os animais do grupo BLM-EXE (649,88 ± 98,35µm 2 ; p < 0,05), promoveu redução significativa da área de fibrose quando comparada com o grupo BLM-SED (4.647,61 ± 939,69µm 2 ). Entretanto, o grupo BLM-EXE apresentou maior área de tecido conjuntivo fibroso quando comparado com os grupos controles. A área de colágeno tipo I no grupo BLM-SED (2.814,24 ± 505,73µm 2 ) foi significativamente superior aos grupos C-SED (143,65 ± 40,75µm 2 ) e C-EXE (130,65 ± 20,79µm 2 ) e BLM-EXE (427,20 ± 66,12µm 2 ). A área positiva para SP-A nos animais do grupo BLM-SED (2.304,21 ± 546,51µm 2 ; p < 0,05) foi superior à dos grupos controles e BLM-EXE (1.066,32 ± 155,82µm 2 ). O número de células PII com marcação positiva para SP-A no grupo C-EXE (12,39 ± 0,59; p < 0,05) foi maior quando comparado com o grupo C-SED (7,76 ± 0,50). No grupo BLM-SED (59,41 ± 5,26; p < 0,05), o número de PII foi superior à dos grupos controles. O treinamento físico em piscina a que foram submetidos os animais do grupo BLM-EXE (40,02 ± 3,17) também promoveu redução significativa do número de PII com marcação positiva para SP-A quando comparada com o grupo BLM-SED ( p < 0,05). Conclusão O estudo demonstrou que o exercício físico atenuou significativamente a progressão das lesões pulmonares e que pode constituir uma opção terapêutica não-farmacológica para o tratamento de doenças pulmonares fibrosantes.

FeSBE 2012

Resumo: 08.017

CRITICAL ROLE FOR CCR2 (CC-chemokine receptor 2) AND HMGB1 (high-mobility group protein 1) IN INDUCTION OF EXPERIMENTAL ENDOTOXIC SHOCK

Autores

1BARROSO, M. V.

2, ALVES, J. N.

2, LOPES, A. A.

2, LANZETTI, M.

2, PIRES, K. M. P.

1,

VALENÇA, S. D. S. 4, COSTA, C. A.

4, RESENDE, A. C.

3, SANTOS, J. C.

4, RIBEIRO, M. L.

2,

PORTO, L. C. 1, BENJAMIM, C. F.

1 ICB - UFRJ,

2 BHEx - UERJ,

3 Unidade de Farmacologia e

Gastroenterologia - USF, 4 Departamento de Farmacologia e Psicobiologia – Instituto de Biologia

Roberto Alcântara Gomes - UERJ

Apoio Financeiro: FAPERJ, FAPESP, CAPES and CNPq

Resumo Objetivos Sepsis is a biological complex condition that is characterized by a whole-body inflammatory state. Although several studies, effective and accurate treatment is still under research. Our aim was to investigate CCR2 (CC-chemokine receptor 2) and HMGB1 (high-mobility group protein 1) involvement in a murine endotoxic shock model. Métodos We use male C57BL/6 (wild type; WT) and CCR2-deficient mice (CCR2−/−), 8 to 10 weeks old, were bred and maintained under standard conditions in the animal facility of the Institute of Biomedical Science, Federal University of Rio de Janeiro (Rio de Janeiro, Brazil). CCR2−/− mice were generated by W.A. Kuziel (Kuziel et al., 1997) and were kindly supplied, for established an optimal dose of LPS. All procedures were in accordance with international guidelines (NIH) and Brazilian Law (“Arouca” Law) for the use of animals (Law 11,794 from 10/08/2008) and this study received prior approval by the animal ethics committee from Federal University of Rio de Janeiro (IBCCF 108). Then after know some inflammatory and redox responses we used glycyrrhizic acid (50 mg/kg), an HMGB1 inhibitor (GA), with optimal dose of LPS (20 mg/kg). We analyzed histology (lung, kidney and liver), performed western blotting, qPCR, and biochemical analyses in mouse lungs. All experiments were set up at 24 h with LPS i.p. Resultados CCR2 KO mice survived more than WT mice after 80, 40 and 20 mg/kg of LPS i.p. Although inflammation and redox markers are present in CCR2 KO mice, WT mice were largest values. We observed increased leukocyte influxes in BAL of WT mice (three folds, p < 0.001) and CCR2 KO mice (two folds, p < 0.001) injected with LPS when compared with control groups respectively. ROS in BAL also was increased in WT mice (almost 200%, p < 0.05) and CCR2 KO mice (150%, p < 0.05) injected with LPS when compared with control groups, respectively. MPO in BAL, an indirect method for neutrophil quantification, was increased in WT mice ( p < 0.001) and CCR2 KO mice ( p < 0.001) injected with LPS when compared with control groups, respectively (Table 2). Finally, nitrite was measured in lung homogenates, and we observed an increase in WT mice ( p < 0.05) injected with LPS when compared with control group. Nitrite in CCR2 KO mice injected with LPS was not different from control group. HMGB1 expression was reduced in CCR2 KO mice parallel ERK 1/2 activation. So we used GA in WT mice injected with LPS and mortality was fully abolished. We observed also reduced leukocyte influxes on BAL from LPS+GA mice when compared with LPS group ( p < 0.001). ROS and MCP-1 were increased in LPS group ( p < 0.01 and p < 0.05) when compared with GA group. Conclusão In conclusion we demonstrated that CCR2 KO mice has an altered inflammatory and redox profile after LPS-induced

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endotoxic shock. These parameters were accompanied by ERK 1/2 pathway and gave us the opportunity for investigate HMGB1 involvement through an inhibitor in WT mice. Thus, drug target CCR2 and HMGB1 could represent future resources for sepsis treatment in humans particularly in the early stage of this condition.

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Resumo: 08.018

POTENCIAL TERAPÊUTICO DO LASSBIO596 VIA ORAL EM CAMUNDONGOS INTOXICADOS POR MICROCISTINA-LR: MARCADORES BIOMOLECULARES

Autores

1CASQUILHO, N. V.

1, MAGALHÃES, C. B.

1, MACHADO, M. N.

1, SOARES, R. M.

1,

AZEVEDO, S. M. F. O. 1, LIMA, L. M.

1, BARREIRO, E. J.

1, FORTUNATO, R. S.

1, CARVALHO,

A. R. 1, ZIN, W. A.

1 Centro de Ciências da Saúde - IBCCF

Apoio Financeiro: PRONEX/FAPERJ, FAPERJ, CNPq, MCT.

Resumo Objetivos As microcistinas (MCYST) são cianotoxinas hepatotóxicas, produzidas por algumas espécies de cianobactérias. Objetivamos avaliar o potencial terapêutico do LASSBio596 (inibidor das fosfodiesterases 4 e 5), administrado por via oral, e os marcadores bioquímicos envolvidos nas lesões pulmonar, hepática e renal induzidas pela exposição aguda a uma dose subletal de MCYST-LR. Métodos Este estudo foi aprovado pela Comissão de Ética no Uso de Animais (CEUA/CCS/UFRJ), sob o número IBCCF 142. Camundongos Swiss adultos machos (20-35 g) foram aleatoriamente divididos em três grupos. Os animais CTRL (n=10) foram injetados intraperitonealmente com 30 µL de salina, enquanto os grupos TOX (n=10) e LASSBio receberam 40 µg/kg (dose subletal) de microscistina-LR em 30 µL de salina pela mesma via de administração. Após 6 horas, os grupos CTRL e TOX receberam 30 µL de salina por gavagem, e o LASSBio recebeu 50 mg/kg de LASSBio596 em 12,5 µL de dimetilsulfóxido (DMSO) e 17,5 µL de salina pela mesma via de administração (TOX+LASS, n=10). Após 2 horas, avaliou-se os níveis séricos de alanina aminotransferase (ALT), aspartato aminotransferase (AST), uréia e creatinina. Adicionalmente, avaliou-se a expressão de RNAm para NOX 2 e NOX 4 por RT-PCR, bem como a atividade geradora de H2O2 pela DUOX no tecido pulmonar por Amplex Red. Em todos os testes, o nível de significância considerado foi de 5% ( p < 0,05). Resultados O grupo TOX apresentou aumento significativo de todos os parâmetros analisados: ALT (554,50 ± 80,25 U/L), AST (1171,70 ± 136,60 U/L), uréia (32,93 ± 0,71 mg/dL), creatinina (0,58 ± 0,04 mg/dL), RNAm para NOX 2 (6,54 ± 2,05 fold change) e NOX 4 (4,52 ± 0,96 fold change), atividade da DUOX (5,14 ± 0,70 nMol) e geração de H2O2 (30,63 ± 1,19 nMol) em relação ao CTRL (100,80 ± 37,60 U/L, 520,30 ± 75,90 U/L, 28,42 ± 0,97 mg/dL, 0,40 ± 0,04 mg/dL, 1,00 ± 0,23 fold change, 0,32 ± 0,26 fold change, 1,69 ± 0,72 nMol, 26,04 ± 1,19 nMol, respectivamente) e ao grupo TOX+LASS (315,6 ± 72,90 U/L, 613,10 ± 206,00 U/L, 25,99 ± 1,87 mg/dL, 0,41 ± 0,01 mg/dL, 3,38 ± 0,41 fold change, 4,00 ± 0,27 fold change, 1,63 ± 1,39 nMol, 29,15 ± 1,28 nMol, respectivamente). Não se observou diferença estatisticamente significativa entre os grupos CTRL e TOX+LASS. Conclusão A exposição à microcistina-LR deteriorou a função hepática e renal bem como induziu uma situação de desequilíbrio redox nos camundongos o que foi evitado pela administração oral de LASSBio596. Assim, este composto mostra-se eficaz no tratamento das lesões pulmonar, hepática e renal decorrentes da ação da toxina.

