clotest rapid urease test - halyard1. after removing the clotest* rapid urease test slide from...

CLOtest*

RAPID UREASE TEST

Instructions for Use

Rx Only

In Vitro Diagnostic Medical Device Negative ControlPositive Control

CautionConsult instructions for use

TemperatureLimitation

48°F8°C

2°C36°F

CONTROL CONTROLIV D

Instructions for UseRx Only: Federal Law (USA) restricts this device to sale by or on the order of a physician.

Intended UseThe CLOtest* Rapid Urease Test (RUT) accurately and conveniently detects the urease enzyme of Helicobacter pylori in gastric mucosal biopsies. Its use is intended for the presumptive diagnosis of H. pylori infection.Note: For in vitro diagnostic use.CLOtest* is CLIA ‘88 waived.

SummaryBarry Marshall, M.D. developed the CLOtest*1. Its name originated from “Campylobacter-Like Organism” test2. Drs. Robin Warren and Marshall first cultured the bacterium from antral biopsies in 1982 calling it a Campylobacter–like bacterium3. Subsequently, the genus was named Helicobacter, meaning spiral or helical bacteria2.H. pylori has been shown to cause active chronic gastritis4 and is a risk factor for gastric cancer5 and mucosal-associated-lymphoid-type (MALT) lymphoma6. The eradication of H. pylori is effective in eliminating or reducing the recurrence of ulcers and may also lower the risk of gastric cancer7,8.

Product Description and StorageCLOtest* is a well of urease indicator gel sealed inside a plastic slide. The gel contains urea, USP (29 mg/mL) phenol red (a pH indicator), buffers and a bacteriostatic agent to prevent the growth of contaminating urease-positive organisms. If the urease from H. pylori is present in the tissue sample, it changes the gel from yellow to bright magenta according to the following reaction:

urea water acid ammonium bicarbonate

The CLOtest* RUT has a shelf life of 18 months when stored at 2° –8°C (36°–48°F). The product expires on the last day of the month indicated on the package. Do not use the product if the gel is not yellow, if the seal is damaged and the gel appears dehydrated, or if the expiration date has passed. For further questions, call 1-844-425-9273 before using the CLOtest*.

Patient PreparationThe patient should discontinue the use of antibiotics and bismuth preparations three weeks before the biopsy. These agents may suppress but not eradicate the presence of H. pylori making the organism difficult to detect by any means. The patient should not have ingested proton pump inhibitors two weeks prior to the

e

HALYARD* CLOtest*Rapid Urease Test

NH2

C = O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

NH2

urea

urease

water acid ammonium bicarbonate

4

test as these drugs have been shown to inhibit growth of the organism in some persons.

The Biopsy1. The recommended gastric area to biopsy is at least 2 cm away from the pylorus

along the lesser or greater curve of the antrum. Excise tissue that appears normal – avoid tissue that is eroded or ulcerated as H. pylori may be present in smaller numbers around those areas. A standard biopsy forceps should render a specimen of sufficient size for the test.

2. If desired, an additional sample may be inserted into a single CLOtest* well. Do not contaminate the second specimen with blood from the first biopsy site.

Specimen Collection and Handling1. After removing the CLOtest* rapid urease test slide from refrigeration, lift the

label far enough to expose the yellow gel. For faster test results, allow the gel to reach room temperature before inserting the biopsy (usually between 7–10 minutes).

2. With a clean applicator device (e.g., toothpick etc.) push the entire sample from the forceps beneath the surface of the gel to expose as much of the specimen to the gel as possible. Make sure that the biopsy specimen is completely immersed in the gel.

3. Re-seal the pressure-sensitive label on the slide and record the patient name, date, and time the biopsy sample was inserted.

4. If desired, the CLOtest* slide may be put on a warming plate at a temperature between 30°–40°C (86°–104°F). Although the warming plate may speed the reaction time and provide faster results, its use is optional and will not affect the test accuracy. If the warming plate is used, the slide should be heated no more than three hours, then it should be stored at room temperature until the final reading.

5. Record a positive reaction as soon as the gel changes color. Once a positive reaction has occurred no further reading is necessary. 75% of positive tests change color within 20 minutes (Fig.1).

Figure 1:CLOtest* Rapid UreaseTest positive reactiontime chart.

Time (minutes)

Interpretation of Results1. A specimen contaminated with blood may stain the gel around the edge of the

tissue. This is NOT a positive test. If the biopsy contains urease, the change first appears around the sample and eventually colors all of the gel.

2. The pH change in a positive test is first seen at the inter-face of the gel and the biopsy. If a significant amount of urease is present the visible change is rapid. Any color change of the whole gel to a shade other than yellow (e.g., red, magenta, pink, deep orange) indicates the presence of H. pylori.

3. A negative test remains yellow after imbedding the tissue into the gel. If the

5

15-H1-209-0-00• DFU Folded Size: 2.5” x 8.5” • Prints PMS 295

color of the gel is yellow at 24 hours, the test is negative. If unable to be read at 24 hours, the test will remain valid for 72 hours after insertion of the biopsy into the gel medium. For example, if a test performed on Friday has not changed color by the end of the day, it may be stored at room temperature and read on Monday.

Fail-Safe Protocol (For Clia Waiver Requirements)With each negative test, perform the following positive control to ensure the CLOtest* RUT is working properly:1. Insert a urease tablet (Halyard catalog #60407) into the CLOtest* gel and re-seal

the slide.2. After five minutes, inspect the gel for a positive color change (red or magenta).3. If the gel does not turn to red or magenta, notify Halyard at 1-844-425-9273.

Performance CharacteristicsThe CLOtest* RUT detects 75% of H. pylori infections within 20 minutes with no false positives1. By one hour 85% of positive patients will be detected by CLOtest*, and at three hours 90% are detected. Between 3 and 24 hours CLOtest* will detect another 5% of patients. In the then largest U.S. Study reported to date, Dye et al took antral biopsies, one each for histology (Giemsa stain) and CLOtest* from 122 consecutive routine endoscopy patients at the University of Virginia9. Eighty-two patients also had specimens cultured. The results obtained are shown in the table below.

Table 1: CLOtest* Study, Dye et al, University of Virginia True + True - False + False -CLOtest* n=121 46 72 2 1Histology n=122 43 74 5Culture n=82 23 49 10

Sensitivity SpecificityCLOtest* 98% 97%Histology 91% 100%Culture 70% 100%Similar results were noted by Schnell et al in Missouri10.

Limitations of Rapid Urease Tests, Histology, and CulturePossible causes for False Negatives• Very low numbers of H. pylori in the tissue sample • Patchy H. pylori distribution so that the organism is not captured in the tissue

sample• A sample of intestinal metaplasia – (H. pylori does not colonize intestinal

mucosa)• Recent ingestion of antibiotics, bismuth, proton pump inhibitors, or sucralfate

which can inhibit the organism• Formalin contamination of the sample

Possible causes for False Positives• When the test is properly performed, false positives are rare. Late false positive

reactions (>12 hours) may be caused by failure to completely insert the biopsy into the gel so that contaminating organisms can grow in the tissue.

• Theoretically, a false positive could occur in patients who have achlorhydria

6

from bacterial overgrowth. This could be the result of the following conditions: pernicious anemia, previous gastric surgery, or recent use of proton pump inhibitor drugs. However, other bacteria produce much less urease than H. pylori and should not cause a rapid color change.

If there are factors that might adversely affect the performance of the CLOtest* rapid urease test, consider other diagnostic measures such as a urea breath test and serology in order to exclude a diagnosis of H. pylori.

Bibliography1. Marshall BJ, Warren JR, Francis GJ, Langton SR, Goodwin CS, Blincow E. Rapid urease test in

the management of Campylobacter pyloridis-associated gastritis. Am J Gastroenterol 1987; 82(3):200-210.

2. Goodwin CS, Armstrong JA, Chilvers T, et al. Transfer of Campylobacter pylori and Campylobacter mustelae to Helicobacter gen nov. as Helicobacter pylori comb. nov. and helicobacter mustelae comb. nov., Respectively. Int J Sys Bacteriol 1989; 39:397-405.

3. Marshall BJ, Royce H, Annear DI, Goodwin CS, Pearman JW, Warren JR, Armstrong JA. Original isolation of Campylobacter pyloridis from human gastric mucosa. Microbios Lett 1984; 25:83-88.

4. Marshall BJ, McGechie DB, Rogers PAR, Giancy RG. Pyloric Campylobacter Infection and gastroduodenal disease. Med J Aust 1985; 149:439-44.

5. Parsonnet J, Friedman GD, Vandersteen DP, et al. Helicobacter pylori infection and the risk of gastric carcinoma. N Engl J Med 1991; 325:1127-1131.

6. Wotherspoon AC, Ortiz Hidalgo C, Falzon MR, Isaacson PG. Helicobacter pylori-associated gastritis and primary B-cell gastric lymphoma. Lancet 1991; 338: 1175-6.

7. Marshall BJ, Goodwin CS, Warren JR, et al. Prospective doubleblind trial of duodenal ulcer relapse after eradication of Campylobacter pylori. Lancet 1988; 2:1437-42.

8. Uemura N, Mukai T, Okamoto S, et al. Effect of Helicobacter pylori eradication on subsequent development of cancer after endoscopic resection of early gastric cancer. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 1997; 6:8, 639-42.

9. Dye KR, Marshall BJ, Frierson HF, Barrett LJ, Guerrant RL, McCallum RW. Is CLOtest* alone adequate to diagnose Campylobacter pylori? Am J Gastroenterol 1988; 83:1032 (abstract).

10. Schnell GA, Schubert TT, Barnes WG, Rupani MK, Comparison of urease, H&E, and culture tests for Campylobacter pylori. Gastroenterology 1988; 94(5): A410 (abstract).

7


Mode d’emploi Rx Only: Sur ordonnance uniquement : aux États-Unis, la loi fédérale restreint la vente de ce dispositif par un médecin ou sur son ordonnance.

Utilisation prévueLe test rapide à l’uréase (TRU) CLOtest* détecte facilement et avec précision l’enzyme uréase de Helicobacter pylori dans les biopsies de la muqueuse gastrique. Son utilisation est destinée au diagnostic de présomption d’une infection à H. pylori. Remarque : Pour une utilisation diagnostique in vitro.CLOtest* renonce à la réglementation CLIA ‘88.

RésuméBarry Marshall, Docteur en médecine, a développé le CLOtest*1. Son nom provient du test “Campylobacter-Like Organism” test2. Les docteurs Robin Warren et Marshall ont assuré la première culture de la bactérie à partir de biopsies antrales dès 1982, en lui attribuant le nom de bactérie semblable au campylobacter3. Ultérieurement, le genre prit le nom de Helicobacter, signifiant une bactérie en spirale ou en hélice2.Il a été prouvé que H. pylori est à l’origine de gastrites en évolution4 et reste un facteur de risque quant aux cancers de l’estomac5 et aux lymphomes MALT (type de tissus lymphoïdes associés aux muqueuses)6. L’éradication de H. pylori est efficace dans l’élimination ou la réduction de récidive des ulcères et peut aussi diminuer les risques de cancer de l’estomac7,8.

Description du produit et entreposageLe CLOtest* se présente sous la forme d’une cupule de gel indicateur d’uréase, scellée à l’intérieur d’une microplaquette en plastique. Le gel contient de l’urée, du rouge de phénol (un indicateur de pH) de qualité USP (29 mg/ml), des tampons et un agent bactériostatique afin d’éviter la prolifération d’organismes contaminateurs positifs à l’uréase. Si l’uréase issue de H. pylori se trouve présente dans un échantillon biologique, elle modifie la couleur jaune du gel en magenta vif, selon la réaction suivante:

urée eau acide ammonium bicarbonate

La durée de conservation du TRU CLOtest* est de 18 mois s’il est conservé entre 2° et 8 °C (36° et 48 °F). Le produit expire le dernier jour du mois indiqué sur l’emballage. Ne pas utiliser ce produit si le gel n’est pas de couleur jaune, si le sceau est endommagé et si le gel semble déshydraté, ou si la date de péremption est dépassée. Pour de plus amples informations, appeler le 1-844-425-9273 avant d’utiliser le CLOtest*.

f

HALYARD* CLOtest* Test rapide à l’uréase

NH2

C = O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

NH2

urea

urease


uréase

8

Préparation du patientLe patient doit interrompre l’utilisation d’antibiotiques et de préparations au bismuth trois semaines avant la biopsie. Ces agents peuvent supprimer, mais sans éradication, la présence de H. pylori, rendant l’organisme difficile à détecter quel que soit le moyen utilisé. Le patient ne doit pas avoir ingéré d’inhibiteurs de la pompe à protons dans les deux semaines précédant le test, car ces médicaments ont prouvé qu’ils étaient en mesure de bloquer la croissance de cet organisme chez certaines personnes.

Biopsie1. La zone gastrique recommandée pour pratiquer la biopsie se situe à au moins

2 cm du pylore, le long de la petite ou de la grande courbe de l’antre. Pratiquer une excision sur du tissu apparaissant normal – éviter les tissus érodés ou ulcérés, car le H. pylori peut être présent en quantité inférieure autour de ces zones. Une pince à biopsie classique doit pouvoir fournir un spécimen de taille suffisante pour le test.

2. Au besoin, un échantillon supplémentaire peut être inséré dans une seule cupule CLOtest*. Ne pas contaminer le deuxième spécimen avec du sang provenant du premier site de biopsie.

Collecte et manipulation des spécimens1. Après avoir sorti de son lieu réfrigéré de conservation la microplaquette de test

rapide à l’uréase CLOtest*, soulever suffisamment l’étiquette afin d’exposer le gel jaune. Pour des résultats plus rapides, laisser au gel le temps d’atteindre la température ambiante avant d’insérer le spécimen de biopsie (généralement entre 7 et 10 minutes).

2. Avec un applicateur propre (un cure-dent, par exemple), pousser le spécimen entier de la pince à biopsie jusque sous la surface du gel afin de le mettre en contact avec le gel autant que possible. S’assurer que le spécimen de biopsie se trouve totalement immergé dans le gel.

3. Réappliquer l’étiquette auto-adhésive sur la microplaquette et prendre note du nom du patient, ainsi que de l’heure à laquelle le prélèvement a été inséré.

4. Au besoin, la microplaquette CLOtest* peut être placée sur une plaque chauffante à une température comprise entre 30° et 40 °C (86° et 104 °F). Même si la plaque chauffante accélère la vitesse de la réaction et fournit plus rapidement des résultats, son utilisation reste facultative et n’affecte en aucun cas la précision du test. Si la plaque chauffante est utilisée, la microplaquette ne doit pas être réchauffée plus de trois heures et elle doit être ensuite conservée à température ambiante jusqu’à la mesure finale.

5. Prendre note de la réaction positive aussitôt que le gel change de couleur. Après qu’une réaction positive se soit produite, aucune autre lecture n’est nécessaire. 75 % des tests positifs changent de couleur en moins de 20 minutes (Fig.1).

Figure 1 :Tableau des durées de réaction positive du test rapide à l’uréase CLOtest*

Durée (minutes)

9


Interprétation des résultats1. Un spécimen contaminé avec du sang peut tacher le gel autour des bords

du tissu. Il ne s’agit PAS d’un test positif. Si la biopsie contient de l’uréase, le changement apparaît d’abord autour de l’échantillon et colorie éventuellement tout le gel.

2. Le changement de pH d’un test positif apparaît en premier lieu au niveau de la surface de séparation du gel et de la biopsie. Si une quantité significative d’uréase est présente, le changement visible est rapide. Toute modification de la couleur de la totalité du gel en une teinte autre que jaune (c’est-à-dire, rouge, magenta, rose ou orange foncé) indique la présence de H. pylori.

3. Un test négatif reste jaune après avoir introduit le tissu dans le gel. Si la couleur du gel reste jaune après vingt-quatre heures, le test est négatif. S’il ne peut pas être lu au-delà de 24 heures, le test restera valide pendant les 72 heures après insertion de la biopsie dans le gel. Par exemple, si un test réalisé le vendredi n’a pas changé de couleur à la fin de la journée, il peut être stocké à la température ambiante et interprété le lundi.

Protocole de sécurité (pour les exigences de renoncement CLIA)Avec chaque test négatif, exécuter le contrôle positif suivant afin de s’assurer que le TRU CLOtest* fonctionne correctement :1. Insérer une tablette d’uréase (n° de référence Halyard 60407) dans le gel

CLOtest* et refermer la microplaquette.2. Cinq minutes plus tard, vérifier le gel à la recherche d’une modification positive

de la couleur (rouge ou magenta).3. Si le gel ne devient pas rouge ou magenta, aviser Halyard au 1-844-425-9273.

Caractéristiques des performancesLe TRU CLOtest* détecte 75 % des infections à H. pylori en moins de 20 minutes sans faux résultat positif1. Après 1 heure, 85 % des patients positifs sont détectés par le CLOtest* et 90 % le sont en moins de trois heures. Entre 3 et 24 heures, CLOtest* détecte encore 5 % des patients. Au cours de la plus grosse étude effectuée aux États-Unis jusqu’à présent, Dye et ses collaborateurs réalisèrent des biopsies antrales, une à titre histologique (coloration Giemsa) et une destinée au CLOtest*, à partir de 122 endoscopies consécutives de routine chez des patients de l’université de Virginie9. Des spécimens en provenance de quatre-vingt-deux patients furent mis en culture. Les résultats obtenus sont présentés dans le tableau suivant.Tableau 1 : Étude sur le CLOtest*, Dye et ses collaborateurs, Université de Virginie Vrai + Vrai – Faux + Faux – CLOtest* n=121 46 72 2 1Histologie n=122 43 74 5Culture n=82 23 49 10

Sensibilité SpécificitéCLOtest* 98 % 97 %Histologie 91 % 100 %Culture 70 % 100 %Des résultats similaires ont été enregistrés par Schnell et son équipe dans le Missouri10.

10

Limitations des tests rapides à l’uréase, histologie et culturesCauses possibles de résultats faux négatifs• Une très faible quantité de H. pylori dans l’échantillon tissulaire • Répartition irrégulière de H. pylori ce qui empêche la capture de l’organisme dans

l’échantillon tissulaire• Un échantillon de métaplasie intestinale – (H. pylori ne s’implante pas sur la

muqueuse intestinale)• Ingestion récente d’antibiotiques, de bismuth, d’inhibiteurs de pompes à protons

ou de sucralfates pouvant inhiber l’organisme• Contamination de l’échantillon par le formol

Causes possibles de résultats faux positifs• Si le test est correctement exécuté, les résultats faux positifs sont rares. Des

réactions fausses positives tardives (+ de 12 heures) peuvent avoir pour origine une insertion incomplète de la biopsie dans le gel permettant aux organismes contaminateurs de se développer dans le tissu.

• Théoriquement, un résultat faux positif peut se produire chez des patients avec une achlorhydrie provenant d’un surdéveloppement bactérien. Ceci peut être le résultat des conditions suivantes : anémie pernicieuse, chirurgie gastrique antérieure ou utilisation récente de médicaments inhibiteurs de la pompe à protons. Néanmoins, d’autres bactéries produisent beaucoup moins d’uréase que H. pylori et ne devraient provoquer aucun changement rapide de couleur.

S’il existe d’autres facteurs pouvant affecter de manière défavorable les performances du test rapide à l’uréase CLOtest*, étudier d’autres mesures diagnostiques, telles que le test respiratoire de l’urée et la sérologie, afin d’exclure un diagnostic de H. pylori.

Bibliographie1. Marshall BJ, Warren JR, Francis GJ, Langton SR, Goodwin CS, Blincow E. Rapid urease test

in the management of Campylobacter pyloridis-associated gastritis (Test rapide à l’uréase dans la gestion des gastrites associées à Campylobacter pyloridis). Am J Gastroenterol 1987; 82(3):200-210.

2. Goodwin CS, Armstrong JA, Chilvers T, et al. Transfer of Campylobacter pylori and Campylobacter mustelae to Helicobacter gen nov. as Helicobacter pylori comb. nov. and helicobacter mustelae comb. nov., Respectively (Transfert de Campylobacter pylori et Campylobacter mustelae à Helicobacter gen nov. comme Helicobacter pylori comb. nov. et helicobacter mustelae comb. nov., respectivement). Int J Sys Bacteriol 1989; 39:397-405.

3. Marshall BJ, Royce H, Annear DI, Goodwin CS, Pearman JW, Warren JR, Armstrong JA. Original isolation of Campylobacter pyloridis from human gastric mucosa (Isolement initial de Campylobacter pyloridis à partir de muqueuse gastrique humaine). Microbios Lett 1984; 25:83-88.

4. Marshall BJ, McGechie DB, Rogers PAR, Giancy RG. Pyloric Campylobacter Infection and gastroduodenal disease (Infection à Campylobacter pylori et maladie gastroduodénale). Med J Aust 1985; 149:439-44.

5. Parsonnet J, Friedman GD, Vandersteen DP, et al. Helicobacter pylori infection and the risk of gastric carcinoma (Infection à Helicobacter pylori et risque de carcinome gastrique). N Engl J Med 1991; 325:1127-1131.

6. Wotherspoon AC, Ortiz Hidalgo C, Falzon MR, Isaacson PG. Helicobacter pylori-associated gastritis and primary B-cell gastric lymphoma (Gastrite associée à Helicobacter pylori et lymphome gastrique primaire à cellules B). Lancet 1991; 338: 1175-6.

11


Bibliographie (suite) :7. Marshall BJ, Goodwin CS, Warren JR, et al. Prospective doubleblind trial of duodenal ulcer

relapse after eradication of Campylobacter pylori (Étude prospective en double aveugle de rechute d’ulcère duodénal après éradication de Campylobacter pylori). Lancet 1988; 2:1437-42.

8. Uemura N, Mukai T, Okamoto S, et al. Effect of Helicobacter pylori eradication on subsequent development of cancer after endoscopic resection of early gastric cancer (Effet de l’éradication de Helicobacter pylori sur le développement ultérieur de cancer après resection endoscopique d’un cancer gastrique précoce). Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 1997; 6:8, 639-42.

9. Dye KR, Marshall BJ, Frierson HF, Barrett LJ, Guerrant RL, McCallum RW. Is CLOtest* alone adequate to diagnose Campylobacter pylori? (Le CLOtest* à lui tout seul est-il suffisant pour diagnostiquer le Campylobacter pylori ?) Am J Gastroenterol 1988; 83:1032 (abstract).

10. Schnell GA, Schubert TT, Barnes WG, Rupani MK, Comparison of urease, H&E, and culture tests for Campylobacter pylori (Comparaison des tests d’uréase, H&E et de cultures pour Campylobacter pylori). Gastroenterology 1988; 94(5): A410 (abstract).

12

Gebrauchsanweisung Rx Only: Verschreibungspflichtig: Laut US-amerikanischem Recht darf dieses Produkt nur von einem Arzt oder auf Anweisung eines Arztes verkauft werden.

IndikationDer CLOtest* Urease-Schnelltest (UST) entdeckt akkurat und schnell das von Helicobacter pylori produzierte Enzym Urease in Biopsien der Magenschleimhaut. Seine Anwendung ist zur Diagnose bei Verdacht auf eine Infektion durch H. pylori indiziert. Hinweis: Zur diagnostischen Anwendung in vitro.CLOtest* wurde gemäß CLIA ’88 (Clinical Laboratory Improvement Amendments of 1988) freigegeben.

ZusammenfassungCLOtest* wurde von Dr. Barry Marshall entwickelt.1 Der Name leitet sich von „Campylobacter-Like Organism“-Test ab.2 Dr. Robin Warren und Dr. Marshall legten 1982 als erste eine Kultur des Bakteriums aus Antralbiopsien an und nannten es ein „Campylobacter–ähnliches Bakterium“.3 Später wurde die Art Helicobacter genannt, was so viel bedeutet wie spiral- oder helixförmige Bakterien.2

H. pylori wurde als Auslöser von aktiver chronischer Gastritis4 nachgewiesen und stellt einen Risikofaktor für Magenkrebs5 und schleimhautbedingte lymphartige (MALT) Lymphoma6 dar. Die Beseitigung von H. pylori trägt nachweislich zur Elimination oder Reduktion von Geschwüren bei und kann außerdem das Risiko von Magenkrebs senken.7,8

Produktbeschreibung und -lagerungCLOtest* ist eine in einem Plastikobjektträger versiegelte Schale mit flüssigem Urease-Indikatorgel. Das Gel enthält Harnstoff, USP (29 mg/ml) Phenolrot (einen pH-Indikator), Pufferstoffe sowie einen bakteriostatischen Wirkstoff, der das Wachstum der kontaminierenden Urease-positiven Organismen verhindert. Wenn die Urease von H. pylori in der Gewebeprobe vorhanden ist, ändert das Gel seine Farbe von gelb zu hellrot und reagiert auf die folgenden Stoffe:

Harnstoff Wasser Säure Ammonium Bicarbonat

Der CLOtest*-UST kann bis zu 18 Monate bei 2–8 °C gelagert werden. Das Verfallsdatum des Produkts ist der letzte Tag des auf der Packung angegebenen Monats. Das Produkt nicht verwenden, wenn das Gel nicht gelb ist, wenn die Versiegelung beschädigt oder das Gel dehydriert erscheint, oder wenn das Verfallsdatum abgelaufen ist. Auskunft zu weiteren Fragen vor der Verwendung von CLOtest* ist unter den folgenden Rufnummern erhältlich: 1-844-425-9273.

g

HALYARD* CLOtest*Urease-Schnelltest

NH2

C = O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

NH2

urea

urease


Urease

13


Vorbereitung des PatientenDer Patient sollte drei Wochen vor der Biopsie eventuelle Antibiotika und Bismut-Präparate absetzen. Diese Wirkstoffe können die Präsenz von H. pylori unterdrücken, jedoch nicht ganz eliminieren, was den Nachweis des Organismus in jedem Fall erschwert. Der Patient sollte zwei Wochen vor dem Test keine Protonenpumpenhemmstoffe mehr einnehmen, da sich solche Medikamente bei einigen Personen als wachstumshemmend für den Organismus erwiesen haben.

Die Biopsie1. Der für die Biopsie empfohlene Magenbereich liegt mindestens 2 cm vom

Pylorus entfernt, entlang der kleineren oder größeren Kurve des Antrums. Normal erscheinendes Gewebe exzisieren und erodiertes oder von Geschwüren befallenes Gewebe vermeiden, da in diesen Bereichen kleine Mengen von H. pylori vorhanden sein können. Mit einer Standard-Biopsiezange sollten sich ausreichend große Proben für den Test entnehmen lassen.

2. Bei Bedarf kann eine zusätzliche Probe in eine separate CLOtest*- Schale gelegt werden. Die zweite Probe nicht mit Blut aus der ersten Biopsiestelle kontaminieren.

Probenentnahme und -handhabung1. Nach Entnahme des CLOtest*-UST-Objektträgers aus dem Kühlschrank das

Etikett weit genug anheben, um das gelbe Gel freizulegen. Es lassen sich schnellere Testergebnisse erzielen, wenn das Gel vor dem Einsetzen der Biopsieprobe Zimmertemperatur erreicht hat (in der Regel nach 7 bis 10 Minuten).

2. Mit einem sauberen Applikator (z.B. einem Zahnstocher o.ä.) die gesamte Probe von der Pinzette schieben und in das Gel eintauchen, um eine möglichst große Menge der Probe mit dem Gel in Kontakt zu bringen. Sicherstellen, dass die Biopsieprobe vollständig vom Gel bedeckt ist.

3. Das druckempfindliche Etikett des Objektträgers wieder verschließen und den Namen des Patienten sowie Datum und Uhrzeit des Einlegens der Biopsieprobe notieren.

4. Bei Bedarf kann der CLOtest*-Objektträger bei Temperaturen zwischen 30 und 40 °C auf eine Wärmeplatte gelegt werden. Auch wenn die Wärmeplatte die Reaktionszeit beschleunigen und schnellere Ergebnisse liefern kann, ist ihre Verwendung optional und hat keinen Einfluss auf die Zuverlässigkeit des Tests. Wenn eine Wärmeplatte benutzt wird, sollte das Röhrchen nicht länger als drei Stunden erwärmt werden, anschließend sollte es bei Zimmertemperatur bis zur endgültigen Ablesung gelagert werden.

5. Eine positive Reaktion notieren, sobald das Gel beginnt, seine Farbe zu verändern. Sobald eine positive Reaktion eingetreten ist, ist kein weiteres Ablesen erforderlich. Bei 75 % der positiven Tests tritt die Farbveränderung innerhalb von 20 Minuten ein (Abb. 1).

Abbildung 1Zeitdiagramm für CLOtest* Urease- Schnelltest bei positiver Reaktion. Dauer (Minuten)

14

Interpretation der Ergebnisse1. Eine mit Blut kontaminierte Probe kann das am Geweberand befindliche

Gel leicht färben. Dies stellt KEINE positive Testreaktion dar. Wenn das Biopsiegewebe Urease enthält, ist die Farbveränderung zunächst in der Umgebung der Probe festzustellen, und später am ganzen Gel.

2. Die Änderung des pH-Werts in einem positiven Test ist zuerst an der Kontaktfläche zwischen Gel und Biopsieprobe festzustellen. Wenn eine signifikante Menge von Urease vorhanden ist, geschieht die sichtbare Veränderung sehr schnell. Jede Farbveränderung des Gels, die von gelb abweicht (z.B., rot, hellrot, rosa, dunkelorange), gilt als Indikator für das Vorhandensein von H. pylori.

3. Bei einem negativen Test behält das Gel nach dem Einlegen von Gewebe seine gelbe Färbung bei. Wenn die Farbe des Gels nach 24 Stunden immer noch gelb ist, ist das Testergebnis negativ. Wenn das Resultat nach 24 Stunden nicht abgelesen werden kann, behält der Test 72 Stunden nach Einlegen des Biopsiegewebes in das Gel seine Gültigkeit. Wenn beispielsweise bei einem am Freitag durchgeführten Test am Ende des Tages keine Farbveränderung festzustellen ist, kann das Gel bei Zimmertemperatur gelagert und am Montag abgelesen werden.

Gegenprobe (für CLIA-Freigabeanforderungen)Bei jedem negativen Testergebnis sollte die folgende positive Gegenprobe durchgeführt werden, um sicherzustellen, dass der CLOtest*-UST einwandfrei funktioniert:1. Eine Urease-Tablette (Halyard Bestell-Nr. 60407) in das CLOtest*-Gel einlegen

und den Objektträger wieder verschließen.2. Nach fünf Minuten das Gel auf positive Farbveränderung prüfen (rot oder

hellrot).3. Wenn das Gel keine rötliche oder hellrote Färbung annimmt, ist Halyard

telefonisch unter 1-844-425-9273 (nur in den USA) zu benachrichtigen.

