分子生物学的解析細胞培養細胞分離サンプル調製 フローサイトメトリー

試験研究用

幹細胞研究のための製品群Stem Cell Solutions by Miltenyi Biotec

www. miltenyibiotec.co.jp

ver.1.3

2

Sample Preparation for Stem Cells標準化されたサンプル調製

実験結果はサンプルの質に大きく依存します。 ミルテニーバイオテク社では、機械的な分散と酵素処理に基づく最適化されたプロトコルを組み合わせることにより、 優れた生存率を有し高度に標準化された単細胞懸濁液を調製できる革新的な装置および試薬をご提供しています。

gentleMACS™ Dissociator シリーズは、組織分散における新しいソリューションを提供します。

組織分散キットエピトープの抗原性を保持したまま、高い生存率を有する

単細胞懸濁液を調製できます。

gentleMACS™ Tubes

アプリケーション例

gentleMACSTM Octo Dissociatorの性能はそのままに、さらに新機能搭載！

gentleMACSTM Dissociator

gentleMACSTM Octo Dissociator

●自動組織分散で時間の節約

組織からviability の高い単細胞懸濁液を自動調製

RNA 抽出のための組織・細胞の自動ホモジナイズ

●様々な組織に対応したプログラムとプロトコル

●キャップを閉じて操作でき、実験者の安全に高い配慮

●無菌操作が可能

●オリジナルプログラムの作成が可能（Octoシリーズのみ）

gentleMACSTM Octo Dissociator with Heaters ●本体上でサンプルを37℃に加熱し、酵素反応が可能

●組織分散キット*と、専用プログラムを組み合わせれば組織分散と酵素反応の完全自動化が可能

●エピトープの抗原性を保持できる酵素の組合わせを慎重に選択

●評価済みのプロトコルで、確実に生存率の高い単細胞懸濁液を調製

● gentleMACS Dissociatorと組み合わせて、高度に標準化

●効率的な組織の分散あるいは破砕が可能

●サンプル間のクロスコンタミネーションを防ぐディスポーザブルチューブ

●感染性サンプルの安全な取扱いが可能

１ 組織の保存手術などで採取した組織の保存（Option）

２ サンプルのセット組織と酵素液を専用

チューブに入れて本体に

セット

３ プログラムのランこの間に他の作業を行うことができます

Tissue Storage Solution

（#130-100-008） 酵素溶液

＊一部対応していないキットもあります

組織細切 30min

組織細切 36sec 組織細切 37sec

酵素反応 37˚C 1hr

酵素反応 37˚C 30min

酵素反応 37˚C 30min

酵素反応 37˚C 30min

酵素反応 37˚C 30min

組織細切 36sec 組織細切 37sec

酵素反応 37˚C 1hr

ピペッティング 10min ピペッティング 10min

全工程約3時間

全工程完全自動約1時間！

ヒーター搭載装置

マニュアル（例）gentleMACS Octo Dissociator

with Heaters

gentleMACS Dissociator gentleMACS Octo Dissociator

デモ受付中

◆ Whole Skin Dissociation Kit, human

ヒト皮膚組織サンプルから表皮と真皮を分けることなく、優しく効率的に単細胞懸濁液を調製することが可能です。

ヒト皮膚バイオプシー検体からの線維芽細胞の分離やフローサイトメトリー解析等に適しています。

線維芽細胞の調製 線維芽細胞の濃縮 iPS細胞の作成 フェノタイピング 目的細胞への分化誘導 目的細胞の濃縮

分子生物学実験用 M Tubes 単細胞懸濁液調製用 C Tubes

C TubesM Tubes

■ gentleMACS Dissociator

■Whole Skin Dissociation Kit

■MACS Separator

■ Anti-fibroblast MicroBeads

■ StemMACS mRNA

Reprogramming Kit

■ StemMACS iPS-Brew XF

■ StemMACS Thiazovivin

■MACSQuant Analyzer

■ Nanog, Oct3/4,

Tra-1-60 抗体■ Live Cell Stain 抗体

■ gentleMACS Dissociator

■ Embryoid Dissociation Kit

■MACS サイトカイン &

グロースファクター■ StemMACS 合成mRNA

■MACS Separator

■各種マイクロビース

3

幹細胞研究に求められる高品質の細胞分離MACS Technologyが25年間、選ばれ続ける理由

autoMACS® Pro Separator

● MACS Technologyに基づいた細胞に優しい分離

●最大6サンプルまでの自動連続分離

● 1秒間に1,000万個におよぶ細胞処理

●再現性の高い安定した結果

● クリーンベンチ内にも設置可能なコンパクト設計

MultiMACS™ Cell24 Separator Plus

●最大24サンプルまで並行で分離可能

● SCA (Single Column Adapter)により、

LS、LD、Whole Bloodカラムに対応

マニュアル細胞分離装置 ●シンプルで簡単な実験系のセットアップ

●どんな研究室にも設置可能

●研究者自身のスケジュールで実験計画

●便利な用手法のためのスターティングキット

MACS® マイクロビーズによる細胞分離MACS Technology：カラムを使用するベネフィット

■ 磁場を増強⇒磁気標識が弱くても分離が可能

MACS Technologyでは、カラムを利用して磁場を～ 1万倍まで増強

することにより、細胞への磁気標識を弱くできます。

◆ 磁気ビーズ標識後も、フリーの抗原エピトープが残る＊

＊一部例外もございます。データシートをご確認ください。 ◆ 極小（粒径平均 50 nm) の磁気ビーズで分離が可能

細胞への磁気標識の影響を最小限に抑えます。

■ カラムの流速を変えて、分離の最適化が可能

■ スケールアップが容易

同じテクノロジーで、同等の分離結果。 細胞が1万倍に増えたとしても、分離時間は大きく変わりません。　

MACS Technology：フローソーティングの前処理にも最適分離時間の短縮は、実験を楽にするだけでなく、細胞のviabilityも高めます。

MACS Technology：無毒で生物分解可能な極小磁気ビーズと

細胞に優しいカラムの組合せ

MACSマイクロビーズの特長(A) MACSマイクロビーズでポジティブセレクションした細胞の走査型電子顕微鏡写真。極小サイズのため、結合している磁気ビーズを視認することができない。(B) 同様の細胞の透過型電子顕微鏡写真。細胞膜上にウイルス並みの大きさのビーズを確認できる。(C) カラムマトリックスのスフェア間のスペース(a)は、最も狭い部位でもほとんどの細胞サイズ(b)の数倍広い。