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Resumo: 08.019

Ventral surface purinergic mechanisms are involved in cardiorespiratory responses to central chemoreceptor activation in rats

Autores 1MOREIRA, T. D. S.

1, SOBRINHO, C. R.

2, TAKAKURA, A. C.

1 Fisiologia e Biofísica - USP,

2

Farmacologia - USP

Apoio Financeiro: Fapesp (2011/13462-7)

Resumo Objetivos Central chemoreception is the mechanism by which the brain regulates breathing in response to changes in tissue CO2/H+. A brainstem region called the retrotrapezoid nucleus (RTN) contains a population of CO2/H+-sensitive neurons that appear to function as important chemoreceptors. The goal of this study is to determine the extent to which adenosine 5'-triphosphate (ATP) contributes to RTN chemoreception in vivo. Métodos CEEA 118-109/02. Mean arterial pressure (MAP) and phrenic nerve activity (PNA) were recorded in urethane-anaesthetized, vagotomized and artificial ventilated male Wistar rats (n = 6-7/group). Resultados Bilateral injections of pyridoxal-phosphate-6-azophenyl-2',4'-disulfonate (PPADS, a P2-receptor antagonist - 3 mM in 50 nl) into the RTN reduced pressor response (Δ = +8 ± 2 mmHg, vs. saline: Δ = +22 ± 4 mmHg), PNA amplitude (Δ = +62 ± 3%, vs. saline: Δ = +101 ± 5%) and PNA frequency (Δ = +77 ± 3%, vs. saline: Δ = +101 ± 5%) induced by hypercapnia (10% CO2). MRS2179 (P2Y1 receptor antagonist, 100 μM in 50 nl) bilaterally within the RTN did not change pressor response and PNA activity elicited by hypercapnia Conclusão These results support the possibility that CO2/H+ evoked ATP release in RTN region act probably through P2X receptors.

FeSBE 2012

Resumo: 08.020

Differential effects of atorvastatin, pravastatin, rosuvastatin and sinvastatin on lungs from mice exposed to cigarette smoke

Autores

1FERREIRA, T. S.

2, LOPES, A. A.

4, CARDOSO, D. M.

2, PIRES, K. M. P.

2, NETO, L. A. S.

1,

VALENCA, S. S. 2, LANZETTI, M.

2, ALVES, J. N.

2, TRAJANO, E. T. L.

3, NESI, R. T.

4,

BARROSO, M. V. 2, PINTO, R.

1, BENJAMIM, C. F.

2, PORTO, L. C. S.

1 Pós Graduação em

Farmacologia e Química Medicinal - UFRJ, 2 Departamento de Histologia e Embriologia - UERJ,

3

Instituto de Ciências Biomédicas - UERJ, 4 Instituto de Nutrição Josué de Castro - UFRJ

Apoio Financeiro: FAPERJ, CNPq and CAPES

Resumo Objetivos Statins are widely recognized as hypolipemic drugs, but some studies have observed anti-inflammatory and anti- oxidants effects, known as pleiotropic effects.The present study aimed to determine whether I.P. administration of atorvastatin, pravastatin, rosuvastatin and sinvastatin could reduce lung inflammation induced by cigarette smoke. Métodos Male C57Bl/6 mice with 8 weeks and weight of 24 g were divided into six groups (n=8 each): Mice exposed to the smoke from 12 cigarettes/day/5 days (CS group); exposed to smoke from 12 cigarettes per day for 5 days plus atorvastatin (10 mg/kg/day; CS+A group), or pravastatin (5 mg/kg/day; CS+P group), or rousovastatin (5 mg/kg/day; CS+R group) or sinvastatin (20 mg/kg/day; CS+S group); control group was sham-smoked. One day after the last CS exposure, mice were sacrificed, the bronchoalveolar lavage fluid (BAL) was performed and the lungs were removed for histological analysis and homogenized for biochemical analysis.This study was approved to animal use ethic committe UFRJ (DFBCICB046). Resultados Oxidant levels were reduced in CS+S (77.98±8.94) when compared with CS (114.40±27.84); DPPH levels were increased in CS+A (59.9±10.6), CS+R (52 ± 5) and CS+S (55.5 ± 6.5)when compared with CS (39.8 ± 5.3); nitrite levels were reduced in CS+P (11.1 ± 2.3), CS+R (29 ± 3) and CS+S (29.4 ± 3.5) when compared with CS (53.5 ± 9.4 ); MCP-1 levels were reduced in CS+R (0.243±0.033) and CS+S(0.257 ± 0.145) when compared with CS(0.67±0.123) ; hydroperoxides levels were reduced in CS+A (8.22 ± 1.23), CS+R (9.14 ± 1.10) and CS+S (8.78 ± 1.63) when compared with CS (15.78 ± 3.32); catalase activity was reduced in CS+S (6.5±1.7) when compared with CS (14.8 ± 2.5); SOD activity were reduced in CS+A (0.70±0.15), CS+P (0.33±0.10), CS+R (1.46±0.45) and CS+S (0.99±0.14) all when compared with CS group. Conclusão These results suggest that sinvastatin is the best treatment for acute lung inflammation induced by CS due to reduction of inflammatory and pro-oxidant markers.

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Resumo: 08.021

FUNÇÃO PULMONAR, ESTRESSE OXIDATIVO E MARCADORES INFLAMATÓRIOS NA LESÃO PULMONAR AGUDA INDUZIDA POR LPS: DIFERENTES EFEITOS DA ATORVASTATINA, PRAVASTATINA E SINVASTATINA

Autores

1MELO, A. C.

1, SILVA-NETO, L. A.

1, ALVES, J. N.

3, BARROSO, M. V.

3, CARDOSO, D. M.

2,

VALENÇA, S. S. 1, LOPES, A. D. A.

1, PINTO, R.

4, NESI, R. T.

1, TRAJANO, E. T. L.

4,

MUCCIACCIO, G. M. 5, MAGALHÃES, C. D.

5, ZIN, W. A.

1, PORTO, L. C.

2, VALENÇA, S. S.