LeistungsdatenMit dem CLOtest*-UST lassen sich 75 % der H. pylori Infektionen innerhalb von 20 Minuten feststellen, falsche Positivreaktionen treten nicht auf.1 Nach einer Stunde lässt sich bei 85 % der positiven Patienten ein Nachweis durch CLOtest* erbringen, nach drei Stunden sogar bei 90 %. Im Zeitraum zwischen 3 und 24 Stunden lässt sich bei weiteren 5 % der Patienten ein positiver Nachweis erbringen. In der bis dahin größten veröffentlichten US-Studie entnahmen Dye et al. Antralbiopsieproben von 122 aufeinander folgenden, routinemäßigen Endoskopie-Patienten an der University of Virginia, jeweils eine Probe für Histologiezwecke (Giemsa-Färbung) und eine weitere für CLOtest*.9 Von 82 Patienten wurden außerdem Probenkulturen angelegt. Die Ergebnisse finden sich in der folgenden Tabelle.Tabelle 1: CLOtest* Studie, Dye et al., University of Virginia Wahr + Wahr – Falsch + Falsch –CLOtest* n=121 46 72 2 1Histologie n=122 43 74 5Kultur n=82 23 49 10

15


Empfindlichkeit SpezifizitätCLOtest* 98 % 97 % Histologie 91 % 100 % Kultur 70 % 100 %Ähnliche Ergebnisse wurden von Schnell et al. in Missouri vorgelegt. 10

Einschränkungen von Urease-Schnelltests, Histologien und Kulturen Mögliche Ursachen für falsche Negativergebnisse• Eine sehr geringe Zahl von H. pylori in der Gewebeprobe• Unregelmäßige Verteilung von H. pylori, so dass der Organismus nicht in der

Gewebeprobe enthalten ist• Die Probe enthält Darmmetaplasiematerial – (H. pylori siedelt sich nicht in der

Darmschleimhaut an)• Kürzlich erfolgte Einnahme von Antibiotika, Bismut, Protonenpumpenhemmern

oder Sukralfat, welche den Organismus unter Umständen hemmen• Kontamination der Probe durch Formalin

Mögliche Ursachen für falsche Positivergebnisse• Wenn der Test korrekt durchgeführt wurde, sind falsche Positivergebnisse kaum

zu erwarten. Verspätete falsche Positivreaktionen (nach mehr als 12 Stunden) egeben sich unter Umständen daher, dass das Biopsiematerial nicht vollständig in das Gel eingetaucht wurde und dass sich dann im Gewebe kontaminierende Organismen bilden.

• Theoretisch könnten falsche Positivergebnisse bei Patienten vorkommen, die wegen zu starken Bakterienwachstums eine Achlorhydrie aufweisen. Dies könnte auf folgende Umstände zurückzuführen sein: schwere hyperchrome Anämie, eine vorausgegangene Magenoperation oder der kürzlich erfolgte Einsatz von Medikamenten zur Protonenpumpenhemmung. Andere Bakterien produzieren jedoch weit weniger Urease als H. pylori und sollten deshalb keine schnellen Farbveränderungen bewirken.

Falls Faktoren vorhanden sind, welche die Leistungsfähigkeit des CLOtest* Urease-Schnelltests beeinträchtigen würden, sollten andere diagnostische Maßnahmen wie Harnstoffatemtest und Serologie gewählt werden, um die Diagnose von H. pylori auszuschließen.

Literaturnachweise1. Marshall BJ, Warren JR, Francis GJ, Langton SR, Goodwin CS, Blincow E. Rapid urease test in






16

Literaturhinweise (Forts.):6. Wotherspoon AC, Ortiz Hidalgo C, Falzon MR, Isaacson PG. Helicobacter pylori-associated

gastritis and primary B-cell gastric lymphoma. Lancet 1991; 338: 1175-6.7. Marshall BJ, Goodwin CS, Warren JR, et al. Prospective doubleblind trial of duodenal ulcer

relapse after eradication of Campylobacter pylori. Lancet 1988; 2:1437-42.8. Uemura N, Mukai T, Okamoto S, et al. Effect of Helicobacter pylori eradication on subsequent

development of cancer after endoscopic resection of early gastric cancer. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 1997; 6:8, 639-42.



17


Инструкции за употреба Rx Only: Само Rx: Федералните закони (на САЩ) ограничават продажбата на това изделие от или по нареждане на лекар.

ПредназначениеБързият тест за уреаза CLOtest* (Rapid Urease Test, RUT) точно и удобно открива ензима уреаза на Helicobacter pylori в материал от биопсии от стомашна лигавица. Предназначен е за употреба при диагностициране на предполагаема инфекция с H. pylori.Забележка: За in vitro диагностика.CLOtest* е освободен от задължението за съответствие с CLIA ‘88.

РезюмеCLOtest* е разработен от д-р Бари Маршал1. Наименованието му идва от „Campylobacter-Like Organism“ test (Тест за Campylobacter-подобен микроорганизъм)2. Д-р Робин Уорън и д-р Маршал първи култивират въпросният бактерий от материал от биопсии на антрума през 1982, като го наричат Campylobacter–подобен бактерий3. Впоследствие родът е наречен Helicobacter, което означава спираловидни или „завити“ бактерии2.Доказано е, че H. pylori причинява активен хроничен гастрит4 и е рисков фактор за рак на стомаха5 и лимфом от мукозноасоцииран лимфоиден тип (MALT)6. Радикалното унищожаване на H. pylori е ефективен метод за премахване или намаляване на повторната поява на язви и може да намали риска от рак на стомаха7,8.

Описание и съхранение на продуктаCLOtest* представлява ямка с индикаторен гел за уреаза, запечатана в пластмасов носител. Гелът съдържа урея, USP (29 mg/ml) червен фенол (pH индикатор), буфер и бактериостатично средство за предотвратяване на растежа на контаминиращи уреаза-положителни микроорганизми. Ако в тъканната проба има уреаза от H. pylori, тя променя цвета на гела от жълт до светлопурпурен съгласно следната реакция:

урея вода киселина амониев радикал бикарбонат

CLOtest* RUT има срок на годност 18 месеца, когато се съхранява при 2°–8°C (36°–48°F). Срокът на годност на продукта изтича в последния ден на месеца, посочен върху опаковката. Не използвайте продукта, ако гелът не е жълт, ако опаковката не е херметична и гелът изглежда дехидратиран, или ако срокът на годност е изтекъл. За повече въпроси позвънете на +1-844-425-9273, преди да използвате CLOtest*.

b

HALYARD* CLOtest*Бърз тест за уреаза

NH2

C = O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

NH2

urea

urease


уреаза

18

Подготовка на пациентаПациентът трябва да преустанови приема на антибиотици и бисмут-съдържащи препарати три седмици преди биопсията. Тези средства могат да потиснат, но не и да унищожат H. pylori, което прави микроорганизма труден за откриване с всякакви средства. Пациентът не трябва да е приемал инхибитори на протонната помпа две седмици преди теста, тъй като е доказано, че тези лекарства инхибират растежа на микроорганизма при някои индивиди.

Биопсията1. Препоръчителната област от стомаха за биопсия е най-малко на 2 см от

пилора по малката или голямата кривина на антрума. Ексцизирайте тъкан, която изглежда нормално – избягвайте тъкан, която е ерозирана или разязвена, тъй като H. pylori може да се намира в по-малко количество около тези участъци. Стандартните щипки за биопсия трябва да вземат проба с достатъчен размер за теста.

2. Ако желаете, в една ямка на CLOtest* можете да въведете и допълнителна проба. Не контаминирайте втората проба с кръв от първото място на биопсия.

Вземане и работа с проби1. След изваждането на носителя на бързия тест за уреаза CLOtest* от

хладилника повдигнете етикета достатъчно, за да се види жълтия гел. За по-бързи резултати от теста оставете гела да достигне стайна температура преди да въведете материала от биопсията (обикновено между 7–10 минути).

2. С чисто апликаторно устройство (напр. клечка за зъби и др.) натиснете цялата проба от щипките под повърхността на гела, за да покриете колкото може по-голяма част от пробата с гела. Уверете се, че материалът от биопсията е напълно потопен в гела.

3. Запечатайте повторно самозалепващия се етикет върху носителя и запишете името на пациента, датата и часа на въвеждане материалът от биопсията.

4. Ако желаете, можете да поставите носителя на CLOtest* върху темперираща плоча при температура между 30°–40°C (86°–104°F). Макар че темпериращата плоча може да ускори времето за реакция и да осигури по-бързи резултати, употребата й не е задължителна и няма да повлияе на точността на теста. Ако се използва темперираща плоча, носителят трябва да се нагрява не повече от три часа, след това трябва да се съхранява при стайна температура до крайното отчитане.

5. Отчетете положителна реакция веднага след като гелът промени цвета си. След настъпване на положителна реакция не е необходимо по-нататъшно отчитане. 75 % от положителните тестове променят цвета си в рамките на 20 минути (Фиг. 1).

Фигура 1:Диаграма на времето заположителна реакция отбърз тест за уреаза CLOtest*.

Време (минути)

19


Интерпретация на резултатите1. Ако пробата е замърсена с кръв, тя може да оцвети гела около ръба

на тъканта. Това НЕ е положителен тест. Ако материалът от биопсията съдържа уреаза, промяната първо се появява около пробата и в крайна сметка оцветява целия гел.

2. Промяната на рН в положителен тест се наблюдава най-напред в областта на взаимодействие на гела и материала от биопсията. Ако е налице значително количество уреаза, видимата промяна е бърза. Всяка промяна в цвета на целия гел до оттенък, различен от жълт (напр. червен, пурпурен, розов, тъмнооранжев) показва наличието на H. pylori.

3. Отрицателният тест остава жълт след поставянето на тъканта в гела. Ако цветът на гела е жълт след 24 часа, тестът е отрицателен. Ако не можете да отчетете теста след 24 часа, тестът ще остане валиден в продължение на до 72 часа след въвеждането на материала от биопсията в средата на гела. Ако например тест, проведен в петък, не е променил цвета си до края на деня, той може да се съхранява при стайна температура и да се отчете в понеделник.

Протокол Fail-Safe (Неуспех-Безопасен) (За изискванията за освобождаване от задължението за съответствие с CliaПри всеки отрицателен тест изпълнете следната положителна контрола, за да гарантирате, че CLOtest* RUT функционира както трябва:1. Въведете таблетка уреаза (каталожен № 60407 на Halyard) в гела CLOtest* и

запечатайте носителя повторно.2. След пет минути проверете гела за положителна промяна на цвета (червен

или пурпурен).3. Ако цвета на гела не се променя в червен или пурпурен, уведомете Halyard

на +1-844-425-9273.

Работни характеристикиCLOtest* RUT открива 75 % от инфекциите с H. pylori в рамките на 20 минути без фалшиво положителни резултати1. До един час 85 % от положителните пациенти ще бъдат открити от CLOtest*, а след три часа се откриват 90 %. Между 3 и 24 часа CLOtest* ще открие още 5 % от пациентите. В най-голямото тогава американско проучване, докладвано до този момент, Dye et al вземат биопсии от антрум, по една за хистология (оцветяване по Giemsa) и за CLOtest* от 122 последователни пациенти с рутинна ендоскопия в Университета на Вирджиния9. В допълнение са култивирани проби от осемдесет и двама пациенти. Получените резултати са показани в долната таблица.

Таблица 1: Проучване на CLOtest*, Dye et al, Университет на Вирджиния Истински + Истински - Фалшиви + Фалшиви -CLOtest* n=121 46 72 2 1Хистология n=122 43 74 5Култура n=82 23 49 10

Чувствителност СпецифичностCLOtest* 98 % 97 %Хистология 91 % 100 %Култура 70 % 100 %Подобни резултати са отбелязани от Schnell et al в Мисури10.

20

Ограничения на бързите тестове за уреаза, хистология и култураPossible causes for False Negatives• Много малък брой H. pylori в тъканната проба • Неравномерно разпределение на H. pylori, поради което микроорганизмът

не попада в тъканната проба• Проба от чревна метаплазия – (H. pylori не колонизира чревната лигавица)• Скорошен прием на антибиотици, бисмут, инхибитори на протонната помпа

или сукралфат, които могат да инхибират микроорганизма• Контаминиране на пробата с формалин

Възможни причини за фалшиво положителни резултати• Когато тестът е проведен както трябва, фалшиво положителните резултати

са редки. Късните фалшиво положителни реакции (>12 часа) могат да бъдат причинени от непълно потапяне на материала от биопсията в гела, в резултат на което контаминиращите организми могат да растат в тъканта.

• На теория фалшиво положителен резултат може да се получи при пациенти, които имат ахлорхидрия от бактериален свръхрастеж. Той може да настъпи в резултат на следните състояния: пернициозна анемия, предишна стомашна операция или скорошен прием на лекарства, които са инхибитори на протонната помпа. Другите бактерии обаче произвеждат много по-малко уреаза от H. pylori и не би трябвало да причиняват бърза промяна на цвета.

Ако има фактори, които биха могли да повлияят неблагоприятно върху провеждането на бързия тест за уреаза CLOtest*, помислете за други диагностични мерки като например тест за дъх на урея и серология, за да изключите диагнозата на H. pylori.












21


Instrucciones para el uso Rx Only: Venta sólo por receta facultativa. Las leyes federales de los Estados Unidos restringen la venta de este dispositivo a médicos o por receta facultativa.

Uso previstoLa prueba rápida de ureasa (PRU) CLOtest* detecta de forma fácil y precisa la enzima ureasa del Helicobacter pylori en biopsias de mucosa gástrica. Está indicada para eldiagnóstico provisional de infección por H. pylori. Nota: Para uso in vitro únicamente.CLOtest* es una prueba excluida de los requisitos de CLIA ‘88.

ResumenEl Dr. Barry Marshall, M.D. diseñó CLOtest*1. El nombre es por “Campylobacter-Like Organism” (organismos similares al Campylobacter)2. Los Drs. Robin Warren y Marshall cultivaron la bacteria a partir de biopsias del antro gástrico por primera vez en 1982, y la llamaron bacteria semejante al Campylobacter3. Posteriormente, el género se llamó Helicobacter, que significa bacteria espiral o helicoidal2.Se ha demostrado que el H. pylori causa gastritis crónica activa4 y que es un factor de alto riesgo para cáncer gástrico5 y linfoma de tipo linfoide asociado a la mucosa (MALT)6. La erradicación del H. pylori es eficaz para eliminar o reducir la recurrencia de úlceras, y es posible que reduzca el riesgo de cáncer gástrico7,8.

Descripción del producto y almacenamientoCLOtest* es un pocillo con gel indicador de ureasa que se encuentra sellado dentro de una laminilla de plástico. El gel contiene urea, rojo de fenol USP (29 mg/mL) (un indicador de pH), amortiguadores y un agente bacteriostático para evitar el crecimiento de microorganismos ureasa positivos. Si la muestra de tejido contiene ureasa proveniente del H. pylori, el gel cambia de color amarillo a fucsia brillante, de acuerdo con la siguiente reacción:

urea agua ácido amonio bicarbonatoLa PRU CLOtest* tiene una duración de 18 meses si se almacena a 2°–8°C (36°–48°F). El producto vence el último día del mes indicado en el paquete. No utilice el producto si el gel no es amarillo, si el sello está dañado y el gel parece seco, o si ha pasado la fecha de vencimiento. Para mayor información llame al 1-844-425-9273 antes de usar CLOtest*.

Preparación del pacienteEl paciente debe suspender el uso de antibióticos y preparados de bismuto tres semanas antes de la biopsia, ya que estos medicamentos pueden inhibir el H. pylori

s

HALYARD* CLOtest*Prueba rápida de ureasa

NH2

C = O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

NH2

urea

urease


urease

22

sin erradicarlo, lo que dificulta su detección con cualquier método. Por dos semanas antes de la prueba, el paciente no debe ingerir inhibidores de la bomba de protones, ya que se ha visto que estos medicamentos inhiben el crecimiento de la bacteria en algunas personas.

La biopsia1. El área recomendada para hacer la biopsia es a lo largo de la curvatura mayor o la

curvatura menor del antro, a por lo menos 2 cm de distancia del píloro. Se debe resecar tejido de apariencia normal, no erosionado o ulcerado, ya que alrededor de estas áreas puede haber cantidades inferiores de H. pylori. Con pinzas de biopsia corrientes se puede obtener una muestra de tamaño suficiente para esta prueba.

2. Se puede insertar una muestra adicional en un solo pocillo de CLOtest* si así se desea. No contamine la segunda muestra con sangre de la primera biopsia.

Obtención y manipulación de la muestra1. Después de sacar la laminilla de prueba rápida de ureasa CLOtest* de

refrigeración, levante la etiqueta lo suficiente para exponer el gel amarillo. Para resultados más rápidos, deje que el gel llegue a temperatura ambiente antes de poner la biopsia (generalmente entre 7 y 10 minutos).

2. Con un aplicador limpio (p. ej., un palillo de dientes o algo por el estilo) ponga la muestra íntegra debajo de la superficie del gel para así exponer la mayor cantidad posible de la muestra al gel. Cerciórese de que la muestra de la biopsia esté totalmente sumergida en el gel.

3. Vuelva a sellar la etiqueta a presión de la laminilla y anote el nombre del paciente, y la fecha y hora en que se colocó la muestra.

4. La laminilla de CLOtest* se puede poner en una placa calentadora a 30°–40°C (86°–104°F). Si bien la placa calentadora podría acelerar el tiempo de reacción y dar resultados más pronto, su uso es opcional y no afecta a la exactitud de la prueba. En caso de usarse una placa calentadora, la laminilla no se debe calentar por más de tres horas; luego se debe guardar a temperatura ambiente hasta el momento de la lectura definitiva.

5. Registre la reacción positiva tan pronto como el gel cambie de color. Una vez que haya ocurrido una reacción positiva, no hay necesidad de hacer más lecturas. El 75 % de las pruebas positivas cambian de color en 20 minutos (Fig. 1).

Figura 1:Gráfica de tiempo de reacción positiva con la prueba rápida de ureasa CLOtest*. Tiempo (minutos)

Interpretación de resultados1. Una muestra contaminada con sangre podría manchar el gel alrededor del borde

del tejido. Esto NO constituye una prueba positiva. Si la biopsia contiene ureasa, el cambio ocurre primero alrededor de la muestra y eventualmente todo el gel cambia de color.

2. El cambio de pH en una prueba positiva se ve primero en la zona de contacto

23


entre el gel y la biopsia. El cambio se produce rápidamente si hay una cantidad significativa de ureasa. Cualquier cambio de color de todo el gel a un tono que no sea amarillo (p. ej. rojo, fucsia, rosado o naranja oscuro) indica la presencia de H. pylori.

3. En una prueba negativa el gel permanece amarillo después de insertar el tejido en el gel. Si a las 24 horas el gel es amarillo, la prueba es negativa. Si la prueba no se puede leer a las 24 horas, sigue siendo válida por 72 horas después de poner la biopsia en el gel. Por ejemplo, si la prueba se hace el viernes y al final del día no ha cambiado de color, se puede guardar a temperatura ambiente y leerse el lunes.

Protocolo a prueba de fallos (para exclusión de los requisitos de la CLIA)Cada vez que haya una prueba negativa, se debe hacer el siguiente control positivo para cerciorarse de que la PRU CLOtest* está funcionando correctamente:1. I nserte una tableta de ureasa (artículo Halyard #60407) en el gel de CLOtest* y

vuelva a sellar la laminilla.2. Después de cinco minutos, examine el gel para ver si el color ha cambiado (a rojo

o fucsia).3. Si el gel no se vuelve rojo o fucsia, notifique a Halyard al teléfono 1-844-425-

9273.

Características de rendimientoLa PRU CLOtest* detecta el 75% de las infecciones por H. pylori en 20 minutos, sin falsos positivos1. CLOtest* detecta el 85% de los pacientes positivos en una hora, y el 90% a las tres horas. CLOtest* detecta otro 5% de los pacientes entre las 3 y las 24 horas. En el estudio más grande hasta la fecha realizado en los Estados Unidos, Dye et al tomaron biopsias del antro de 122 pacientes consecutivos con endoscopía de rutina en la University of Virginia9 para hacerle a cada uno un examen histológico (tinción de Giemsa) y la prueba CLOtest*. Se hicieron cultivos de 82 muestras. La siguiente tabla muestra los resultados.Tabla 1: Estudio CLOtest*, Dye et al, University of Virginia Verdadero + Verdadero – Falso + Falso – CLOtest* n = 121 46 72 2 1Examen histológico n = 122 43 74 5Cultivo n = 82 23 49 10

Sensibilidad EspecificidadCLOtest* 98% 97%Examen histológico 91% 100%Cultivo 70% 100%Schnell et al observaron resultados similares en Missouri10.

Limitaciones de las pruebas rápidas de ureasa, el examen histológico y el cultivoPosibles causas de falsos negativos• Muy bajo número de H. pylori en la muestra• Distribución de H. pylori poco uniforme, de forma que la bacteria no se encuentra

en la muestra de tejido• Muestra de metaplasia intestinal (H. pylori no coloniza la mucosa intestinal)• Ingesta reciente de antibióticos, bismuto, inhibidores de la bomba de protones o

24

sucralfato, que pueden inhibir la bacteria• Contaminación de la muestra con formalina

Posibles causas de falsos positivos• Los resultados positivos falsos son muy poco comunes si la prueba se realiza

correctamente. Las reacciones positivas falsas tardías (>12 horas) pueden ser causadas por no insertar la biopsia totalmente dentro del gel, de forma que los organismos contaminantes pueden crecer en el tejido.

• En teoría, podría ocurrir un falso positivo en los pacientes con acloridria causada por proliferación bacteriana. Esto podría ser el resultado de las siguientes condiciones: anemia perniciosa, cirugía gástrica anterior o uso reciente de medicamentos inhibidores de la bomba de protones. Sin embargo, otras bacterias producen mucha menor cantidad de ureasa que el H. pylori, y no causan un cambio rápido de color.

En caso de que haya factores que puedan afectar al desempeño de la prueba rápida de ureasa CLOtest*, considere la posibilidad de usar otros métodos diagnósticos para descartar el diagnóstico de H. pylori, como la prueba de urea en el aire espirado y pruebas serológicas.

Referencias bibliográficas1. Marshall BJ, Warren JR, Francis GJ, Langton SR, Goodwin CS, Blincow E. Rapid urease test in











25


Návod na použití Rx Only: Pouze na předpis: Federální zákony USA omezují prodej tohoto zařízení na lékaře nebo na jeho předpis.

Určené použitíRychlý ureázový test CLOtest* (Rapid Urease Test, RUT) detekuje přesně a pohodlně ureázový enzym baktérie Helicobacter pylori v biopsiích žaludečních sliznic. Je určen pro použití u předběžné diagnózy infekcí H. pylori.Poznámka: Pro diagnostické použití in vitro.CLOtest* je osvobozen od požadavků zákona o zlepšení klinických laboratoří z roku 1988 (CLIA ’88).

SouhrnCLOtest* vyvinul Dr. Barry Marshall1. Jde o zkratku názvu „Campylobacter-Like Organism“ test2. Dr. Robin Warren a Dr. Marshall nejprve vypěstovali tuto baktérii z antrálních biopsií v roce 1982 a nazvali ji baktérie podobná kampylobaktérii (Campylobacter–like bacterium)3. Následně byl tento rod pojmenován Helicobacter, což znamená spirálová neboli helická baktérie2.Bylo prokázáno, že H. pylori způsobuje aktivní chronickou gastritidu4 a že je rizikovým faktorem u žaludeční rakoviny a se sliznicemi souvisejícím typem lymfomu (mucosal-associated-lymphoid-type, MALT)6. Potlačování H. pylori je efektivní při odstraňování nebo snižování opakovaného výskytu vředů a může také snižovat riziko žaludeční rakoviny7,8.

Popis produktu a jeho uskladňováníCLOtest* je želé indikující ureázu v prohlubni plastového sklíčka. Toto želé obsahuje močovinu, USP (29 mg/ml) fenolovou červeň (indikátor pH), pufery a bakteriostatické činidlo pro zabránění růstu kontaminujících ureázově pozitivních organismů. Pokud je ureáza od H. pylori přítomná ve vzorku tkáně, změní se barva želé ze žluté na jasně to červenou anilinovou podle následující reakce:

močovina voda kyselina hydrogenuhličitan amonný

CLOtest* RUT má dobu skladovatelnosti 18 měsíců při teplotě 2 – 8 °C. Jeho trvanlivost vyprší poslední den měsíce uvedeného na obalu. Nepoužívejte ho, pokud není želé žluté, pokud je porušená pečeť a želé vypadá dehydrované nebo pokud je prošlá záruční doba. Máte-li další dotazy, zavolejte na číslo +1 844-425-9273 před použitím CLOtestu*.

Příprava pacientaPacient musí přestat užívat antibiotika a přípravky bismutu tři týdny před biopsií.

c

HALYARD* CLOtest*Rychlý ureázový test

NH2

C = O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

NH2

urea

urease


ureáza

26

Tato činidla mohou potlačit, ale nikoli vyhladit H. pylori, čímž se ztěžuje detekce tohoto organismu jakýmikoli prostředky. Pacient nesmí požívat inhibitory protonové pumpy dva týdny před těmito testy, protože se prokázalo, že tyto léky u některých osob inhibují růst tohoto organismu.

Biopsie1. Doporučená oblast gastrické biopsie je minimálně 2 cm od pyloru podél nižší

nebo vyšší křivky antra. Vyřízněte tkáň, která se jeví normální – vyhýbejte se erodované nebo vředovité tkáni, protože H. pylori může být přítomná v malých množstvích kolem těchto oblastí. Standardními bioptickými kleštěmi by se měl získat vzorek o dostatečné velikosti pro tento test.

2. Budete-li si to přát, můžete do jedné prohlubně testu CLOtest* vložit další vzorek. Nekontaminujte tento druhý vzorek krví z místa první biopsie.

Odběr vzorku a manipulace s ním1. Po vytažení sklíčka rychlého ureázového testu CLOtest* z chladničky stáhněte

etiketu dostatečně daleko, aby se odhalilo žluté želé. Pro rychlejší výsledky testu umožněte, aby želé dosáhlo pokojové teploty před vsazením biopsie (obvykle 7–10 minut).

2. Pomocí čistého aplikátoru (např. párátka apod.) vtlačte celý vzorek z kleští pod povrch želé, aby se co možná nejvíce vzorku vystavilo želé. Zkontrolujte, zda je vzorek biopsie zanořen do želé.

3. Přilepte etiketu citlivou na tlak na sklíčko a zaznamenejte jméno pacienta, datum a čas vsazení vzorku biopsie.

4. Budete-li si to přát, můžete sklíčko CLOtestu* vložit na ohřívací desku při teplotě 30– 40 °C. I když ohřívací deska může urychlit reakční dobu a umožnit rychlejší výsledky, její použití je volitelné a neovlivní přesnost testu. Pokud použijete ohřívací desku, nesmí se sklíčko ohřívat déle než tři hodiny a poté se musí uskladnit při pokojové teplotě až do posledního odečítání výsledku.

5. Zaznamenejte pozitivní reakci hned, jakmile želé změní barvu. Jakmile dojde k pozitivní reakci, není třeba další odečítání. U 75 % pozitivních testů se barva změní během 20 minut (obr.1).

Obrázek 1:Rychlý ureázový CLOtest* Pozitivní reakceČasový průběh

Čas (v minutách)

Interpretace výsledků1. Vzorek kontaminovaný krví může zbarvit želé kolem okrajů tkáně. To NENÍ

pozitivní test. Pokud biopsie obsahuje ureázu, ke změně dojde nejdříve kolem vzorku a nakonec dojde ke zbarvení celého želé.

2. Změna pH u pozitivního testu se objeví nejprve na rozhraní želé a biopsie. Pokud je přítomno podstatné množství ureázy, je viditelná změna rychlá. Změna barvy celého želé ne jinou než žlutou (např. červenou, anilinovou červenou, růžovou, temně oranžovou) znamená přítomnost H. pylori.

3. Negativní test zůstane po vsazení tkáně do želé žlutý. Pokud je barva želé žlutá

27


po 24 hodinách, je test negativní. Nebudete-li moci odečítat po 24 hodinách, zůstane test platný 72 hodin po vsazení biopsie do želé. Když se například test provedený v pátek nezmění do konce dne, může se uskladnit při pokojové teplotě a výsledek odečíst v pondělí.

Fail-Safe protokol (pro osvobození od zákona CLIA)U každého negativního testu proveďte následující pozitivní kontrolu, aby se zajistilo, že CLOtest* RUT funguje správně:1. Vložte tabletu ureázy (katalogové č. Halyard 60407) do gelu CLOtestu* a

zapečeťte sklíčko.2. Po pěti minutách zkontrolujte, zda došlo k pozitivní změně barvy gelu (na

červenou nebo anilinově červenou).3. Pokud se barva želé nezmění na červenou nebo anilinově červenou, uvědomte o

tom společnost Halyard na čísle +1 844-425-9273.

Výkonové charakteristikyCLOtest* RUT detekuje 75 % infekcí H. pylori během 20 minut se žádnými falešnými pozitivními výsledky1. Do jedné hodiny bude CLOtestem* detekováno 85 % pozitivních pacientů a do tří hodin jich bude detekováno 90 %. Od 3 do 24 hodin bude CLOtest* detekovat dalších 5 % pacientů. V zatím nejrozsáhlejší studie hlášené v USA do dneška analyzovali Dye a spolupracovníci antrální biopsie, co se týče histologie (Giemsovo zbarvení) a CLOtestu* od 122 po sobě jdoucích pacientů absolvujících běžnou endoskopii na univerzitě státu Virginia9. U osmdesáti dvou pacientů byly také vzorky kultivovány. Získané výsledky jsou v tabulce níže.

Tabulka 1: Studie CLOtestu*, Dye et al, University of Virginia Pravé + Pravé - Falešné + Falešné -CLOtest* n=121 46 72 2 1Histologie n=122 43 74 5Kultivace n=82 23 49 10

Citlivost SpecifičnostCLOtest* 98 % 97 %Histologie 91 % 100 %Kultivace 70 % 100 %Podobné výsledky zaznamenali Schnell et al v Missouri10.

Omezení rychlých ureázových testů, histologie a kultivaceMožné příčiny falešných negativních výsledků• Velmi nízké množství H. pylori ve vzorku tkáně • Nejednotná distribuce H. pylori, takže tento organismus není zachycen ve vzorku

tkáně• Vzorek střevní metaplázie – (H. pylori nekolonizuje střevní sliznici)• Nedávné požití antibiotik, bismutu, inhibitorů protonové pumpy nebo sukralfátu,

které mohou inhibovat organismus• Formalinová kontaminace vzorku

Možné příčiny falešných pozitivních výsledků• Když se test provede správně, falešné pozitivní výsledky jsou vzácné. Pozdní

falešně pozitivní reakce (>12 hodin) mohou být způsobeny neúplným vsazením biopsie do želé, takže v tkáni mohou růst kontaminující organismy.

28

• Teoreticky může k falešným pozitivním výsledkům dojít u pacientů, kteří mají achlorhydrii z nadměrného růstu baktérií. Může to být důsledkem následujících stavů: perniciózní anémie, předchozí žaludeční operace nebo nedávného užití inhibitorů protonové pumpy. Ostatní baktérie však vytvářejí mnohem méně ureázy než H. pylori a neměly by být příčinou rychlé změny barvy.

Pokud existují faktory, které by mohly nepříznivě ovlivňovat výsledky rychlého ureázového CLOtestu*, zvažte další diagnostická opatření, jako například dechový test s močovinou a zkoušku séra, aby se vyloučila diagnóza H. pylori.

Bibliografie1. Marshall BJ, Warren JR, Francis GJ, Langton SR, Goodwin CS, Blincow E. Rapid urease test in











29


Brugsanvisning Rx Only: Receptpligtig: Amerikansk lovgivning begrænser denne anordning til salg af eller på ordinering af en læge.

Tilsigtet brugCLOtest* Rapid Urease Test (RUT) detekterer nøjagtigt og bekvemt ureaseenzymet fra Helicobacter pylori i biopsier fra maveslimhinden. Den er beregnet til tentativ diagnose af H. pylori infektion.Bemærk: Til in vitro diagnostisk brug. CLOtest* frafalder CLIA ‘88.