MACS Technology：シンプルなプロトコル

MACS Technology：用手法でも、自動装置でも

用手法

自動磁気細胞分離装置

autoMACSプログラムを選択することにより、流速が変化します

流 速 ： 速い ＞＞＞＞＞＞＞＞＞ 遅い

Deplete ＞ Deplete_S ＞ Deplete_05 ＞ Deplete_025

MS Column

LS Column LD Column

総細胞数

~105 cells の小容量から臨床応用を視野に入れることが可能な109 個オーダーの大容量まで

MiniMACS Separator CliniMACS Prodigy®

＜Mi iMACS S

Flow Sortingのみ

MACSによるプレ濃縮 &Flow Sorting

例 ： 存在率～1％の希少細胞 ； Target 106

cells in 108 cells

40分Total206分

Total47分

166分フローソート染色

磁気標識&染色 40分

autoMACS Proによる分離 5分

フローソート 2分

永久磁石だけだと…大きなビーズや多量の抗体標識が必要

磁石とカラムの組み合わせなら…50 nmビーズで、最小限の磁気標識

A B C

b

a

▼

MidiMACS Separator & LSカラム

磁気標識

細胞を極小の磁気ビーズ：マイクロビーズで標識します。

磁気分離

カラムを磁石にセットして、標識済みの細胞をアプライします。フロースルーは、標識されなかった細胞の画分

（ネガティブフラクション）として回収できます。

標識細胞の溶出

カラムを磁石から取り

外します。

カラムに保持されていた標識細胞をポジティブフラクションとして回収できます。

分離した細胞は、種々の実験に！■ 細胞培養　■ 細胞移植■ 機能試験■ 核酸やタンパク質の抽出など

S N

S N

S N

S N磁場

～1万倍！

lus

4

Cell Culture & Phenotyping for Stem Cells Research細胞培養やフローサイトメトリー解析の標準化に

ミルテニーバイオテク社は基礎研究から臨床研究へのシームレスな移行を可能にする品質の高い細胞培養や

フローサイトメトリー解析に有用な製品群をご用意しております。

幹細胞研究に特化した高品質のStemMACS製品群

MACS® サイトカイン・グロースファクターMiltenyi Biotec社は、細胞培養・刺激に最適なサイトカイン・グロースファクターを製造しています。 Nature掲載論文にも使用実績があり、幹細胞研究にも幅広く利用されております。

フローサイトメトリー解析のための製品群高品質でユニークな特長を持つ抗体と高機能、 ユーザーフレンドリーなフローサイトメーターを提供しております。

StemMACS™ Xeno-Free 培地再現性の高いロバストな幹細胞増殖のためのXeno Freeかつ

血清フリーの培地

◆ StemMACS™ iPS-Brew XF　◆ StemMACS™ HSC Expansion Media XF

◆ StemMACS™ MSC Expansion Media Kit XF

※GMPグレードの培地もご用意しています。

StemMACS™ Xeno-Free 凍結保存用培地

◆ StemMACS™ Cryo-Brew

StemMACS 合成mRNA

ゲノムインテグレーションフリーで突然変異のリスクがない臨床応用を

見据えた技術

◆ StemMACS™ mRNA Reprogramming Kit

◆ StemMACS™ 合成 mRNA

StemMACS™ 低分子化合物主要なエピジェネティック修飾、細胞内シグナル伝達に作用する

高品質の阻害物質

Premium grade

フローサイトメトリー解析ソフトウェア

Research grade

活性保証付きの高品質サイトカイン

非常に厳しい条件の品質試験を行っている、Research gradeより高い活性と低エンドトキシンを特徴としたグレードです。製品ロットごとの明確な生物活性を記した品質証明書のご提供が可能です。

科学者が科学者のために作ったフローサイトメトリー解析ソフトウェア。通常の解析はもちろん、バッチ処理も簡単にできます！

スクリーニングをより簡単＆スピーディーに！MACS Marker Screen

フローサイトメーターで371種類のヒト細胞表面マーカーを網羅的に測定できます。そのデータをFlowlogicで処理することで、簡単に可視化して、ハイスピードな比較解析が可能です。

豊富な製品数と優れたコストパフォーマンス

厳しい品質試験を合格した、細胞培養用の標準的な品質のグレードです。

Research gradeの製品はフィルター滅菌されており、含有エンドトキシン濃度は

0.1 ng/μg(1 EU/μg)以下、また平均95%以上の純度を有しています。

＊MACSQuant X には濃縮ユニットは搭載されていません。

操作が簡単な、3レーザー搭載のハイスペックフローサイトメーター。より簡単にハイクオリティーな細胞解析が可能。

● 8色解析可能

●濃縮カラムを用いた高感度希少細胞解析＊

●自動染色・測定が可能

● Volumetric 法による細胞数の測定

●自動キャリブレーションとコンペンセーション

MACSQuant® Analyzer

●厳密な生物活性検定 *1：WHOの指定する標準物質(NIBSC) と直接比較し、適切な生物検定を実施

●動物成分由来Carrier不使用 *1：キャリアフリーあるいは植物由来成分をStabilizerとして採用

●活性保証書の発行（premium gradeのみ）：ロット毎に発行するCoAに凍結乾燥/再構成後の検定結果を記載*1: 一部製品を除きます。

MACSQuant X Coming soon

384well plateの高速処理に対応

MACSQuant 10 Analyzer （上）MACSQuant VYB Analyzer （下）

platelogic™

▲

5

Purification of ES/iPS Cells Prior to DifferentiationES/iPS 細胞の濃縮に

ES/iPS 細胞研究において、リプログラミング、自己複製・分化を制御する分子機構を解明するために、均一な細胞集団を用いることが求められます。ミルテニーバイオテク社では、マイルドで信頼性の高いES/iPS 細胞の分離を可能にする試薬キットを多数ご用意しています。