1

PROGRAMA DE PÓS GRADUAÇÃO EM BIOLOGIA HUMANA E EXPERIMENTAL - UERJ, 2

PROGRAMA DE PÓS GRADUAÇÃO EM CIÊNCIAS MORFOLÓGICAS - UFRJ, 3 INSTITUO DE

NUTRIÇÃO JOSUÉ DE CASTRO - UFRJ, 4 INSTITUTO DE CIÊNCIAS BIOMÉDICAS - UFRJ,

5

INSTITUTO DE BIOFÍSICA CARLOS CHAGAS FILHO - UFRJ

Apoio Financeiro: FAPERJ, CNPQ e CAPES

Resumo Objetivos Determinar que tipo de estatina pode atenuar a lesão pulmonar aguda (LPA) induzida por lipopolissacarídeo (LPS) em camundongos da linhagem C57Bl/6. Métodos Esse projeto de pesquisa foi aprovado pelo Comitê de Ética em Experimentação Animal do ICB da UFRJ (DFBCICB 046). Camundongos machos, jovens, 6 - 8 semanas (± 23 g), foram divididos em 5 grupos (n = 6 em cada grupo). Foram administrados três tipos de estatinas: atorvastatina (10 mg/kg), sinvastatina (20 mg/kg), pravastatina (5 mg/kg), via i.p. por três dias consecutivos. No terceiro dia, foi injetado LPS (10 mg/kg), também via i.p. (grupos A+LPS, S+LPS e P+LPS). O grupo controle recebeu apenas salina i.p. O grupo LPS recebeu LPS i.p. (10 mg/kg). 24 horas após o estímulo com salina ou LPS foram coletados dados de mecânica ventilatória. Após tais medidas os animais foram sacrificados e foi realizado lavado broncoalveolar; os pulmões foram removidos para análise histopatológica e homogeneizados para análises bioquímicas. A análise estatística foi feita usando o teste ANOVA seguido pelo pós-teste de Bonferroni e a diferença estatística foi considerada quando encontrado p < 0,05. Resultados A quantidade de leucócitos foi menor no grupo P+LPS ( p < 0.01) e S+LPS ( p < 0.05) quando comparados ao grupo LPS. Níveis de citocinas como a MCP-1 foi menor no grupo P+LPS ( p < 0.01) enquanto IL-6 foi menor no grupo P+LPS ( p < 0.01) e S+LPS ( p < 0.05). Marcadores redox (superóxido dismutase e catalase) encontraram-se reduzidos no grupo A+LPS ( p < 0.01) em comparação com o grupo LPS. Peroxidação lipídica (malondialdeido e hidroperoxidos) foram reduzidos em todos os grupos tratados ( p < 0.05) quando comparados ao grupo LPS. Mieloperoxidase foi menor no grupo P+LPS ( p < 0.01) quando comparado ao grupo LPS. Dados de mecânica, tais como ΔPtot e Est foram significativamente maiores ( p < 0.05) no grupo LPS quando comparados a todos os outros grupos. Est foi reduzido no grupo P+LPS ( p < 0,01) e A+LPS ( p < 0,05) em comparação ao grupo LPS. Conclusão Nossos resultados sugerem que a atorvastatina e a pravastatina, mas não a sinvastatina, exibiram ações anti-inflamatórias e antioxidantes na lesão pulmonar aguda induzida por LPS.

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Resumo: 08.022

CELL THERAPY IN A MURINE MODEL OF EMPHYSEMA

Autores

2MACHADO, M. N.

2, MAZZOLI-ROCHA, F.

2, CASQUILHO, N. V.

3, MORALES, M. M.

2, ZIN,

W. A. 2 Carlos Chagas Filho Institute of Biophysics/Laboratory of Respiration Physiology - UFRJ,

3

Carlos Chagas Filho Institute of Biophysics/Laboratory of Cellular e Molecular Physiology - UFRJ

Apoio Financeiro: FAPERJ, CNPq, PRONEX-FAPERJ, and MCT

Resumo Objetivos Papain-induced emphysema reproduces many of the characteristics found in patients. This study tested the hypothesis that bone marrow-derived mononuclear cell (BMMC) therapy could minimize lung injury in a mouse model of lung emphysema. For such purpose, lung mechanics and histology were analyzed after intratracheal instillation ( < i>i.t.) of BMMC in papain-treated mice. Métodos This study was approved by the institutional Ethics Committee on the Use of Animals (CEUA/UFRJ) under the code IBCCF 094. Female BALB/c mice (20 – 25 g), n=6 per group, were anaesthetized with sevoflurane and received an intratracheal instillation of either 50 µL of sterile saline [NaCl 0.9% (SAL)] or 10 U of papain (0.2 U/µL of saline) (PAP) on days 1 and 7. BMMC were generated from male donor mice. On day 14 mice were intravenously injected with 2 x 10 6 BMMC (SAL21-C and PAP21-C). Lung mechanics and histology were analyzed on days 14 (SAL14, PAP14) and 21 (SAL21, PAP21, SAL21-C and PAP21-C). Resultados Pulmonary elastance and its viscoelastic component (cmH2O/mL), viscoelastic and total pressures (cmH2O) were higher in PAP14 (28.9±6.9, 5.7±0.3, 1.1±0.1 and 1.9±0.1, respectively) than in SAL14 (25.0±2.1, 5.7±0.3, 1.1±0.1 and 1.9±0.1, respectively) and increased in PAP21 (29.5±4.7, 5.8±0.8, 1.1±0.2 and 1.8±0.2, respectively) compared to SAL21 (25.0±2.1, 4.5±0.1, 0.9±0.0 and 1.6±0.1, respectively), SAL21-C and PAP21-C (24.1±2.2, 4.8±0.5, 0.9±0.1 and 1.6±0.1, respectively, and 24.1±2.2, 4.8±0.5, 0.9±0.1 and 1.6±0.1, respectively). Resistive pressure (cmH2O) increased in PAP21. An influx of polymorphonuclear cells was observed in PAP21 compared to SAL21 and PAP21-C, and elastic fibre content was smaller in PAP14 and PAP21 than in SAL14, SAL21, SAL21-C and PAP21-C. TNF-α and IL-1β levels were similar among analyzed groups (α= 5 %). Y chromosome was not observed in samples of lung tissue that received cell therapy. Conclusão BMMC therapy reduced inflammation, improved lung function and prevented disruption of elastic fibres.

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Resumo: 08.023

ORIENTAÇÃO DOS QUIMIORRECEPTORES DE O2 BRANQUIAIS EM TILÁPIA-DO-NILO (OREOCHROMIS NILOTICUS)

Autores 1ZERAIK, V. M.

1, BELÃO, T.

1, THOMAZ, J.

1, KALININ, A. L.

1, RANTIN, F. T.

1 Ciências

Fisiológicas - UFSCar

Apoio Financeiro: Fapesp

Resumo Objetivos Em peixes, os quimiorreceptores de O2 são encontrados principalmente nas brânquias e podem ser orientados internamente monitorando as pressões parciais de O2 (PO2) do sangue arterial e/ou externamente, detectando a PO2 da água inspirada. O cianeto de sódio (NaCN) por interferir na cadeia transportadora de elétrons nas mitocôndrias é amplamente utilizado para a estimulação e identificação desses receptores em peixes. O presente projeto tem por objetivo determinar a orientação dos quimiorreceptores de O2 nos arcos branquiais de tilapia-do-Nilo e o papel desses receptores nos ajustes cardiorrespiratórios desta espécie em resposta à hipóxia. Métodos Nᵒ CEEA 013/2010. Em um grupo de peixes intactos (n = 10, Wt = 259,6 ± 6,2) foram implantados uma cânula bucal, uma cânula na veia caudal e eletrodos de ECG para a medição das seguintes variáveis: freqüência respiratória - fR, amplitude ventilatória - Vamp, e freqüência cardíaca - fH. Esses animais foram submetidos à 2 injeções de NaCN internas (administradas por meio da cânula na veia caudal): a) 0,5 mL intravenoso de salina (0,9%); b) 0,5mL intravenoso de NaCN (750 μg.ml-1 de NaCN em salina) e 2 injeções externas (injetadas por meio da cânula bucal): c) 1 mL H2O d) 1 mL NaCN (750 μg.ml-1 de NaCN em água). Para se verificar se a orientação dos receptores está ligada à todos os arcos branquiais foi realizada a extirpação bilateral do primeiro par de arcos (operados n = 10, Wt = 248,7 ± 6,5) e após 4 dias de recuperação foram realizados os mesmos procedimentos descritos para o grupo intacto. Resultados As respostas internas e externas ao NaCN foram relativamente rápidas, no primeiro minuto após as injeções, e ocasionaram diminuição da fH (bradicardia) e aumento tanto da fR, quanto da Vamp. No grupo controle com a injeção interna de NaCN a fH diminuiu 56% e até 80% em resposta à injeção externa. Já no grupo operado a fH diminuiu 46% e até 57% com a injeção interna e externa respectivamente. A fR e a Vamp foram aumentadas em ambos os grupos mas, do mesmo modo que a fH, foram atenuadas no grupo operado, exceto pela Vamp após injeção externa que apresentou um aumento maior do que a Vamp do grupo controle. A atenuação das respostas mostra a existência de quimiorreceptores, mas não exclusivamente no primeiro arco branquial. A análise exploratória dos dados foi feita pelo teste Two-way ANOVA Conclusão Em tilápia-do-nilo a orientação dos quimiorreceptores de O2 não está relacionada somente ao primeiro par de arcos branquiais. Estes estão, provavelmente, distribuídos por todos os demais arcos e direcionados tanto internamente quanto externamente o que confere a esta espécie uma grande capacidade de ajustar as variáveis cardiorrespiratórias frente à hipóxia gradual que frequentemente ocorre nos ambientes em que vive em condições naturais.