OversigtBarry Marshall, M.D. udviklede CLOtest*1. Navnet stammer fra “Campylobacter-Like Organism” (Campylobacter-lignende organisme) test2. Lægerne Robin Warren og Marshall var de første, der dyrkede bakterien fra antrum biopsier i 1982 og kaldte den Campylobacter–like bacterium (Campylobacter-lignende bakterie)3. Som et resultat heraf blev dette genus kaldt Helicobacter, hvilket vil sige spiralformede bakterier2.H. pylori har vist at forårsage aktiv kronisk gastritis4, som formodes at prædisponere for cancer ventriculi5 og mucosal- associated-lymphoid-type (mucosa-associeret-lymfatisk-type) (MALT) lymfom6. Eradikation af H. pylori er en effektiv metode til at helbrede ulcus eller reducere recidivhyppigheden og kan også mindske risikoen for udvikling af cancer ventriculi7,8.

Produktbeskrivelse og opbevaringCLOtest* er en brønd med ureaseindikatorgel, som er forseglet i et objektglas af plast. Gelen indeholder urea, phenolrødt (en pH indikator) USP (29 mg/ml), buffere og et bakteriostatisk middel til at forhindre vækst af kontaminerende ureaspositive organismer. Hvis urease fra H. pylori findes i vævsprøven, ændrer det gelfarven fra gul til stærk magenta, i henhold til følgende reaktion:

urea vand syre ammonium bikarbonat

CLOtest* RUT er holdbar i 18 måneder, når den opbevares ved 2–8 °C. Produktet udløber den sidste dag i måneden, der er angivet på pakken. Produktet må ikke bruges, hvis gelen ikke er gul, hvis forseglingen er beskadiget og gelen forekommer dehydreret, eller hvis udløbsdatoen er nået. Yderligere oplysninger kan fås på 1-844-425-9273 inden CLOtest* tages i brug.

PatientforberedelsePatienten skal ophøre med brug af antibiotikum og vismuth præparater tre uger før biopsien. Disse stoffer kan hæmme, men ikke udrydde tilstedeværelsen af H. pylori,

D

HALYARD* CLOtest*Hurtig ureasetest

NH2

C = O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

NH2

urea

urease


urease

30

hvilket gør det vanskeligt overhovedet at detektere organismen. Patienten bør ikke have indtaget syrepumpehæmmere to uger før testen, da disse lægemidler har vist at hæmme væksten af organismen hos visse personer.

Biopsien1. Det anbefales at tage biopsien mindst 2 cm fra pylorus langs antrums større eller

lille kurvatur. Tag biopsien i væv, som forekommer normalt – undgå væv, som er arroderet eller ulcereret, da H. pylori kan være til stede i mindre antal i disse områder. En standard biopsitang tager en biopsi af tilstrækkelig størrelse for testen.

2. En ekstra prøve kan om ønsket indsættes i en enkelt CLOtest* brønd. Undgå at kontaminere det andet præparat med blod fra det første biopsisted.

Præparatindsamling og -håndtering1. Efter fjernelse af objektglasset med CLOtest* hurtig ureasetesten fra køleskabet

skal mærkaten løftes tilstrækkeligt til at blotte den gule gel. Hurtigere resultater kan opnås ved at lade gelen nå stuetemperatur, inden biopsien indsættes (normalt mellem 7-10 minutter).

2. Med en ren applikator (en tandstik eller lign.) skubbes hele biopsien af tangen og ind under geloverfladen for at eksponere så meget af præparatet som muligt for gelen. Sørg for at biopsipræparatet er helt nedsænket i gelen.

3. Genforsegl den trykfølsomme mærkat på objektglasset, og notér patientens navn samt dato og tidspunkt for indsættelse af biopsiprøven.

4. CLOtest* objektglasset kan om ønsket sættes på en varmeplade ved en temperatur på 30–40 °C. Selv om varmepladen kan fremskynde reaktionstiden og give hurtigere resultater, er det ikke nødvendigt, og det har ingen indvirkning på testens nøjagtighed. Hvis varmepladen bruges, bør objektglasset højst opvarmes i tre timer, hvorefter det skal opbevares ved stuetemperatur, indtil den endelige aflæsning.

5. Reaktionen er positiv, så snart gelen skifter farve. Så snart en positiv reaktion har fundet sted, er yderligere aflæsninger ikke nødvendige. 75 % af positive tester skifter farve i løbet af 20 minutter (figur 1).

Figur 1:Skema over positive reaktionstider for CLOtest* hurtige ureasetester

Tid (minutter)

Fortolkning af resultaterne1. Et præparat kontamineret med blod kan misfarve gelen omkring vævskanten.

Dette er IKKE en positiv test. Hvis en biopsi indeholder urease, forekommer ændringen først omkring prøven og farver til sidst hele gelen.

2. pH ændringen i en positiv test ses først ved grænsefladen mellem gelen og biopsien. Hvis en signifikant mængde urease er til stede, finder den synlige ændring hurtigt sted. En hvilken som helst farveændring af hele gelen til en farve andet end gul (f.eks. rød, magenta, lyserød, mørk orange) angiver tilstedeværelse af H. pylori.

31


3. En negativ test forbliver gul efter indlejring af vævet i gelen. Hvis farven på gelen er gul efter 24 timer, er testen negativ. Hvis testen ikke kan aflæses efter 24 timer, forbliver den gyldig, indtil 72 timer efter indsættelse af biopsien i gelen. Hvis en test, som blev foretaget en fredag, f.eks. ikke har skiftet farve ved fyraften, kan den opbevares ved stuetemperatur og aflæses den følgende mandag.

Sikkerhedsforanstaltninger (for CLIA-frafaldelseskrav )I forbindelse med hver negativ test skal følgende positive kontrol foretages for at sikre, at CLOtest* RUT virker rigtigt:1. Indsæt en ureasetablet (Halyard katalognr. 60407) i CLOtest* gelen og

genforsegl objektglasset.2. Undersøg gelen efter fem minutter for at se om en positiv farveændring (rød

eller magenta) har fundet sted.3. Hvis gelen ikke bliver rød eller magentafarvet, skal Halyard underrettes på

1-844-425-9273.

PræstationsegenskaberCLOtest* RUT detekterer 75 % af H. pylori infektioner i løbet af 20 minutter uden falske positiver1. Efter en time vil 85 % af positive patienter være blevet detekteret af CLOtest*, og efter tre timer vil 90 % være blevet detekteret. Mellem 3 og 24 timer vil CLOtest* detektere yderligere 5 % af patienterne. I den største amerikanske undersøgelse hidtil tog Dye et al antrum biopsier, en til histologi (Giemsa-farvning) og en til CLOtest*, fra 122 konsekutive patienter, som fik udført rutinemæssig endoskopi på University of Virginia9. Præparater fra 82 patienter blev også dyrket. De indsamlede resultater vises i tabellen nedenfor.

Tabel 1: CLOtest* undersøgelse, Dye et al, University of Virginia Sand + Sand - Falsk + Falsk - CLOtest* n=121 46 72 2 1Histologi n=122 43 74 5Dyrkning n=82 23 49 10

Sensitivitet SpecificitetCLOtest* 98 % 97 %Histologi 91 % 100 %Dyrkning 70 % 100 %Lignende resultater blev noteret af Schnell et al i Missouri10.

Begrænsninger for hurtige ureasetester, histologi og dyrkningMulige grunde til falske negativer• Meget lavt antal H. pylori i vævsprøven• Pletvis fordeling af H. pylori, så organismen ikke blev indfanget af vævsprøven.• Biopsien taget et sted med intestinal metaplasi - (H. pylori koloniserer ikke den

intestinale mucosa)• Nylig indtagning af antibiotikum, vismuth, syrepumpehæmmere eller sucralfat,

hvilket kan hæmme organismen• Formalinkontaminering af prøven

Mulige grunde til falske positiver• Når testen udføres korrekt, er falske positiver yderst sjældne. Sene falske positive

32

reaktioner (> 12 timer) kan forekomme, hvis biopsien ikke blev helt indsat i gelen, så kontaminerende organismer kan vokse i vævet.

• En falsk positiv kunne teoretisk set forekomme hos patienter, som har aklorhydri på grund af bakteriel overvækst. Dette kan være et resultat af følgende tilstande: perniciøs anæmi, tidligere maveoperation eller nylig brug af syrepumpehæmmende lægemidler. Andre bakterier producerer dog meget mindre urease end H. pylori, og skulle ikke forårsage en hurtig farveændring.

Hvis der findes faktorer, som kan have en negativ indvirkning på udførelsen af CLOtest* hurtig ureasetesten, bør andre diagnostiske metoder overvejes, såsom en urea-åndedrætstest og serologi, for at kunne udelukke en diagnose af H. pylori.

Bibliografi1. Marshall BJ, Warren JR, Francis GJ, Langton SR, Goodwin CS, Blincow E. Rapid urease test in











33


Kasutusjuhend Rx Only: Ainult Rx: USA föderaalseadused lubavad seda seadet müüa ainult arstidel või arsti korraldusel.

KasutusnäidustusUreaasi kiirtest CLOtest* tuvastab täpselt ja mugavalt Helicobacter pylori ensüümi ureaas esinemist mao limaskesta bioptaatides. See on mõeldud kasutamiseks H. pylori infektsiooni presumptiivsel diagnoosimisel.Märkus: Mõeldud in vitro diagnostiliseks kasutuseks.CLOtest*-il on CLIA ‘88 loobumisotsus.

KokkuvõteCLOtest*1-i töötas välja Barry Marshall, M.D. Selle nimi pärineb terminis „Campylobacter-Like Organism” (kampülobakterile sarnaste organismide) test2. Dr Robin Warren ja dr Marshall kasvatasid 1982. aastal esimesena mao antrumi bioptaatidest pärinevat bakterit söötmel ja nimetasid selle kampülobakterile sarnaseks bakteriks3. Seejärel nimetati perekond Helicobacter’iks, mis tähendab spiraalseid ehk helikaalseid baktereid2.On tõestatud, et H. pylori põhjustab aktiivset kroonilist gastriiti4 ja on maovähi5 ning limaskestaga seotud lümfoidkoe tüüpi (MALT) lümfoomi riskitegur6. H. pylori kolonisatsiooni hävitamine on tõhus haavandite elimineerimisel või nende kordumise vähendamisel ja võib vähendada ka maovähi riski7,8.

Toote kirjeldus ja säilitamineCLOtest* on plastslaidi külge hermeetilise tihendiga suletud ureaasi indikaatorgeeli mahuti. Geel sisaldab uureat, USP (29 mg/ml) fenoolpunast (pH-indikaator), puhvreid ja bakteriostaatilist ainet, mis takistab saastumist põhjustavate ureaaspositiivsete organismide kasvu. Kui koeproovis leidub H. pylori ureaasi, siis muutub geel järgmise reaktsiooni tagajärjel kollasest erkpunaseks:

uurea vesi hape ammoonium bikarbonaat

Ureaasi kiirtesti CLOtest* säilivusaeg on temperatuuril 2–8 °C (36–48 °F) 18 kuud. Toode aegub pakendile märgitud kuu viimasel päeval. Ärge kasutage toodet, kui geel ei ole kollane, kui tihend on kahjustatud ja geel näib olevat dehüdreeritud või kui aegumiskuupäev on möödunud. Lisaküsimuste korral helistage numbril 1-844-425-9273 enne, kui CLOtest*-i kasutate.

Patsiendi ettevalmistaminePatsient peaks kolm nädalat enne biopsiat lõpetama antibiootikumide ja

E

HALYARD* CLOtest*Ureaasi kiirtest

NH2

C = O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

NH2

urea

urease


ureaas

34

vismutipreparaatide kasutamise. Need ained võivad H. pylori’t pärssida, muutes selle tuvastamise mis tahes meetodiga raskeks, kuid ei hävita seda. Patsient ei tohi olla kahe nädala jooksul enne testi manustanud prootonpumba inhibiitoreid, kuna on tõestatud, et need ravimid inhibeerivad mõnedel inimestel bakteri kasvu.

Biopsia1. Soovituslik biopsia võtmise piirkond maos on püülorusest vähemalt 2 cm

kaugusel antrumi väikesel või suurel kõveral. Lõigake välja kude, mis näib normaalne – vältige kudet, mis on erodeerunud või haavandunud, kuna H. pylori’t võib neis piirkondades esineda vähem. Standardsed biopsiatangid peaksid andma testi jaoks piisava suurusega proovi.

2. Soovi korral võib ühte CLOtest*-i mahutisse sisestada lisaproovi. Ärge laske teisel proovil saastuda verega esimesest biopsiapiirkonnast.

Proovide kogumine ja käsitsemine1. Pärast ureaasi kiirtesti CLOtest* külmkapist välja võtmist tõstke silti piisavalt

kaugele, et kollane geel nähtavale ilmuks. Kiiremate testitulemuste saamiseks laske geelil enne bioptaadi sisestamist toatemperatuurile soojeneda (see võtab tavaliselt 7–10 minutit).

2. Lükake puhta aplikaatorseadmega (nt hambaork, vms) kogu proov tangidelt geeli pinna alla, et võimalikult suur osa proovist puutuks geeliga kokku. Veenduge, et bioptaat oleks täielikult geeli kastetud.

3. Sulgege survetundlik silt slaidil uuesti ja märkige sellele patsiendi nimi ja bioptaadi sisestamise kuupäev ning kellaaeg.

4. Soovi korral võib CLOtest*-i slaidi asetada soojendusplaadile temperatuurile 30–40 °C (86–104 °F). Kuigi soojendusplaat võib reaktsiooniaega kiirendada ja kiiremini tulemusi anda, on selle kasutamine valikuline ja see ei mõjuta testi täpsust. Soojendusplaadi kasutamisel ei tohiks slaidi soojendada kauem kui kolm tundi – pärast seda peaks slaidi kuni lõpliku hindamiseni toatemperatuuril hoidma.

5. Märkige positiivse reaktsiooni teke üles niipea, kui geel värvi muudab. Pärast positiivse reaktsiooni teket pole edasine hindamine vajalik. 75% positiivsetest testidest muudavad värvi 20 minuti jooksul (joonis 1).

Joonis 1.ureaasi kiirest CLOtest*Testi positiivne reaktsioonajagraafik.

Aeg (minutites)

Tulemuste tõlgendamine1. Verega saastunud proov võib värvida geeli koe serva ümber. See EI OLE positiivne

test. Kui bioptaat sisaldab ureaasi, siis tekib muutus esmalt proovi ümber, misjärel värvub kogu geel.

2. Positiivse testi korral on pH muutus nähtav esmalt geeli ja bioptaadi kokkupuute piirkonnas. Kui ureaasi on olulises koguses, siis toimub nähtav muutus kiiresti. Kui kogu geel värvub mis tahes muud värvi peale kollase (nt punaseks, fuksiinpunaseks, roosaks, tumeoranžiks), siis tähendab see H. pylori esinemist bioptaadis.

35


3. Negatiivne test jääb pärast koe geeli sisestamist kollaseks. Kui geel on 24 tunni pärast kollane, siis on test negatiivne. Kui 24 tunni pärast ei ole tulemust võimalik hinnata, siis võib testi hinnata veel kuni 72 tunni jooksul pärast bioptaadi geeli sisestamist. Näiteks kui reedel tehtud test ei ole päeva lõpuks värvi muutnud, võib seda hoida toatemperatuuril ja hinnata esmaspäeval.

Tõrkekindluse protokoll (Clia loobumisotsuse nõuete jaoks)Tehke iga negatiivse testi korral järgmine positiivne kontroll, et veenduda ureaasi kiirtesti CLOtest* õiges töötamises.1. Sisestage CLOtest*-i geeli ureaasitablett (ettevõtte Halyard kataloogi nr 60407)

ja sulgege slaidi tihend uuesti.2. Viie minuti pärast kontrollige geeli positiivse värvimuutuse suhtes (punane või

fuksiinpunane).3. Kui geel punaseks või fuksiinpunaseks ei muutu, siis teavitage ettevõtet Halyard

numbril 1-844-425-9273.

ToimivuskarakteristikudUreaasi kiirtest CLOtest* tuvastab 75% H. pylori infektsioonidest 20 minuti jooksul ilma valepositiivsete tulemusteta1. Ühe tunni jooksul tuvastatakse CLOtest*-iga 85% positiivsetest patsientidest ja kolme tunni jooksul 90%. 3–24 tunni jooksul tuvastab CLOtest* veel 5% patsientidest. Suurimas seni avaldatud USA uuringus võtsid Dye jt Virginia Ülikoolis 122 järjestikuselt regulaarsele endoskoopiale tulnud patsiendilt mao antrumist bioptaate – ühe histoloogia jaoks (Giemsa värving) ja ühe CLOtest*-i jaoks9. Kaheksakümne kahe patsiendi proove kasvatati söötmel. Saadud tulemusi on kujutatud alltoodud tabelis.Tabel 1. CLOtest*-i uuring, Dye jt, Virginia Ülikool Õige + Õige - Vale + Vale - CLOtest* n=121 46 72 2 1Histoloogia n=122 43 74 5Kultuur n=82 23 49 10

Tundlikkus Spetsiifilisus CLOtest* 98% 97%Histoloogia 91% 100% Kultuur 70% 100%Sarnaseid tulemusi täheldasid Schnell jt Missouris10.

Ureaasi kiirtestide, histoloogia ja kultuuri piirangudValenegatiivsete tulemuste võimalikud põhjused• Väga madal H. pylori sisaldus koeproovis • H. pylori ebaühtlane jaotumine, mistõttu organismi koeproovi ei haaratud• Intestinaalsest metaplaasiast võetud proov – (H. pylori ei koloniseeri

intestinaalset limaskesta)• Hiljutine antibiootikumide, vismuti, prootonpumba inhibiitorite või sukralfaadi

manustamine, mis võib organismi inhibeerida• Proovi saastumine formaliiniga

Valepositiivsete tulemuste võimalikud põhjused• Testi õigesti tegemisel on valepositiivsed tulemused harvad. Hilised

valepositiivsed reaktsioonid (> 12 tundi) võivad tuleneda bioptaadi ebatäielikust geeli sisestamisest, misjärel on võimalik saastumist põhjustavate organismide

36

kasv koes.• Teoreetiliselt võib valepositiivne tulemus tekkida patsientidel, kellel on bakterite

ülekasvust tingitud akloorhüdria. Seda võivad põhjustada järgmised seisundid: pernitsioosne aneemia, varasem maooperatsioon või hiljutine prootonpumba inhibiitorite manustamine. Teised bakterid toodavad aga H. pylori’ga võrreldes oluliselt vähem ureaasi ega tohiks põhjustada värvi kiiret muutumist.

Kui esineb tegureid, mis võiksid ureaasi kiirtesti CLOtest* toimivust negatiivselt mõjutada, siis kaaluge H. pylori diagnoosi välistamiseks muude diagnostiliste meetmete, nt uurea hingamistesti ja seroloogia kasutamist.

Kirjandus1. Marshall BJ, Warren JR, Francis GJ, Langton SR, Goodwin CS, Blincow E. Rapid urease test in











37


Οδηγίες χρήσης Rx Only: Μόνο με συνταγή ιατρού: Η ομοσπονδιακή νομοθεσία (ΗΠΑ) περιορίζει την πώληση της συγκεκριμένης συσκευής μόνο από ιατρό ή με συνταγή ιατρού.

Προβλεπόμενη χρήσηΗ Ταχεία Δοκιμασία Ουρεάσης (ΤΔΟ) CLOtest* ανιχνεύει με ακρίβεια και ευκολία το ένζυμο ουρεάση του Helicobacter pylori, κατά τις βιοψίες γαστρικού βλεννογόνου. Προορίζεται για χρήση κατά την υποθετική διάγνωση λοίμωξης λόγω H. pylori.Σημείωση: Για in vitro διαγνωστική χρήση.Δεν είναι απαραίτητη η έγκριση της δοκιμασίας CLOtest* κατά CLIA ‘88.

ΣύνοψηΗ δοκιμασία CLOtest* αναπτύχθηκε από τον Barry Marshall, M.D1. Η ονομασία της προέρχεται από τις λέξεις «Campylobacter-Like Organism» test (δοκιμασία μικροοργανισμών παρόμοιων με το καµπυλοβακτηρίδιο)2. Οι Δρ. Robin Warren και Marshall καλλιέργησαν το βακτήριο για πρώτη φορά το 1982 με βάση βιοψίες των άντρων, και το ονόμασαν «βακτήριο παρόμοιο με το καµπυλοβακτηρίδιο»3. Το γένος ονομάστηκε αργότερα Helicobacter, που σημαίνει σπειροειδή ή ελικοειδή βακτήρια2.Το H. pylori έχει αποδειχθεί ότι προκαλεί χρόνια ενεργό γαστρίτιδα4 και αποτελεί παράγοντα κινδύνου για τον καρκίνο του στομάχου5 και για το λέμφωμα λεμφοειδούς τύπου που σχετίζεται με τους βλεννογόνους (MALT)6. Η εξάλειψη του H. pylori επιτυγχάνει την εξάλειψη ή τη μείωση της υποτροπής ελκών και μπορεί επίσης να μειώσει τον κίνδυνο εμφάνισης καρκίνου του στομάχου7,8.

Περιγραφή και φύλαξη προϊόντοςΤο CLOtest* είναι μια κυψελίδα με γέλη ενδεικτική της ουρεάσης, η οποία έχει σφραγιστεί στεγανά μέσα σε μια πλαστική πλάκα. Η γέλη περιέχει ουρία, ερυθρό της φαινόλης (δείκτη του pH) USP (29 mg/mL), ρυθμιστικά διαλύματα και έναν βακτηριοστατικό παράγοντα που αποτρέπει την ανάπτυξη μικροοργανισμών, θετικών στην ουρεάση, που μπορούν να μολύνουν τη δοκιμασία. Αν στο δείγμα ιστού υπάρχει ουρεάση από το H. pylori, αυτή αλλάζει το χρώμα της γέλης από κίτρινο σε έντονο ιώδες, με την παρακάτω αντίδραση:

ουρία νερό οξύ αμμώνιο διττανθρακικό

Η ΤΔΟ CLOtest* έχει διάρκεια ζωής 18 μηνών όταν φυλάσσεται σε θερμοκρασία 2°-8°C (36°-48°F). Η ημερομηνία λήξης του προϊόντος είναι η τελευταία ημέρα του μήνα που αναγράφεται στη συσκευασία. Μη χρησιμοποιήσετε το προϊόν αν η γέλη δεν είναι κίτρινη, αν το σφράγισμα έχει σπάσει και η γέλη φαίνεται να έχει αφυδατωθεί ή αν έχει παρέλθει η ημερομηνία λήξης. Αν έχετε απορίες, καλέστε τον αριθμό 1-844-425-9273 πριν χρησιμοποιήσετε το CLOtest*.

G

HALYARD* CLOtest*Ταχεία δοκιμασία ουρεάσης

NH2

C = O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

NH2

urea

urease


ουρεάση

38

Προετοιμασία ασθενούςΟ ασθενής θα πρέπει να διακόψει τη λήψη αντιβιοτικών και παρασκευασμάτων βισμουθίου τρεις εβδομάδες πριν από τη βιοψία. Οι παράγοντες αυτοί μπορούν να καταστείλουν την παρουσία του H. pylori, χωρίς να το εξαλείψουν, καθιστώντας έτσι δυσκολότερη την ανίχνευσή του με οποιονδήποτε τρόπο. Ο ασθενής δεν θα πρέπει να έχει λάβει αναστολείς της αντλίας πρωτονίων επί δύο εβδομάδες πριν από τη δοκιμασία, διότι τα φάρμακα αυτά έχει αποδειχθεί ότι αναστέλλουν την ανάπτυξη του μικροοργανισμού σε ορισμένα άτομα.

Η βιοψία1. Η συνιστώμενη γαστρική περιοχή για την εκτέλεση της βιοψίας βρίσκεται σε

απόσταση τουλάχιστον 2 cm από τον πυλωρό, κατά μήκος του ελάσσονος ή του μείζονος τόξου του άντρου. Αφαιρέστε ιστό με φυσιολογική όψη και αποφύγετε τους διαβρωμένους ή εξελκωμένους ιστούς, καθώς το H. pylori μπορεί να βρίσκεται σε μικρότερους αριθμούς γύρω από τις περιοχές αυτές. Η χρήση τυπικής λαβίδας βιοψίας θα πρέπει να επιτρέψει τη λήψη δείγματος επαρκούς μεγέθους για τη διεξαγωγή της δοκιμασίας.

2. Αν είναι επιθυμητό, μπορείτε να τοποθετήσετε ένα επιπλέον δείγμα μέσα σε μία μόνο κυψελίδα CLOtest*. Μη μολύνετε το δεύτερο δείγμα με αίμα από το πρώτο σημείο βιοψίας.

Συλλογή και χειρισμός του δείγματος1. Αφού αφαιρέσετε την πλάκα της ταχείας δοκιμασίας ουρεάσης CLOtest* από το

ψυγείο, ανασηκώστε την ετικέτα όσο απαιτείται για να αποκαλυφθεί η κίτρινη γέλη. Για ταχύτερα αποτελέσματα κατά τη δοκιμή, αφήστε τη γέλη να φτάσει σε θερμοκρασία δωματίου προτού εισαγάγετε το δείγμα της βιοψίας (συνήθως μεταξύ 7-10 λεπτών).

2. Χρησιμοποιώντας ένα καθαρό εργαλείο εφαρμογής (π.χ. οδοντογλυφίδα), ωθήστε ολόκληρο το δείγμα από τη λαβίδα κάτω από την επιφάνεια της γέλης, ώστε να εκτεθεί στη γέλη όσο το δυνατόν μεγαλύτερο μέρος του δείγματος. Βεβαιωθείτε ότι το δείγμα βιοψίας έχει εμβυθιστεί πλήρως στη γέλη.

3. Επανασφραγίστε την ευαίσθητη στην πίεση ετικέτα πάνω στην πλάκα και καταγράψτε το όνομα του ασθενούς, την ημερομηνία και την ώρα εισαγωγής του δείγματος βιοψίας.

4. Αν χρειαστεί, η πλάκα CLOtest* μπορεί να τοποθετηθεί σε εστία θέρμανσης, σε θερμοκρασία μεταξύ 30°-40°C (86°-104°F). Η εστία θέρμανσης μπορεί να επιταχύνει την αντίδραση και να αποδώσει ταχύτερα αποτελέσματα, η χρήση της όμως είναι προαιρετική και δεν επιδρά στην ακρίβεια της δοκιμασίας. Αν χρησιμοποιηθεί εστία θέρμανσης, η πλάκα δεν θα πρέπει να θερμανθεί επί περισσότερο από τρεις ώρες και θα πρέπει στη συνέχεια να φυλαχθεί σε θερμοκρασία δωματίου μέχρι την τελική ανάγνωση.

5. Καταγράψτε μια θετική αντίδραση μόλις αλλάξει το χρώμα της γέλης. Δεν απαιτείται νέα ανάγνωση μετά από θετική αντίδραση. Το 75% των θετικών δοκιμασιών αλλάζουν χρώμα μέσα σε 20 λεπτά (Εικ. 1).

Εικόνα 1:Χρονοδιάγραμμα θετικής αντίδρασης της ταχείας δοκιμασίας ουρεάσης CLOtest*.

Χρόνος (λεπτά)

39


Ερμηνεία των αποτελεσμάτων1. Ένα δείγμα που έχει μολυνθεί από αίμα μπορεί να προκαλέσει χρώση της γέλης

στις παρυφές του ιστού. Αυτό ΔΕΝ αποτελεί θετική δοκιμασία. Αν το δείγμα της βιοψίας περιέχει ουρεάση, η αλλαγή χρώματος εμφανίζεται αρχικά γύρω από το δείγμα και τελικά σε ολόκληρη τη γέλη.

2. Η αλλαγή του pH μιας θετικής δοκιμασίας εμφανίζεται αρχικά στην επιφάνεια διεπαφής της γέλης με το δείγμα βιοψίας. Αν υπάρχει σημαντική ποσότητα ουρεάσης, τότε η ορατή αλλαγή είναι ταχεία. Κάθε αλλαγή χρώματος ολόκληρης της ποσότητας της γέλης προς κάποιο άλλο χρώμα, αντί του κίτρινου (π.χ. κόκκινο, ιώδες, ροζ, βαθύ πορτοκαλί), υποδεικνύει την παρουσία του H. pylori.

3. Οι αρνητικές δοκιμασίες διατηρούν το κίτρινο χρώμα μετά την εισαγωγή του ιστού στη γέλη. Αν το χρώμα της γέλης παραμένει κίτρινο μετά από 24 ώρες, η δοκιμασία είναι αρνητική. Αν δεν είναι δυνατό να γίνει ανάγνωση στις 24 ώρες, η δοκιμασία παραμένει έγκυρη για 72 ώρες μετά την εισαγωγή του δείγματος βιοψίας στη γέλη. Αν π.χ. μια δοκιμασία που πραγματοποιείται την Παρασκευή δεν αλλάξει χρώμα μέχρι το τέλος της ημέρας, μπορεί να φυλαχθεί σε θερμοκρασία δωματίου και να αναγνωστεί τη Δευτέρα.

Πρωτόκολλο ασφάλειας από αστοχία (για τις απαιτήσεις αποποίησης της έγκρισης κατά CLIA)Σε κάθε περίπτωση αρνητικής δοκιμασίας, εκτελέστε τον παρακάτω θετικό έλεγχο για να βεβαιωθείτε ότι η ΤΔΟ CLOtest* λειτουργεί σωστά:1. Εισαγάγετε ένα δισκίο ουρεάσης (αρ. καταλόγου Halyard 60407) μέσα στη γέλη

CLOtest* και επανασφραγίστε την πλάκα.2. Μετά από πέντε λεπτά, εξετάστε τη γέλη για θετική αλλαγή χρώματος (κόκκινο ή

ιώδες).3. Αν το χρώμα της γέλης δεν αλλάξει προς το κόκκινο ή το ιώδες, ενημερώστε την

Halyard καλώντας τον αριθμό 1-844-425-9273.

Χαρακτηριστικά απόδοσηςΗ ΤΔΟ CLOtest* ανιχνεύει το 75% των λοιμώξεων από H. pylori μέσα σε 20 λεπτά, χωρίς ψευδώς θετικά αποτελέσματα1. Μέσα σε μία ώρα, το 85% των θετικών ασθενών ανιχνεύονται από τη δοκιμασία CLOtest* ενώ, μετά από τρεις ώρες, ανιχνεύεται το 90% των ασθενών. Μεταξύ 3 και 24 ωρών, η δοκιμασία CLOtest* ανιχνεύει ένα επιπλέον 5% των ασθενών. Στα πλαίσια της μεγαλύτερης μέχρι σήμερα μελέτης που διεξήχθη στις ΗΠΑ, οι Dye et al έλαβαν δείγματα βιοψίας του άντρου, ένα για ιστολογική εξέταση (χρώση Giemsa) και ένα για τη δοκιμασία CLOtest*, από 122 διαδοχικούς ασθενείς που υποβλήθηκαν σε ενδοσκοπική εξέταση ρουτίνας στο Πανεπιστήμιο της Βιρτζίνια9. Τα δείγματα ογδόντα δύο ασθενών υποβλήθηκαν και σε καλλιέργεια. Τα αποτελέσματα που προέκυψαν παρατίθενται στον παρακάτω πίνακα.

Πίνακας 1: Μελέτη CLOtest*, Dye et al, Πανεπιστήμιο της Βιρτζίνια Αληθές + Αληθές - Ψευδές + Ψευδές -CLOtest* n=121 46 72 2 1Ιστολογία n=122 43 74 5Καλλιέργεια n=82 23 49 10

Ευαισθησία ΕιδικότηταCLOtest* 98% 97%Ιστολογία 91% 100%Καλλιέργεια 70% 100%Παρόμοια αποτελέσματα παρατηρήθηκαν και από τους Schnell et al στο Μιζούρι10.