マウスES細胞からニューロン前駆細胞への分化誘導後に、Anti-SSEA-1 MicroBeads により残存する多能性幹細胞を除去した結果、多能性幹細胞の残存率を0.1%以下にまで抑えられることが示された。

Oct4 / DAPI

CD

15

-PE

FSC

7% <0.1%

100 μm

分離前 除去後

▶

マウス多能性幹細胞の除去

ヒトiPS細胞とマウスフィーダー細胞との共培養系から、Anti-TRA-1-60 MicroBead KitによりヒトiPS細胞を濃縮することで、MEFを除去した。濃縮後のヒトiPS細胞はDorsomorphin

を含む誘導培地で5日間培養することで、神経系細胞へ誘導できることが示された。

TR

A-1

-60

Feeder+: 10% Feeder+: <1%

分離前 濃縮後 培養5日目

Anti-Feeder Pax6 / DAPI

▶ ▶

ヒト iPS細胞の濃縮に続く神経前駆細胞への分化誘導

ヒトiPS細胞とマウスH-2Kk+フィーダー細胞の共培養系からFeeder Removal MicroBeads

によりフィーダー細胞を除去した。フィーダー細胞を除去したヒトiPS細胞分画は、2μM

thiazovivinを含むES細胞用の培地で6日間培養することで、正常に胚様体を形成することが示された。

An

ti-H

-2K

k-A

PC H2Kk+: 15%H-2Kk+: 15% H-2Kk+: 0.2%

分離前 除去後 培養6日目

CD326-FITC

▶ ▶

マウスフィーダー細胞の除去

マウスES細胞をLIF存在下で維持培養後、LIF除去による分化誘導3日目にPluripotent Stem

Cell Isolation Kit を用いて分化細胞の除去を行った。分化細胞を除去したES細胞を胚盤胞に移植することで、キメラマウスを得ることができた。

An

ti-E

-Ca

dh

eri

n-A

PC

31% 1%

分離前 除去後 キメラマウス

Anti-Diff-PE

▶ ▶

マウスES細胞集団から初期分化細胞の除去

ES/iPS 細胞の濃縮・除去に◆ Anti-SSEA-1(CD15) MicroBeads, human, mouse

ポジティブセレクションにより、99%以上の純度でマウスES/iPS 細胞を濃縮できます。また、目的細胞へ分化誘導後、マウス多能性幹細胞を除去する際にも有用です。

◆ Pluripotent Stem Cell MicroBeads, human

CD326 (EpCAM)の発現に基づいたヒトES/iPS 細胞のポジティブセレクションにより、99%以上の純度でES/iPS細胞を濃縮できます。

Oct4やNanogとの相関性もあり、信頼性の高いマーカーです。

◆ Anti-TRA-1-60 MicroBeads, human

多能性幹細胞のマーカーとして使用実績の多いTRA-1-60 の発現に基づき

99%以上の純度でヒトES/iPS 細胞の濃縮が可能です。

◆ Anti-SSEA-4 MicroBeads, human

SSEA-4+多能性幹細胞もしくは組織幹細胞の濃縮および除去に使用できます。

◆ UEA-1 MicroBeads

Ulex europaeus agglutinin 1 に基づき、迅速かつ効果的に多能性幹細胞の

除去が可能です。種特異的な発現パターンを示すその他の多能性幹細胞の

マーカーとは異なり、レクチンUEA-1 は種を問わず多くの生物種の細胞

分離に使用できます。

その他、Tra-1-81やSSEA-3 等の多能性マーカーの発現に基づくポジティブ

セレクションにより、多能性幹細胞の濃縮が可能です。

目的細胞に合った直接標識用マイクロビーズがない場合も、豊富な種類の

間接標識用マイクロビーズをご利用いただけます。

フィーダー細胞の除去に◆ Feeder Removal MicroBeads, mouse

ヒトもしくはマウスES/iPS 細胞とマウスフィーダー細胞との共培養液中から

マウスフィーダー細胞を効果的に除去するために特別に開発されました。

除去後のES/iPS細胞分画において、フィーダー細胞の混入率は1%以下に

抑えられます。

◆ Anti-Fibroblast MicroBeads, human

ヒトフィーダー細胞のディプリーションにより、99%以上の純度でES/iPS細胞を濃縮できます。

初期分化細胞の除去に◆ Pluripotent Stem Cell Isolation Kit, mouse

培養中のマウスES/iPS細胞の初期分化段階で、著しく発現が高まる細胞表面

マーカーを同定しました。

この細胞表面マーカーに基づき簡単に初期分化細胞を除くことができ、

均一な多能性幹細胞集団を得ることが可能です。

6

Maintenance and Reprogramming for ES/iPS CellsiPS 細胞の作成からES/iPS 細胞の維持培養に

幹細胞研究に特化した品質の高い低分子化合物および合成mRNA、培地の自社開発ブランド“StemMACS™” で、 臨床応用を見据えた研究をサポートします。

ES/iPS 細胞の維持培養・増殖に◆ StemMACS iPS-Brew XF

フィーダーフリーでヒト多能性幹細胞の維持・増殖を可能にする

Xeno-Free；異種由来成分不含の培地です。

● On-Feeder からFeeder-Free 培養条件への移行も容易

● 凍結保存された多能性幹細胞の解凍後の迅速な培養再開が可能

● 臨床応用を見据えた組成

◆ StemMACS Passaging Solution XF

ヒト多能性幹細胞の継代培養のためのXeno-Free 溶液です。

高いviability を維持したまま細胞クラスターを効果的に分散できます。

◆ Human Fibronectin (Fragment), premium grade

多能性幹細胞、間葉系幹細胞、分離後の心筋細胞の培養において、

接着基質として最適化された組換えタンパク質です。

◆ Anti-TRA-1-60-Vio488 Live Cell Stain 抗体, ヒト◆ Anti-TRA-1-81-Vio488 Live Cell Stain 抗体, ヒト