FeSBE 2012

Resumo: 08.024

MICROBIOTA PRESENTE EM CONDICIONADORES DE AR DE SALA ADJACENTE A UNIDADE DE TERAPIA INTENSIVA ADULTO SUGERE FOCO DE CONTAMINAÇÃO

Autores

1NARDELI, C. R.

1, BITTENCOURT, T. R.

1, NAGATO, A. C.

1, SILVA, M. A. D. S.

1,

RODRIGUES, L. M. S. 2, BEZERRA, F. S.

1, SOARES, L. D. C.

1 Biomorfologia e Patologia

Experimental - USS, 2 Laboratório de Bioquímica Metabólica - UFOP,

3 Laboratório de Microbiologia

- USS

Apoio Financeiro: FUSVE

Resumo Objetivos A limitação da utilização dos aparelhos de ar condicionado (AAC) em hospitais está ligada à renovação de ar ambiente, e pode induzir as infecções hospitalares pela colonização de microrganismos. Entre as infecções comuns ocorridas na unidade de terapia intensiva (UTI), encontram-se as pneumonias associadas à ventilação mecânica, que tem como principal veículo de contaminação, o ar. O objetivo deste estudo foi analisar a microbiota presente nos filtros de condicionadores de ar pode ser importante foco de contaminação através da veiculação de bactérias com potencial patogênico. Métodos O estudo foi aprovado pelo comitê de ética em experimentação humana (No. 079/2011-01). Foram realizadas culturas, isolamento e identificação das colônias bacterianas de amostras coletadas dos filtros dos AAC do ambiente da UTI-adulto, sala adjacente e tubo orotraqueal (TOT) de um paciente do sexo masculino, 31 anos de idade em ventilação mecânica. O percentual de crescimento da microbiota foi calculado a partir da razão entre o número de quadrantes ocupados por microrganismos pela área total da placa de Petri, mensurado a partir de um sistema teste de área conhecida. A comparação entre a taxa de crescimento da microbiota entre os AAC foi expressa em porcentagem e a normalidade da amostra foi verificada através D'Agostino & Pearson omnibus normality test. Resultados Foi observado nos filtros de AAC do ambiente de tratamento intensivo o crescimento de fungos e Bacillus spp. Na sala adjacente da UTI foi observado fungos, Bacillus spp., Staphylococcus spp. coagulase-negativo e Micrococccus spp. Neste último ambiente o crescimento da microbiota foi 727,96% maior quando comparado ao ambiente de tratamento intensivo. Os fungos detectados na sala adjacente e na sala de tratamento intensivo não foram identificados. Na cultura do TOT foi observado o crescimento de Staphylococcus spp. coagulase-negativos. Conclusão A coincidência da presença de bactérias encontradas no TOT e no filtro de AAC sugere que o ar provido de salas adjacentes às unidades de tratamento intensivo deva ser monitorado, pois pode ser uma via importante de contaminação.

FeSBE 2012

Resumo: 08.025

AUSÊNCIA DE 5-LIPOXIGENASE EXACERBA INFLUXO CELULAR PULMONAR, MAS PRESERVA ARQUITETURA DO PULMÃO CAMUNDONGOS EXPOSTOS À FUMAÇA DE CIGARRO: POSSÍVEL PAPEL DA GLUTATIONA.

Autores

1,2PINTO, R. F. S.

2, PIRES, K. M. P.

3,1, LANZETTI, M.

1, FERREIRA, T. S.

1, NESI, R. T.

3,1,

TRAJANO, E. T. L. 2,1

, NETO, L. A. D. S. 1, BARROSO, M. V.

2, PÔRTO, L. C. D. M. S.

1,

VALENÇA, S. 1 Instituto de Ciências Biomédicas - UFRJ,

2 Laboratório de Histocompatibilidade -

UERJ, 3 Departamento de Histologia e Embriologia - UERJ

Apoio Financeiro: CAPES, FAPERJ, CNPq

Resumo Objetivos Avaliar a participação da via 5-Lipoxigenase (5-LO), no desequilíbrio redox, dano oxidativo e na preservação do parênquima pulmonar em camundongos expostos à fumaça de cigarro. Métodos Camundongos da linhagem 129sv (selvagens e deficientes para 5-lipoxigenase [5-LO]) machos (8 semanas de idade), foram expostos à fumaça de 12 cigarros/dia durante 60 dias (FC). Animais expostos ao ar ambiente foram usados como controles (CTR). Os seguintes grupos foram formados: 129sv-CTR; 5-LO-CTR; 129sv-FC e 5-LO-FC. Um dia após a última inalação, os animais foram sacrificados, o lavado broncoalveolar (LBA) foi colhido e o número de leucócitos foi aferido. Um fragmento pulmonar foi separado para análises histológicas de morfometria do parênquima pulmonar (densidade de volume de septos alveolares - Sv e do diâmetro alveolar -Lm) e outro foi homogeneizado. Foram analisadas as atividades das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD), glutationa peroxidase (GPx), catalase (CAT) e mieloperoxidase (MPO). Os níveis de nitrito (NO2, glutationas oxidada (GSH) e reduzida (GSSG), espécies reativas de oxigênio (ROS) e malondialdeído (MDA) foram medidos. Número de protocolo de aprovação de Comitê de Ética: DFBCICB054. Resultados O número de leucócitos foi maior nos grupos FC (129sv-FC: 112%; 5-LO-FC: 298%; p < 0,001). Houve uma preservação significativa do parênquima pulmonar no grupo 5-LO-FC quando comparado ao grupo 129sv-FC (37% no Vv, p < 0,01; -30% no Lm, P < 0,01). A atividade de SOD esteve 30% menor no grupo 5-LO quando comparado ao grupo 129sv-CTR ( p < 0,05), ao passo que esta esteve aumentada nos grupos FC quando comparados aos seus respectivos grupos CTR (38% no grupo 129sv-FC, p < 0,05; 112% no grupo 5-LO-FC, p < 0,01). A atividade de CAT não se alterou entre os grupos. Houve apenas uma redução na atividade de GPX no grupo 5-LO-CS quando comparado ao grupo 129sv-CS (-13%, p < 0,05). A razão GSH/GSSG esteve reduzida no grupo 129sv-CS quando comparado com o grupo 129sv-CTR (-34%, p > 0,05). A atividade de MPO esteve aumentada no grupo 5-LO-CTR quando comparado ao grupo 129sv-CTR (20%, p < 0.05), e também nos grupos 129sv-FC e 5-LO quando comparados aos respectivos controles (164%, p < 0.001 e 189%, p.001, respectivamente). O mesmo se repetiu para os níveis de NO2 (309% no grupo 5-LO, p < 0.001; 341% no grupo 129sv-FC, p < 0.001; 95% no grupo 5-LO-FC, p < 0.01). Os níveis de ROS (261% no grupo 129sv-FC, p < 0.001; 103% no grupo 5-LO-FC) e MDA (367% no grupo 129sv-FC, p < 0.001; 629% no grupo 5-LO-FC) estiveram aumentados nos grupos expostos à FC quando comparados aos seus respectivos controles. Conclusão Ausência de 5-lipoxigenase exacerba influxo celular pulmonar, mas preserva arquitetura do pulmão camundongos expostos à fumaça de cigarro, sugerindo um possível papel da glutationa neste processo.

FeSBE 2012

Resumo: 08.026

Efeito dose-dependente do eugenol em lesão pulmonar aguda induzida por lipopolissacarídeo

Autores

1MAGALHÃES, C. B.

1, CASQUILHO, N. V.

1, MACHADO, M. N.

1, RIVA, D. D. R.

1,

FORTUNATO, R.S. 1, ZIN, W. A.

1, TRAVASSOS, L. H.

2, LEAL-CARDOSO, J. H.