40

Περιορισμοί των ταχέων δοκιμασιών ουρεάσης, της ιστολογικής εξέτασης και της καλλιέργειαςΠιθανές αιτίες λήψης ψευδώς αρνητικών αποτελεσμάτων• Πολύ μικρός αριθμός H. pylori στο δείγμα ιστού • Ακανόνιστη κατανομή του H. pylori, με αποτέλεσμα να μη συλλαμβάνεται ο

μικροοργανισμός με το δείγμα ιστού• Δείγμα εντερικής μετάπλασης – (το H. pylori δεν αποικίζει τον εντερικό

βλεννογόνο)• Πρόσφατη λήψη αντιβιοτικών, βισμουθίου, αναστολέων της αντλίας πρωτονίων ή

σουκραλφάτης, τα οποία αναστέλλουν την ανάπτυξη του μικροοργανισμού• Μόλυνση του δείγματος από φορμόλη

Πιθανές αιτίες ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων• Εφόσον η δοκιμασία εκτελεστεί σωστά, τα ψευδώς θετικά αποτελέσματα είναι

σπάνια. Όψιμες ψευδώς θετικές αντιδράσεις (μετά από >12 ώρες) μπορεί να οφείλονται στη μερική εισαγωγή του δείγματος στη γέλη, με αποτέλεσμα να είναι δυνατή η ανάπτυξη στον ιστό μικροοργανισμών, οι οποίοι μολύνουν τη δοκιμασία.

• Θεωρητικά, ψευδώς θετικό αποτέλεσμα μπορεί να εμφανιστεί σε ασθενείς που έχουν εμφανίσει αχλωρυδρία λόγω βακτηριακής υπερανάπτυξης. Αυτό μπορεί να οφείλεται στις παρακάτω καταστάσεις: κακοήθης αναιμία, προηγούμενη χειρουργική επέμβαση στον στόμαχο ή πρόσφατη χρήση φαρμάκων αναστολής της αντλίας πρωτονίων. Τα άλλα βακτήρια όμως παράγουν πολύ μικρότερες ποσότητες ουρεάσης από το H. pylori και δεν θα πρέπει να προκαλέσουν ταχεία αλλαγή χρώματος.

Αν συνυπάρχουν παράγοντες που ενδέχεται να επηρεάσουν δυσμενώς την απόδοση της ταχείας δοκιμασίας ουρεάσης CLOtest*, εξετάστε το ενδεχόμενο χρήσης άλλων διαγνωστικών μέτρων, όπως είναι η αναπνευστική δοκιμασία ουρίας και η ορολογική εξέταση, προκειμένου να αποκλειστεί η διάγνωση του H. pylori.












41


Istruzioni per l’uso Rx Only: Solo dietro prescrizione medica: la normativa federale statunitense limita la vendita del presente dispositivo ai soli medici o dietro prescrizione di un medico.

Uso previstoIl test rapido dell’ureasi (TRU) CLOtest* rileva con precisione e facilità l’enzima ureasi dell’Helicobacter pylori nelle biopsie della mucosa gastrica. Il suo uso è destinato alla presunta diagnosi di infezione da H. pylori. N.B.: per uso diagnostico in vitro.Il CLOtest* è esente dai requisiti CLIA ‘88.

SommarioIl CLOtest*1 è stato sviluppato dal Dott. Barry Marshall. Il nome deriva dal test “Campylobacter-Like Organism” (organismi simili al Campylobacter)2. I Dott. Robin Warren e Marshall coltivarono il batterio tratto da biopsie dell’antro gastrico per la prima volta nel 1982 e lo chiamarono batterio simile al Campylobacter3. Successivamente, il genere venne denominato Helicobacter, che significa batterio a spirale o elicoidale2.È stato dimostrato che l’H. pylori causa gastrite cronica attiva4 ed è un fattore di rischio di cancro gastrico5 e linfoma di tipo linfoide associato alla mucosa6 (MALT). L’estirpazione dell’H. pylori è efficace per eliminare o ridurre la ricorrenza di ulcere e può anche ridurre il rischio di cancro gastrico7,8.

Descrizione e conservazione del prodottoIl CLOtest* consiste in un pozzetto con gel indicatore di ureasi sigillato dentro una piastrina di plastica. Il gel contiene urea, fenolsolfonftaleina USP (29 mg/mL) (un indicatore di pH), tamponi e un agente batteriostatico per evitare la crescita di microorganismi ureasi positivi contaminanti. Se l’ureasi proveniente dall’ H. pylori è presente nel campione di tessuto, essa cambia il gel da giallo a magenta acceso in base alla alla seguente reazione:

urea acqua acido ammonio bicarbonato

Il test rapido dell’ureasi CLOtest* ha una durata di 18 mesi se conservato a una temperatura compresa tra 2° e 8° C. Il prodotto scade l’ultimo giorno del mese indicato sulla confezione. Non usare il prodotto se il gel non è giallo, se il sigillo è danneggiato e il gel appare desidratato o se la data di scadenza è superata. Per ulteriori chiarimenti, telefonare al numero 1-844-425-9273 prima di usare il CLOtest*.

i

HALYARD* CLOtest*Test rapido dell’ureasi

NH2

C = O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

NH2

urea

urease


ureasi

42

Preparazione del pazienteIl paziente deve sospendere l’uso di antibiotici e preparati di bismuto tre settimane prima della biopsia. Questi agenti possono sopprimere ma non eliminare la presenza di H. pylori rendendo difficile la rilevazione dell’organismo con qualsiasi metodo. Per due settimane prima del test, il paziente non deve ingerire inibitori della pompa protonica poiché si è dimostrato che questi farmaci inibiscono la crescita dei batteri in alcune persone.

La biopsia1. La zona gastrica suggerita per eseguire la biopsia è lungo la curvatura maggiore

o minore dell’antro, per lo meno a 2 cm di distanza dal piloro. Escindere il tessuto di aspetto normale, evitando quello che è eroso o ulcerato dato che l’H. pylori può essere presente in minori quantità intorno a quelle zone. Con delle pinze standard per biopsia si può ottenere un campione di grandezza sufficiente per il test.

2. Se si desidera, si può inserire un altro campione in un solo pozzetto CLOtest*. Non contaminare il secondo campione con sangue del sito della prima biopsia.

Raccolta e manipolazione del campione1. Dopo avere ritirato la piastrina di test rapido dell’ureasi CLOtest* dalla

refrigerazione, sollevare l’etichetta abbastanza da esporre il gel giallo. Per risultati più rapidi, lasciare che il gel raggiunga la temperatura ambiente prima di inserire la biopsia (generalmente tra 7 e 10 minuti).

2. Con un applicatore pulito (ad esempio, uno stuzzicadenti o altro simile) spingere l’intero campione dalle pinze sotto la superficie del gel per esporre quanto più possibile del campione al gel. Accertarsi che il campione della biopsia sia completamente immerso nel gel.

3. Sigillare di nuovo l’etichetta a pressione sulla piastrina e registrare il nome del paziente, la data e l’ora in cui è stato inserito il campione della biopsia.

4. Se si desidera, la piastrina del CLOtest* può essere collocata su una piastra riscaldante a una temperatura tra 30° e 40° C. Benché la piastra riscaldante possa accelerare il tempo di reazione e rendere risultati più rapidi, il suo uso è opzionale e non influirà sulla precisione del test. Se si usa la piastra riscaldante, si deve riscaldare la piastrina per non oltre tre ore, quindi la si deve lasciare a temperatura ambiente fino al momento della lettura definitiva.

5. Registrare la reazione positiva appena il gel cambia di colore. Una volta ottenuta una reazione positiva non è necessaria una lettura ulteriore. Il 75% dei test positivi cambia colore entro 20 minuti (Fig.1).

Figura 1:Grafico del tempo di reazione positiva con il test rapido dell’ureasi CLOtest*.

Tempo (minuti)

Interpretazione dei risultati1. Un campione contaminato con sangue può macchiare il gel intorno al bordo

43


del tessuto. Ciò NON costituisce un test positivo. Se la biopsia contiene ureasi, il cambiamento appare prima attorno al campione e poi colora tutto il gel.

2. Il cambiamento di pH in un test positivo si vede prima nella zona di contatto tra il gel e la biopsia. Il cambiamento avviene rapidamente se c’è una quantità significativa di ureasi. Qualsiasi cambiamento di colore di tutto il gel a una tonalità che non sia il giallo (ad esempio, rosso, magenta, rosa, arancione scuro) indica la presenza di H. pylori.

3. Un test negativo rimane giallo dopo avere inserito il tessuto nel gel. Se il colore del gel è giallo dopo 24 ore, il test è negativo. Se il test non si può leggere trascorse le 24 ore, rimane valido per 72 ore dopo l’inserimento della biopsia nel gel. Ad esempio, se un test eseguito il venerdì non ha cambiato colore alla fine della giornata, si può riporre e leggerlo il lunedì.

Protocollo esente da errori (per l’esclusione dei requisiti CLIA)Con ogni test negativo, eseguire il seguente controllo positivo per assicurarsi che il TRU CLOtest* funzioni correttamente:1. Inserire una compressa di ureasi (N. di catalogo Halyard 60407) nel gel di

CLOtest* e sigillare di nuovo la piastrina.2. Dopo 5 minuti, esaminare il gel per vedere se il colore è cambiato (rosso o

magenta).3. Se il gel non è diventato rosso o magenta, informare Halyard al numero 1-844-

425-9273.

Caratteristiche di rendimentoIl TRU CLOtest* rileva il 75% delle infezioni da H. pylori nel giro di 20 minuti senza falsi positivi1. Il CLOtest* rileva l’85% dei pazienti positivi in un’ora e il 90% dopo tre ore. CLOtest* rileva l’altro 5% dei pazienti tra 3 e 24 ore. Nello studio più vasto condotto fino ad oggi negli Stati Uniti, Dye et al. hanno eseguito biopsie dell’antro di 122 pazienti consecutivi con endoscopia di routine presso la University of Virginia9 per eseguire in ciascuno di essi un esame istologico (colorazione di Giemsa) e il CLOtest*. Sono state eseguite inoltre colture di campioni estratti da 82 pazienti. La tabella che segue illustra i risultati ottenuti.

Tabella 1: Studio CLOtest*, Dye et al, University of Virginia Vero + Vero - Falso + Falso -CLOtest* n=121 46 72 2 1Esame istologico n=122 43 74 5Coltura n=82 23 49 10

Sensibilità SpecificitàCLOtest* 98% 97%Esame istologico 91% 100%Coltura 70% 100%Risultati analoghi sono stati osservati da Schnell et al nel Missouri10.

Limitazioni dei test rapidi dell’ureasi, esami istologici e colturePossibili cause dei falsi negativi• Numero molto basso di H. pylori nel campione di tessuto• Distribuzione dell’ H. pylori poco uniforme di modo che l’organismo non viene

captato nel campione di tessuto

44

• Campione di metaplasia intestinale (l’ H. pylori non colonizza la mucosa intestinale)

• Ingestione recente di antibiotici, bismuto, inibitori della pompa protonica o sucralfato, che possono inibire i batteri

• Contaminazione del campione con formalina

Possibili cause dei falsi positivi• Quando il test viene eseguito correttamente, i falsi positivi sono rari. Le

reazioni false positive tardive (>12 ore) possono essere causate dal non inserire totalmente il campione dentro il gel, di modo che gli organismi contaminanti possono crescere nel tessuto.

• In teoria, un falso positivo potrebbe prodursi in pazienti che soffrono di acloridria causata da proliferazione batterica. Ciò potrebbe essere il risultato delle seguenti condizioni: anemia perniciosa, intervento chirurgico gastrico precedente o uso recente di farmaci inibitori della pompa protonica. Comunque, altri batteri producono una quantità molto minore di ureasi dell’H. pylori e non causano un cambiamento di colore rapido.

Se ci fossero fattori che possano influire negativamente sul rendimento del test rapido dell’ureasi CLOtest*, considerare la possibilità di adottare altre misure diagnostiche per escludere la diagnosi di H. pylori, quali il test del respiro e l’esame serologico.

Bibliografia1. Marshall BJ, Warren JR, Francis GJ, Langton SR, Goodwin CS, Blincow E. Rapid urease test in











45


Lietošanas pamācībaRx Only: Tikai ar ārsta recepti: ASV federālais likums nosaka šīs ierīces pārdošanu tikai ārstam vai pēc ārsta rīkojuma.

Paredzētā lietošanaCLOtest* ātrais ureāzes tests (ĀUT) precīzi un ērti nosaka ureāzes enzīma Helicobacter pylori esamību kuņģa gļotādas biopsijas paraugos. To lieto, lai noteiktu iespējamu inficēšanos ar H. pylori.Ievērībai: Diagnostikai in vitro.CLIA ‘88 uz CLOtest* prasības neizvirza.

PārskatsCLOtest*1 ir izgudrojis Barijs Maršals, M.D. Tā nosaukums cēlies no “Campylobacter-Like Organism” (kampilobakteriozā organisma) testa2. Ārsti Robins Vorens un Maršals baktēriju vispirms kultivēja no antrālajām biopsijām 1982. gadā, nosaucot to par kampilobakteriozo baktēriju (Campylobacter-like bacterium)3. Vēlāk ģints tika nosaukta par Helicobacter, kas apzīmēja spirālveida baktēriju2.Ir pierādīts, ka H. pylori var izraisīt aktīvu hronisko gastrītu4 un ir riska faktors kuņģa vēzim5 un ar gļotādu saistītajai limfas tipa (MALT) limfomai6. H. pylori iznīcināšana ir efektīvs līdzeklis čūlu recidīva un arī kuņģa vēža riska samazināšanā7,8.

Izstrādājuma apraksts un uzglabāšanas noteikumiCLOtest* ir ureāzes indikatora gēla krātuve, noslēgta plastmasas slaidā. Gēls satur urīnvielu, USP (29 mg/ml) fenola sarkano (pH indikatoru), bufervielas un bakteriostatisko līdzekli, lai novērstu piesārņojošo ureāzes-pozitīvo organismu attīstību. Ja audu paraugā ir H. pylori, gēls pārkrāsojas no dzeltenās krāsas spilgtā fuksīna krāsā, atbilstoši sekojošai ķīmiskajai reakcijai:

urīnviela ūdens skābe amonijs bikarbonāts

CLOtest* ĀUT uzglabāšanas laiks ir 18 mēneši, ja tas tiek uzglabāts 2°- 8°C temperatūrā. Izstrādājuma derīguma termiņš izbeidzas sākot ar mēneša, kas norādīts uz iepakojuma, pēdējo dienu. Nelietojiet izstrādājumu, ja gēls nav dzeltens, iepakojums ir bojāts un gēls izskatās izžuvis, vai derīguma termiņš ir beidzies. Ja vēlaties sanemt plašāku informāciju pirms CLOtest* lietošanas, zvaniet uz 1-844-425-9273.

Pacienta sagatavošanaPacientam ir jāpārtrauc antibiotiku un bismuta preparātu lietošanu trīs nedēļas pirms biopsijas. Šie līdzekļi spēj nomākt, bet ne likvidēt H. pylori, un izraisa grūtības organisma noteikšanā ar jebkādām metodēm. Pacients nedrīkst būt lietojis protona

l

HALYARD* CLOtest*Ātrais ureāzes tests

NH2

C = O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

NH2

urea

urease


ureāze

46

sūkņa inhibitorus divas nedēļas pirms testa, jo ir konstatēts, ka šīs zāles dažām personām var kavēt organisma attīstību.

Biopsija1. Ieteicamā gastriskā zona biopsijai atrodas vismaz 2 cm prom no pilorusa,

gar antruma lielāko vai mazāko līkni. Izgrieziet audus, kas izskatās normāli - neaizskariet audus, kas ir saēsti vai čūlā, jo tajās zonās H. pylori var būt mazākā skaitā. Pietiekami liels paraugs testam var tikt izņemts ar parastajām biopsijas knaiblēm.

2 Ja vēlaties, varat ievietot papildu paraugu vienā CLOtest* krātuvē. Nepiesārņojiet otro paraugu ar asinīm no pirmā parauga biopsijas vietas.

Parauga savākšana un apstrāde1. Pēc CLOtest* ātrās ureāzes testa slaida izņemšanas no saldētājiekārtas, paceliet

uzlīmi tik augstu, lai atklātu dzelteno gēlu. Lai rezultātus iegūtu ātrāk, pirms biopsijas parauga ievietošanas ļaujiet gēlam sasniegt istabas temperatūru (parasti 7 -10 minūtes).

2. Ar tīru aplikatoru (piem. zobu bakstāmo u. c.) iespiediet visu paraugu no knaiblēm zem gēla virsmas, lai gēlam atklātu tik daudz no parauga, cik vien iespējams. Pārliecinieties, ka biopsijas paraugs ir pilnībā iegremdēts gēlā.

3. Novietojiet atpakaļ pret spiedienu jutīgo uzlīmi uz slaida, pierakstiet pacienta vārdu, uzvārdu, datumu un biopsijas parauga ievietošanas laiku.

4. Ja vēlams, CLOtest* slaidu var novietot uz sildītājplates 30°- 40°C temperatūrā. Lai gan sildītājplates lietošana var paātrināt reakcijas laiku un sniegt rezultātus ātrāk, tās lietošana nav obligāta un testa precizitāte ietekmēta netiks. Ja tiek lietota sildītājplate, slaida sildīšana jāveic ne ilgāk par trīs stundām. Tad to jāuzglabā istabas temperatūrā līdz galīgā rezultāta noteikšanai.

5. Atzīmējiet pozitīvu reakciju, tiklīdz gēls maina krāsu. Pēc pozitīvās reakcijas citi lasījumi nav nepieciešami. 75% pozitīvo testu maina krāsu 20 minūtēs (1. attēls).

1. attēls:CLOtest* ātrās ureāzes testa pozitīvās reakcijas laika grafiks.

Laiks (minūtes)

Rezultātu interpretācija1. Ar asinīm piesārņots paraugs var sasmērēt gēlu ap audu malām. Tāds tests NAV

pozitīvs. Ja biopsijas paraugs satur ureāzi, reakcija vispirms notiek ap parauga malām un pēc tam nokrāsojas viss gēls.

2. pH reakcija pozitīvajā testā vispirms tiek novērota zonā starp gēlu un biopsijas paraugu. Ja ureāze ir nozīmīgā daudzumā, izmaiņas noris ātri. Ja visa gēla krāsa izmainās uz jebkādu citu krāsu, nevis dzeltenu (piem., sarkanu, fuksīna, sārtu, spilgti oranžu), tad paraugā ir H. pylori.

3. Tests ir negatīvs, ja pēc audu ievietošanas gēlā tas saglabā dzelteno krāsu. Ja gēla krāsa pēc 24 stundām ir dzeltena, tests ir negatīvs. Ja testu nav iespējams nolasīt 24 stundu laikā, paraugs paliks derīgs nolasīšanai vēl 72 stundas pēc

47


biopsijas parauga ievietošanas gēlā. Piemēram, ja tests ir veikts piektdien un krāsa līdz dienas beigām nav mainījusies, to var uzglabāt istabas temperatūrā līdz pirmdienai.

Bezatteices protokols (CLIA prasību neizvirzīšanas sakarā)Ar katru negatīvo testu veiciet sekojošo pozitīvās reakcijas kontroli, lai nodrošinātu, ka CLOtest* ĀUT darbojas pareizi:1. Ievietojiet ureāzes tableti (Halyard kataloga nr. 60407) CLOtest* gēlā un

noslēdziet slaidu.2. Pēc piecām minūtēm pārbaudiet gēlu, vai nav notikusi pozitīvas reakcijas krāsas

maiņa (sarkana vai fuksīna).3. Ja gēls nepārvēršas sarkanā vai fuksīna krāsā, ziņojiet Halyard uz 1-844-425-

9273.

Veiktspējas raksturojumsCLOtest* ĀUT nosaka 75% H. pylori infekciju 20 minūtēs, bez maldīgām pozitīvām reakcijām1. Stundas laikā CLOtest* noteiks 85% pozitīvos pacientus un trīs stundu laikā tiks noteikti 90%. Starp 3 un 24 stundām CLOtest* noteiks vēl 5% pacientu. Lielākajā ASV pētījumā, kas reģistrēts uz šo brīdi, Dajs un citi veica antrālās biopsijas - vienu histoloģijai (Giemsa iekrāsojums) un vienu CLOtest* 122 rutīnas endoskopijas pacientiem (secībā) Virdžīnijas universitātē9. Astoņdesmit diviem pacientiem tika arī kultivētas parauga kultūras. Iegūtie rezultāti parādīti zemāk.

1. tabula: CLOtest* pētījums, Dajs un citi, Virdžīnijas universitāte Patiesi + Patiesi - Nepatiesi + Nepatiesi -CLOtest* n=121 46 72 2 1Histoloģija n=122 43 74 5Kultūra n=82 23 49 10

Jutība SpecifiskumsCLOtest* 98% 97%Histoloģija 91% 100%Kultūra 70% 100%Līdzīgus rezultātus novēroja Šnels un citi Misūri10.

Ātrā ureāzes testa, histoloģijas un kultūras ierobežojumiIespējamie nepatieso negatīvo reakciju cēloņi• Nepietiekošs H. pylori daudzums audu paraugā • Nevienmērīgs H. pylori izplatījums, kas neļauj uztvert organismu audu paraugā• Zarnu metaplāzijas paraugs - (H. pylori nekolonizē zarnu gļotādu)• Organisma augšanu var kavēt nesena antibiotiku lietošana, bismuts, protona

sūkņa inhibitori vai sukralfāts• Formalīna piesārņojums paraugā

Iespējamie nepatieso pozitīvo reakciju cēloņi• Ja tests tiek veikts pareizi, nepatiesās pozitīvās reakcijas notiek reti. Novēlojušās

nepatiesās pozitīvās reakcijas (>12 stundas) var notikt, ja biopsijas paraugs nav pilnībā ievietots gēlā un audos izplatās piesārņotāji.

• Teorētiski, nepatiesā pozitīvā reakcija var rasties pacientā, kam ir ahlorīdija no baktēriju hipertrofijas. Tas varētu būt sekojošo apstākļu rezultāts: ļaundabīgā

48

mazasinība, iepriekšēja kuņģa operācija, nesena protonu sūkņa inhibitoru lietošana. Tomēr, citas baktērijas izdala daudz mazāk ureāzi nekā H. pylori un tām nevajadzētu izraisīt ātru krāsas maiņu.

Ja ir tādi faktori, kas varētu nelabvēlīgi ietekmēt CLOtest* ātro ureāzes testu, tad lai izslēgtu H. pylori diagnozi, ir jāņem vērā arī citi diagnostiskie līdzekļi, kā piem. elpas urīnvielas noteikšana un seroloģija.

Bibliogrāfija1. Marshall BJ, Warren JR, Francis GJ, Langton SR, Goodwin CS, Blincow E. Rapid urease test in











49


Naudojimo instrukcija Rx Only: Receptinis prietaisas – federaliniai (JAV) įstatymai numato, kad šį įtaisą galima parduoti tik gydytojui arba jo nurodymu.

Numatytoji paskirtisCLOtest* greitasis ureazės testas tiksliai ir nesudėtingai skrandžio gleivinės biopsijos mėginiuose nustato Helicobacter pylori išskiriamo ureazės fermento aktyvumą. Jis yra skirtas numanomai H. pylori infekcijos diagnozei.Pastaba: skirta diagnostikai in vitro.CLOtest* priemonei 1988 m. CLIA klinikinių laboratorijų tobulinimo pataisų standartai netaikomi.

SantraukaCLOtest* testą sukūrė medicinos daktaras Barry Marshall1. Pavadinimas atspindi „į Campylobacter panašaus mikroorganizmo“ tyrimą2. Gydytojai Robin Warren ir Marshall pirmą kartą šios bakterijos pasėlį iš skrandžio urvo bioptato išaugino 1982 m. ir ją pavadino į Campylobacter panašia bakterija3. Vėliau ši gentis buvo pavadinta Helicobacter, kas reiškia spiralinę ar susivijusią bakteriją2.Nustatyta, kad H. pylori sukelia lėtinį aktyvųjį gastritą4 ir yra skrandžio vėžio5 bei su gleivine susijusio limfinio audinio (MALT) limfomos6 rizikos veiksnys. H. pylori eradikacija yra veiksminga priemonė gydant opas ar slopinant jų atsinaujinimą, taip pat gali sumažinti skrandžio vėžio7,8 riziką.

Gaminio aprašymas ir laikymo sąlygosCLOtest* yra ureazės indikatoriniu geliu užpildytas šulinėlis, užsandarintas plastikiniame stiklelyje. Gelio terpės sudėtyje yra šlapalo, JAV farmakopėjos (29 mg/ml) fenolio raudonojo (pH indikatoriaus), buferinių tirpalų ir bakteriostatinės medžiagos, kad nesidaugintų teigiamai su ureaze reaguojantys šalutinės mikrofloros mikroorganizmai. Jei audinio mėginyje esama H. pylori išskirtos ureazės, gelio spalva iš geltonos pasikeičia į skaisčiai purpurinę pagal tokią reakciją:

šlapalas vanduo rūgštis amonis hidrokarbonatas

CLOtest* greitojo ureazės testo tinkamumo trukmė, laikant 2 °C – 8 °C (36 °F – 48 °F) temperatūroje, yra 18 mėnesių. Gaminio tinkamumo terminas baigiasi paskutinę ant pakuotės nurodyto mėnesio dieną. Nenaudokite šio gaminio, jei gelio spalva nėra geltona, jei pažeistas sandariklis ir gelis atrodo išdžiūvęs arba jei pasibaigęs tinkamumo terminas. Iškilus klausimų, prieš pradėdami naudoti CLOtest* skambinkite tel.: 1-844-425-9273.

L

HALYARD* CLOtest*Greitasis ureazės testas

NH2

C = O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

NH2

urea

urease


ureazė

50

Pacientų paruošimasLikus trims savaitėms iki biopsijos pacientas turi nutraukti antibiotikų ir bismuto preparatų vartojimą. Šios medžiagos gali prislopinti, bet nesunaikinti, H. pylori kolonijas, ir dėl to mikroorganizmą gali būti sunku aptikti bet kokiomis priemonėmis. Dvi savaites prieš tyrimą pacientas negali vartoti geriamųjų protonų siurblio inhibitorių, nes yra nustatyta, kad šie vaistai kai kuriems asmenims slopina mikroorganizmo augimą.

Biopsija1. Biopsiją rekomenduojama atlikti bent 2 cm nuo prievarčio nutolusioje skrandžio

srityje, palei mažąją ar didžiąją urvo kreivę. Išpjaukite audinį, kuris atrodo sveikas – venkite audinių, kurie paveikti erozijos ar išopėję, nes aplink šias sritis H. pylori kolonijos gali būti mažesnės. Standartinėmis biopsijos žnyplėmis galima paimti šiam testui pakankamo dydžio mėginį.

2. Pageidaujant į tą patį CLOtest* šulinėlį galima įleisti papildomą mėginį. Antrojo mėginio neužterškite krauju iš pirmosios biopsijos vietos.

Mėginių ėmimas ir ruošimas1. Iš šaldytuvo išėmę CLOtest* greitojo ureazės testo stiklelį, pakelkite etiketę tiek,

kiek reikia geltonam geliui atidengti. Jei reikia spartesnių testo rezultatų, prieš įterpdami bioptatą leiskite geliui atšilti iki kambario temperatūros (paprastai 7–10 minučių).

2. Švariu aplikatoriumi (pvz., dantų krapštuku ar pan.) visą mėginį nuo žnyplių nustumkite gilyn po gelio paviršiumi, kad gelis apsemtų kiek įmanoma daugiau mėginio. Biopsijos mėginys turi būti visiškai panardintas į gelį.

3. Vėl užsandarinkite spaudimui jautrią stiklelio etiketę ir užrašykite paciento vardą, pavardę ir biopsijos mėginio įterpimo datą bei laiką.

4. Pageidaujant CLOtest* stiklelį galima padėti ant 30 °C – 40 °C (86 °F – 104 °F) temperatūros kaitlentės. Nors kaitlentė gali pagreitinti reakcijos laiką ir paspartinti rezultatus, jos naudojimas yra nebūtinas ir neturės įtakos tyrimo tikslumui. Naudojant kaitlentę stiklelio negalima šildyti ilgiau nei tris valandas, paskui jis turi būti laikomas kambario temperatūroje iki galutinio įvertinimo.

5. Teigiamą reakciją užregistruokite tuoj pat, kai tik pakis gelio spalva. Teigiamai reakcijai įvykus, toliau tirti nebūtina. 75 % visų teigiamos reakcijos testų spalvą pakeičia per 20 minučių (1 pav.).

1 pav.CLOtest* greitojo ureazėstesto teigiamos reakcijostrukmės grafikas.

Trukmė (minutės)

Rezultatų interpretavimas1. Krauju užterštas mėginys gali nudažyti gelį aplink audinio pakraščius. Tai NĖRA

teigiama testo reakcija. Jei bioptate esama ureazės, pokyčiai pirmiausiai pradės ryškėti aplink mėginį ir galiausiai nusispalvins visas gelis.

2. Teigiamos reakcijos testo pH pokyčiai pirmiausiai pastebimi ties gelio ir bioptato susilietimo riba. Jei mėginyje esama žymaus ureazės kiekio, matomi pokyčiai

51


vyksta greitai. Viso gelio spalvinis pakitimas iš geltono į bet kokį kitą atspalvį (pvz., raudoną, purpurinį, rausvą, sodriai oranžinį) rodo H. pylori buvimą.

3. Neigiamo testo terpė, audinį įterpus į gelį, išlieka geltonos spalvos. Jei praėjus 24 valandoms gelio spalva tebėra geltona, testo rezultatas yra neigiamas. Jei po 24 valandų nėra galimybės patikrinti tyrimo rezultatų, tie rezultatai tebegalios 72 valandas nuo bioptato įterpimo į gelio terpę. Pavyzdžiui, jei penktadienį atlikto testo terpė iki dienos pabaigos nepakeitė spalvos, jį galima laikyti kambario temperatūroje ir patikrinti pirmadienį.

Patikimumo užtikrinimo protokolas (pagal CLIA kokybės nuolaidos reikalavimus)Gavę neigiamą testo rezultatą, kiekvieną kartą atlikite teigiamos kontrolės tyrimą, kad įsitikintumėte tinkamu CLOtest* greitojo ureazės testo veikimu:1. Į CLOtest* gelį įterpkite ureazės tabletę („Halyard“ katalogo Nr. 60407) ir vėl

užsandarinkite stiklelį.2. Po penkių minučių patikrinkite, ar gelis nenusispalvino teigiamos reakcijos

spalva (raudona ar purpurine).3. Jei gelis nepakeitė spalvos į raudoną ar purpurinę, apie tai praneškite „Halyard“

tel. 1-844-425-9273.

Metrologinės charakteristikosCLOtest* greitasis ureazės testas per 20 minučių aptinka 75 % H. pylori infekcijų be klaidingai teigiamų rezultatų1. Per vieną valandą CLOtest* patvirtina 85 % teigiamos reakcijos pacientų, o per tris valandas nustatoma 90 % infekcijų. 3–24 valandų laikotarpiu CLOtest* aptinka dar 5 % pacientų. Didžiausio tuometinio tyrimo JAV metu Dye ir kiti tyrėjai Virginijos universitete atlikdami įprastus endoskopinius tyrimus iš 122 pacientų paeiliui paėmė urvo bioptatus, po vieną histologiniam tyrimui (dažant Gimzos dažais) ir CLOtest* testui9. Taip pat iš aštuoniasdešimt dviejų pacientų mėginių buvo auginti pasėliai. Toliau lentelėje pateikiami šių tyrimų rezultatai.