細胞を固定せずに生きたまま蛍光染色できるため、染色後も培養を続けることが出来ます。iPS細胞コロニーの状態を確認する際にも有用です。

ES/iPS 細胞の未分化維持、リプログラミング効率の向上、 分化誘導に有用な低分子化合物をご用意しています。

Thiazovivin：Rho-associated Kinase (ROCK) の選択的な低分子阻害物質

CHIR99021：Wnt シグナル伝達を活性化する最も選択的なGSK3βの阻害物質

PD0325901：MEK の選択的な低分子阻害物質

A83-01：Ⅰ型TGF-β, Activin およびNodalシグナル伝達経路の選択的阻害物質

SB431542：TGF-β, Activin およびNodal シグナル伝達経路の強力な阻害物質

Dorsomorphin：BMPシグナリングおよびAMP活性化プロテインキナーゼの阻害物質

Purmorphamine：ヘッジホッグシグナル伝達経路を活性化する低分子化合物

IWP-2：βカテニンの核局在を阻害するWnt シグナリングの阻害物質

LDN-193189：BMP type I 受容体ALK2 および ALK3 の強力かつ選択的な阻害物質

LY411575：Notchシグナリングの重要因子であるγセクレターゼの選択的な阻害物質

RG108：DNA methyltransferase (DNMT)の細胞膜透過性の選択的な阻害物質

DAPT：Notchシグナル経路を阻害するγセクレターゼの阻害物質

IWP-4： Wntシグナル経路を選択的に阻害する低分子化合物

IWR-1-endo：Wntシグナル伝達経路の阻害物質

合成mRNAによるiPS 細胞の作成に◆ StemMACS mRNA Reprogramming Kit

mRNA 技術はゲノムインテグレーションのリスクを完全に除外することが

できる、臨床研究を見据えた技術です。

●フィーダーフリー培養条件下でのリプログラミングが可能

● Conditioned medium は不要

●わずか14日間でiPS 細胞コロニーをピックアップ

◆ StemMACS Repro-Brew XF, human

mRNA リプログラミングをサポートするXeno-Free リプログラミング培地です。

mRNA Reprogramming Kit を用いて、ヒト新生児線維芽細胞をリプログラミング(12日間トランスフェクション)した。A. 6ウェルプレートに7,000個、4,000個、2,000個の細胞を播種しリプログラミング14日目に固定しAnti-Oct-4 抗体による染色を行った。　B. 24ウェルプレート上でリプログラミング14日目にアルカリフォスファターゼ活性を検出した。　C. iPS細胞のコロニー像

StemMACS iPS-Brew XF によるヒト iPS細胞の維持培養

マトリゲル上でStemMACS iPS-Brew XFを用いてヒトiPS細胞を維持培養し(A)、多能性幹細胞マーカーの発現の維持(C)、20継代後も正常なカリオタイプを維持していることが示されている(B)。さらに、NOD-Scid マウスに移植8 週間後に形成されたテラトーマを採取し、3胚葉への分化能を確認している(D)。

2000 Cells

4000 Cells7000 Cells

AB

C

培養中のヒトiPS細胞を未固定のまま、Anti-TRA-1-60-Vio488 Live Cell Stain antibody

およびAnti-TRA-1-81-Vio488 Live Cell Stain antibodyで染色し蛍光染色した。

ヒト iPS細胞の生細胞染色

明視野 Tra-1-60 明視野 Tra-1-81

ヒト線維芽細胞から iPS細胞への効率の高いリプログラミング

A

91.66%

Anti-TRA-1-60-Dylight 488

An

ti-S

SE

A-3

-Bio

tin

/A

nti

-Bio

tin

-Vio

Blu

e

3.38%

Anti-TRA-1-60-PE

An

ti-S

SE

A-1

-Dy

lig

ht

48

8C

内胚葉 外胚葉 中胚葉D

B

7

Differentiation for ES/iPS CellsES/iPS細胞から目的前駆・幹細胞への誘導および濃縮に

近年、サイトカイン・グロースファクター、低分子化合物等を組合せることで、ES/iPS 細胞より特定の細胞系譜へ分化した

様々な幹・前駆細胞を効率よく誘導できるようになりました。ミルテニーバイオテク社では、分化誘導された細胞集団からの分離に最適化した製品を多数ご用意しており、目的幹・前駆細胞の迅速な濃縮を可能にします。

ES/iPS細胞より誘導した細胞の分離に◆ Anti-A2B5 MicroBead Kit, human, mouse

ES/iPS 細胞から誘導したグリア前駆細胞を高純度で濃縮するために最適化

されています。脳・神経組織よりグリア前駆細胞を分離する場合は、

Anti-A2B5 MicroBeads (#130-093-388) をご利用ください。

◆ Anti-PSA-NCAM MicroBead Kit, human, mouse

ES/iPS 細胞より誘導したPSA-NCAM+ 神経前駆細胞を磁気濃縮することで、

特定のサブタイプの神経細胞への分化誘導効率の向上が期待できます。

脳・神経組織よりニューロン前駆細胞を分離する場合は、Anti-PSA-NCAM

MicroBeads (#130-092-966) をご利用ください。

◆ Neural Crest Stem Cell MicroBeads , human

CD271(LNGFR, p75NTR) の発現に基づいて、ヒトES/iPS細胞より分化誘導したneural crest stem cells を分離するために最適化されています。