1 Instituto de

Biofísica Carlos Chagas Filho - UFRJ, 2 Instituto de Ciências Biomédicas - UEC

Apoio Financeiro: PRONEX/FAPERJ, FAPERJ, CNPq, MCT

Resumo Objetivos Eugenol, um componente de óleo de cravo da índia, inibe a ativação de NF-kappa B induzida por TNF-alfa em macrófagos estimulados por LPS. Nosso objetivo foi avaliar os efeitos de diferentes doses de eugenol na mecânica pulmonar, histopatologia e citocinas inflamatórias em pulmões de camundongos expostos a LPS. Métodos Este estudo foi aprovado pela Comissão de Ética no Uso de Animais (CEUA), CCS, UFRJ, sob o número IBCCF 050. 85 Camundongos fêmeas BALB/c foram divididos aleatoriamente em 9 grupos (n=8-11/groupo). Os camundongos receberam, intratraquealmente, solução salina estéril (0,05 ml) ou LPS (10 microgramas em 0,05 ml de solução salina); 6 h após receberam, por gavagem, solução salina estéril (0,2 ml) e Tween 1% (grupos C e L) ou diferentes doses de eugenol: 16, 65, 114, 160, 650 ou 1140 mg/kg em solução salina (0,2 ml) e Tween 1% (grupos LE1, LE2, LE3, LE4, LE5, da utilização do EL6 e LE7, respectivamente). Os camundongos foram analisados 24 h após a primeira instilação (LPS ou solução salina). Em outros 18 camundongos [C = 6, L = 6, E = 3 (solução salina seguido por eugenol) e LE = 3], TNF-alfa e IL-1 beta foram detectados por ELISA em homogeneizados de pulmão de 6 (C = 3 e L = 3) e 24 h (C = 3, L = 3, E = 3 e LE = 3) após a instilação com LPS. Para análise estatística, usou-se ANOVA de uma entrada seguida pelo teste de Tukey (α = 5%). Resultados Elastância estática, componente viscoelástico de elastância e pressão viscoelástica resistiva foram maiores no grupo L (33,05, 5,01 cmH2O/ml, e 1,00 cmH2O, respectivamente) do que no grupo C (22,13, 3,62 cmH2O/ml, e 0,71 cmH2O), o mesmo ocorrendo com os dados de colapso alveolar e deposição de fibras colágenas. Eugenol reduziu os parâmetros em LE4 grupo (exceto o colapso alveolar) e retornou ao mesmo nível de C do grupo LE5 (23,34, 3,62 cmH2O/ml, e 0,72 cmH2O) em diante. O grupo LE apresentou menor nível de TNF-alfa e IL-1 beta em relação aos camundongos do grupo L. Além disso, o grupo LE se comportou de forma semelhante ao grupo C e E. Conclusão Eugenol exibiu uma in ação anti-inflamatória dose-dependente em modelo in vivo lesão pulmonar induzida por LPS.

FeSBE 2012

Resumo: 08.027

Plant proteinase inhibitor from Enterolobium contortisiliquum (EcTI) attenuates elastase-induced pulmonary inflammatory, remodeling and mechanical alterations in mice.

Autores

1THEODORO-JÚNIOR, O. A.

1, ALMEIDA-REIS, R.

1, OLIVA, L. V.

1, OLIVEIRA, B. M.

1,

LOPES, T. 2, PRADO, C. M.

3, OLIVA, M. L. V.

1, TIBÉRIO, I. D. F. L. C.

1 Ciências Médicas -

Processos Inflamatórios e Alérgicos - USP, 2 Ciências Biológicas - UNIFESP,

3 Bioquímica -

UNIFESP

Apoio Financeiro: FAPESP, CNPq, LIM-20 HCFMUSP.

Resumo Objetivos To evaluate if a plant Kunitz proteinase inhibitor EcTI contributes to inactivation of elastase-induced mechanical, inflammatory and remodelling alterations. Métodos C57Bl6 mice received elastase (E group). Control group received saline (Ve group). Mice were treated with intraperitoneal injection of EcTI (2mg/kg) on days 1, 14 and 21 after elastase instillation (I-E group). On day 30, mice were anesthetized, mechanically ventilated and we analyzed respiratory system resistance (Rrs) and elastance (Ers), tissue elastance (Htis), tissue damping (Gtis), airway resistance (Raw) and exhaled nitric oxide (ENO). Bronchoalveolar lavage fluid (BALF) was performed, lungs were removed and by morphometry, we quantified the mean linear intercept (Lm), collagen and elastic fibers in lung parenchyma. This research was aproved by the Ethics commitee of the University of Sao Paulo whit the number of the protocol 243/10. Resultados In E-group there was a significant increase in the Ers, Rrs, Raw, Htis, Lm, ENO, total cells and macrophages,neutrophils and lymphocytes in BALF, elastic and collagen fibres compared to controls ( p < 0.05). In I-E group there was a decreased in Lm (57.63±5.2µm), Raw (0.29±0.05cmH2O/ml/s), Ers (34.71±3.16cmH2O/L), Htis (36.30±4.42cmH2O/mL/s), macrophages (94.86±2.36%), neutrophils (3.29±2.31%), and lymphocytes (0.91±0.28%) in the BALF, ENO (31.67±2.23ppb) and collagen fibers (0.69%±0.04%) compared to E-group ( p < 0.05). Conclusão This proteinase inhibitor (EcTI) reduced elastase-induced pulmonary inflammatory, remodeling and mechanical alterations induced by elastase. Although more studies need to be performed, this inhibitor may contribute as potential therapeutic tool for COPD management.

FeSBE 2012

Resumo: 08.028

Influence of chest wall mechanical properties on the identification of PEEP-induced tidal recruitment/overdistension

Autores

1BERGAMINI, B. C.

1, CARVALHO, N. S.

2, ZIN, W. A.

1, GIANNELLA-NETO, A.

1,2,

CARVALHHO, A. R. 1 Alberto Luiz Coimbra Institute of Post-Graduation and Research in

Engineering - UFRJ, 2 Carlos Chagas Filho Institute of Biophysics - UFRJ

Apoio Financeiro: PRONEX/FAPERJ, FAPERJ, CNPq, MCT

Resumo Objetivos Continuous monitoring of respiratory mechanical properties has been applied to identify tidal recruitment/overdistension and aid setting protective ventilatory strategies in order to minimize lung injury. However, the influence of chest wall on the estimation of cyclical recruitment/overdistension is still unclear. Métodos The experimental protocol (IBCCF-103) was approved by the Ethics Committee on the Use of Animals, Health Sciences Centre, Federal University of Rio de Janeiro. Fourteen male Wistar rats (345 ± 37 g) were anesthetized, paralyzed and mechanically ventilated (baseline settings: VT = 6 ml/kg, ZEEP, RR = 90 bpm, I:E ratio = 1:2 in room air). A catheter (Arrow, 18GA, USA) was introduced in the carotid artery for continuous arterial pressure (AP) measurement. Five minutes thereafter, PEEP was sequentially increased to 3, 7 and 8 cmH2O, 30 s per step, and later decreased from 8 to 4 and 0 cmH2O, 10 min per step (Close Chest Group, CC, n=14). Animals were then divided into 2 groups: 1) Open Chest Group (OC, n=8); in this group the anterior chest wall removed at a PEEP of 0 cmH2O and 2) Restricted Chest Group (RC, n=6); in this group a pediatric sphygmomanometer was wrapped around the thorax of the animal from the axilla to the subcostal plane and the cuff was inflated up to 11.5 cmH2O (11.0-12.0 cmH2O). In both groups, the protocol was repeated again as previously described. Respiratory system mechanical properties were calculated in a breath-by-breath basis with the least squares method applying the volume-dependent single compartment model. The fraction of the volume-dependent elastance (%E2) was then calculated in order to evaluate the presence of cyclical recruitment/derecruitment (%E2 < 0 ) as well as overdistension (%E2>10%). Differences between groups and each level of PEEP were assessed by two-way ANOVA test (P < 0.05). Multiple comparisons were corrected by the Least Significant Difference method. Resultados Tidal recruitment occurred independently on PEEP in the RC group and occurred at a PEEP of 4 cmH2O, in the CC, and at ZEEP in the CC and OC group. Chest wall removal magnified PEEP-induced overdistension. Significant difference in %E2 were observed at PEEP 0 and 4 compared to 8 cmH2O (-19.4 ± 4.9 and -7.0 ± 7.6 vs 25.6 ± 10.0, P < 0.001 in CC group; and -20.2 ± 2.3 and 0.0 ± 4.3 vs 37.4 ± 6.1, P < 0.003 in OC group, respectively. In the RC group, this difference was only observed at 0 and 8 cmH2O (-23.0 ± 10.3 vs. -7.6 ± 20.7, P < 0.004, respectively). At a PEEP of 8 cmH2O, %E2 was significantly different in RC compared to CC and OC group, (-7,6 ± 20.7 vs 25,6 ± 10.0, P < 0.01 and -7,6 ± 20.7 vs 37.4 ± 6,1, P < 0.01, respectively ). Additionally RC was significantly different from OC at PEEP of 4 cmH2O (-13.6 ± 21.3 vs 0.0 ± 4,3; P < 0.01). Conclusão Chest wall mechanical properties do not influence the detection of PEEP-induced tidal recruitment/overdistension and may protect against overdistension while exacerbate tidal recruitment at a given level of PEEP.