1 lentelė. CLOtest* tyrimas, Dye ir kiti, Virginijos universitetas Teisinga + Teisinga - Klaidinga + Klaidinga -CLOtest* n=121 46 72 2 1Histologija n=122 43 74 5Pasėlis n=82 23 49 10

Jautris SpecifiškumasCLOtest* 98% 97%Histologija 91% 100%Pasėlis 70% 100%Panašių rezultatų Schnell ir kt. pasiekė JAV Misūrio valstijoje10

Greitųjų ureazės testų, histologinių ir pasėlio tyrimų ribotumaiGalimos klaidingai neigiamų rezultatų priežastys• Labai mažas H. pylori skaičius audinio mėginyje • H. pylori bakterijos pasiskirstę netolygiai ir mikroorganizmas nepateko į audinio

mėginį• Žarnų metaplazijos mėginys (H. pylori kolonijos žarnyno gleivinėje neplinta)• Neseniai vartoti antibiotikai, bismuto preparatai, protonų siurblio inhibitoriai ar

52

sukralfatas, kurie gali prislopinti šį mikroorganizmą• Mėginys užterštas formalinu

Galimos klaidingai teigiamų rezultatų priežastys• Teisingai atliekant tyrimą, klaidingai teigiami rezultatai pasitaiko retai. Vėlyvas

klaidingai teigiamas reakcijas (> 12 valandų) gali sukelti nevisiškas biopsijos mėginio įterpimas į gelį, dėl šios priežasties tiriamame audinyje gali priaugti šalutinės mikrofloros mikroorganizmų.

• Klaidingai teigiami rezultatai teoriškai gali pasitaikyti pacientams, sergantiems achlorhidrija, dėl bakterijų pertekliaus. Tokią būklę gali nulemti šios sąlygos: piktybinė mažakraujystė, ankstesnė skrandžio operacija arba neseniai vartoti protonų siurblio inhibitorių vaistai. Vis dėlto kitos bakterijos išskiria žymiai mažiau ureazės nei H. pylori, todėl neturėtų sukelti staigaus spalvos pokyčio.

Jei esama veiksnių, kurie gali neigiamai paveikti CLOtest* greitojo ureazės testo metrologinį tikslumą, H. pylori diagnozei atmesti imkitės kitų diagnostinių priemonių, tokių kaip šlapalo iškvepiamame ore testas ar serologiniai tyrimai.

Bibliografiniai šaltiniai1. Marshall BJ, Warren JR, Francis GJ, Langton SR, Goodwin CS, Blincow E. Rapid urease test in











53


Használati útmutató Rx Only: Kizárólag orvosi rendelvényre: Az (Amerikai Egyesült Államok) szövetségi törvényei értelmében az eszköz csak orvos számára vagy orvosi rendelvényre értékesíthető.

Alkalmazási javallatA CLOtest* gyors ureáz teszt (RUT) pontos és kényelmes módon mutatja ki a gyomor nyálkahártyájából vett biopsziában a Helicobacter pylori ureáz enzimjét. Használatával valószínűsíthető módon kimutatható a H. pylori fertőzés.Megjegyzés: In vitro diagnosztizáláshoz.A CLOtest* a CLIA ‘88-at váltotta.

ÖsszefoglalásA CLOtest*-et Dr. Barry Marshall fejlesztette ki1. A név a „Campylobacter-féle organizmus” tesztből2 („Campylobacter-Like Organism”) származik. A baktériumot először Dr. Robin Warren és Dr. Marshall tenyésztette ki gyomorbiopsziából 1982-ben, és Campylobacter-féle baktériumnak3 hívták. Ezt követően a nemzetséget Helicobacternek nevezték el, ami spirális vagy csigavonalú baktériumot2 jelent.Kimutatták, hogy a H. pylori krónikus aktív gyomorgyulladást4 okoz, és a gyomorrák5, valamint a nyálkahártyával összefüggő limfoid típusú (MALT) limfóma kialakulásának kockázati tényezője6. A H. pylori baktérium eradikációjával megszüntethetők vagy hatékony csökkenthetők a visszatérő fekélyek, valamint csökkenhet a gyomorrák kialakulásának a veszélye is7,8.

Termékleírás és tárolásA CLOtest* egy, az ureáz enzim detektálásra használható zselégolyó, ami egy elcsúsztatható műanyag lapkában található. A zselé ureázt, USP-t (29 mg/ml), fenolvörös indikátort (pH indikátor), puffert és bakteriosztatikus anyagot tartalmaz, ami meggátolja az ureáz-pozitív szennyező organizmusok fejlődését. Ha a H. pylori baktériumból származó ureáz jelen van a szövetmintában, a zselé sárga színe, élénk magenta színre változik, a következő reakció alapján:

ureáz víz sav ammónia bikarbonát

A CLOtest* gyors ureáz teszt 2°–8°C (36°–48°F) között 18 hónapig tárolható. A termék szavatossága a csomagoláson jelzett hónap utolsó napján jár le. Ne használja fel a terméket, ha a zselé nem sárga, ha a hegesztés sérült, ha a zselé száraznak tűnik vagy ha lejárt a felhasználhatósági ideje. Ha további kérdése merülne fel, a CLOtest* használata előtt hívja az alábbi számot: 1-844-425-9273.

h

HALYARD* CLOtest*Gyors ureáz teszt

NH2

C = O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

NH2

urea

urease


ureáz

54

Beteg előkészítéseA betegnek a biopszia előtt három héttel abba kell hagynia az antibiotikumok és bizmut-készítmények szedését. Ezek az anyagok elnyomják a H. pylori jelenlétét, de nem irtják ki őket, ami megnehezíti az organizmus észlelését. A beteg két héttel a teszt előtt már nem fogyaszthat protonpumpa-gátló gyógyszereket, mert kimutatták, hogy egyes emberekben ezek a gyógyszerek gátolják az organizmus fejlődését.

Biopszia1. Ajánlatos a biopsziát legalább 2 cm-re a gyomorzártól, a kishajlás vagy

nagyhajlás mentén venni. Épnek kinéző szövetet válasszon – kerülje a sérült vagy fekélyes szöveteket, mert az ilyen területeken a H. pylori baktérium kisebb számban van jelen. Egy hagyományos biopszia csipesszel vett minta a teszthez megfelelő méretű lesz.

2. Ha szeretné, egy további minta is behelyezhető ugyanabba a CLOtest*-be. Vigyázzon, hogy ne fertőzze meg a második mintát az első minta helyéről származó vérrel.

Mintavétel és mintakezelés1. Miután kivette a CLOtest* gyors ureáz tesztet a hűtőből, a címkét annyira

emelje fel, hogy a sárga zselégolyó látható hozzáférhető legyen. A gyorsabb eredmény érdekében hagyja a zselét szobahőmérsékletűre melegedni, mielőtt belehelyezné a biopsziát (általában 7–10 perc).

2. Egy tiszta applikátor-eszközzel (pl. egy fogpiszkálóval stb.) nyomja az egész mintát a csipeszről a zselé felszíne alá úgy, hogy minél több minta érintkezzen a zselével. Győződjön meg róla, hogy a minta teljes terjedelmével a zselében van.

3. Zárja vissza a nyomásérzékeny címkét a lapka szélein, majd írja rá a beteg nevét, a dátumot és az időpontot, amikor a biopsziát a zselébe helyezte.

4. Ha szeretné, a CLOtest* lapkát egy 30°–40°C-os (86°–104°F) melegítőlapra is ráhelyezheti. A melegítés felgyorsíthatja a reakciót, ezáltal gyorsabban kaphat eredményt, használata opcionális és nem befolyásolja a teszt pontosságát. Ha melegítőlapot használ, a lapkát ne melegítse három óránál tovább, majd a végső leolvasásig tárolja szobahőmérsékleten.

5. Amint a zselé színe megváltozik, a pozitív reakció lezajlott. Amint a pozitív reakció végbement, nincs szükség további leolvasásra. A pozitív tesztek 75%-a 20 percen belül megváltoztatják a színüket (1. ábra).

1. ábra:CLOtest* gyors ureáz tesztPozitív reakcióidőskála.

Idő (perc)

Az eredmények értelmezése1. Egy vérrel fertőzött minta megfestheti a szövet széle körüli zselét. Ez NEM

minősül pozitív eredménynek. Ha a biopszia tartalmaz ureázt, a színváltozás először a minta körül jelenik meg, majd az egész zselé színe megváltozik.

2. Egy pozitív teszt pH változása először a zselé és a biopszia érintkezési felületén

55


látható. Ha jelentős mennyiségű ureáz található a mintában, a változás gyorsan lezajlik. A teljes zselégolyó sárgától bármilyen árnyalatban eltérő (pl.: vörös, magenta, rózsaszín, mély narancssárga) színváltozása a H. pylori baktérium jelenlétét jelzi.

3. Egy negatív teszt a szövet zselébe helyezése után is sárga marad. Ha 24 óra elteltével a zselé színe továbbra is sárga, az eredmény negatív. Ha 24 óra elteltével nem tudja leolvasni az eredményt, a teszt a biopszia zselébe helyezésétől számított 72. óráig érvényes. Például, ha a pénteken elvégzett teszt a nap végére nem változtatja meg a színét, a teszt szobahőmérsékleten tovább tárolható és leolvasható még hétfőn is.

Biztonsági protokoll (a Clia Waiver követelményhez)Minden egyes negatív teszt után a teszten el kell végezni a pozitív kontroll tesztet is, ezzel igazolva, hogy a CLOtest* gyors ureáz teszt megfelelően működik:1. Helyezze egy ureáz tablettát (Halyard katalógusszám: 60407) a CLOtest* zselébe,

és zárja vissza a lapkát.2. Öt perc elteltével vizsgálja meg a zselét, hogy változott-e a színe (vörösre vagy

magentára).3. Ha a zselé színe nem váltott vörösre vagy magentára, értesítse a Halyard

vállalatot a 1-844-425-9273-as telefonszámon.

Teljesítményi jellemzőkA CLOtest* gyors ureáz teszt a H. pylori fertőzések 75%-át 20 percen belül kimutatják, fals pozitív eredmény nélkül1. Egy óra elteltével a pozitív betegek 85%-a azonosítható, és három óra elteltével a 90%-uk. 3 és 24 óra között a CLOtest* a betegek újabb 5%-át azonosítja. A legnagyobb amerikai tanulmányt a témában Dye és társai végezték el a Virginiai egyetemen. 122, egymást követő rutin endoszkópos vizsgálaton áteső betegből vettek gyomorbiopsziát, amiket azután szövettani festéssel (Giemsa festés) és CLOtest*-tel vizsgáltak9. 82 beteg esetében a minták tenyésztéses vizsgálaton is átestek. A kapott eredményeket az alábbi táblázat tartalmazza.

1. táblázat: CLOtest* tanulmány, Dye és társai, Virginiai egyetem Pozitív + Pozitív - Negatív + Negatív -CLOtest* n=121 46 72 2 1Szövettani festés 43 74 5 n=122 Tenyésztés n=82 23 49 10

Érzékenység SpecificitásCLOtest* 98% 97%Szövettani festés 91% 100%Tenyésztés 70% 100%Schnell és társai hasonló eredményeket kaptak Missouriban10.

A gyors ureáz teszt, a szövettani festés és a tenyésztéses vizsgálat korlátaiA fals negatív eredmények lehetséges okai• Nagyon alacsony a H. pylori baktériumok száma a szövetmintában • Foltos H. pylori eloszlás, azaz a szövetmintában pont nincs jelen az organizmus• Intestinális metaplázia minta – (a H. pylori baktérium nem szaporodik a bél

56

nyálkahártyájában)• A beteg az utóbbi időben fogyasztott antibiotikumokat, bizmutot,

protonpumpa-gátló gyógyszereket vagy szukralfátot, amik gátolják az organizmust

• A minta formalinnal szennyeződött

A fals pozitív eredmények lehetséges okai• Ha a tesztet megfelelően készítik elő, fals pozitív eredmények ritkán fordulnak

elő. A késői fals pozitív reakciókat (>12 óra) okozhatja az, hogy nem sikerült a biopszát teljes egészében a zselébe nyomni, így az organizmus tovább szaporodhatott a szöveten.

• Elméletileg fals pozitív eredmény előfordulhat olyan betegeknél is, akik bakteriális túlnövés miatti aklórhidriában szenvednek. Ezt okozhatják a következő esetek: perniciózus anémia, korábbi gyomorműtét vagy ha a beteg az utóbbi időben fogyasztott protonpumpa-gátló gyógyszereket. Azonban egyéb baktérium, ami a H. pylori-hoz képest jóval kevesebb ureázt termel, nem okoz gyors színváltozást.

Ha olyan tényezők állnak fenn, amik negatív módon befolyásolhatják a CLOtest* gyors ureáz teszt teljesítményét, válasszon másik diagnosztikai módszert, például ureáz kilégzési tesztet és szerológiát a H. pylori diagnosztizálásához.

Irodalomjegyzék1. Marshall BJ, Warren JR, Francis GJ, Langton SR, Goodwin CS, Blincow E. Rapid urease test in











57


Gebruiksaanwijzing Rx Only: Uitsluitend op voorschrift verkrijgbaar: Volgens de federale wetgeving (van de Verenigde Staten) mag dit medische hulpmiddel uitsluitend door of op voorschrift van een arts worden verkocht.

Beoogd gebruikDe CLOtest* snelle ureasetest (RUT [rapid urease test]) detecteert op snelle en handige wijze het enzym urease van Helicobacter pylori in biopten van het maagslijmvlies. De test wordt gebruikt om een vermoedelijke H. pylori-infectie te diagnosticeren.NB: Voor in-vitro diagnostisch gebruik.Opname van de CLOtest* in de CLIA ‘88-classificatie (Clinical Laboratory Improvement Act) werd niet noodzakelijk geacht.

SamenvattingBarry Marshall, M.D., heeft de CLOtest*1 ontwikkeld. De naam is ontleend aan de ‘Campylobacter-Like Organism’-test2. Dr. Robin Warren en dr. Marshall waren de eersten die in 1982 de bacterie uit antrumbiopten kweekten; ze noemden hem ‘Campylobacter-like bacterium’3 (campylocbacter-achtige bacterie). Later werd het geslacht Helicobacter genoemd, wat spiraalvormige of helixbacterie betekent2.Het is aangetoond dat H. pylori actieve chronische gastritis4 veroorzaakt en een risicofactor voor maagkanker5 en MALT-lymfomen (lymfomen van mucosa-geassocieerd lymfoïd weefsel)6 is. Met de uitroeiing van H. pylori kunnen ulcusrecidieven effectief worden voorkomen of gereduceerd en neemt het risico van maagkanker7,8 waarschijnlijk eveneens af.

Beschrijving van het product en wijze van opslagDe CLOtest* bestaat uit een met urease-indicatorgel gevulde holte in een afgesloten kunststofobjectglaasje. De gel bevat ureum, USP (29 mg/ml) fenolrood (een pH-indicator), bufferoplossingen en een bacteriostaticum om de groei van contaminerende urease-positieve organismen te voorkomen. Als het weefselmonster urease van H. pylori bevat, verandert de kleur van de gel als gevolg van onderstaande reactie van geel in heldermagenta:

ureum water zuur ammonium bicarbonaat

De CLOtest* RUT kan 18 maanden worden bewaard bij een temperatuur tussen 2 en 8 °C. De gebruiksduur van het product verstrijkt op de laatste dag van de maand die op de verpakking staat aangegeven. Gebruik het product niet als de gel niet geel is, als de verzegeling beschadigd is en de gel uitgedroogd lijkt of als de

n

HALYARD* CLOtest*Snelle ureasetest

NH2

C = O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

NH2

urea

urease


urease

58

uiterste gebruiksdatum is verstreken. Neem met eventuele vragen contact op met +1-844- 425-9273 voordat u de CLOtest* gebruikt.

Voorbereiden van de patiëntDrie weken voordat wordt gebiopteerd moet de patiënt het gebruik van antibiotica en bismutpreparaten staken. Deze middelen kunnen H. pylori onderdrukken zonder het uit te roeien, waardoor het organisme met welke methode dan ook moeilijk valt aan te tonen. De patiënt mag voorafgaand aan de test twee weken lang geen protonpompremmers innemen, omdat het is aangetoond dat deze geneesmiddelen bij sommige personen de groei van het organisme afremmen.

De biopsie1. Het verdient aanbeveling de maagwand op ten minste 2 cm afstand van de

pylorus langs de kleine of de grote curvatuur van het antrum te biopteren. Biopteer weefsel dat er normaal uitziet – vermijd genecrotiseerd of ulcererend weefsel omdat H. pylori in die gebieden in kleinere aantallen aanwezig kan zijn. Met een standaard biopsietang is een specimen van voldoende omvang te verkrijgen voor de test.

2. Desgewenst kan er een extra monster aan dezelfde CLOtest*-holte worden toegevoegd. Het tweede specimen mag niet in aanraking komen met bloed uit de eerste biopsieplaats.

Behandelen van het specimen1. Haal het objectglaasje met de CLOtest* snelle ureasetest uit de koelkast en

trek het label zo ver los dat de gele gel blootligt. Voor snellere testresultaten laat u de gel op kamertemperatuur komen voordat het biopt wordt ingebracht (gewoonlijk 7 à 10 minuten).

2. Druk het gehele monster met een schoon instrument (bijv. een tandenstoker) uit de tang tot onder het oppervlak van de gel zodat zoveel mogelijk specimen aan de gel wordt blootgesteld. Zorg dat het bioptspecimen geheel en al in de gel is ondergedompeld.

3. Druk het drukgevoelige label op het objectglaasje weer dicht en noteer de naam van de patiënt alsmede de datum en het tijdstip waarop het biopt in de gel is aangebracht.

4. Desgewenst kan het CLOtest*-objectglaasje op een verwarmingsplaatje met een temperatuur tussen 30 en 40 °C worden gelegd. Het verwarmingsplaatje kan de reactietijd versnellen waardoor de uitslag eerder bekend is, maar is optioneel en heeft geen invloed op de nauwkeurigheid van de test. Bij gebruik van een verwarmingsplaatje mag het objectglaasje niet langer dan drie uur worden verwarmd. Daarna moet het bij kamertemperatuur worden bewaard totdat de uitslag kan worden afgelezen.

5. Er kan een positieve reactie worden genoteerd zodra de gel van kleur verandert. Wanneer er een positieve reactie heeft plaatsgevonden, is verdere aflezing niet meer nodig. Bij 75% van de positieve tests vindt de kleurverandering binnen 20 minuten plaats (afb. 1).

Afbeelding 1:Tijdsverloop van positieve reacties van CLOtest* snelle ureasetest. Tijd (minuten)

59


Interpretatie van de resultaten1. Door aan een specimen aanhangend bloed kan de gel langs de randen van het

weefsel verkleuren. Dit is GEEN positieve test. Als het biopt urease bevat, treedt de eerste kleurverandering rond het monster op, waarna uiteindelijk alle gel verkleurt.

2. De pH-verandering in een positieve test wordt het eerst zichtbaar op de overgang tussen het biopt en de gel. Bij een aanzienlijke hoeveelheid urease vindt de zichtbare verandering snel plaats. Elke kleurverandering van alle gel in een andere tint dan geel (bijv. rood, magenta, roze, dieporanje) duidt op de aanwezigheid van H. pylori.

3. Een negatieve test blijft geel nadat het weefsel in de gel is ingebed. Als de kleur van de gel 24 uur later nog geel is, is de test negatief. Als het niet mogelijk is de test 24 uur later af te lezen, dan blijft de test geldig tot 72 uur nadat het biopt in de gel is gebracht. Als bijvoorbeeld een op vrijdag uitgevoerde test aan het eind van de dag nog niet van kleur is veranderd, kan de test bij kamertemperatuur worden bewaard en op maandag worden afgelezen.

Fail-safe protocol (CLIA-vereiste voor niet-complexe tests)Voer bij elke negatieve test de volgende positieve controle uit om vast te stellen of de CLOtest* RUT naar behoren werkt:1. Breng een ureasetablet (Halyard catalogusnr. 60407) in de gel van de CLOtest*

en sluit het objectglaasje weer af.2. Controleer na vijf minuten of de gel een positieve kleurverandering (rood of

magenta) heeft ondergaan.3. Als de gel niet rood of magenta wordt, neemt u contact op met Halyard op

telefoonnr. +1-844-425-9273.

Prestatie-eigenschappenMet de CLOtest* rUT wordt 75% van de H. pylori-infecties binnen 20 minuten zonder vals-positieven gedetecteerd1. Na één uur is 85% en na drie uur 90% van de positieve patiënten met de CLOtest* gedetecteerd. Tussen 3 en 24 uur na aanvang wordt met de CLOtest* nog eens 5% van de patiënten gedetecteerd. Aan de Universiteit van Virginia is door Dye et al. destijds het grootste onderzoek in de Verenigde Staten uitgevoerd waarvan tot op heden verslag is uitgebracht9. Bij 122 achtereenvolgende patiënten bij wie een routine-endoscopie werd uitgevoerd, namen zij twee antrumbiopten, één voor histologisch onderzoek (kleuring volgens Giemsa) en één voor de CLOtest*. Van 82 patiënten werd tevens een specimen op kweek gezet. De verkregen resultaten zijn in onderstaande tabel weergegeven.Tabel 1: CLOtest*-onderzoek, Dye et al., Universiteit van Virginia Waar + Waar – Vals + Vals –CLOtest* n=121 46 72 2 1Histologie n=122 43 74 5Kweek n=82 23 49 10

Gevoeligheid SpecificiteitCLOtest* 98% 97%Histologie 91% 100%Kweek 70% 100%Er zijn vergelijkbare resultaten door Schnell et al. in Missouri verkregen10.

60

Beperkingen van de snelle ureasetest, histologie en kweekMogelijke oorzaken van vals-negatieven• Zeer kleine aantallen H. pylori in het weefselmonster;• Een ongelijkmatige verspreiding van H. pylori, waardoor het organisme niet in

het weefselmonster voorkomt;• Een monster bestaande uit intestinaal metaplastisch weefsel (H. pylori

koloniseert geen darmslijmvlies);• Recente inname van antibiotica, bismut, protonpompremmers of sucralfaat, wat

een remmende invloed op het organisme kan hebben;• Verontreiniging van het monster door formaline.

Mogelijke oorzaken van vals-positieven• Bij een correct uitgevoerde test komen zelden vals-positieven voor. Late vals-

positieve reacties (> 12 uur) kunnen optreden wanneer het biopt niet in zijn geheel in de gel is gebracht, zodat via contaminatie aanwezige organismen in het weefsel kunnen groeien.

• In theorie kunnen vals-positieve uitslagen voorkomen bij patiënten met een achloorhydrie door bacteriële overgroei. Dat kan het gevolg zijn van: pernicieuze anemie, een eerdere maagoperatie of recent gebruik van protonpompremmers. Andere bacteriën produceren echter veel minder urease dan H. pylori en veroorzaken gewoonlijk geen snelle kleurverandering.

Als er sprake is van factoren die de werking van de CLOtest* snelle ureasetest negatief kunnen beïnvloeden, kunnen andere diagnostische methoden zoals de ureum-ademtest en serologisch onderzoek worden overwogen om de diagnose H. pylori uit te sluiten.












61


Instrukcja użytkowania Rx Only: Wyłącznie na receptę: Zgodnie z prawem federalnym (w USA) urządzenie to może być sprzedawane wyłącznie przez lekarzy lub na ich zlecenie.

PrzeznaczenieSzybki test ureazy CLOtest* (RUT) stanowi dokładne i wygodne narzędzie do wykrywania podczas biopsji śluz—wki żołądka enzymu ureazy wytwarzanego przez Helicobacter pylori. Przeznaczony jest do wstępnej diagnozy zakażenia bakterią H. pylori.Uwaga: Do użytku diagnostycznego in vitro.CLOtest* nie podlega kontroli zgodnie z przepisami CLIA ‘88.

PodsumowanieCLOtest*1 został opracowany przez dra Barry’ego Marshalla. Nazwa testu to akronim od “Campylobacter-Like Organism” (organizmy z rodzaju Campylobacter)2. Dr Najpierw, w 1982 r., dr Robin Warren i Marshall wyhodowali bakterię z materiału biopsyjnego z antrum i nazwali ją bakterią z rodzaju Campylobacter3. Następnie rodzaj ten otrzymał nazwę Helicobacter, która oznacza bakterie spiralne2.Stwierdzono, że H. pylori powoduje czynne, przewlekle zapalenie błony śluzowej żołądka4 i stanowi czynnik ryzyka zachorowania na raka żołądka5 i pozawęzłowego chłoniaka strefy brzeżnej (MALT)6. Zwalczenie H. pylori wspomaga eliminację lub ograniczanie nawrotów choroby wrzodowej i może także obniżyć ryzyko zachorowania na raka żołądka,7,8.

Opis i przechowywanie produktuCLOtest* to zbiorniczek z żelem wskaźnikowym wykrywającym obecność ureazy umieszczony wewnątrz płytki z tworzywa. Żel zawiera mocznik, czerwień fenolową (wskaźnik pH) spełniającą wymagania USP (29 mg/mL), czynniki buforowe i czynnik bakteriostatyczny zapobiegający rozwojowi skażających organizm—w ureazo-dodatnich. Jeżeli ureaza wytwarzana przez H. pylori jest obecna w pr—bce tkanki, żel zmienia kolor z ż—łtego na kolor jasnej fuksji w wyniku następującej reakcji:

mocznik woda kwas wodorowęglan amonu

Okres trwałości szybkiego testu ureazy CLOtest* wynosi 18 miesięcy, gdy produkt jest przechowywany w temperaturze 2ˇ –8ˇC (36ˇ–48ˇF). Ważność produktu wygasa w ostatnim dniu miesiąca podanego na opakowaniu. Nie używać produktu, jeżeli żel ma barwę inną niż ż—łta, jeżeli plomba jest uszkodzona, a żel wydaje się być odwodniony lub upłynął termin przydatności. W przypadku dalszych pytań, przed użyciem testu CLOtest* należy zadzwonić pod numer 1-844-425-9273.

p

HALYARD* CLOtest*Szybki test ureazy

NH2

C = O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

NH2

urea

urease


ureazė

62

Przygotowanie pacjentaTrzy tygodni przed biopsją pacjent powinien przerwać stosowanie antybiotyków i preparatów bizmutu trzy tygodnie przed biopsją. Środki te mogą tłumić, jednak nie eliminują obecności H. pylori, utrudniając wykrycie tych organizmów w jakikolwiek sposób. Na dwa tygodnie przed badaniem pacjent nie powinien przyjmować inhibitor—w pompy protonowej, gdyż stwierdzono, że u niekt—rych os—b te leki hamują rozw—j wymienionego organizmu.

Biopsja1. Zaleca się, aby biopsję żołądka wykonać przynajmniej 2 cm od odźwiernika,

wzdłuż krzywizny mniejszej lub większej antrum. Należy wyciąć tkankę, kt—ra wydaje się normalna – unikać pobierania tkanki zerodowanej lub owrzodzonej, gdyż wok—ł tych miejsc nagromadzenie H. pylori może być mniejsze. Standardowe kleszczyki do biopsji powinny umożliwiać pobranie pr—bki wystarczającej wielkości.

2. Jeśli to pożądane, w jednej płytce CLOtest* można r—wnież umieścić dodatkową pr—bkę. Nie należy zanieczyszczać drugiej pr—bki krwią z pierwszego miejsca biopsji.

Pobieranie i postępowanie z próbką1. Po wyjęciu płytki z szybkim testem ureazy CLOtest* z chłodziarki, podnieść

etykietkę na tyle, aby odsłonić ż—łty żel. Aby szybciej uzyskać wyniki testu, przed umieszczeniem w nim pr—bki z biopsji żel należy pozostawić, aby osiągnął temperaturę pokojową (zazwyczaj 7–10 minut).

2. Za pomcą czystego aplikatora (np. wykałaczki itp.) wepchnąć całą pr—bkę z kleszczyk—w pod powierzchnię żelu, żeby miała jak największy kontakt z żelem. Upewnić się, że pr—bka z biopsji jest całkowicie zanurzona w żelu.

3. Ponownie przykleić etykietę dociskową na płytkę i zapisać na niej imię i nazwisko pacjenta, datę i godzinę umieszczenia próbki z biopsji w żelu.

4. W razie potrzeby płytkę CLOtest* można umieścić na podgrzewaczu w temperaturze 30ˇ–40ˇC (86ˇ–104ˇF). Chociaż podgrzewacz może przyspieszyć czas reakcji i zapewnić szybsze wyniki testu, jego użycie jest opcjonalne i nie ma wpływu na dokładność testu. W przypadku użycia podgrzewacza płytkę należy podgrzewać nie dłużej niż trzy godziny. Następnie należy ją przechowywać w temperaturze pokojowej aż do odczytu wyniku.

5. Odnotować reakcję dodatnią, gdy tylko żel zmieni kolor. Po reakcji dodatniej nie ma potrzeby dokonywania dalszych odczyt—w. 75% test—w z wynikiem dodatnim zmienia kolor w ciągu 20 minut (Rys.1).

Rysunek 1:Wykres czasu reakcji dodatniej szybkiego testu ureazy CLOtest*.

Czas (minuty)

Interpretacja wyników1. Pr—bka zanieczyszczona krwią może zaplamić żel wok—ł krawędzi tkanki.

63


Wynik takiego testu NIE jest dodatni. Jeżeli pr—bka z biopsji zawiera ureazę zmiana najpierw pojawia się wok—ł pr—bki, a w końcu zabarwiony zostaje cały żel.

2. Zmiana pH w teście dodatnim najpierw widoczna jest na styku żelu z pr—bką. W przypadku istotnej zawartości ureazy szybko następuje widoczna zmiana. Każda zmiana koloru całego żelu na odcień inny niż ż—łty (np. czerwony, fuksja, różowy, głęboki pomarańczowy) wskazuje na obecność H. pylori.

3. Wynik testu jest ujemny, gdy po umieszczeniu tkanki w żelu, żel zachowuje żółty kolor. Jeżeli po 24 godzinach żel ma kolor żółty, wynik testu jest ujemny. Jeżeli wyniku nie można odczytać po 24 godzinach, test zachowuje ważność przez 72 godziny po umieszczeniu próbki z biopsji w żelu. Na przykład, jeżeli test wykonany w piątek nie zmieni koloru do końca dnia, można go przechowywać w temperaturze pokojowej i odczytać w poniedziałek.

Protokół zachowania maksymalnego bezpieczeństwa (Wymogi dotyczące testów niepodlegających kontroli Clia)Jeżeli wynik testu jest ujemny, należy przeprowadzić następującą kontrolę dodatnią, aby upewnić się, że szybki test ureazy CLOtest* działa prawidłowo:1. Umieścić tabletkę ureazy (nr katalogowy Halyard 60407) w żelu CLOtest* i

ponownie zakleić płytkę.2. Po pięciu minutach sprawdzić czy żel zmienił kolor (czerwony lub fuksja).3. Jeżeli żel nie zmieni koloru na czerwony lub fuksję, zawiadomić firmę Halyard

pod numerem 1-844-425-9273.

Cechy użytkoweSzybki test ureazy CLOtest* wykrywa 75% zakażeń H. pylori w ciągu 20 minut bez fałszywych wynik—w dodatnich1. Przed upływem godziny CLOtest* wykrywa 85% wynik—w dodatnich u pacjent—w, a po trzech godzinach 90%. Między 3 a 24 godziny CLOtest* wykrywa kolejne 5% pacjent—w. W ramach największego do dzisiaj badania w USA, Dye et al na Uniwersytecie Virginia9 pobrali biopsję z antrum od 122 kolejnych pacjent—w poddawanych rutynowej endoskopii, po jednej od pacjenta, do badania histologicznego (barwienie Giemsa) i testu CLOtest*. U osiemdziesięciu dw—ch pacjent—w hodowano r—wnież bakterie z wycinka. Uzyskane wyniki zamieszczono w tabeli poniżej.