◆ CD144 (VE-Cadherin) MicroBeads, human

ヒトES/iPS細胞より分化誘導されたCD144+ 内皮細胞を濃縮あるいは除去

するために使用できます。

◆ CD309 (Flk-1) MicroBead Kit, mouse

CD309 は内皮細胞および造血系細胞の最も初期の分化マーカーの一つで、

マウスES/iPS 細胞から誘導されたCD309+ 前駆細胞の分離に最適です。

◆ CD184 (CXCR4) MicroBead Kit, human

CXCR4は、胚体内胚葉の特異的なマーカーであるFoxA1およびSox17とほぼ

共発現しています。ヒトES/iPS 細胞より分化誘導した胚体内胚葉細胞を

CXCR4の発現に基づき高純度で濃縮できます。

◆ PSC-Derived Cardiomyocyte Isolation Kit, human

ヒトES/iPS 細胞より誘導した心筋細胞を1時間以内に濃縮できます。

合成mRNAによるダイレクト分化誘導

脂肪細胞の分化：PPAR-gamma, C/EBP-beta

神経系細胞の分化：Brn2, Lmx1a, Mash1, NeuroD1, NeuroG2 , Nurr1, Myt1l

加齢の誘導：Progerin-eGFP

ポジティブコントロール：Nuclear eGFP, eGFP

リコンビナーゼ：Flp Recombinase, Cre Recombinase

ゲノム編集用：Cas9 Nickase, Cas9 Nuclease

◆ StemMACS mRNA Transfection Kit

様々な細胞への効率的なmRNA導入が可能なトランスフェクションシステムです。細胞毒性を最小限に抑えながら高いトランスフェクション効率が得られます。

胚様体の分散に◆ Embryoid Body Dissociation Kit, human, mouse

gentleMACS と組み合わせて、in vitroで形成させた胚様体もしくは多能性

幹細胞由来のneurosphere の分散を標準化するために開発されました。

１週間以上の培養により分化の進んだ胚様体もviability よく高い回収率で

分散できます。

注) gentleMACS OctoおよびgentleMACS Octo with Heatersは対応しておりません。

ヒトiPS 細胞を神経前駆細胞へ誘導後、Neural Crest Stem Cell MicroBeadsを用いて、Neural Crest Stem Cellを濃縮した。その後、適切な分化培地を用いて21日間培養することで末梢神経細胞へ誘導できることが示された。

Peripherin / DAPI

CD271+ : 17% CD271+ : 95%

CD

27

1 (

p7

5)-

PE

FSC

培養21日目分離前 濃縮後

▶ ▶

ヒト iPS細胞より誘導されたneural crest stem cellsの濃縮

ヒトiPS 細胞をフィーダー細胞との共培養後、フィーダー細胞を除去し胚体内胚葉への分化誘導を行った。その後、CD184 (CXCR4) MicroBead Kitで濃縮したCXCR4+胚体内胚葉をマトリゲル上で適切な分化培地を用いて14日間培養することで、肝細胞様細胞に分化誘導できることが示された。

TTR / Albumin / DAPI

CD

18

4 (

CX

CR

4)

FSC

培養14日目分離前 濃縮後

▶ ▶

CXCR4+: 25% CXCR4+: 98%

ヒト iPS細胞より誘導された胚体内胚葉細胞の濃縮

マウスES 細胞とフィーダー細胞との共培養後、Feeder Removal MicroBeadsを用いてフィーダー細胞を除去し胚葉体の形成を行った。続いて、神経系への分化誘導後Anti-PSA-NCAM MicroBeads によるニューロン前駆細胞の分離を行った結果、92%の純度で濃縮できることが示された。PSA-NCAM+ニューロン前駆細胞を増殖培養し、ニューロンへの分化誘導を7日間行った。

PS

A-N

CA

M-A

PC

FSC

分離前 分離後

41% 92%

▶

PSA-NCAM / DAPI

マウスES細胞より誘導されたニューロン前駆細胞の濃縮

B

培養14日目の胚様体(A) を用いて、マニュアルでの分散とgentleMACSとEB Dissociation Kit

を用いた分散法を比較した。用手法で分散した結果、完全に分散できず細胞塊が残存しており死細胞も多かったが(B)、gentleMACSとEB Dissociation Kitを用いて分散することで、完全に分散することができ、Viabilty、回収率ともに優れていることが示された（C）。

効率の良い胚葉体の分散

A C

8

Stem Cell Differentiation PathwaysPSCsから各胚葉への分化 / 造血幹細胞からの分化誘導因子

IL-3

IL-4

SCF

TGF-β1

IL-3

IL-4

GM-CSF

G-CSF

IL-3

IL-4

GM-CSF

IL-5

IL-3

IL-4

M-CSF

GM-CSF

IL-3

IL-4

IL-10

TSLP

Lymphoid

progenitor

Megakaryocyte

erythrocyte progenitor

Common myeloid progenitor

Hematopoietic stem cell

SCF

IL-3

TPO

SCF

IL-7

Megakaryocyte

lineage

Erythroid lineage

IL-3

GM-CSF

EPO

IL-3

GM-CSF

TPO

Neutrophilic

lineage

Eosinophilic

lineage

Basophilic

lineage

B cell lineage NK cell lineage T cell lineage

Mast cell

lineage

Monocytic

lineage

MacrophageOsteoclast Dendritic cell

IFN-γ

IL-4

GM-CSF

Flt3L

IL-34

M-CSF

RANK-L

Flt3L

M-CSF

GM-CSF

IL-34

SCF , TPO, Flt3L

SCF , IL-1β

IL-6 , IL-7

IL-11 , IL-12

SCF , IL-1β

IL-2 , IL-6

IL-7

SCF

IL-2

IL-12

IL-3 , IL-6 ,

G-CSF , GM-CSF ,

EPO

Definitive endoderm

Anterior

endoderm

Hepatic

progenitor

Pancreatic

progenitor

Multipotent

endodermal

progenitor cell

Hindgut

endoderm

BMP-4

FGF-2

EGF

VEGF

BMP-4

Ascorbic acid

A83-01

Dorsomorphin

Noggin

FGF-2

NGF

BDNF

SHH

Retinoid acid

Noggin

FGF-7

FGF-2

SHH

PDGF

FGF-10

Retinoid acid

SB431542CNTF

Retinoid acid

HGF

FGF-4

EGF

Wnt3a

FGF-4

R-Spondins

EGF

Noggin

BMP-4

FGF-2

WNTs

Multipotent

lung

progenitor

Intestinal tissue Hepatocyte β-Islet cell

Neural stem cell

KeratinocyteRetinal pigment

epithelium (RPE)