FeSBE 2012

Resumo: 08.029

ALTERAÇÃO NA QUALIDADE DE VIDA E PRESENÇA DE ANSIEDADE E DEPRESSÃO EM PNEUMOPATAS CRÔNICOS.

Autores

1MEDEIROS, D. F.

1, ALVES, I. G. N.

1, SANTOS, D. R.

1, SANTANA-FILHO, V. J.

2, BADAUÊ-

PASSOS, D. J. 1 NÚCLEO DE FISIOTERAPIA - UFS,

2 DEPARTAMENTO DE FISIOLOGIA -

UFS

Apoio Financeiro:

Resumo Objetivos Os fatores psicológicos associados à doença crônica desempenham um papel importante na determinação do impacto desta sobre o indivíduo, sendo assim, objetivamos nesse estudo avaliar a qualidade de vida e a presença de ansiedade e depressão entre os portadores da doença respiratória crônica internados no Hospital Universitário da Universidade Federal de Sergipe (HU/UFS). Métodos Foram utilizados instrumentos validados para língua portuguesa para quantificação de ansiedade e depressão, Hospital Anxiety and Depression Scale (HADS), e da qualidade de vida, Short Form 36 (SF-36). Para a análise estatística foi utilizado o teste t-Student e a correlação de Pearson. As variáveis categóricas foram descritas em porcentagem e as variáveis contínuas em média ± erro padrão da média. Adotou-se o nível de significância ≤ 5%. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa da Universidade Federal de Sergipe sob o nº 0053.0.107.000-11. Resultados No período de abril a outubro de 2011, foram avaliados 20 indivíduos portadores de doença pulmonar crônica internados no HU/UFS. Destes, 40% eram do sexo masculino e a idade média da população estudada foi de 58,5± 20,9. 70% possuíam diagnóstico de doença obstrutiva, 20% apresentavam sequela de tuberculose e 10% possuíam tumoração pulmonar. Dos indivíduos incluídos no estudo, apenas um tinha acompanhamento psicológico ambulatorial e/ou hospitalar. A pontuação média encontrada para ansiedade e depressão foi de 8.0 ± 4.5 e 7.0±4.8, respectivamente. Para o questionário SF-36, de maneira geral, observou-se comprometimento da qualidade de vida em todos os domínios do questionário, sendo que o menor escore médio alcançado foi para o domínio aspecto físico (17.5 ± 19.5). Para os indivíduos com tumoração pulmonar, foi observada diferença significativa na pontuação para o domínio aspecto emocional quando comparado com aqueles que não possuíam tal patologia (0.0 ± 0.0 versus 44.0 ± 41.5, respectivamente, p=0.001). A atividade física exerceu influência positiva no quesito dor do SF-36. Pois, os indivíduos que não realizavam exercício físico regular apresentaram pior pontuação neste domínio quando comparado aos que realizavam(38.5 ± 28.0 versus 80.5 ± 33.5, respectivamente p=0.032). Foi observada correlação fraca ou inexistente entre idade e pontuação na HADS e SF-36. De maneira contrária observou-se moderada correlação inversa entre ansiedade e os domínios vitalidade, aspecto social, aspecto emocional e saúde mental (r= -0.638 e p=0.02, r= -0.601 e p=0.05, r= - 0.610 e p=0.04, r= - 0.602 e p= 0.05, respectivamente). Acrescido a isto foi identificada presença de forte correlação entre depressão e a pontuação no domínio vitalidade e saúde mental da escala SF-36 (r= -0.826 e p < 0.001 e r= -0.847 e p < 0.001, respectivamente). Moderada correlação foi observada entre depressão e os domínios aspecto social e emocional (r=-0.557 e p=0.01 e 0.5583 e p=0.007, respectivamente). Conclusão A presença de ansiedade e depressão esteve associada com as doenças respiratórias crônicas e foi possível constatar que a doença pulmonar crônica interferiu negativamente na percepção subjetiva da qualidade de vida dos pacientes estudados.

FeSBE 2012

Resumo: 08.030

VENTILAÇÃO VARIÁVEL MINIMIZA HIPERDISTENSÃO ALVEOLAR EM RATOS VENTILADOS MECANICAMENTE

Autores

1CAMILO, L. M.

1, AVILA, M. B.

1, CRUZ, L. F.

1, MANCIN, V. G. L.

2, RIBEIRO, G. C. D. M.

1,

ZIN, W. A. 1, CARVALHO, A. R.

1 Instituto de Biofísica Carlos Chagas Fillho - UFRJ,

2 Instituto

Alberto Luiz Coimbra/COPPE - UFRJ

Apoio Financeiro: FAPERJ, CNPq

Resumo Objetivos Durante a anestesia geral e paralisia muscular, a ventilação mecânica com padrão monótono leva a uma progressiva deterioração da função pulmonar com significativo aumento da elastância pulmonar e queda da oxigenação arterial. Nosso objetivo foi avaliar os efeitos da adição de uma variabilidade extrínseca no volume corrente na estabilidade alveolar e ocorrência de hiperdistensão alveolar ao longo da inspiração em ratos ventilados mecanicamente. Métodos O estudo foi aprovado pelo Comitê de ética em pesquisa animal institucional (protocolo número IBCCF-012). Vinte e quatro ratos machos Wistar (2 meses de idade, 250 ± 30g) foram anestesiados, paralisados e ventilados mecanicamente em modo volume controlado (VT: 6 mL/kg, ZEEP, FR: 90 bpm, I:E: 1:2 e FiO2: 0,5). A PEEP de mínima elastância (PEEPminErs) foi obtida após uma manobra de recrutamento alveolar com sequencial aumento da PEEP para 3, 6, 7 e 8 cmH2O, 30 s/degrau, seguido de redução da PEEP até 0 cmH2O em passos 1 cmH2O, 30 s por passo. Em seguida, os animais foram ventilados por 2 horas com os mesmos parâmetros iniciais e a PEEP ajustada ao nível da PEEPminErs (VCV_E, n=4), e 2 cmH2O acima (VCV_E+2, n=4) ou abaixo (VCV_E-2, n=4) deste nível. Outros 18 animais foram ventilados em modo ventilação variável (VV) e níveis de PEEP ajustados com idêntico critério. A VV foi realizada ciclo-a-ciclo por uma sequência de volumes correntes oriundos de uma distribuição randômica com coeficiente de variação de 30% em relação ao VT médio de 6 ml/kg. As pressões de via aérea e esofagiana, fluxo aéreo e pressão arterial foram continuamente monitoradas. O volume foi calculado pela integração numérica do sinal de fluxo. A Ers foi estimada ciclo-a-ciclo pelo método dos mínimos quadrados, considerando o modelo Paw(t) = Rrs.F(t)+(E1 + E2V).V+EEP, onde Rrs e EEP são a resistência e a pressão quando fluxo e volume iguais a zero e F e V são o fluxo e o volume respectivamente. Neste modelo, a Ers é igual a E1 + E2VT e a fração da elastância dependente do volume (%E2) é igual a 100.[E2VT/(E1 + E2VT)]. Valores de %E2 maiores que 30% são indicadores de hiperdistensão cíclica. Os gases arteriais foram analisados 5 min após o ajuste da PEEP e ao final das 2 horas de cada estratégia ventilatória. Resultados A Ers aumentou em todos os grupos ao longo do período de ventilação. Contudo, a ocorrência de %E2 acima de 30% foi menor nos grupos ventilados com volume corrente variável independente do nível de PEEP ajustado (VCV_E: 2,2%; VCV_E-2: 8,4%; VCV_E+2: 75,4%; VV_E: 1,2%; VV_E-2: 0,007%; VV_E+2: 48,2%). Conclusão A adição de variabilidade foi capaz de minimizar a hiperdistensão alveolar em ratos ventilados mecanicamente. Isso sugere que, apesar da deterioração da Ers ocorrer, a ventilação variável parece minimizar a ocorrência de hiperdistensão pulmonar cíclica o que pode resultar em maior proteção pulmonar.

FeSBE 2012

Resumo: 08.031

Positive end-expiratory pressure at minimal respiratory system elastance is a surrogate for the mathematical inflection point of the pressure volume curve

Autores 1Cruz, L.F

2, SPIETH, P. M.

2, ABREU, M. G. D.

1, CARVALHO, A. R. S.

1 Carlos Chagas Filho

Biophysics Institute - UFRJ, 2 Department of Anesthesiology and Intensive Care Therapy - UHCGC

Apoio Financeiro: DFG, CNPq e FAPERJ.