Tabela 1: Badanie CLOtest*, Dye et al, Uniwersytet Virginia Prawda + Prawda - Fałsz + Fałsz -CLOtest* n=121 46 72 2 1Histologia n=122 43 74 5Posiew n=82 23 49 10

Wrażliwość SpecyficznośćCLOtest* 98% 97%Histologia 91% 100%Posiew 70% 100%Schnell et al w Missouri10 uzyskali podobne wyniki.

Ograniczenia szybkich testów ureazy, badań histologicznych i posiewówMożliwe przyczyny wyników fałszywie ujemnych• Bardzo mała liczebność H. pylori w próbce tkanki

64

• Nierównomierne rozłożenie H. pylori, w związku z czym w próbce tkanki nie został uchwycony organizm.

• Próbka metaplazji jelitowej – (H. pylori nie tworzy kolonii na błonach śluzowych jelit)• Niedawno przyjmowane antybiotyki, bizmut, inhibitory pompy protonowej lub

sukralfat, które mogą hamować rozwój organizmu• Zanieczyszczenie próbki formaliną

Możliwe przyczyny wyników fałszywie dodatnich• Jeżeli test jest wykonywany poprawnie, wyniki fałszywie dodatnie zdarzają

się rzadko. P—źniejsze reakcje fałszywie dodatnie (>12 godzin) mogą być rezultatem niewłaściwego umieszczenia pr—bki z biopsji w żelu, co umożliwia rozw—j organizm—w skażających tkankę.

• Teoretycznie wynik fałszywie dodatni może wystąpić u pacjent—w cierpiących na bezkwaśność z powodu przerostu flory bakteryjnej. Może to być wynikiem: niedokrwistości złośliwej, przebytej operacji żołądka lub niedawnego przyjmowania inhibitor—w pompy protonowej. Inne bakterie wytwarzają jednak znacznie mniej ureazy niż H. pylori i nie powinny powodować szybkiej zmiany koloru żelu.

Jeżeli istnieją czynniki, które mogą negatywnie wpływać na wyniki szybkiego testu ureazy CLOtest*, należy rozważyć zastosowanie innych środków diagnostycznych takich jak ureazowy test oddechowy i badanie serologiczne w celu wykluczenia diagnozy zakażenia H. pylori.












65


Instruções de utilização Rx Only: Apenas sob receita médica: A lei federal (E.U.A.) limita a venda deste dispositivo a médicos ou por ordem de um médico.

Utilização previstaO teste rápido de urease (TRU) CLOtest* detecta com facilidade e precisão a enzima urease do organismo Helicobacter pylori em biopsias da mucosa gástrica. A sua utilização está indicada para o diagnóstico presumível de infecção por H. pylori.Nota: Para uma utilização diagnóstica in vitro.O CLOtest* é um teste isento dos requisitos da regulamentação CLIA ‘88.

ResumoBarry Marshall, doutor em medicina, concebeu o CLOtest*1. O nome do teste é originário do teste “Campylobacter-Like Organism” [organismos semelhantes ao Campylobacter]2. Os médicos Robin Warren e Barry Marshall cultivaram a bactéria pela primeira vez, a partir de biopsias antrais em 1982, e atribuíram-lhe o nome de bactéria semelhante ao Campylobacter3. Posteriormente, o organismo foi denominado Helicobacter, o que significa bactéria espiral ou helicoidal2.Foi demonstrado que o H. pylori causa gastrites crónicas activas4 e que constitui um factor de alto risco para o cancro do estômago5 e para os linfomas de tipo de tecidos linfóides associados às mucosas (MALT - mucosal-associated-lymphoid-type)6. A erradicação do H. pylori é eficaz na eliminação ou na redução da recorrência de úlceras, e pode também diminuir o risco de cancro do estômago7,8.

Descrição do produto e armazenamentoO CLOtest* apresenta-se sob a forma de um pequeno recipiente com gel indicador de urease que se encontra selado dentro de uma lâmina de plástico. O gel contém ureia, vermelho de fenol (um indicador de pH) de qualidade USP (29 mg/ml), tampões e um agente bacteriostático para evitar a proliferação de microrganismos positivos à urease. Se a amostra de tecido contém urease proveniente do H. pylori, o gel muda de cor e de amarelo passa a magenta brilhante, de acordo com a reacção seguinte:

ureia água ácido amónio bicarbonato

O teste rápido de urease (TRU) CLOtest* tem uma duração de 18 meses se for armazenado entre 2° e 8° C (36° e 48° F). O produto perde a validade no último dia do mês indicado na embalagem. Não utilizar o produto se o gel não se apresentar amarelo, se o selo estiver danificado e o gel parecer desidratado, ou se tiver ultrapassado a data de validade. Para obter mais informações, telefonar para o número 1-844-425-9273 antes de utilizar o CLOtest*.

P

HALYARD* CLOtest*Teste rápido de urease

NH2

C = O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

NH2

urea

urease


urease

66

Preparação do paciente O paciente deve suspender a utilização de antibióticos e de preparados de bismuto três semanas antes da biopsia, dado que estes medicamentos podem inibir o H. pylori sem erradicá-lo, o que dificulta a sua detecção seja qual for o método utilizado. Durante duas semanas antes do teste, o paciente não deve ingerir inibidores da bomba de protões, dado que foi comprovado que estes medicamentos inibem o crescimento da bactéria em algumas pessoas.

A biopsia1. A zona gástrica recomendada para fazer a biopsia situa-se a menos de 2 cm

do piloro, ao longo da curvatura maior ou da curvatura menor do antro. Deve praticar-se uma excisão sobre o tecido de aparência normal, evitando os tecidos corroídos ou ulcerados, dado que o H. pylori pode estar presente em quantidades inferiores em volta destas áreas. Com pinças de biopsia normais pode obter-se uma amostra de tamanho suficiente para este teste.

2. Pode inserir-se uma amostra adicional em um único pequeno recipiente de CLOtest*, se desejado. Não contaminar a segunda amostra com sangue proveniente do primeiro local da biopsia.

Colheita e manipulação das amostras1. Depois de retirar a lâmina de teste rápido de urease CLOtest* da refrigeração,

levantar a etiqueta o suficiente para expor o gel amarelo. Para obter resultados mais rápidos, deixar que o gel chegue à temperatura ambiente antes de inserir a amostra da biopsia (geralmente entre 7 e 10 minutos).

2. Com um aplicador limpo (por exemplo, um palito para os dentes, ou algo assim), impelir toda a amostra da pinça por baixo da superfície do gel para expor a maior quantidade possível da amostra ao gel. Verificar se a amostra da biopsia está totalmente submersa no gel.

3. Voltar a selar a etiqueta auto adesiva da lâmina e anotar o número do paciente, e a data e a hora em que foi inserida a amostra.

4. Se necessário, a lâmina do CLOtest* pode ser colocada sobre uma placa de aquecimento a uma temperatura compreendida entre 30° e 40° C (86° a 104° F). Se bem que a placa de aquecimento possa acelerar o tempo de reacção e fornecer resultados mais rápidos, a sua utilização é opcional e não afecta a precisão do teste. Caso seja utilizada a placa de aquecimento, a lâmina não deverá ser aquecida durante mais de três horas, podendo depois ser conservada à temperatura ambiente até ao momento da leitura final.

5. Registar uma reacção positiva assim que o gel mudar de cor. Assim que tenha ocorrido uma reacção positiva, não é necessário fazer mais leituras. 75 % dos testes com resultados positivos mudam de cor em 20 minutos (Fig. 1).

Figura 1:Diagrama temporal das durações de reacção positiva do teste rápido de urease CLOtest*.

Duração (minutos)

67


Interpretação dos resultados1. Uma amostra contaminada de sangue poderia manchar o gel em volta das

bordas do tecido. Isto NÃO constitui um teste positivo. Se a biopsia contiver urease, a mudança ocorre primeiro em volta da amostra e eventualmente todo o gel muda de cor.

2. A mudança do pH em um teste positivo aparece primeiro ao nível da zona de contacto entre o gel e a biopsia. A modificação produz-se rapidamente se estiver presente uma quantidade significativa de urease. Qualquer mudança de cor de todo o gel para um tom que não seja o amarelo (por exemplo, vermelho, magenta, cor-de-rosa ou laranja escuro) indica a presença de H. pylori.

3. Em um teste negativo o gel permanece amarelo depois da introdução do tecido no gel. Se a cor do gel continuar a ser amarela depois de decorridas 24 horas, o resultado do teste é negativo. Se não puder ser lido às 24 horas, o teste continuará a ser válido durante 72 horas depois da introdução da biopsia no gel. Por exemplo, se um teste for realizado na sexta-feira e até ao fim do dia não tiver mudado de cor, poderá ser guardado à temperatura ambiente e ser interpretado na segunda-feira.

Protocolo de segurança (devido à isenção dos requisitos da regulamentação CLIA)Cada vez que se obtenha um resultado de teste negativo, deverá executar-se o seguinte controlo positivo para verificar se o teste TRU CLOtest* está a funcionar correctamente:1. Inserir uma pastilha de urease (no. de referência Halyard 60407) no gel de

CLOtest* e voltar a selar a lâmina.2. Após decorrerem cinco minutos, examinar o gel para ver se a cor mudou (para

vermelho ou magenta).3. Se o gel não ficar vermelho ou magenta, notificar a Halyard através do número

de telefone 1-844-425-9273.

Características de desempenhoO TRU CLOtest* detecta 75% das infecções por H. pylori em 20 minutos, sem resultados falsos positivos1. Após uma hora o CLOtest* detecta 85% dos pacientes positivos, e 90% são detectados após três horas. O CLOtest* detecta mais 5% dos pacientes entre 3 e 24 horas. Durante o maior estudo realizado até à data nos Estados Unidos, Dye e os seus colaboradores realizaram biopsias antrais de 122 pacientes consecutivos sujeitos a endoscopia de rotina na University of Virginia9 para submeter cada um deles a um exame histológico (coloração de Giemsa) e ao teste CLOtest*. Realizaram-se culturas de amostras provenientes de 82 pacientes. Os resultados obtidos são apresentados no quadro seguinte.Quadro 1: Estudo sobre o CLOtest*, Dye e seus colaboradores, Universidade de Virginia Verdadeiro + Verdadeiro – Falso + Falso – CLOtest* n=121 46 72 2 1Exame histológico n = 121 43 74 5Cultura n = 82 23 49 10

Sensibilidade Especificidade CLOtest* 98% 97%Exame histológico 91% 100%Cultura 70% 100%

68

Resultados semelhantes foram observados por Schnell e seus colaboradores no estado do Missouri10.

Limitações dos testes rápidos de urease, do exame histológico e das culturasPossíveis causas de resultados falsos negativos• Números muito baixos de H. pylori existentes na amostra• Uma distribuição irregular de H. pylori, o que impede a captação da bactéria ou

organismo na amostra de tecido• Uma amostra de metaplasia intestinal (o H. pylori não coloniza a mucosa

intestinal)• Uma ingestão recente de antibióticos, bismuto, inibidores da bomba de protões

ou de sucralfatos, que podem inibir a bactéria ou o organismo• Uma contaminação da amostra com formalina

Possíveis causas de resultados falsos positivos• Os resultados falsos positivos são pouco comuns se o teste for realizado

correctamente. As reacções falsas positivas tardias (+ de 12 horas) podem ser causadas por uma inserção incompleta da biopsia dentro do gel, de forma que os organismos contaminantes podem desenvolver-se e crescer no tecido.

• Teoricamente, poderia ocorrer um resultado falso positivo nos pacientes com acloridria causada por uma proliferação bacteriana. Isto poderia ser o resultado das condições seguintes: anemia perniciosa, cirurgia gástrica anterior ou a utilização recente de medicamentos inibidores da bomba de protões. No entanto, outras bactérias produzem quantidades muito menores de urease do que o H. pylori, e não causam nenhuma mudança rápida de cor.

No caso de existirem factores que possam afectar o desempenho do teste rápido de urease CLOtest*, deverá ser considerada a possibilidade da utilização de outros métodos diagnósticos, tais como o teste respiratório da ureia e a serologia, a fim de excluir um diagnóstico de H. pylori.

Bibliografia1. Marshall BJ, Warren JR, Francis GJ, Langton SR, Goodwin CS, Blincow E. Rapid urease test in








69





70

Instrucţiuni de utilizare Rx Only: Doar Rx: Conform legii federale S.U.A., acest dispozitiv poate fi vândut numai de către un medic sau la ordinele acestuia.

Domeniu de utilizareTestul rapid pentru urează (TRU) CLOtest* detectează în mod precis şi convenabil enzima urează din Helicobacter pylori, în probele de biopsie din mucoasa gastrică. Este destinat pentru stabilirea diagnosticului prezumtiv de infecţie cu H. pylori.Notă: A se utiliza pentru diagnostic in vitro.CLOtest* este omologat CLIA ‘88.

SumarDr. Barry Marshall este cel care a dezvoltat CLOtest*1. Numele provine din „Campylobacter-Like Organism“ test2. Doctorii Robin Warren şi Marshall au obţinut primele culturi de bacterii din probele de biopsie de la nivelul antrului gastric în 1982, numindu-le bacterii de tip Campylobacter3. După aceea, genul a fost numit Helicobacter, însemnând bacterie spirală sau helicoidală2.S-a demonstrat că H. pylori cauzează gastrită cronică activă4 şi reprezintă un factor de risc pentru cancer gastric5 şi limfom cu ţesut limfoid asociat mucoaselor (MALT)6. Eradicarea H. pylori este o metodă eficientă în scopul eliminării sau reducerii recurenţei ulcerelor şi, de asemenea, poate scădea riscul de cancer gastric7,8.

Descrierea produsului şi modul de păstrareCLOtest* este un godeu cu gel indicator pentru urează, sigilat în interiorul unei lame de plastic. Gelul conţine uree, USP (29 mg/ml), roşu fenol (un indicator de pH), agenţi de tamponare şi un agent bacteriostatic pentru prevenirea creşterii microorganismelor ureazo-pozitive contaminante. Dacă este prezentă urează provenită de la H. pylori în proba de ţesut, aceasta va provoca schimbarea culorii gelului de la galben la purpuriu strălucitor, în baza următoarei reacţii:

uree apă acid amoniu bicarbonat

TRU CLOtest* are o durată de valabilitate de 18 luni în condiţiile păstrării la 2° – 8°C (36° – 48°F). Produsul expiră în ultima zi a lunii indicate pe ambalaj. Nu utilizaţi produsul dacă gelul nu este galben, dacă sigiliul este deteriorat, dacă gelul pare să fie deshidratat sau dacă data de expirare este depăşită. Pentru întrebări suplimentare, apelaţi 1-844-425-9273 înainte de a utiliza CLOtest*.

Pregătirea pacientuluiPacientul trebuie să întrerupă utilizarea antibioticelor şi a preparatelor cu bismut cu

r

HALYARD* CLOtest*Test rapid pentru urează

NH2

C = O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

NH2

urea

urease


uréase

71


trei săptămâni înainte de biopsie. Aceşti agenţi pot reprima, fără a eradica, prezenţa H. pylori, ceea ce îngreunează detectarea microorganismului, indiferent de mijloace. Trebuie ca pacientul să nu fi ingerat inhibitori de pompă de protoni timp de două săptămâni înainte de test, întrucât s-a demonstrat că aceste medicamente inhibă creşterea microorganismelor la unele persoane.

Biopsia1. Zona gastrică recomandată pentru biopsie este la cel puţin 2 cm în afara

pilorului, de-a lungul micii sau marii curburi a antrului. Excizaţi ţesut care pare normal; evitaţi ţesutul erodat sau ulcerat întrucât H. pylori ar putea fi prezent în număr mai mic în acele zone. Un forceps de biopsie standard este de natură să obţină o probă de mărime suficientă pentru test.

2. Dacă se doreşte, poate fi introdusă o probă suplimentară în acelaşi godeu CLOtest*. Nu contaminaţi a doua probă cu sânge provenit de la primul loc de biopsie.

Prelevarea şi manipularea probelor1. După scoaterea din frigider a lamei testului rapid pentru urează CLOtest*, ridicaţi

eticheta suficient de mult pentru a expune gelul galben. Pentru a obţine mai rapid rezultate la test, lăsaţi gelul să ajungă la temperatura camerei înainte de a introduce proba de biopsie (de obicei, între 7 şi 10 minute).

2. Cu ajutorul unui dispozitiv de aplicare curat (de exemplu o scobitoare, etc.), împingeţi în totalitate proba din forceps sub suprafaţa gelului, pentru a expune la gel o suprafaţă a probei cât mai mare cu putinţă. Aveţi grijă ca proba de biopsie să fie scufundată complet în gel.

3. Resigilaţi eticheta sensibilă la presiune pe lamă şi consemnaţi numele pacientului, data şi ora la care a fost introdusă proba de biopsie.

4. Dacă se doreşte, lama CLOtest* poate fi pusă pe o placă de încălzire, la o temperatură cuprinsă în intervalul 30°– 40°C (86°– 104°F). Deşi placa de încălzire poate scurta timpul de reacţie şi poate facilita obţinerea mai rapidă a rezultatelor, utilizarea sa este opţională şi nu va afecta acurateţea testului. Dacă se utilizează placa de încălzire, durata de încălzire a lamei trebuie să fie de cel mult trei ore, după care aceasta trebuie păstrată la temperatura camerei până la momentul citirii finale.

5. Înregistraţi o reacţie pozitivă de îndată ce gelul îşi schimbă culoarea. După apariţia unei reacţii pozitive, nu ai este necesară nicio altă citire. Un procent de 75% din testele pozitive îşi schimbă culoarea în primele 20 de minute (Fig.1).

Figura 1:Diagrama în funcţie de timpa reacţiei pozitive la testul rapid pentru urează CLOtest*.

Timp (minute)

Interpretarea rezultatelor1. O probă contaminată cu sânge poate colora gelul din vecinătatea marginii

ţesutului. Acest lucru NU indică un test pozitiv. Dacă proba de biopsie conţine urează, modificarea apare mai întâi în jurul probei şi, în cele din urmă, colorează tot gelul.

72

2. Modificarea de pH în cazul unui test pozitiv se vede mai întâi la interfaţa dintre gel şi proba de biopsie. Dacă este prezentă o cantitate semnificativă de urează, devine vizibilă o schimbare rapidă. Orice modificare de culoare către o altă nuanţă decât galben (de exemplu roşu, purpuriu, roz, portocaliu închis) indică prezenţa H. pylori.

3. Un test negativ va rămâne galben după scufundarea fragmentului de ţesut în gel. Dacă culoarea gelului rămâne galbenă după 24 de ore, testul este negativ. Dacă nu poate fi citit după 24 de ore, testul va rămâne valid timp de 72 de ore de la introducerea probei de biopsie în mediul de gel. De exemplu, dacă un test efectuat vineri nu şi-a modificat culoarea până la sfârşitul zilei, poate fi păstrat la temperatura camerei pentru a fi citit luni.

Protocolul anti-eroare (pentru condiţiile de omologare Clia)În cazul fiecărui test negativ, efectuaţi următorul control pozitiv pentru a vă asigura că TRU CLOtest* funcţionează corespunzător:1. Introduceţi un comprimat de urează (nr. catalog Halyard 60407) în gelul CLOtest*

şi resigilaţi lama.2. După cinci minute, inspectaţi gelul pentru a detecta o schimbare a culorii (roşu

sau purpuriu) ce semnifică pozitivarea.3. Dacă gelul nu îşi schimbă culoarea în roşu sau purpuriu, anunţaţi Halyard la

numărul de telefon 1-844-425-9273.

Caracteristici de performanţăTRU CLOtest* detectează 75% din infecţiile cu H. pylori în primele 20 de minute1. După o oră, testul CLOtest* detectează 85% din pacienţii pozitivi, iar după trei ore detectează 90% din aceştia. Între 3 şi 24 de ore, testul CLOtest* va detecta alţi 5% din pacienţii pozitivi. În cadrul celui mai extins studiu efectuat în SUA care a fost raportat până în prezent, Dye et al au prelevat biopsii de la nivelul antrului, câte una pentru examen histologic (coloraţie Giemsa) şi pentru CLOtest* de la 122 de pacienţi consecutivi, supuşi endoscopiei de rutină, la Universitatea Virginia9. De asemenea, la 82 de pacienţi s-a efectuat cultură din probe. Rezultatele obţinute sunt prezentate în tabelul de mai jos.

Tabelul 1: Studiul CLOtest*, Dye et al, Universitatea Virginia Real + Real - Fals + Fals -CLOtest* n=121 46 72 2 1Histologie n=122 43 74 5Cultură n=82 23 49 10

Sensibilitate SpecificitateCLOtest* 98% 97%Histologie 91% 100%Cultură 70% 100%Rezultate similare au fost obţinute de Schnell et al în Missouri10.

Limitări ale testelor rapide pentru urează, examenului histologic şi culturiiCauze posibile pentru rezultate fals negative• Număr foarte scăzut de H. pylori în proba de ţesut

73


• Distribuţie neuniformă a H. pylori astfel încât microoorganismul nu este captat pe proba de ţesut

• O probă cu metaplazie intestinală – (H. pylori nu colonizează mucoasa intestinală)

• Ingestia recentă de antibiotice, bismut, inhibitori de pompă de protoni sau sucralfat, care pot inhiba microorganismul

• Contaminarea cu formalină a probei

Cauze posibile pentru rezultate fals pozitive• Când testul este corect efectuat, rezultatele fals pozitive sunt rare. Reacţiile

fals pozitive tardive (>12 ore) pot fi cauzate de lipsa introducerii complete a probei de biopsie în gel, ceea ce face posibilă creşterea microorganismelor contaminante în ţesut.

• Teoretic, un rezultat fals pozitiv poate apărea la pacienţii cu aclorhidrie datorată creşterii excesive a bacteriilor. Această situaţie poate apărea în următoarele cazuri: anemie pernicioasă, intervenţie chirurgicală anterioară la nivel gastric sau utilizare recentă a medicamentelor inhibitoare de pompă de protoni. Pe de altă parte, alte bacterii produc mult mai puţină urează decât H. pylori şi nu ar trebui să cauzeze o schimbare rapidă a culorii.

Dacă există factori care ar putea afecta negativ performanţa testului rapid pentru urează CLOtest*, luaţi în considerare alte mijloace de diagnostic, cum sunt testul pentru uree pe aerul expirat şi testele serologice, pentru a exclude diagnosticul de H. pylori.












74

Инструкция по использованию Rx Only: Отпускается только по предписанию врача. Согласно федеральному законодательству США, данное устройство подлежит продаже только врачам или по их заказу.

НазначениеБыстрый уреазный тест (RUT) CLOtest* позволяет быстро и удобно определять фермент уреазу, выделяемый Helicobacter pylori в биоптате слизистой желудка. Он предназначен для предварительной диагностики инфицирования H. pylori.Примечание: Используется для диагностики in vitro.На CLOtest* не распространяется поправка CLIA ‘88.

ОбзорCLOtest*1 был разработан д-ром Барри Маршалом. Его название происходит от термина “Campylobacter-Like Organism” test2 (тест для определения кампилобактер-подобных организмов). Д-ра Робин Уоррен и Маршал впервые культивировали эту бактерию из биоптата слизистой антрального отдела желудка в 1982 г. и назвали ее кампилобактер-подобная бактерия3. Позже род этих бактерий был назван Helicobacter, что означает “спиральные” или “геликоидальные” бактерии2.Было установлено, что H. pylori вызывает активный хронический гастрит4 и является фактором риска для возникновения рака желудка5 и MALT-лимфомы (относящейся к лимфоидной ткани, связанной со слизистыми оболочками)6. Эрадикация H. pylori является эффективной мерой по устранению или сокращению числа рецидивов язвы желудка, а также может снизить риск возникновения рака желудка7,8.

Описание и хранение продуктаCLOtest* - это ячейка с гелем, являющимся индикатором уреазы, запаянная в пластиковую пластинку. Гель содержит мочевину, феноловый красный по USP (29 мг/мл) (индикатор pH), буфферный раствор и бактериостатическое средство, предотвращающее рост загрязняющих уреазо-позитивных микроорганизмов. При наличии в образце тканей уреазы, вырабатываемой H. pylori, гель изменит свой цвет с желтого на ярко-пурпурный в соответствии со следующей реакцией:

мочевина вода кислота бикарбонат аммония

Срок хранения CLOtest* RUT - 18 месяцев, хранение при температуре 2° – 8°C (36°– 48°F). Срок годности продукта истекает в последний день месяца,

R

HALYARD* CLOtest*Быстрый уреазный тест

NH2

C = O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

NH2

urea

urease


уреаза

75


указанного на упаковке. Не используйте данный продукт, если цвет геля не является желтым, если поврежден герметичный слой и гель выглядит высохшим или после окончания срока годности. Если у вас возникнут какие-либо другие вопросы, перед применением CLOtest* позвоните по тел. 1-844-425-9273.

Подготовка пациентаПациент должен прекратить прием антибиотиков и препаратов висмута за три недели до проведения биопсии. Эти средства могут подавить развитие бактерий H. pylori, однако не уничтожат их, в результате чего будет их сложно определить с помощью любой методики. Пациент должен прекратить прием ингибиторов протонной помпы за две недели до проведения теста, поскольку было установлено, что у некоторых лиц они угнетают развитие этих микроорганизмов.

Биопсия1. Участок желудка, рекомендуемый для биопсии, находится на расстоянии,

по меньшей мере, 2 см от привратника желудка вдоль малой или большой кривизны антрального отдела желудка. Необходимо иссечь участок ткани, имеющий нормальный вид. Избегайте тканей с признаками эрозии или изъязвления, поскольку H. pylori может находиться вокруг этих участков в незначительных количествах. Стандартные щипцы для биопсии позволяют получить образец достаточного для тестирования размера.

2. Если необходимо, в ту же ячейку CLOtest* можно поместить дополнительный образец. Следите, чтобы второй образец не был заражен кровью из первого участка биопсии.

Сбор и обработка образцов1. После извлечения быстрого уреазного теста CLOtest* из холодильника

необходимо отделить этикетку, чтобы открыть ячейку з желтым гелем. Для более быстрого получения результата необходимо перед внесением биоптата позволить тесту достичь комнатной температуры (обычно 7-10 мин).

2. С помощью чистого аппликатора (например, зубочистки) протолкните весь образец из щипцов для биопсии под поверхность геля, чтобы максимально погрузить образец в гель. Убедитесь, что образец, полученный с помощью биопсии, полностью погрузился в гель.

3. Повторно запечатайте самоклеящуюся этикетку на пластинке и запишите имя пациента, дату и время внесения образца биопсии.

4. При желании пластинку CLOtest* можно поместить на нагревательную плиту с температурой примерно 30°–40°C (86°–104°F). Хотя нагревательная плита может ускорить реакцию и позволит быстрее получить результат, ее использование не обязательно и не повлияет на точность теста. При использовании нагревательной плиты пластинку можно нагревать не более трех часов, затем ее необходимо хранить при комнатной температуре до окончательной интерпретации результата.

5. Сразу после изменения гелем цвета можно зарегистрировать положительную реакцию. После получения положительной реакции дальнейшая интерпретация результатов не требуется. В 75% случаев положительные тесты меняют цвет в течение 20 минут (Рис.1).

76

Рисунок 1:Быстрый уреазный тест CLOtest*Положительная реакциявременная диаграмма.

Время (минуты)

Интерпретация результатов1. Образец, загрязненный кровью, может испачкать гель по краю ткани.

Это НЕ ЯВЛЯЕТСЯ положительным результатом. Если биоптат содержит уреазу, изменение цвета сперва произойдет вокруг образца и затем окрасит весь гель.

2. Изменение рН при положительной реакции сперва наблюдается на границе соприкосновения геля и биоптата. При повышенном содержании уреазы изменение цвета проявится быстрее. Любое изменение цвета всего геля на цвет кроме желтого (например, красный, пурпурный, розовый, темно-оранжевый) указывает на присутствие H. pylori.

3. Отрицательный тест будет оставаться желтым после погружения ткани в гель. Если цвет геля будет оставаться желтым на протяжении 24 часов, результат теста можно считать отрицательным. Если невозможно провести интерпретацию результатов теста через 24 часа, они будут оставаться действительными на протяжении 72 часов после погружения биоптата в гель. Например, если тест, проведенный в пятницу, не изменит цвет до конца дня, его можно хранить при комнатной температуре и провести интерпретацию результатов в понедельник.

Протокол проверки надежности (в соответствии с требованиями, касающимися разрешенного отклонения от правил Clia)Для каждого отрицательного результата теста проведите следующий положительный контроль, чтобы убедиться, что CLOtest* RUT функционирует надлежащим образом:1. Поместите таблетку уреазы (#60407 в каталоге Halyard #60407) в гель

CLOtest* и повторно заклейте пластинку.2. Через пять минут изучите гель на положительное изменение цвета

(красный или пурпурный).3. Если гель не приобретет красный или пурпурный цвет, уведомьте об этом

Halyard по тел. 1-844-425-9273.

Показатели эффективностиCLOtest* RUT определяет 75% случаев инфицирования H. pylori в течение 20 минут без ложно-положительных результатов1. Через один час CLOtest* определяет 85% положительных результатов, а через три часа - 90%. Через 3- 24 часа CLOtest* определит результат для оставшихся 5% пациентов. В ходе крупнейшего на тот момент исследования в США Dye et al были отобраны образцы биопсии антрального отдела желудка, один для гистологии (краситель Гимза), а один для CLOtest*, у 122 пациентов, проходивших плановое эндоскопическое исследование в Виргинском университете9.

77


У восьмидесяти двух пациентов также был проведен посев культуры. Полученные результаты приведены в таблице ниже.

Таблица 1: Исследование CLOtest*, Dye et al, Виргинский университет Истинный + Истинный - Ложный + Ложный -CLOtest* n=121 46 72 2 1Гистология n=122 43 74 5Культура n=82 23 49 10

Чувствительность СпецифичностьCLOtest* 98% 97%Гистология 91% 100%Культура 70% 100%Аналогичные результаты были получены Schnell et al в Миссури10.

Ограничения, связанные с проведением быстрых уреазных тестов, гистологии или посевами культурВозможные причины ложно-отрицательных результатов• Очень низкое содержание H. pylori в образце ткани • Неравномерное распределение очагов H. pylori, поэтому микроорганизм не

был захвачен в образце ткани• Образец кишечной метаплазии – (H. pylori не колонизируется на слизистой

оболочке кишечника)• Недавний прием антибиотиков, висмута, ингибиторов протонной помпы

или сукральфата, приведший к угнетению данного микроорганизма• Загрязнение образца формалином

Возможные причины ложно-положительных результатов• При надлежащем проведении теста случаи ложно-положительных

результатов происходят редко. Поздние ложно-положительные реакции (>12 часов) могут быть вызваны неполным погружением биоптата в гель, в результате чего в ткани могли развиться загрязняющие образец микроорганизмы.

• Теоретически, ложно-положительные результаты могут быть получены у пациентов с ахлоргидрией, возникшей в результате чрезмерного развития микрофлоры. Это может произойти в следующих условиях: пернициозная анемия, предшествующие операции на желудке или недавнее использование ингибиторов протонной помпы. Однако другие бактерии производят гораздо меньше уреазы чем H. pylori и поэтому не приводят к быстрому изменению цвета.