Neural Crest GABA

neuron

Dopaminergic

neuron

Astrocyte Cortical

neuron

Oligodendrocyte

Primitive streak

mesoderm

Adipocyte

Peripheral neurons

Osteogenic cell Chondrocyte

Mesenchymal stem cell SCF , TPO

Flt3-L IL-3

IL-6 , G-CSF

BMP-4, VEGF

Cardiomyocyte Endothelial cell

Dexa-

methasone

VEGF

FGF-2

SB431542

TGF-β1

TGF-β3

Ascorbic acid

Insulin

IBMX

Dexamethasone

Activin A

CHIR99021

EGF

FGF-2 , TGF-β1, Thiazovivin, Y27632

Dorso-

morphin

Insulin , Transferrin ,

Selenium , SerumBMP-4 , Activin-A ,

FGF-2 , CHIR99021

FGFs , Noggin ,

SB431542 , Dorsomorphin ,

LDN-193189 , DAPT

■：培地■：分離マーカー■：StemMACS 低分子化合物■：MACS サイトカイン

p75 (CD271)

p75 (CD271) ACSA-1 (GLAST) AN2, O4, CD140a

Prominin-1 (CD133)

Pluripotent stem cells (ESC/iPSC)

Tra-1-60, Tra-1-81, SSEA-4, UEA-1

CD271, MSCA-1

CD34, CD133

CD184 (CXCR4)

SIRPα CD31, CD144

StemMACS MSCExpansionMedia Kit XF

NeuroBrew-21MACS Neuro Medium

StemMACS iPS-Brew XF

StemMACS HSCExpansion Media XF

Activin-ADKK-1FGFsSHHDAPT

FGF-2FGF-8bSHHCHIR99021

FGF-2FGF-7BMP-4

DAPT

LDN-193189

DKK-1

IWP-2

IWP-4

IWR-1-endo

StemMACSAdipoDiffMedia

StemMACSOsteoDiffMedia

StemMACSChondroDiffMedia

内胚葉系

外胚葉系

iPS/ES

細胞

中胚葉系

9

HSCs Isolation and Analysis and Culture造血幹細胞・前駆細胞研究の進展に

ヒトPBMCよりCD34 MicroBead Kit UltraPure を用いてCD34+細胞を分離した結果、純度よく濃縮できていることが示された。

CD34

◆ CD34 MicroBead Kit UltraPure

CD34+造血幹細胞および前駆細胞のポジティブセレクション用に新たに

開発されました。

● 簡単な1ステップ分離

● 存在率の低いサンプルに理想的

● 死細胞やデブリのキャリーオーバーを最小限に抑えます

◆ CD34 MicroBead Kit, human

2,000以上もの文献で引用されている最も実績のあるHSCs の分離用試薬です。

◆ Diamond CD34 Isolation Kit, human

末梢血、骨髄、臍帯血からLin– CD34+細胞を高純度に濃縮できます。

◆ CD34 MultiSort Kit, human

連続分離により分離後のCD34+サブポピュレーションを他のマーカーで

ポジティブセレクションできます。

CD133

◆ CD133 MicroBead Kit- Hematopoietic Tissue, human

1ステップで簡単にPBMCs、骨髄、臍帯血等の造血組織からCD133+ 造血幹・前駆細胞もしくは内皮幹・前駆細胞を分離できます。腫瘍組織由来のCD133+癌幹細胞を分離する場合は、CD133 MicroBead Kit - Tumor Tissue

(#130-100-857)をご利用ください。

◆ Diamond CD133 Isolation Kit, human

末梢血、臍帯血、骨髄、 leukapheresis product からのLin–CD133+ 細胞

を高純度に濃縮できます。

その他◆ CD117 MicroBead Kit, human ◆ Lineage Cell Depletion Kit, human

◆ CD117 MicroBeads, mouse ◆ CD105 MultiSort Kit (PE), mouse

◆ Lineage Cell Depletion Kit, mouse ◆ Anti-Sca-1 MicroBead Kit (FITC), mouse

◆ Direct Lineage Cell Depletion Kit, mouse

ヒトのHSC/HPCsの培養増殖に◆ StemMACS HSC Expansion Media XF, human

分離精製したCD34+造血幹・前駆細胞に最適化された血清

フリーかつXeno-Freeの培地です。 ●ロット間差がなく一定した高い増殖率

●厳格な基準の元で製造された高い品質の培地

● StemMACS HSC Expansion Cocktailを加えて増殖を誘導

◆ StemMACS HSC Expansion Cocktail, human

HSCの増殖に最適な濃度に調整済みの SCF、Flt3-ligand およびTPOのカクテルです。

StemMACS HSC Expansion Media XF に添加してご使用ください。

◆ Vectofusin-1

シンプルなプロトコルで、ウイルスベクターを用いたCD34+細胞等の浮遊細胞への

遺伝子導入効率を促進します。

造血系幹細胞および前駆細胞 (HSCs/HPCs) 研究は骨髄移植や免疫学分野において、治療を見据えた臨床研究に必要となる

造血系の理解とその利用に多大な貢献をしてきました。 ミルテニーバイオテク社は最先端のヒトHSCs/HPCs 研究のための、一連のソリューションを提供します。

ヒト臍帯血から分離したCD34+細胞を、StemMACS HSC Expansion Media XF(赤)あるいは他社同等製品(青) に、StemMACS HSC Expansion Cocktailを加えて7日間培養増殖させた。増殖後のCD34+細胞をフローサイトメーターにより解析した結果、初期造血前駆細胞の表現型を維持していることが示された。