Resumo Objetivos The open lung positive end-expiratory pressure (OLA-PEEP) has been proposed to avoid lung collapse and can be adjusted at the level of the upper inflection point (UIP) of the deflation limb of the pressure-volume (PV) curve. We hypothesized that despite sufficient to avoid collapse, such level of PEEP also generates overdistension. Thus, we hypothesized that the PEEP of minimal respiratory system elastance (PEEP-Ers) in a decremental PEEP trial with low tidal volume (VT) should be equivalent to the mathematical inflection point (MIP) of the PV curve and minimizes both PEEP-induced derecruitment and overdistension. Métodos The present study was approved by the Institutional Animal Care Committee. Twelve pigs (30 to 36 Kg) were sedated, anaesthetized (15-20 mg.kg -1 .h -1 ketamine and 1-2 mg.kg -1 .h -1 midazolam), paralyzed (0.5-2.5 mg.kg -1 .h -1 atracurium) and mechanically ventilated (EVITA 4Lab, Dräger Medical) in volume controlled ventilation (VCV) with VT of 6 ml/kg, FIO2 of 1.0, and respiratory rate (RR) to keep PaCO2 in 60 mmHg. Acute Lung Injury was then induced by repetitive lung lavages with 0.9% saline solution (37-39°C). Injury was considered stable if PaO2/FIO22O, 10 s per step in continuous positive airway pressure (CPAP) mode. Thereafter, a recruitment maneuver (RM) was performed (CPAP of 50 cmH2O, 50 s) and PEEP was progressively reduced from 24 to 0 cmH2O, in steps of 4 cmH2O, 10 min per step. A whole lung CT-scan was acquired during end-expiratory and -inspiratory breath-hold maneuvers at each PEEP level in six of the animals. In these animals, PV curve was obtained by taking whole-lung volume of air at each PEEP level. In the PV curve, airway pressure and volume were fitted to V = a+b/(1+e -(P+c)/d ), where the constant c is the MIP and UIP = c + 1.317.d. The volume of hyperinflated, normally, poorly and non-aerated areas were measured at each PEEP. The PEEP-Ers, calculated as the minimal Ers during PEEP trial, was also calculated. All variables were compared with one-ANOVA during PEEP trial, considering P < 0.05. Paired t-test was used for pairwise comparisons and multiple comparisons corrected by the Bonferroni method. CEA: 24D-9168.11-1-2005-26 Resultados UIP was significantly higher than PEEP-Ers (21.01 ± 3.69 vs 13.69 ± 2.86 cmH2O, P =6.1x10 -8 ) and MIP (vs 13.09 ± 2.58 cmH2O, P =4.8x10 -8 ). PEEP results in a significantly reduction in nonaerated areas ( < 2% of the TLV) but with a higher amount of hyperinflated areas (almost 13 % of the TLV). PEEP-Ers was equivalent to MIP and at this level, the amount of nonaerated areas was still lower than 5% TLV and less hyperinflated areas were observed. Conclusão PEEP at the level UIP of the deflation limb of the PV curve prevents alveoli collapse while exacerbate hyperinflation. PEEP-Ers is equivalent to MIP and results in a better balance between alveolar derecruitment, hyperinflation.

FeSBE 2012

Resumo: 08.032

Parede torácica limita a expansão pulmonar e exacerba repercussões hemodinâmicas em ratos Wistar ventilados com pressão positiva

Autores

1CARVALHO, N. S.

1, BERGAMINI, B. C.

2, ZIN, W. A.

1, GIANNELLA-NETO, A.

2,1,

CARVALHO, A. R. 1 Programa de Engenharia Biomédica - UFRJ,

2 Instituto de Biofísica Carlos

Chagas Filho - UFRJ

Apoio Financeiro: PRONEX/FAPERJ, FAPERJ, CNPq, MCT

Resumo Objetivos Em algumas espécies de animais a parede torácica pode limitar a expansão pulmonar e exacerbar as repercussões hemodinâmicas associadas à pressão positiva. Esta restrição, ao passo que limita a hiperdistensão pulmonar, pode agravar a hipotensão induzida pela PEEP. Neste estudo avaliamos a influência da parede torácica sobre as repercussões hemodinâmicas em ratos Wistar sob ventilação mecânica, durante a curva Pressão-Volume (PV) quase estática e diferentes níveis de PEEP. Métodos O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética para Uso de Animais do Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho (IBCCF-103). Dezesseis ratos Wistar, machos (345 ± 37 g), foram anestesiados, paralisados e ventilados mecanicamente (ajustes iniciais: VT = 6 ml/Kg, ZEEP, FR = 90 irpm, relação I:E = 1:2 em ar ambiente). A pressão arterial (PA) e a frequência cardíaca (FC) foram medidas continuamente. Após cinco minutos sob os ajustes iniciais, os parâmetros ventilatórios foram alterados para FR = 6 irpm, relação I:E = 4:1, VT = 30-45 ml/kg e cinco curvas PVs foram realizadas. Posteriormente, os parâmetros foram reajustados de acordo com os valores iniciais, e a PEEP foi sequencialmente ajustada em 0, 3, 7 e 8 cmH2O, 30 s por degrau, e em seguida reduzida de 8 para 4 e 0 cmH2O, 10 minutos por degrau, (Grupo Torax Fechado, TF, n = 16). Em seguida, os animais foram divididos em dois grupos: 1) Tórax Aberto (TA, parede torácica anterior removida com PEEP = 0 cmH2O, n= 8) 2) e Tórax Restrito (TR; parede torácica comprimida com uma pressão de 11,5 ± 0.5 cmH2O; n= 8). Nos dois grupos, todo o protocolo foi repetido como descrito anteriormente. As diferenças entre os grupos foram avalizadas pelo teste two-way ANOVA ( p < 0,05) e as comparações múltiplas foram corrigidas pelo método de Least Significant Difference. Resultados Durante as curvas PV, em todos os grupos foi observado uma importante hipotensão com redução da FC e da pressão de pulso (PP) durante a inspiração com subsequente recuperação ao final da expiração. Uma queda significativa na pressão arterial média (PAM) ao final da inspiração foi observada em relação ao início da inspiração e final da expiração (48,9±31,8,1 vs 99,5,7±20,5 e 100,8±32,1 mmHg; p < 0,01, respectivamente, no grupo TF; e 23,8±11,2 vs 69,5±16,1 e 76,0±16,3 mmHg; p < 0,01, respectivamente, no grupo TR . Houve um aumento da PAM, FC ePP nos três grupos com a redução da PEEP. A PEEP de 8 cmH2O, resultou em uma queda significativa na PAM no grupo TR (65,3±14,2 vs 93,5±20,1 mmHg; p < 0,04, PEEP de 8 vs 4 cmH2O; e 65,3±14,2 vs 95,9±21 mmHg; p < 0,04, PEEP de 8 vs 0 cmH2O. Conclusão Em ratos Wistar, a parede torácica parece exacerbar as repercussões hemodinâmicas relacionadas com a variação do volume e pressão intratorácicas com importante redução da PAM durante a curva PV e aumento da PEEP.

FeSBE 2012

Resumo: 08.033

AS ALTERAÇÕES NA MECÂNICA E HISTOLOGIA PULMONARES EM CAMUNDONGOS C57BL/6 INFECTADOS COM DIFERENTES CEPAS DE PLASMODIUM

Autores

1SENA, G. G. S.

1, RIVA, D. D. R.

2, REIS, P. A.

1, SILVA, D. V.

1, ALVES, J. L. C. R.

2, NETO, H.