При наличии каких-либо факторов, которые могут повлиять на эффективность быстрого уреазного теста CLOtest*, рассмотрите возможность других диагностических средств, например, использование уреазного дыхательного теста и серологии, чтобы исключить диагноз H. pylori.

Библиография1. Marshall BJ, Warren JR, Francis GJ, Langton SR, Goodwin CS, Blincow E. Rapid urease test in


2. Goodwin CS, Armstrong JA, Chilvers T, et al. Transfer of Campylobacter pylori and

78

Campylobacter mustelae to Helicobacter gen nov. as Helicobacter pylori comb. nov. and helicobacter mustelae comb. nov., Respectively. Int J Sys Bacteriol 1989; 39:397-405.









79


Návod na použitie Rx Only: Len na predpis: Federálne zákony USA obmedzujú predaj tohto nástroja na lekára alebo na jeho predpis.

Určené použitieRýchly ureázový test CLOtest* (Rapid Urease Test, RUT) detekuje presne a pohodlne ureázový enzým baktérie Helicobacter pylori v biopsiách žalúdočných slizníc. Je určený na použitie u predbežnej diagnózy infekcií H. pylori.Poznámka: Pre diagnostické použitie in vitro.CLOtest* je oslobodený od požiadaviek zákona o zlepšení klinických laboratórií z roku 1988 (CLIA ’88).

SouhrnCLOtest* vyvinul Dr. Barry Marshall1. Ide o skratku názvu „Campylobacter-Like Organism“ test2. Dr. Robin Warren a Dr. Marshall najprv vypestovali tuto baktériu z antrálnych biopsií v roku 1982 a nazvali ju baktéria podobná kampylobaktérii (Campylobacter–like bacterium)3. Potom bol tento rod pomenovaný Helicobacter, čo znamená špirálová čiže hélická baktéria2.Bolo preukázané, že H. pylori spôsobuje aktivnu chronickú gastritídu4 a že je rizikovým faktorom u žalúdočnej rakoviny5 a so sliznicami súvisiacim typom lymfómu (mucosal-associated-lymphoid-type, MALT)6. Potlačovanie H. pylori je efektívne pri odstraňovaní alebo znižovaní opakovaného výskytu vredov a môže tiež znižovať riziko žalúdočnej rakoviny7,8.

Popis produktu a jeho uskladňovanieCLOtest* je želé indikujúce ureázu v priehlbine plastového sklíčka. Toto želé obsahuje močovinu, USP (29 mg/ml) fenolovú červeň (indikátor pH), pufery a baktériostatické činidlo pre zabránenie rastu kontaminujúcich ureázovo-pozitívnych organizmov. Ak je ureáza od H. pylori prítomná vo vzorke tkaniva, zmení sa farba želé zo žltej na jasnú až červeno-anilínovú podľa nasledujúcej reakcie:

močovina voda kyselina hydrogénuhličitan amónny

CLOtest* RUT má dobu skladovateľnosti 18 mesiacov pri teplote 2 – 8 °C. Jeho trvanlivosť vyprší posledný deň mesiaca uvedeného na obale. Nepoužívajte ho, ak želé nie je žlté, ak je porušená pečať a želé vyzerá dehydrované, alebo ak je po záručnej dobe. Ak máte ďalšie otázky, zavolejta na číslo +1 844-425-9273 pred použitím CLOtestu*.

Príprava pacientaPacient musí prestať užívať antibiotiká a prípravky bizmutu tri týždne pred

k

HALYARD* CLOtest*Rýchly ureázový test

NH2

C = O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

NH2

urea

urease


ureáza

80

biopsiou. Tieto činidlá môžu potlačiť, ale nie zničiť H. pylori, čím sa sťažuje detekcia tohto organizmu akýmikoľvek prostriedkami. Pacient nesmie požívať inhibítory protónovej pumpy dva týždne pred týmito testami, pretože sa preukázalo, že tieto lieky u niektorých osôb inhibujú rast tohto organizmu.

Biopsia1. Odporúčaná oblasť gastrickej biopsie je minimálne 2 cm od pyloru pozdĺž nižšej

alebo vyššej krivky antra. Vyrežte tkanivo, ktoré sa javí normálne – vyhýbajte sa erodovanému alebo vredovitému tkanivu, pretože H. pylori môže byť prítomná v malých množstvách okolo týchto oblastí. Štandardnými bioptickými kliešťami by sa mala získať vzorka dostatočnej veľkosti pre tento test.

2. Ak si to budete želať, môžete do jednej priehlbiny testu CLOtest* vložiť ďalšiu vzorku. Nekontaminujte túto druhú vzorku krvou z miesta prvej biopsie.

Odber vzorky a manipulácia s ňou1. Po vytiahnutí sklíčka rýchleho ureázového testu CLOtest* z chladničky stiahnite

etiketu dostatočne ďaleko, aby sa odhalilo žlté želé. Pre rýchlejšie výsledky testu umožnite, aby želé dosiahlo pokojovú teplotu pred vsadením biopsie (obvykle 7–10 minút).

2. S pomocou čistého aplikátora (napr. špáradla apod.) vtlačte celú vzorku z klieští pod povrch želé, aby sa čo možno najviac vzorky vystavilo želé. Skontrolujte, či je vzorka biopsie zanorená do želé.

3. Prilepte etiketu citlivú na tlak na sklíčko a zaznamenajte meno pacienta, dátum a čas vsadenia vzorky biopsie.

4. Ak si to budete želať, môžete sklíčko CLOtestu* vložiť na ohrievaciu dosku pri teplote 30– 40 °C. Hoci ohrievacia doska môže urýchliť reakční dobu a umožniť rýchlejšie získanie výsledkov, jej použitie je voliteľné a neovplyvní presnosť testu. Ak použijete ohrievaciu dosku, nesmie sa sklíčko ohrievať dlhšie ako tri hodiny a potom sa musí uskladniť pri izbovej teplote až do posledného získania výsledku.

5. Zaznamenajte pozitívnu reakciu hneď, ako želé zmení farbu. Akonáhle nastane pozitívna reakcia, nie je potrebné získať ďalší výsledok. U 75 % pozitívnych testov sa farba zmení počas 20 minút (obr.1).

Obrázok 1:Rýchly ureázový CLOtest* Pozitívna reakciaČasový priebeh

Čas (v minútach)

Interpretácia výsledkov1. Vzorka kontaminovaná krvou môže sfarbiť želé okolo okrajov tkaniva. To NIE JE

pozitívny test. Ak biopsia obsahuje ureázu, k zmene dôjde najprv okolo vzorky a nakoniec sa sfarbí celé želé.

2. Zmena pH u pozitívneho testu sa objaví najprv na rozhraní želé a biopsie. Ak je prítomné podstatné množstvo ureázy, je viditeľná zmena rýchla. Zmena farby celého želé inou ako žltou (napr. červenou, anilínovou červenou, ružovou, temne oranžovou) znamená prítomnosť H. pylori.

3. Negatívny test zostane po vsadení tkaniva do želé žltý. Ak je farba želé žltá po

81


24 hodinách, je test negatívny. Ak nezískate výsledok po 24 hodinách, zostane test platný 72 hodín po vsadení biopsie do želé. Keď sa napríklad test vykonaný v piatok nezmení do konca dňa, môže sa uskladniť pri izbovej teplote a výsledok získať v pondelok.

Fail-Safe protokol (pre oslobodenie od zákona CLIA)U každého negatívneho testu urobte nasledujúcu pozitívnu kontrolu, aby sa zaistilo, že CLOtest* RUT funguje správne:1. Vložte tabletu ureázy (katalogové č. Halyard 60407) do želé CLOtestu* a

zapečaťte sklíčko.2. Po piatich minútach skontrolujte, či došlo k pozitívnej zmene farby želé (na

červenú nebo anilínovo červenú).3. Ak sa farba želé nezmení na červenú alebo anilínovo červenú, upovedomte

spoločnosť Halyard na čísle +1 844 425 9273.

Výkonové charakteristikyCLOtest* RUT detekuje 75 % infekcií H. pylori do 20 minút bez falošných pozitívnych výsledkov1. Do jednej hodiny bude CLOtestom* detekovaných 85 % pozitívnych pacientov a do troch hodín ich bude detekovaných 90 %. Od 3 do 24 hodín bude CLOtest* detekovať ďalších 5 % pacientov. V zatiaľ najrozsiahlejšej štúdii hlásnej v USA do dneška analyzovali Dye a spolupracovníci antrálne biopsie, čo sa týka histológie (Giemsovo sfarbenie) a CLOtestu* od 122 po sebe idúcich pacientov absolvujúcich bežnú endoskopiu na univerzite štátu Virgínia9. U osemdesiatich dvoch pacientov boli vzorky tiež kultivované. Získané výsledky sú v tabuľke dole.

Tabuľka 1: Štúdia CLOtestu*, Dye et al, University of Virginia Pravé + Pravé - Falošné + Falošné -CLOtest* n=121 46 72 2 1Histológia n=122 43 74 5Kultivácia n=82 23 49 10

Citlivosť ŠpecifičnosťCLOtest* 98 % 97 %Histológia 91 % 100 %Kultivácia 70 % 100 %Podobné výsledky zaznamenali Schnell et al v Missouri10.

Obmedzenie rýchlych ureázových testov, histológie a kultivácieMožné príčiny falošných negatívnych výsledkov• Veľmi nízke množstvo H. pylori vo vzorke tkaniva • Nejednotná distribúcia H. pylori, takže tento organizmus nie je zachytený vo

vzorke tkaniva• Vzorka črevnej metaplázie – (H. pylori nekolonizuje črevnú sliznicu)• Nedávne požitie antibiotík, bizmutu, inhibítorov protónovej pumpy alebo

sukralfátu, ktoré môžu inhibovať organizmus• Formalínová kontaminácia vzorky

Možné príčiny falošných pozitívnych výsledkov• Keď sa test vykoná správne, falošné pozitívne výsledky sú vzácne. Neskorá

falošne pozitívna reakcia (>12 hodín) môžu byť spôsobené neúplným vsadením

82

biopsie do želé, takže v tkanive môžu rasť kontaminujúce organizmy.• Teoreticky môže k falošným pozitívnym výsledkom dôjsť u pacientov, ktorí majú

achlórhydriu z nadmerného rastu baktérií. Môže to byť dôsledkom nasledujúcich stavov: pernicióznej anémie, predchádzajúcej žalúdočnej operácie alebo nedávneho užitia inhibítorov protónovej pumpy. Iné baktérie však vytvárajú oveľa menej ureázy ako H. pylori a nemali by byť príčinou rýchlej zmeny farby.

Ak existujú faktory, ktoré by mohli nepriaznivo ovplyvňovať výsledky rýchleho ureázového CLOtestu*, zoberte do úvahy ďalšie diagnostické opatrenia, ako napríklad dychový test s močovinou a skúšku séra, aby sa vylúčila diagnóza H. pylori.












83


Navodila za uporabo Rx Only: Samo na recept: Zvezni (ZDA) zakon predpisuje, da sme ta pripomoček prodati samo zdravnik oz. se ga lahko proda samo po naročilu zdravnika.

Predvidena uporabaHitri ureazni test (HUT) CLOtest* natančno in priročno zazna encim ureaza bakterije Helicobacter pylori v vzorcih tkiva želodčne sluznice. Test je namenjen za diagnozo domnevne okužbe s H. pylori.Opomba: Samo za in vitro diagnostično uporabo.CLOtest* se lahko uporablja v laboratorijih, ki niso certificirani v skladu z Dopolnili za izboljšave v kliničnih laboratorijih (Clinical Laboratory Improvement Amendments oz. CLIA) iz leta 1988.

PovzetekDr. Barry Marshall je razvil CLOtest*1. Ime izvira iz testa2 za “Campylobacter-Like Organism”. Doktorja. Robin Warren in Marshall sta bakterijo prvič kultivirala iz antralnih vzorcev tkiva v letu 1982 in jo poimenovala Campylobacter–like bacterium (bakterija, ki je videti kot Campylobacter)3. Naknadno so rod poimenovali Helicobacter, kar pomeni spiralna bakterija2.Dokazano je bilo, da H. pylori povzroča aktivni kronični gastritis4, ter da je dejavnik tveganja za raka na želodcu5 in MALT (mucosal-associated-lymphoid-type) limfom6. Uničenje H. pylori je učinkovito pri odpravljanju ali zmanjšanju števila ponovitev pojava razjed in lahko tudi zmanjša tveganje za pojav raka na želodcu7,8.

Opis izdelka in hranjenjeCLOtest* je plastična posodica, v kateri je zapečaten žele, ki pokaže prisotnost ureaze. Žele vsebuje sečnino, USP (29 mg/ml) rdeči fenol (pH indikator), pufre in bakteriostatični agens za preprečitev razvoja kontaminirajočih ureaza-pozitivnih organizmov. Če je v vzorcu tkiva prisotna ureaza iz H. pylori, bo žele spremenil barvo iz rumene v svetlo vijolično v skladu z naslednjo reakcijo:

sečnina voda kislina amonijak bikarbonat

HUT CLOtest* je lahko shranjen 18 mesecev pri temperaturi od 2°C - 8°C (36°F - 48°F). Življenjska doba izdelka poteče na zadnji dan meseca, ki je označen na embalaži. Izdelka ne uporabljajte, če žele ni rumen, če izdelek ni zapečaten in je žele videti posušen ali če je rok za uporabo že potekel. Za nadaljnja vprašanja pokličite 1-844-425-9273 pred uporabo CLOtest*.

S

HALYARD* CLOtest*Hitri ureazni test

NH2

C = O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

NH2

urea

urease


ureaza

84

Priprava bolnikaBolnik mora tri tedne pred biopsijo prenehati jemati antibiotike in bismutove preparate. Ti agensi lahko zmanjšajo, čeprav ne odpravijo, prisotnost H. pylori , kar oteži zaznavo organizma s kakršnimi koli sredstvi. Bolniki dva tedna pred testom ne bi smeli zaužiti inhibitorjev protonske črpalke, ker je dokazano, da ta zdravila zavirajo rast organizma pri nekaterih ljudeh.

Biopsija1. Priporočeno področje želodca za biopsijo je vsaj 2 cm stran od pilorusa ob mali

ali veliki krivini antruma. Odstranite tkivo, ki je videti normalno - izognite se razjedenemu tkivu, ker je možno, da bo bakterija H. pylori okoli teh področij prisotna v manjšem številu. Standardne klešče za biopsijo bi morale odvzeti dovolj velik vzorec za test.

2. Če želite, lahko v isti CLOtest* vstavite tudi dodatni vzorec. Ne kontaminirajte drugega vzorca s krvjo z mesta prve biopsije.

Zbiranje vzorcev in ravnanje z njimi1. Po odstranitvi hitrega ureaznega testa CLOtest* iz hladilnika, toliko dvignite

nalepko, da boste razkrili rumen žele. Za hitrejše rezultate testa dovolite, da gel doseže sobno temperaturo, preden vanj vstavite vzorec tkiva (običajno med 7 - 10 minut).

2. S čisto napravo za nanašanje (npr. zobotrebec, itd.) potisnite celoten vzorec s klešč pod površino želeja, da bo čim več vzorca izpostavljenega želeju. Poskrbite, da bo vzorec odvzetka tkiva popolnoma potopljen v žele.

3. Ponovno namestite zaščitno nalepko, ki je občutljiva na pritisk, ter zabeležite ime bolnika, datum in čas vstavitve vzorca odvzetega tkiva.

4. Če želite, lahko CLOtest* položite na grelno ploščo s temperaturo med 30°C - 40°C (86°F - 104°F). Čeprav lahko grelna plošča skrajša reakcijski čas in omogoči hitrejše rezultate, uporaba grelne plošče ni obvezna in ne bo vplivala na natančnost testa. Če uporabljate grelno ploščo, testa ne grejte več kot tri ure, nato ga ohranite na sobni temperaturi do dokončnega odčitka rezultata.

5. Pozitivno reakcijo zabeležite takoj, ko žele spremeni barvo. Po pojavu pozitivne reakcije nadaljnje odčitavanje ni več potrebno. 75% pozitivnih testov spremeni barvo v 20 minutah (Slika 1).

Slika 1:Razpredelnica s pozitivnimi reakcijskimi časi za hitri ureazni test CLOtest*

Čas (minut)

Tolmačenje rezultatov1. AVzorec, ki je kontaminiran s krvjo, lahko obarva žele okoli robov tkiva. To NI

pozitiven test. Če vzorec tkiva vsebuje ureazo, se bo sprememba najprej pojavila okoli vzorca in v končni fazi spremenila barvo vsega želeja.

2. Spremembo pH-ja pri pozitivnem testu je najprej opaziti pri stiku med želejem in vzorcem tkiva. Če je prisotna velika količina ureaze, je vidna sprememba zelo hitra. Kakršnakoli sprememba barve vsega želeja v odtenek, ki ni rumen (npr.

85


rdeča, vijolična, roza, močna oranžna), kaže na prisotnost H. pylori.3. Negativen test ostane rumen po vstavitvi tkiva v žele. Če je žele po 24-ih urah

rumene barve, je test negativen. Če testa ne morete odčitati po 24-ih urah, bo test ostal veljaven 72 ur po vstavitvi odvzetega tkiva v žele. Na primer, če test, opravljen v petek, ni spremenil barve do konca dneva, se ga lahko shrani pri sobni temperaturi in odčita v ponedeljek.

Varnostni protokol (del zahtev za laboratorije, ki niso certificirani po CLIA)Pri vsakem negativnem testu opravite naslednjo pozitivno preverjanje, da zagotovite, da HUT CLOtest* deluje pravilno:1. Ureazno tableto (Halyard katalog, št. 60407) vstavite v CLOtest* žele in test

ponovno zaprite.2. Po petih minutah preverite, če je prišlo do spremembe barve (rdeča ali vijolična),

ki kaže na pozitiven rezultat.3. Če žele ne spremeni barve v rdečo ali vijolično, o tem obvestite podjetje Halyard

na številko 1-844-425-9273.

Glavne značilnostiHUT CLOtest* zazna 75% H. pylori infekcij v 20-ih minutah, in sicer brez lažnih pozitivnih rezultatov1. CLOtest* bo v roku ene ure zaznal 85% pozitivnih bolnikov, v roku treh ur pa 90%. CLOtest* bo v času med 3 in 24 ur zaznal dodatnih 5% bolnikov. V najobsežnejši do sedaj objavljeni študiji v ZDA je Dye s sodelavci odvzel antralne vzorce tkiva, po enega za histologijo (barvanje po Giemsi) in CLOtest*, 122-im zaporednim bolnikom, pri katerih so na Univerzi v Virginiji9 opravili rutinsko endoskopijo. Pri dvainosemdesetih bolnikih so vzorce tudi kultivirali. Rezultati so prikazani s spodnji razpredelnici.

Razpredelnica 1: Študija CLOtesta*, Dye in sodelavci, Univerza v Virginiji Resnični + Resnični - Lažni + Lažni -CLOtest* n=121 46 72 2 1Histologija n=122 43 74 5Kultura n=82 23 49 10

Občutljivost SpecifičnostCLOtest* 98% 97%Histologija 91% 100%Kultura 70% 100%Podobne rezultate so dobil tudi Schnell s sodelavci v Missouriju10.

Omejitve hitrega ureaznega testa, histologije in kultureMožni vzroki lažnih negativnih rezultatov• Zelo nizko število H. pylori v vzorcu tkiva • Neenakomerna porazdelitev H. pylori, zato organizem ni bil prisoten v vzorcu

tkiva• Vzorec intestinalne metaplazije - (H. pylori ne kolonizira intestinalne

metaplazije)• Nedavno zaužitje antibiotikov, bismuta, inhibitorjev protonske črpalke ali

sukralfata, kar lahko zavira organizem• Kontaminacija vzorcev s formalinom

86

Možni vzroki lažnih pozitivnih rezultatov• Ob pravilni izvedbi testa so lažni pozitivni rezultati redki. Pozni lažni pozitivni

rezultati (>12 ur) so lahko posledica nepopolne vstavitve vzorca tkiva v žele, kar lahko kontaminirajočim organizmom omogoči rast v tkivu.

• Teoretično se lahko lažen pozitiven rezultat pojavi pri bolnikih, ki imajo anacidnost zaradi prekomerne rasti bakterij. To bi lahko bil rezultat naslednjih razmer: perniciozna anemija, prejšnja operacija na želodcu ali nedavna uporaba zdravil z inhibitorjem protonske črpalke. Toda druge bakterije proizvedejo veliko manj ureaze kot H. pylori in ne bi smele povzročiti hitre spremembe barve.

Če obstajajo dejavniki, ki bi lahko negativno vplivali na delovanje hitrega ureaznega testa CLOtest*, pretehtajte uporabo drugih diagnostičnih pristopov za izločitev diagnoze H. pylori, kot npr. dihalni test s sečnino in serološke preiskave.












87


Käyttöohjeet Rx Only: Ainoastaan reseptillä: Yhdysvaltain liittovaltion laki rajoittaa tämän laitteen myytäväksi lääkärin toimesta tai määräyksestä.

KäyttötarkoitusCLOtest*- ureaasin pikatesti (RUT) määrittää tarkasti ja helposti Helicobacter pylorin tuottaman ureaasientsyymin mahan limakalvon biopsianäytteissä. Sitä käytetään H. pylori -infektion alustavaan diagnoosiin. Huomautus: Diagnostiseen in vitro -käyttöön.CLOtest*-testi on vapautettu CLIA ‘88 -määräyksistä.

YhteenvetoTri Barry Marshall, M.D. kehitti CLOtestin*1. Sen nimi johtuu “Campylobacter-Like Organism” testistä2. Tohtorit Robin Warren ja Marshall viljelivät ensimmäisinä bakteeria antrumin biopsianäytteistä vuonna 1982 ja kutsuivat sitä kampylobakteerin kaltaiseksi (Campylobacter-like bacterium) bakteeriksi3. Suvulle annettiin myöhemmin nimeksi Helicobacter, joka tarkoittaa kierteistä bakteeria2. H. pylorin on osoitettu aiheuttavan aktiivista kroonista gastriittia4 ja se on mahasyövän5 ja limakalvoon liittyvän lymfoidistyyppisen (MALT) lymfooman6 riskitekijä. H. pylorin häätö eliminoi mahahaavat tai vähentää residivointia, ja häätö voi myös pienentää mahasyövän riskiä7,8.

Tuotteen kuvaus ja säilytysCLOtest* on muovisen aluslevyn sisällä suljetussa syvennyksessä sijaitseva urea-indikaattorigeeli. Geeli sisältää ureaa USP (29 mg/ml), fenolipunaa (pH-indikaattori), puskureita ja bakteriostaattista valmistetta kontaminoivien ureaasipositiivisten organismien kasvun estämiseksi. Jos kudosnäyte sisältää H. pylori -peräistä ureaasia, se muuttaa geelin keltaisen värin sinipunaiseksi seuraavan reaktion vaikutuksesta:

urea vesi happo ammoniakki bikarbonaatti

CLOtest*- ureaasin pikatestin kestoaika varastoituna on 18 kuukautta, kun sitä säilytetään 2–8 °C:ssa. Tuotteen viimeinen käyttöajankohta on pakkaukseen merkityn kuukauden viimeinen päivä. Tuotetta ei saa käyttää, jos geeli ei ole keltainen, jos sinetti on rikki tai geeli vaikuttaa kuivuneelta tai jos viimeinen käyttöajankohta on ohitettu. Lisätietoja on saatavissa numeroista 1 844 425 9273 ennen CLOtestin* käyttöä.

Potilaan valmisteluPotilaan pitää lopettaa antibioottien ja vismuttivalmisteiden käyttö kolme viikkoa ennen biopsiaa. Nämä valmisteet saattavat vaimentaa H. pylorin kasvua mutta

F

HALYARD* CLOtest*Ureaasin pikatesti

NH2

C = O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

NH2

urea

urease


ureaasi

88

eivät häätää sitä, minkä vuoksi sen toteaminen on vaikeaa millä menetelmällä tahansa.Potilas ei saa ottaa myöskään protonipumpun estäjiä kahden viikon ajan ennen testiä, sillä näiden valmisteiden on osoitettu estävän tämän organismin kasvua joillakin henkilöillä.

Biopsia1. On suositeltavaa ottaa kudosnäyte vähintään 2 cm:n päästä pyloruksesta

antrumin ison tai pienen kaarroksen alueelta. Ota kudosnäyte normaalilta vaikuttavasta kudoksesta – vältä kudoksia, joissa esiintyy eroosiota tai haavaumia, sillä em. alueilla saattaa esiintyä vähemmän helikobakteeria kuin muualla. Tavallisilla biopsiapihdeillä otettu pala riittää testin suorittamiseen.

2. Haluttaessa voidaan samaan CLOtest*-testisyvennykseen panna toinenkin näytepala. Varo, ettei toinen näyte kontaminoidu ensimmäiseen näytteen ottokohdasta tihkuvalla verellä.

Näytteen otto ja käsittely1. Ota CLOtest* RUT -aluslevy jääkaapista ja kohota etikettiä sen verran, että

keltainen geeli tulee näkyviin. Testaustulos saadaan näkyviin nopeammin, jos geeli on lämmennyt huoneenlämpötilaan ennen kudosnäytteen asettamista (tavallisimmin 7–10 minuuttia).

2. Työnnä koko näyte puhtaalla välineellä (esim. hammastikulla) näytteenottopihdeistä niiden alla sijaitsevan geelin päälle, niin että mahdollisimman suuri osa geeliä joutuu kosketukseen kudospalan kanssa. Varmista, että kudospala on kokonaan geelin ympäröimä.

3. Paina tarra takaisin kiinni aluslevyyn ja merkitse siihen potilaan nimi ja kudospalan asettamisen päivämäärä ja kellonaika.

4. Haluttaessa CLOtest*-aluslevy voidaan lämmittää lämpölevyllä (30–40 °C). Vaikka lämpölevy voi lyhentää reaktioaikaa ja antaa tuloksen nopeammin, sen käyttö on valinnaista, eikä se vaikuta testin tarkkuuteen. Jos lämpölevyä käytetään, aluslevyä ei pidä lämmittää yli kolmea tuntia: sen jälkeen sitä pitää säilyttää huoneenlämmössä lukemiseen saakka.

5. Tulos on positiivinen heti kun geelin väri vaihtuu. Jos positiivinen tulos on saavutettu, uutta lukemista ei tarvita. 75 %:ssa positiivisista testeistä värinmuutos tapahtuu 20 minuutin kuluessa (kuva 1).

Kuva 1:Positiivinen reaktio CLOtest* RUT -testissä ajan funktiona.

Aika (minuutteja)

Testitulosten tulkinta1. Verinen kudosnäyte voi värjätä geelin reunat punaisiksi. Tämä EI ole

positiivinen testi. Jos kudosnäyte sisältää ureaasia, värinmuutos ilmenee ensin kudosnäytteen ympärillä, kunnes lopulta koko geeli värjäytyy.

2. pH-muutos positiivisessa testissä näkyy ensin geelin ja kudosnäytteen rajapinnassa. Jos näyte sisältää runsaasti ureaasia, näkyvä muutos on

89


nopea. Kaikki värinmuutokset keltaista lukuun ottamatta (esim. punainen, sinipunainen, vaaleanpunainen, tumma oranssi) ovat merkki helikobakteerista.

3. Negatiivinen testi pysyy keltaisena sen jälkeen kun kudosnäyte on upotettu geeliin. Jos geeli pysyy keltaisena 24 tunnin kuluttua, testi on negatiivinen. Jos tulosta ei voida lukea 24 tunnin kuluttua, testi pysyy pätevänä 72 tuntia kudospalan upottamisesta geeliin. Jos esimerkiksi perjantaina suoritettu testi ei ole aiheuttanut värinmuutosta päivän päättymiseen mennessä, sitä voidaan säilyttää huoneenlämmössä ja lukea maanantaina.

Tuotteen toimivuuden varmistaminen (CLIA-määräyksistä vapauttamista varten)Aina testaustuloksen ollessa negatiivinen on suoritettava testaus positiivisella vertailunäytteellä ureaasin pikatestin toimivuuden varmistamiseksi:1. Aseta ureaasia sisältävä tabletti (Halyard tuotenro 60407) CLOtest*-geelin päälle

ja sulje aluslevy.2. Tarkasta geeli viiden minuutin kuluttua positiivista testitulosta tarkoittavan

värinmuutoksen varalta (punainen tai sinipunainen).3. Jos geeli ei muutu punaiseksi tai sinipunaiseksi, ilmoita asiasta Halyardille,

puhelin: 1 844 425 9273.

Suorituskykyä kuvaavat ominaisuudetCLOtest* RUT havaitsee 75 % helikobakteeri-infektioista 20 minuutin kuluessa ilman vääriä positiivisia tuloksia1. CLOtest* havaitsee positiivisista potilaista tunnin kuluessa 85 % ja kolmen tunnin kuluessa 90 %. CLOtest* havaitsee lisäksi 5 % positiivisista potilaista 3–24 tunnin kuluessa. Siihen mennessä suurimmassa yhdysvaltalaisessa tutkimuksessa Dye ja kumppanit ottivat kudosnäytteitä antrumista histologista tutkimusta (Giemsan värjäys) ja CLOtestiä* varten 122 konsekutiivisesta endoskopialla tutkitusta potilaasta Virginian yliopistossa9. 82 potilaan näytteistä suoritettiin lisäksi viljely. Tulokset on esitetty alla olevassa taulukossa.Taulukko 1: CLOtest*-tutkimus, Dye et al, University of Virginia Oikea + Oikea – Väärä + Väärä –CLOtest* n=131 46 72 2 1Histologinen tulos n=122 43 74 5Viljely n=82 23 49 10

Sensitiivisyys SpesifisyysCLOtest* 98 % 97 %Histologinen tulos 91 % 100 %Viljely 70 % 100 %Schnell ja kumppanit saivat samanlaisia tuloksia Missourissa10.

Ureaasin pikatestiin, histologiseen tutkimukseen ja viljelyyn liittyvät rajoituksetVäärien negatiivisten tulosten mahdolliset syyt• Kudosnäyte sisältää hyvin vähäisiä määriä helikobakteeria.• Helikobakteeri on jakautunut kudokseen epäsäännöllisesti, minkä vuoksi niitä ei

tullut mukaan kudosnäytteeseen.• Kudosnäyte koostuu suolistometaplasiasta (H. pylori ei kolonisoi suolen

limakalvoa).• Potilas on käyttänyt äskettäin antibiootteja, vismuttivalmisteita, protonipumpun

90

estäjiä tai sukralfaattia, mikä saattaa estää organismin kasvua.• Näyte on formaliinin kontaminoima.

Väärien positiivisten tulosten mahdolliset syyt• Kun testi suoritetaan asianmukaisesti, väärät positiiviset ovat harvinaisia.

Myöhäiset väärät positiiviset reaktiot (>12 tuntia) voivat johtua siitä, että kudosnäytettä ei ole työnnetty kunnolla geeliin, minkä vuoksi kontaminoivat organismit voivat kasvaa kudoksessa.

• Väärä positiivinen tulos voi teoreettisesti aiheutua bakteerikasvun aiheuttaman mahan hapottomuuden vuoksi. Tällaista voi ilmetä seuraavien tapauksien yhteydessä: pernisiöösi anemia, aikaisempi mahaleikkaus tai protonipumpun estäjien viimeaikainen käyttö. Muut bakteerit tuottavat kuitenkin paljon vähemmän ureaasia kuin helikobakteeri, eikä niiden pitäisi aiheuttaa nopeaa värinmuutosta.