CD34 MicroBead Kit UltraPure による分離

分離後のCD34+細胞における散乱光での比較解析

CD34-PE

CD

45

-FIT

C

▶

分離前 分離後

CD34 MicroBead Kit (#130-046-702) もしくは CD34 MicroBead Kit UltraPure

(#130-100-453) を用いてデブリリッチなサンプルから分離を行い、散乱光（FSC/SSC）で解析した結果、CD34 MicroBead Kit UltraPureで分離した方がデブリのキャリーオーバーが最小限に抑えられていることが示された。

FSC

SS

C ▶

CD34 MicroBead KitCD34 MicroBead Kit

UltraPure

ヒト造血幹細胞の培養増殖

StemMACS™ HSCExpansion Media XF

% o

f ce

lls

CD

34

CD45

72% 38% 28%

CD133 CD45RA

Competitor A

CD34+

CD45+

80

70

60

50

40

30

20

10

0CD34+

CD133+CD34+

CD45RA-

10

MSCs Isolation and Analysis and Culture間葉系幹細胞研究の進展に

22%2%

1%<1%

85%61%61%

CD

45

-FIT

C

CD271(LNGFR)-PE

ポジティブフラクション分離前 ネガティブフラクション

▶

ヒトMSCs の濃縮に◆ CD271 MicroBead Kit, human

CD271は、骨髄もしくは吸引脂肪由来のMSCsを濃縮できるマーカーとしてよく知られています。CFU-F 活性は、分離後のCD271+ 細胞集団にのみに見られ、CD271– 細胞集団には認められません。分離後の CD271+ 細胞は、プラスチック接着法で分離したMSCs と比較して50% 高い増殖能が示されており、また200倍多いCFU-F数が得られることが示されています。

◆ Anti-MSCA-1 (W8B2) MicroBeads, human

組織非特異的アルカリホスファターゼと同一のmesenchymal stromal cell

antigen-1 (MSCA-1) の発現に基づき、CD271bright CD45dim MSCs を分離できます。骨髄中のCD271+ CD45+ 分画と比べ、より高いクローン形成能を持つため、骨髄中の高い増殖能を持つMSCs を濃縮できます。

ヒトMSCs の解析に◆ MSC Phenotyping Kit , human

ISCTの定義に基づいた、フローサイトメトリーによる培養ヒトMSCs の同定

および表現型解析に最適化されています。

ヒトMSCs の培養増殖～分化誘導に◆ StemMACS MSC Expansion Media Kit XF, human

ヒト骨髄サンプルもしくはその他の組織由来のMSCsの培養増殖に最適化された血清フリーかつXeno-Freeの培地です。

● CFU-Fアッセイや分化誘導に最適

●分化能を維持したままMSCs の効率的な増殖をサポート

●細胞接着のための基質は不要

◆ StemMACS AdipoDiff Medium

◆ StemMACS ChondroDiff Medium

◆ StemMACS OsteoDiff Medium

StemMACS Diff Mediaは、脂肪細胞、軟骨細胞あるいは骨芽細胞への分化誘導に最適化されています。MSCsの臨床応用の可能性を厳密に評価するために、

標準化された細胞培養条件を確立できます。

臍帯の分散に◆ Umbilical Cord Dissociation Kit, human

gentleMACSと組み合わせて、マイルドかつ回収率高く、ヒト臍帯からMSCを含む単細胞懸濁液を調製するために開発されました。4時間以内で組織の分散が可能で、培養しなくても分散直後にフローサイトメトリーでのMSC検出も可能です。

脂肪組織の分散から脂肪幹細胞の分離まで褐色および白色脂肪組織の分散から脂肪幹・前駆細胞の分離まで、1.5

時間以内に完了します。

◆ Adipose Tissue Dissociation Kit, mouse, rat

gentleMACSと組み合わせて、マイルドかつ迅速に、マウスとラットの脂肪組織から脂肪組織由来の幹細胞や前駆細胞の単細胞懸濁液を調製できます。

◆ Adipose Tissue Progenitor Isolation Kit, mouse

褐色および白色脂肪組織を分散して得られた単細胞懸濁液から、非目的細胞の除去後にマウス脂肪組織由来前駆細胞をポジティブセレクションします。

間葉系幹細胞（MSCs）は、骨や軟骨を含む非造血系細胞への高い分化能を保持しており、遺伝的疾患や変性疾患もしくは、 組織損傷などの緩和・治療といったアプリケーション等で利用されることが期待されます。 ミルテニーバイオテク社は、効果的かつ再現性の高いMSCs の分離、培養、解析のための多様な研究ツールを提供します。

ヒト骨髄単核細胞よりCD271 MicroBead Kit を用いてCD271+ 細胞を分離している。

ヒト臍帯をUmbilical Cord Dissociation KitとgentleMACS Dissociator により分散した結果、用手法よりも多くの細胞 (回収量：MSC(CD90+ CD73+) 1.2 x 105個 /g tissue、内皮細胞 (CD45- CD34+) 5 x 104個 /g tissue)を得られることが示された。

ヒト骨髄からCD271+MSCs の濃縮

0,00E+00

2,00E+04

4,00E+04

6,00E+04

8,00E+04

1,00E+05

1,20E+05

gentleMACS 用手法

gentleMACS Dissociator によるヒト臍帯の分散

■MSCs (CD90+/CD73+)　■内皮細胞 (CD45-/CD34+)

増殖培養後のMSCsにおける分化能

StemMACS MSC Expansion Meid XF で増殖培養したMSCsを各種分化誘導培地を用いて分化させた結果、骨芽細胞（A）、脂肪細胞(B)、軟骨細胞(C)への分化能を維持していることが示された。

A B C

Adipose Tissue Dissociation Kit とgentleMACS™ Dissociator によりマウス褐色脂肪組織を分散後、 Adipose Tissue Progenitor Isolation Kit を用いて褐色脂肪組織由来の前駆細胞を濃縮した。濃縮された細胞は、増殖培地で4日間の培養後、さらに脂肪分化培地で3日間分化誘導した結果、脂肪細胞へ分化できることが示された。