C. D. C. F. 1, ZIN, W. A.

1 DEPARTAMENTO DE FISIOLOGIA RESPIRATÓRIA - UFRJ,

2

Departamento de Imunofarmacologia - FIOCRUZ

Apoio Financeiro: CNPq; FAPERJ; MCT

Resumo Objetivos Avaliar a mecânica e a histologia pulmonares em camundongos C57BL/6 infectados com Plasmodium berghei ANKA e Plasmodium berghei NK65 Métodos Camundongos C57BL/6 machos (11-24 g) foram inoculados intraperitonealmente (ip) com hemácias (RBC) infectadas com P. berghei ANKA (grupo PBA), P. berghei NK65 (grupo PBNK) ou receberam apenas RBC (grupo RBC). A mecânica pulmonar foi determinada 3 ou 7 dias (D3 e D7, respectivamente) após a inoculação. Os pulmões foram retirados para a análise histológica. CEA: P-0528/08. Resultados Em D3, a mecânica não demosntrou diferença significativa entre os grupos analisados. No dia 7, o grupo PBNK apresentou maior elastância estática (71,5 ± 8,2 cmH2O/ml) do que o grupo RBC (21,8 ± 0,9 cmH2O/ml). Em D7 PBA também apresentou maior elastância estática (40,8 ± 0,8 cmH2O/ml) do que RBC (21,8 ± 0,9 cmH2O/ml). O componente viscoelástico da elastância e pressão inomogênea nos grupos PBNK (10,6 ± 2,2 cmH2O/ml e 1,9 ± 0,4 cmH2O, respectivamente) e PBA (5,1 ± 0,2 cmH2O/ml e 1,1 ± 0,05 cmH2O, respectivamente) também se mostraram maiores do que RBC em D7 (3,2 ± 0,1 cmH2O/ml e 0,7 ± 0,03 cmH2O, respectivamente). Não houve diferença das pressões resistiva e resistiva total entre os grupos analisados. O grupo PBNK no dia 7 apresentou maior relação de área de fibras elásticas/tecido pulmonar (24,9 ± 5,95%) do que o grupo PBA (12,3 ± 1,61%). Em D3 não houve diferença desta entre os grupos Conclusão A exposição ao P. berguei NK65 levou ao comprometimento da função pulmonar com remodelamento do tecido 7 dias após a inoculação. Os outros modelos não resultaram lesão pulmonar. Assim, a malária pode causar alterações pulmonares, que ainda precisam ser avaliadas no intuito de verificar, ou não, sua persistência.

FeSBE 2012

Resumo: 08.034

REPERCUSSÕES PULMONARES DO USO DE ESTRATÉGIA VENTILATÓRIA BASEADA NA ESTIMATIVA MATEMÁTICA DE HIPERDISTENSÃO

Autores 1AVILA, M. B.

1, CAMILO, L. M.

1, CRUZ, L. F.

1, MANCIN, V. G.

1, ZIN, W. A.

1, CARVALHO,

A. R. 1 Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho - UFRJ

Apoio Financeiro: Faperj

Resumo Objetivos OBJETIVOS: avaliar quais os custos funcionais e estruturais pulmonares após uso de estratégias ventilatórias que provocam ou previnem hiperdistensão. Métodos MÉTODOS: Dezesseis ratos wistar machos foram paralisados e mecanicamente ventilados no modo volume controlado com volume corrente de 6 mL/Kg, ZEEP, e FiO2 de 0,5. Manobra de recrutamento alveolar foi realizada por meio da elevação gradual da PEEP em 3, 6, 7 e 8 cmH20, permanecendo 30 s em cada degrau; essa manobra é seguida pela titulação da PEEP onde há decréscimo da PEEP em 1 cmH20 até 0 cmH2O, 30 s em cada degrau, e posteriormente é realizada nova manobra de recrutamento. Os animais foram, então, divididos em 3 grupos de acordo com a estratégia de titulação da PEEP utilizada, permanecendo em ventilação mecânica por 2 horas: NEG (ventilados com PEEP onde %E2 < 0 , n=4); MEIO (ventilados com PEEP onde %E2 >0 e 30, n=5). Pressão do sistema respiratório e esofágica, fluxo, pressão arterial e frequência cardíaca foram continuamente monitoradas. A mecânica respiratória foi estimada ciclo a ciclo pelo método dos mínimos quadrados, com base no modelo unicompartimental e não linear. A gasometria arterial foi analisada após 5 e 120 minutos de ventilação. Após o protocolo de ventilação mecânica, os pulmões foram retirado e fixado em formol, posteriormente foram cortados e corados com hematoxilina-eosina para análise morfométrica do parênquima pulmonar. Este trabalho foi aprovado pelo comitê de ética do IBCCF com número 012. Resultados RESULTADOS: Ao final das 2 horas de ventilação todos os grupos tendem a piorar a mecânica respiratória, com o aumento da elastância (44,8; 45 e 16,6 % de aumento no grupos NEG, MEIO e MAX, respectivamente), entretanto, nos grupos com maior %E2 esse aumento é menos expressivo. Por outro lado, %E2 tende a manter-se estável em todos os grupos após 2 horas de ventilação. Análise qualitativa dos cortes histológicos evidenciaram dando estrutural ao parênquima pulmonar com áreas de colapso alveolar e ruptura de septo. Conclusão CONCLUSÃO: Quanto maior o %E2 mais estável se torna o sistema respiratório durante a ventilação mecânica, entretanto isto não previne consequências estruturais ao parênquima pulmonar.

FeSBE 2012

Resumo: 08.035

EXPOSIÇÃO AO OXIGÊNIO POR 24 HORAS INDUZ MONOCITOSE EM CAMUNDONGOS BALB/C, MAS NÃO EM CAMUNDONGOS C57BL/6

Autores

2NAGATO, A. C.

1, NARDELI, C. R.

1, SILVA, M. A. D. S.

1, TRAJANO, E. T. L.

2, BEZERRA, F.

S. 1 Centro de Ciências da Saúde - Laboratório de Biomorfologia e Patologia Experimental - USS,

2

Dep. de Ciências Biológicas - Laboratório Bioquímica Metabólica - UFOP

Apoio Financeiro: FAPERJ

Resumo Objetivos Porque o oxigênio medicinal administrado em concentrações suprafisiológicas por longo tempo tem sido mencionado como indutor de inflamação, apoptose, estresse e dano oxidativo, mediado por espécies reativas de oxigênio e nitrogênio, e porque é frequentemente utilizado em baixas doses e curto período de tempo para reverter, prevenir ou tratar hipoxemia, o objetivo do estudo foi verificar se o tecido sanguíneo de camundongos de diferentes linhagens responde de forma diferente à exposição ao oxigênio em baixa dose e curto período de tempo. Métodos O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética para o Uso de Animais Experimentais da USS (No. USS/CEUA N°004/2011). Camundongos BALB/c e C57BL/6, machos, de 6-8 semanas, foram randomicamente selecionados em quatro grupos: Grupo Controle BALB/c (GC-BALB/c; n=10) e Grupo Controle C57Bl/6 (GC-C57Bl/6; n=4), que permaneceram em ar ambiente; Grupo Hiperóxia BALB/c (GH- BALB/c; n=10) e Grupo Hiperóxia C57Bl/6 (GH-C57Bl/6; n=6), que permaneceram por 24 horas em uma câmara de inalação, com fluxo contínuo de oxigênio de 3L/min. Ao término do experimento, os animais foram sacrificados, o sangue central foi coletado através de punção cardíaca. Foram investigadas as diferenças morfológicas dos eritrócitos, realizada a contagem com diferenciação de leucócitos, através do esfregaço sanguíneo. E o hematócrito foi calculado pela razão entre a altura da coluna de eritrócitos pela altura da coluna de sangue total, em tubos microcapilares, sacaneados e digitalizados (Image Pro-Plus 4.5). Os resultados foram expressos em média ± erro padrão. A diferença entre os dados foi analisada através do Teste T com correção de Welch ( p < 0,05). Resultados A comparação entre os grupos controle e hiperóxia, mostrou que não foi possível observar alterações na morfologia dos eritrócitos, no hematócrito (GC-BALB/c: 51,29 ±1,86 %; GH-BALB/c: 50,15 ±0,83 %; p= 0,59; GC-C57Bl/6: 47,00 ±4,04 %; GH-C57Bl/6: 53,25 ±2,09 %; p= 0,26), e na porcentagem de neutrófilos (GC-BALB/c: 33,00 ±3,59%; GH- BALB/c: 32,16 ±2,97%; p= 0,85; GC-C57Bl/6: 49,50 ±3,07 %; GH-C57Bl/6: 50,14 ±4,33 %; p= 0,90) e linfócitos (GC-BALB/c: 55,00 ±3,35 %; GH-BALB/c: 54,47 ±3,70 %; p= 0,91; GC-C57Bl/6: 43,13 ±2,58 %; GH-C57Bl/6: 40,29 ±4,29 %; p= 0,58). Houve monocitose somente na linhagem BALB/c exposto à hiperóxia (GC-BALB/c: 9,60 ±1,47 %; GH- BALB/c: 14,35± 1,70 %; p= 0,04; GC-C57Bl/6: 7,00 ±1,13 %; GH-C57Bl/6: 9,42 ±1,02 %; p= 0,13). Conclusão A exposição ao oxigênio por 24 horas induziu monocitose em camundongos BALB/c sem modificar o hematócrito e a morfologia dos eritrócitos.