Jos CLOtest*- ureaasin pikatestin käyttöön saattaa liittyä haittaavia tekijöitä, on harkittava muiden diagnostisten menetelmien käyttöä. Näitä ovat mm. hengitysilman ureatesti ja serologiset testit helikobakteeri-infektion poissulkemiseksi.

Kirjallisuusviitteet1. Marshall BJ, Warren JR, Francis GJ, Langton SR, Goodwin CS, Blincow E. Rapid urease test in







7. Marshall BJ, Goodwin CS, Warren JR, et al. Prospective doubleblind trial of duodenal ulcer relapse after eradication of Campylobacter pylori. Lancet 1988; 2:1437-42.




91


Bruksanvisning Rx Only: Endast på förskrivning av läkare: Enligt amerikansk federal lag får denna produkt endast säljas av eller på ordination av läkare.

AnvändningsområdeCLOtest* snabbureastest (SUT) detekterar med hög noggrannhet enzymet ureas från Helicobacter pylori i biopsier från ventrikelslemhinnan. Testen är avsedd för preliminär diagnos av H. pylori-infektion.OBS! För in vitro-diagnostik.CLOtest* tillhör testkategorin CLIA ‘88 waived.

SammanfattningBarry Marshall, M.D., är den som utvecklat CLOtest*1. Namnet härleds från “Campylobacter-liknande organism”-test2. Dr Robin Warren och Marshall odlade först bakterier från antrala biopsier år 1982, och kallade dem Campylobacter–liknande bakterier3. Senare gavs detta genus namnet Helicobacter, vilket betyder spiralformad bakterier2.H. pylori har visat sig orsaka aktiv kronisk gastrit4 och är en riskfaktor för ventrikelcancer5 och slemhinne-associerad- lymfoidtypslymfom (MALT)6. Utplåning av H. pylori är effektiv för att eliminera eller reducera ulcusrecidiv och kan även minska risken för ventrikelcancer7,8.

Produktbeskrivning och förvaringCLOtest* utgörs av en brunn med ureasindikatorgel som förseglats inuti ett objektglas av plast. Gelen innehåller urea, USP (29 mg/ml) fenolrött (pH-indikator), buffertar och ett bakteriostatiskt medel för att hindra växt av kontaminerande ureaspositiva organismer. Vid förekomst av ureas från H. pylori i vävnadsprovet, ändras gelens färg från gul till kraftig magenta enligt följande reaktion:

urea vatten syra ammonium bikarbonat

CLOtest* RUT har en hållbarhet på 18 månader när produkten förvaras vid 2–8 °C (36–48 °F). Produkten utgår på sista dagen av den månad som anges på förpackningen. Produkten får inte användas om gelen inte är gul, om förseglingen är skadad, om gelen verkar uttorkad eller om sista användningsdatum har passerats. För ytterligare information innan CLOtest* används, ring 1-844-425-9273.

PatientförberedelserPatienten skall upphöra med användning av antibiotika och vismutpreparat tre veckor före biopsin. Dessa medel kan undertrycka, men inte eliminera förekomsten

v

HALYARD* CLOtest*Snabbureastest

NH2

C = O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

NH2

urea

urease


ureas

92

av H. pylori och därigenom försvåra detektion av organismen, oavsett vilken metod som används. Patienten skall inte ha intagit protonpumpshämmare de senaste två veckorna före testen, eftersom dessa läkemedel har visats hämma växten av denna organism hos vissa personer.

Biopsi1. Det ventrikelområde som rekommenderas för biopsering utgörs av

antrumområdet längs curvatura minor eller major minst 2 cm från pylorus. Excidera vävnad som verkar normal – undvik vävnad som är eroderad eller ulcererad, eftersom H. pylori kan finnas i reducerad mängd runt sådana områden. En biopsitång av standardtyp bör ge ett prov av tillräcklig storlek för testen.

2. Om så önskas kan ett andra prov läggas ned i en CLOtest*- brunn. Förorena inte det andra provet med blod från det första biopsistället.

Provtagning och -hantering1. Sedan objektglaset för CLOtest* snabbureastest tagits ut ur kylskåpet, lyfts

etiketten upp så mycket att den gula gelen exponeras. Snabbare testresultat erhålls om gelen tillåts värmas upp till rumstemperatur innan biopsiprovet förs in (tar normalt 7–10 minuter).

2. Med en ren applikator (t.ex. en tandpetare) trycks hela provet från tången ned under gelytan så att så mycket som möjligt av provet exponeras för gelen. Se till att biopsiprovet är helt nedsänkt i gelen.

3. Försegla åter den tryckkänsliga etiketten på objektglaset och skriv på patientens namn samt tid och datum för biopsiprovets införande.

4. Om så önskas kan objektglaset för CLOtest* placeras på en värmeplatta vid temperatur 30–40 °C (86–104 °F). Även om värmeplattan kan påskynda reaktionen och ge snabbare resultat, är detta förfarand valfritt och påverkar inte testnoggrannheten. Om värmeplatta används, skall objektglaset inte värmas upp i mer än tre timmar och därefter skall det förvaras vid rumstemperatur tills resultatet avläses.

5. Registrera positiv reaktion så snart gelen ändrar färg. Efter att en positiv reaktion har inträffat är ingen ytterligare avläsning nödvändig. Hos 75 procent av alla positiva tester sker färgförändringen inom 20 minuter (se fig.1).

Figur 1:Diagram för tidsåtgångentill positiv reaktion vid CLOtest* snabbureastest.

Tid (minuter)

Tolkning av resultat1. Ett prov som förorenats av blod kan färga gelen runt vävnadskanten. Detta

är INTE ett positivt testresultat. Om biopsiprovet innehåller ureas, uppträder förändringen först runt provet och all gel färgas slutligen.

2. Ändringen av pH-värdet vid positivt testresultat ses först vid gränsen mellan gelen och biopsiprovet. Vid en signifikant mängd ureas sker den synliga förändringen snabbt. Varje färgförändring omfattande hela gelen till en nyans annan än gul (t.ex. röd, magenta, skär, kraftigt brandgul) indikerar närvaro av H. pylori.

93


3. Ett negativt testresultat innebär att gelen förblir gul efter att vävnaden bäddats in i gelen. Om gelen är gul efter 24 timmar är testresultatet negativt. Om resultatet inte kan avläsas efter 24 timmar, förblir provet giltigt i 72 timmar efter införandet av biopsiprovet i gelen. Om en test som till exempel utförs en fredag, inte har ändrat färg vid dagens slut, kan den förvaras vid rumstemperatur och avläsas på måndag.

Säkerhetskontroll (för krav avseende CLIA Waiver)Vid varje negativt testresultat skall följande positiva kontroll utföras för att säkerställa att CLOtest* SUT fungerar tillfredsställande:1. För in en ureastablett (Halyard katalognummer 60407) i CLOtest*-gelen och

försegla åter objektglaset.2. Inspektera gelen med avseende på positiv färgändring efter fem minuter (röd

eller magenta).3. Om gelen inte ändrat färg till röd eller magenta, skall Halyard underrättas på

1-844-425-9273.

PrestandaCLOtest* SUT detekterar 75 procent av H. pylori-infektioner inom 20 minuter utan falskt positiva resultat¹. Efter en timme har 85 procent av positiva patienter detekterats via CLOtest*, och efter tre timmar har 90 procent detekterats. Inom 3 till 24 timmar detekterar CLOtest* ytterligare 5 procent av patienterna. I den då största amerikanska studien hittills tog Dye et al. biopsiprover från antrum, ett för histologisk undersökning (Giemsafärgning) och ett för CLOtest*, från 122 konsekutiva rutinendoskopipatienter vid University of Virginia9. För åttiotvå patienter odlades även på proven. De erhållna resultaten visas i tabellen nedan.Tabell 1: CLOtest*-studie, Dye et al., University of Virginia Sant + Sant – Falskt + Falskt -CLOtest* n=121 46 72 2 1Histologi n=122 43 74 5Odling n=82 23 49 10

Sensitivitet SpecificitetCLOtest* 98% 97%Histologi 91% 100%Odling 70% 100%Liknande resultat erhölls av Schnell et al. i Missouri10.

Begränsningar hos snabbureastest, histologi och odlingMöjliga orsaker till falskt negativa resultat• Mycket lågt antal H. pylori i vävnadsprovet• Oregelbunden H. pylori-distribution, så att organismen inte infångas i

vävnadsprovet ifråga• Prov med intestinal metaplasi – (H. pylori koloniserar inte tarmslemhinnan)• Nyligt intag av antibiotika, vismut, protonpumpshämmare eller sukralfat, vilka

kan hämma organismen• Formalinkontaminering av provet

Möjliga orsaker till falskt positiva resultat• När testen utförs korrekt är falskt positiva resultat sällsynta. Sena falskt positiva

94

reaktioner (>12 timmar) kan orsakas av att biopsiprovet inte förts in fullständigt i gelen så att kontaminerande organismer kan växa i vävnaden.

• Teoretiskt kan falskt positiva resultat erhållas för patienter med aklorhydri på grund av bakteriell överväxt. Detta kan bero på följande tillstånd: perniciös anemi, tidigare magsäcksoperation eller nylig användning av protonpumpshämmare. Andra bakterier producerar emellertid mycket mindre ureas än H. pylori och bör inte orsaka snabb färgförändring.

Om det föreligger faktorer som kan påverka CLOtest* snabbureastesten negativt, skall andra diagnostiska metoder övervägas, t.ex. urea-andningstest (urea breath test) och serologi, för att exkludera diagnosen H. pylori.

Bibliografi1. Marshall BJ, Warren JR, Francis GJ, Langton SR, Goodwin CS, Blincow E. Rapid urease test in







7. Marshall BJ, Goodwin CS, Warren JR, et al. Prospective doubleblind trial of duodenal ulcer relapse after eradication of Campylobacter pylori. Lancet 1988; 2:1437-42.




95


Kullanım Talimatları Rx Only: Yalnızca Reçete ile: Federal (A.B.D) kanunları bu cihazın bizzat hekim tarafından veya hekim talimatı üzerine satışını yasaklamaktadır.

Kullanım AmacıCLOtest* Hızlı Üreaz Testi (RUT) gastrik mukoza biyopsilerinde Helikobakter pilori’nin üreaz enzimini doğru ve kolay bir şekilde ortaya çıkarır. Kullanımı H.pilori enfeksiyonunun olası teşhisi amaçlıdır.Not: In vitro diagnostik kullanım içindir.CLOtest* CLIA ‘8’e tabi değildir.

ÖzetDr. Barry Marshall CLOtest*’i geliştirmiştir. İsmi “Campylobacter-Like Organism” test2 ifadesinden gelir. Öncelikle Dr. Robin Warren ve Dr. Marshall 1982 senesinde antral biyopsilerden elde edilen bakteriyi kültive etmişler ve buna Campylobacter–like bacterium3 adını vermişlerdir. Bunu takiben bu cinse spiral veya helikal bakteri2 anlamına gelen Helikobakter adı verilmiştir.H. pilori’nin aktif kronik gastrit4’e sebebiyet verdiği görüşmüş ve gastrik kanser5 ve mukoza-ile-ilişkili-lenfoid-tip (MALT) lenfoma6 için bir risk faktörü teşkil etmektedir. H. pilori’nin eradiksiyonu ülserin nüksetme riskini azaltması veya yok etmesinde etkilidir ve gastrik kanser7,8 riskini de azaltabilmektedir.

Ürünün Tanımı ve MuhafazasıCLOtest* içi üreaz gösterge jeli ile dolu plastik bir slayttır. Jel kontamine eden üreaz-pozitif organizmaları önlemek için üre, USP (29 mg/mL), phenol red (bir pH göstergesi), tampon ve bakteriyostatik madde içermektedir. Doku örneği H. pilori’den üreaz varsa, aşağıdaki reaksiyonlara göre jel rengini sarıdan açık mor rengine doğru değiştirmektedir.

üre su asit amonyum bikarbonat

CLOtest* RUT’un raf ömrü 2°–8°C (36°–48°F) derecede muhafaza edildiği takdirde 18 aydır. Ürünün son kullanma tarihi paket üzerinde belirtilen ayın son günüdür. Jel sarı değilse, ürün hasar görmüşse ve jel kurumuşsa veya son kullanma tarihi geçmişse ürünü kullanmayın. Sorularınız için CLOtest*’i kullanmadan önce 1-844-425-9273 numaralı telefonu arayın.

Hastanın HazırlanmasıHasta biyopsiden üç hafta önce antibiyotik ve bizmut preparatı kullanmayı bırakmalıdır. Bu maddeler H. pilori’yi bastırabilir ancak yok edemez ve

t

HALYARD* CLOtest*Hızlı Üreaz Testi

NH2

C = O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

NH2

urea

urease


üreaz

96

organizmanın herhangi bir yolla bulunmasını zorlaştırır. Hastanın midesinde testten iki hafta önce proton pompa inhibitörü olmamalıdır, bu ilaçların bazı kişilerde organizmanın büyümesini engellediği görülmüştür.

Biyopsi1. Biyopsi için önerilen gastrik bölgesi antrumun küçük ve büyük kurvatörü

boyunca pilordan 2 cm. uzaklıktadır. Normal gözüken dokuyu eksize edin. – H. pilori daha az sayıda aşınmış veya ülserli bölgeler etrafında olabileceğinden bu dokulardan sakının. Standart biyopsi forsepsleri Ile test için yeterli boyutta spesimen alınmalıdır.

2. İstenirse ek bir numune tekli CLOtest* haznesine sokulabilir. İkinci spesimeni ilk biyopsi bölgesindeki kan ile kontamine etmeyin.

Spesimen Toplama ve Müdahale1. CLOtest* hızlı üreaz test slaydını soğutma yerinden alın ve sarı jel gözükecek

kadar etiketi kaldırın. Daha hızlı test sonuçları için biyopsiye başlamadan once jelin oda sıcaklığına ulaşmasını sağlayın. (genellikle 7-10 dakika)

2. Temiz bir uygulama cihazıyla (ör. kürdan vb.) numunenin mümkün olan en fazla miktarda jele maruz kalması için tüm numuneyi jel seviyesinin altında forsepsten itin. Biyopsi spesimenin tamamen jel içine batırıldığından emin olun.

3. Slayt üzerindeki basınca duyarlı etiketi kapatın ve hastanın ismini, tarihi ve biyopsi numunesinin koyulduğu saati kaydedin.

4. İstenirse, CLOtest* slaydı 30°–40°C (86°–104°F) dereceleri arasındaki bir ısıtma plakası üzerine koyulabilir. Isıtma plakası reaksiyon zamanını hızlandırıp daha çabuk sonuç sağlasa da kullanımı isteğe bağlıdır ve test doğruluğunu etkilememektedir. Isıtma plakası kullanılması durumunda slayt üç saatten daha fazla süreyle ısıtılmamalıdır, daha sonra en son ölçme işlemine kadar oda sıcaklığında saklanmalıdır.

5. Jel renk değiştirir değiştirmez pozitif reaksiyonu kaydedin. Pozitif reaksiyon olması durumunda daha fazla ölçüme gerek yoktur. Pozitif testlerin %75’i 20 dakika içerisinde renk değiştirmektedir. (Resim 1)

Resim 1:CLOtest* hızlı üreaz testi pozitif reaksiyon zamanı şeması.

Zaman (dakika)

Sonuçların Yorumlanması1. Kan ile kontamine olmuş spesimen doku kenarının etrafındaki jeli

koyulaştırabilir. Bu pozitif test sonucu DEĞİLDİR. Biyopsi üreaz içeriyorsa değişiklik öncelikle numune etrafında olur ve sonunda tüm jelin rengini değiştirir.

2. Pozitif bir testteki pH değişikliği öncelikle jelin ara yüzeyinde daha sonra biyopside görülür. Önemli miktarda üreaz varsa değişiklik gözle görülebilir hızda gerçekleşir. Tüm jelin sarı renk haricinde herhangi bir renk tonuna değişmesi (ör.

97


kırmızı, mor, pembe, koyu kavuniçi) H.pilori olduğu anlamına gelir. 3. Negatif bir testte doku jele batırıldıktan sonra sarı renktedir. Jelin rengi 24 saat

sonra sarıysa, test sonucu negatiftir. 24 saat içerisinde ölçülemezse, test biyopsi jel ortamına sokulduktan sonra 72 saat geçerliliğini koruyacaktır. Örneğin test Cuma günü yapıldıysa ve gün sonuna kadar rengi değişmediyse, oda sıcaklığında muhafaza edilip Pazartesi günü ölçümü yapılabilir.

Bozulmaya Karşı Güven Protokolü (CLIA feragat şartı)Her negatif test sonucunda CLOtest* RUT’un doğru bir şekilde çalıştığına emin olmak için aşağıdaki pozitif kontrol testini gerçekleştirin:1. CLOtest* jeli içerisine üreaz tableti sokun ve slaytı tekrar kapatın. (Halyard

catalog #60407) 2. Beş dakika sonra jeli pozitif renk değişikliğine karşı kontrol edin. (kırmızı veya

mor)3. Şayet jel kırmızı veya morumsu bir renge değişmezse, 1-844-425-9273 numaralı

telefondan Halyard ‘ı haberdar edin.

Performans ÖzellikleriCLOtest* RUT H.Pilori enfeksiyonlarının %75’ini 20 dakika içerisinde yanlış pozitifsiz ortaya çıkarır¹. Bir saat içinde CLOtest* tarafından pozitif hastaların %85’i, üç saat içinde %90’ı teşhis edilecektir. 3 ile 24 saat içerisinde CLOtest* hastaların diğer %5’ini teşhis edecektir. Günümüze kadar yapılan en geniş kapsamlı ABD araştırmasında Dye ve arkadaşları Virginia Üniversitesi’ne 122 adet ardı ardına gelen endoskopi hastasından histoloji (Giemsa stain) ve CLOtest* için olmak üzere birer tane antral biyopsi almışlardır. Seksen iki adet hastanın aynı zamanda spesimenleri kültive edilmiştir. Elde edilen sonuçlar aşağıdaki tabloda verilmiştir.

Tabl0 1: CLOtest* Çalışması, Dye ve arkadaşları, Virginia Üniversitesi Doğru + Doğru - Yanlış + Yanlış -CLOtest* n=121 46 72 2 1Histoloji n=122 43 74 5Kültür n=82 23 49 10

Duyarlılık ÖzgüllükCLOtest* 98% 97%Histoloji 91% 100%Kültür 70% 100%Benzer sonuçlar Missouri10’de Schnell ve arkadaşları tarafından elde edilmiştir.

Hızlı Üreaz Testleri, Histoloji ve Kültür SınırlamalarıYanlış negatif test sonucunun muhtemel sebepleri• Doku numunesinde çok düşük sayıda H.Pilori olması • H.Pilori’nin yer yer dağılması ve doku numunesinde organizmanın

yakalanamaması• İntestinal metaplazi numunesi – (H.Pilori intestinal mukozayı kolonize etmez)• Mide içerisine yakın zamanda girmiş organizmayı engelleyecek antibiyotik,

bizmut, proton pompa inhibirötü ya da sükralfat olması• Numunenin formalin kontaminasyonu

98

Yanlış pozitif test sonucunun muhtemel sebepleri • Test gerektiği gibi yapılırsa yanlış negatif sonucun çıkması nadirdir. Geç ortaya

çıkan yanlış pozitif reaksiyonlar (>12 saat) biyopsinin tamamen jel içerisine sokulmaması ve kontamine eden organizmaların doku üzerinde büyümesinden kaynaklanabilir.

• Teorik olarak yanlış pozitif sonuç bakteri fazlalığı sebebiyle aklorhidria’sı olan hastalarda ortaya çıkabilmektedir. Bu aşağıdaki durumların bir sonucu olarak ortaya çıkabilmektedir: öldürücü anemi, bir önceki gastrik ameliyat veya son dönemde alınan proton pompa inhibitör ilaç kullanımı, Ancak diğer bakteriler H.Pilori’den çok daha az üreaz üretmektedirler ve hızlı renk değişikliğine sebebiyet vermemelidirler.

CLOtest* hızlı üreaz testinin performansını etkileyebilecek diğer faktörler söz konusuysa H.pilori teşhisini hariç tutmak için üre nefes testi ve seroloji gibi diğer diagnostik ölçümleri göz önünde bulundurun.












99


사용 지침 Rx Only: 처방 전용: 미국 연방법에 따라 이 장치는 의사가 직접 판매하거나 의사의 지시에 따라 판매할 수 있습니다.

사용 용도CLOtest* 신속한 요소 분해 효소 검사(RUT)는 정확하게, 그리고 편리하게 위장 점막 생체검사에서 헬리코박터 세균의 요소 분해 효소를 검출합니다. 이 장비는 헬리코박터 세균 감염 여부의 가진단에 사용됩니다.주의: 시험관 진단용.CLOtest*는 CLIA ‘88이 면제되었습니다.

개요Barry Marshall, M.D.가 CLOtest*를 개발하였습니다1. 이 장비의 이름은 “캠필로박터 세균(Campylobacter-Like Organism)” 검사에서 나온 것입니다2. Robin Warren 및 Marshall 박사는 1982년에 전정부 생체검사에서 처음 이 세균을 배양하였으며 캠필로박터 세균으로 불렀습니다.3 그 후, 이 세균의 속은 나선형의 세균을 뜻하는 헬리코박터(Helicobacter)로 명명되었습니다.헬리코박터 세균(H. pylori)은 활성적인 만성 위염4을 야기하는 것으로 나타났으며, 위암5 및 점막과 관련된 림프형(mucosal-associated-lymphoid-type, MALT) 악성 림프종6을 일으키는 위험 요소입니다. 헬리코박터 세균(H. pylori)의 소거는 궤양 발생을 제거하거나 줄이는 데 효과적이며, 위암 발생 위험을 줄일 수도 있습니다7,8.

제품 설명 및 저장CLOtest*는 플라스틱 슬라이드에 밀봉된 요소 분해 효소 표시기 겔로된 웰입니다. 겔에는 요소, USP(29 mg/mL) 페놀레드( pH 표시기), 버퍼 및 정균제가 들어 있어, 요소 분해 효소에 양성 반응을 나타내는 세균의 성장을 예방합니다. 조직 샘플에 헬리코박터 세균에게서 온 요소 분해 효소가 있는 경우, 겔은 다음 반응에 따라 노란색에서 밝은 자홍색으로 변합니다.

요소 물 산 암모늄 중탄산염

CLOtest* RUT를 2°–8°C(36°–48°F)에 저장할 경우 저장 기간은 18개월입니다. 제품은 포장에 표시된 마지막 달의 마지막 날에 유효기간이 만료됩니다. 겔이 노란색이 아니거나,

K

HALYARD* CLOtest*신속한 분해 효소 검사

NH2

C = O + 2H2O + H+ 2NH4+ + HCO3-

NH2

urea

urease


요소 분해 효소

100

밀봉상태가 손상되고 겔이 말랐거나, 유효기간이 지난 제품은 사용하지 마십시오. CLOtest*를 사용하기 전에 추가 질문이 있으면 1-844-425-9273으로 연락하십시오.

환자 준비환자는 생체검사 3주 전에 항생제와 창연(bismuth) 제제 사용을 중단해야 합니다. 이런 제제는 헬리코박터 세균을 소거하지 않고 억제할 수 있어 여러 방법으로 세균을 검출하는 것을 힘들게 합니다. 환자는 검사를 수행하기 2주 전에 프로톤 펌프 억제제를 섭취하지 말아야 합니다. 이러한 약물은 일부 사람에게서 세균 성장을 억제하는 것으로 나타났습니다.

생체검사1. 위장의 권장된 생체검사 부위는 전정부의 작은 또는

큰 굴곡을 따라 유문에서 최소한 2cm의 거리를 둔 지점입니다. 정상적으로 보이는 조직을 절제합니다 - 헬리코박터 세균이 소량 존재할 수 있으므로 부식되었거나 궤양이 있는 조직은 피하도록 합니다. 생체검사용 표준 핀셋은 검사에 사용될 충분한 크기의 검사물을 떼어냅니다.

2. 원하는 경우 단일 CLOtest* 웰에 추가 샘플을 삽입할 수 있습니다. 첫 번째 생체검사 위치의 피로 두 번째 검사물을 오염시키지 마십시오.

검사물 채집 및 취급1. CLOtest* 신속한 요소 분해 효소 검사 슬라이드를

냉장고에서 꺼낸 다음, 노란색 겔이 보이도록 라벨을 들어올립니다. 보다 빠르게 검사 결과를 보려면 생체 검사물을 삽입하기 전에 겔이 실내 온도에 도달하도록 합니다(일반적으로 7–10분 사이).

2. 깨끗한 애플리케이터(예: 이쑤시게 등)를 사용하여 겔 표면 아래에 있는 전체 샘플을 핀셋에서 밀어내어 되도록 많은 검사물이 겔에 들어갈 수 있도록 합니다. 생체검사 검사물이 겔에 완전히 담겨졌는지 확인합니다.

3. 측면에 있는 압력 라벨을 다시 밀봉한 후 환자 이름, 그리고 생체검사 샘플이 삽입된 날짜와 시간을 기록합니다.

4. 원하는 경우, CLOtest* 슬라이드를 온도가 30°–40°C(86°–104°F) 사이인 가온 플레이트에 놓아둘 수 있습니다. 가온 플레이트는 반응 시간을 가속시키고 보다 빠른 결과를 제공하지만 그 사용은 옵션이며 검사의 정확성에 영향을 주지 않습니다. 가온 플레이트를 사용하는 경우 슬라이드를 3시간 이상 가열시키면 안 되며, 최종 판독이 있을 때까지 실내 온도에서 저장해야 합니다.

5. 겔의 색깔이 변하는 즉시 양성 반응을 기록합니다. 일단 양성 반응이 나타나면 추가 판독은 필요하지 않습니다. 양성 반응 검사의 75%가 20분 이내에 색깔이 변합니다(그림 1).

101


그림 :CLOtest* 신속한 요소분해 효소 양성 반응타임 차트

시간(분)결과 해석1. 피에 오염된 검사물은 조직 가장자리의 겔을 얼룩지게

할 수 있습니다. 이것은 양성 반응 검사가 아닙니다. 생체검사물에 요소 분해 효소가 포함된 경우, 변화는 우선 샘플 주위에서 나타나며 궁극적으로는 전체 겔의 색깔을 바꿉니다.

2. 양성 반응 검사의 pH 변화는 우선 겔과 생체검사물의 사이에서 보입니다. 많은 양의 요소 분해 효소가 있는 경우, 눈으로 볼 수 있는 변화는 빨리 나타납니다. 전체 겔의 색깔이 노란색이 아닌 다른 색(예: 빨간색, 자홍색, 핑크색, 진한 오렌지색)으로 변하는 것은 헬리코박터 세균이 있다는 것을 표시합니다.

3. 조직을 겔에 담근 후 노란색을 유지하면 음성 반응입니다. 겔의 색깔이 24시간 되는 때에도 노란색이면 검사는 음성 반응입니다. 24시간 되는 때에 결과를 읽을 수 없는 경우, 생체검사물을 겔에 삽입한 후 72시간까지 검사는 유효합니다. 예를 들면, 금요일에 검사를 시작한 후 그 날이 끝날 때까지 색깔이 변하지 않으면, 실내 온도에 놔둔 후 월요일에 결과를 읽을 수 있습니다.

실패-안전 프로토콜(CLIA 면제 요구사항)검사 결과가 음성 반응일 때는 다음 양성 컨트롤을 수행하여 CLOtest* RTU이 정확히 작동하는지 확인하십시오.1. 요소 분해 효소 정제(Halyard 카탈로그 번호 60407)를 CLOtest*

겔에 삽입한 후 슬라이드를 다시 밀봉합니다.2. 5분이 지난 후에 겔을 검사하여 양성 반응의 색깔 변화(

빨간색 또는 자홍색)가 있는지 확인합니다.3. 겔이 빨간색이나 자홍색으로 변하지 않으면 1-844-425-9273

으로 연락하여 Halyard에 알리십시오.

성능 특성The CLOtest* 는 오탐지 없이 20분 이내에 헬리코박터 세균 감염의 75%를 검출합니다1. CLOtest*는 1시간일 때 양성 환자의 85%를 검출하며, 3시간일 때는 90% 를 검출합니다. 3시간에서 24시간 사이에서 CLOtest*는 또 5%의 환자를 검출하게 됩니다. 그 당시까지 보고된 미국에서 가장 큰 연구에서, Dye 및 기타는 버지니아 주립대학에서 122명의 정기적인 내시경 검사 환자에게서 전정부 생체검사물을채집하여 조직학(김사 염색) 및 CLOtest*를 실행하였습니다9. 환자 82명의 검사물은 또한 배양되었습니다. 그 결과는 아래의 표에 표시되었습니다.

102

표 1: CLOtest* 연구, Dye 및 기타, 버지니아 주립대학 진짜 + 진짜 - 가짜 + 가짜 -CLOtest* n=121 46 72 2 1조직학 n=122 43 74 5배양 n=82 23 49 10

민감성 특이성CLOtest* 98% 97%조직학 91% 100%배양 70% 100%유사한 결과는 미조리주의 Schnell 및 기타의 연구에서도 발견되었습니다10.

신속한 요소 분해 효소 검사, 조직학 및 배양의 한계가짜 음성 반응의 가능한 원인• 조직 샘플에 아주 적은 양의 헬리코박터 세균이

있습니다• 고르지 못한 헬리코박터 세균의 분포로 인해 조직

샘플에 세균이 들어있지 않습니다• 장화생 샘플 – (헬리코박터 세균은 장 점막에 이식하지

않음)• 세균을 억제할 수 있는 항생제, 창연, 프로톤 펌프

억제제 또는 수크랄페이트를 최근에 섭취하였습니다• 샘플이 포르말린에 오염되었습니다

가짜 양성 반응의 가능한 원인• 검사를 정확히 실행하면 가짜 양성 반응은 아주

드뭅니다. 늦은 가짜 양성 반응(12시간 이상)은 생체검사물을 겔에 완전히 삽입하지 않아서 오염된 세균이 조직내에서 성장하기 때문에 발생할 수 있습니다.

• 이론상으로, 가짜 양성 반응은 세균이 과다하게 성장함으로 인해 무산성증이 있는 환자에게서 일어날 수 있습니다. 이는 다음 상황으로 인한 결과일 수 있습니다. 악성 빈혈, 위장 수술, 최근에 프로톤 펌프 억제제 약물 사용. 하지만 다른 세균은 헬리코박터 세균보다 훨씬 적은 양의 요소 분해 효소를 생성하므로 신속한 색깔 변화를 야기하지 않습니다.

만약 CLOtest* 신속한 분해 효소 검사에 불리한 영향을 줄 수 있는 요인이 있는 경우, 요소 호기 검사 및 혈청 테스트와 같은 다른 진단 방법을 사용하여 헬리코박터 세균 진단을 제외하도록 합니다.

103


참고 서적 목록1. Marshall BJ, Warren JR, Francis GJ, Langton SR, Goodwin CS, Blincow E. Rapid urease test in











104

Distributed in the USA by Halyard Sales, LLC, Alpharetta, GA 30004 In USA, please call 1-844-425-9273 • halyardhealth.com Halyard Health, Inc., 5405 Windward Parkway, Alpharetta, GA 30004 USA Halyard Belgium BVBA, Leonardo Da Vincilaan 1, 1930 Zaventem, BelgiumSponsored in Australia by Halyard Australia Pty Limited; 52 Alfred Street, Milsons Point, NSW 2061

*Registered Trademark or Trademark of Halyard Health, Inc., or its affiliates. © 2015 HYH. All rights reserved. 2016-06-2915-H1-285-0-01 / 70204363

www.halyardhealth.com

clotest rapid urease test - halyard1. after removing the clotest* rapid urease test slide from...

Documents