Nile Red / DAPI

An

ti-S

ca-1

-FIT

C

CD31/CD45/Anti-Ter-119-APC

培養4日目分離前 濃縮後

▶ ▶

11% >90%

マウス褐色脂肪組織から脂肪幹細胞の濃縮および培養

CD

90

-FIT

C

CD73-APC

11

From Tissue Dissociation to Stem Cell Isolation様々な組織から幹・前駆細胞を分離可能

心組織の分散から各種心臓細胞の分離までViabilityよく心組織を分散することで、機能的な心臓の細胞集団を純度よく分離することが出来ます。

◆ Neonatal Heart Dissociation Kit, mouse, rat

gentleMACS と組み合わせて新生仔マウスおよびラット心組織よりマイルドかつ迅速に単細胞懸濁液を調製するために開発されました。拍動心筋細胞だけでなく、心繊維芽細胞、心前駆細胞、内皮細胞を含む様々なタイプの細胞を分散できます。

◆ Cardiac Progenitor Cell Isolation Kit (Sca-1), mouse

マウス心臓組織を分散した単細胞懸濁液から簡単に成熟した心筋細胞へと分化できるSca-1+/CD31- 細胞を分離することができます。

◆ Neonatal Cardiomyocyte Isolation Kit, mouse

◆ Neonatal Cardiomyocyte Isolation Kit, rat

非標識で心筋細胞(P0-P3)を生細胞のまま分離できます。濃縮された心筋細胞は、機能を保持しており 様々なアプリケーションに使用できます。

◆ Neonatal Cardiac Endothelial Cell Isolation Kit, mouse

◆ Neonatal Cardiac Endothelial Cell Isolation Kit, rat

新生仔の心臓から2ステップでviability よく心臓内皮細胞を分離できます。

濃縮された心臓内皮細胞は機能を保持しており、種々の実験に供することが

可能です。

◆ Neonatal Cardiac Fibroblast Isolation Kit, mouse

◆ Neonatal Cardiac Fibroblast Isolation Kit, rat

新生仔の心組織を分散した後、2ステップで心線維芽細胞を濃縮できます。

回収率よく純度の高い心線維芽細胞が得られます。

骨格筋の分散から筋衛星細胞の分離まで骨格筋分散のためのワークフローおよびその後のMACS分離によりpureでviabilityの高い筋衛星細胞を2.5時間以内に回収できるようになりました。

◆ Skeletal Muscle Dissociation Kit, mouse, rat

gentleMACS と組み合わせて、マウスおよびラット骨格筋組織よりマイルド

かつ迅速に単細胞懸濁液を調製するために開発されました。

骨格筋組織より衛星細胞を含む多数の生細胞（成熟筋管細胞を除く）を回収

できるよう最適化されています。

◆ Satellite Cell Isolation Kit, mouse

マウス骨格筋からサテライト細胞（筋衛星細胞）を生きた細胞のまま分離するために開発されました。濃縮されたサテライト細胞は機能を保持しており、

筋管への分化誘導実験等の続くアプリケーションに使用できます。

◆ Anti-Integrin α-7 MicroBeads, mouse

Satellite Cell Isolation Kitで濃縮した後に、Anti-Integrin α-7 MicroBeadsによる分離を行うことで、より純度の高いサテライト細胞が得られます。

SP細胞の分離に◆ Anti-ABCG2 (CD338) MicroBeads, human

1ステップでSide Population cells (SP)と称されるABCG2+ (CD338) 細胞をポジティブセレクションするために開発されました。SP細胞は骨髄もしくは臍帯血等の様々なソースからの分離が可能です。

P0-P3の新生マウスおよびラットの心臓をgentleMACS Dissociator とNeonatal Heart

Dissociation Kit を用いて分散した結果、高い生存率で多くの細胞を回収できることが示された。

マウス、ラット心臓の分散

Ce

ll c

ou

nt/

he

art

Via

bil

ity

(%)

Cell count/heart

2.5×10⁶

2.0×10⁶

1.5×10⁶

1.0×10⁶

0.5×10⁶

0

100%

80%

60%

40%

20%

0%Viability

Rat Mouse

新生ラット心臓を分散後、Neonatal Cardiomyocyte IsolationKit を用いて心筋細胞を濃縮した結果、フローサイトメトリー解析および免疫組織化学染色により純度よく濃縮できていることが示された。

α-actinin / vimentin / DAPI

α-a

ctin

in-F

ITC

FSC

分離前 濃縮後

▶

53% 98%

新生ラット心臓から心筋細胞の分離

マウス骨格筋をSkeletal Muscle Dissociation Kit とgentleMACS Dissociator により分散した結果、回収率: 4-6 x 106 個/g tissue、生存率: >90%であることが示された。

SS

C

FSC PE 明視野

90% 92%

マウス骨格筋の分散

マウス骨格筋を分散後、 Satellite Cell Isolation Kit でサテライト細胞を濃縮した。 分離の細胞は、効率よく増殖し、筋管へ分化できることが示された。

MyoD / Actinin

Lin

*-F

ITC

integrin-alpha-7-PE

培養7日間＋分化誘導3日目分離前 濃縮後

▶ ▶9% 90%

* CD31/CD45/CD11b/Sca-1

マウス骨格筋から筋衛星細胞の分離および培養

その他、様々な組織からHSCs以外のSca-1+幹・前駆細胞を分離できるAnti-Sca-1(non-HSC) MicroBeads, mouse (#130-106-641)もご用意しています。

■ 販売元 ■ 取扱店

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Translational Research – From Bench to Bedside

再生医療の臨床研究においては、患者自身の細胞を体外に取り出し、培養等の加工をした後再び患者に戻すアプリケーションが実施されます。最終産物（細胞製品）を体内へ戻すにあたって、培養に使用するサイトカインや培地は通常の試験研究用試薬よりも厳格な品質管理基準が求められます。ミルテニーバイオテク社は基礎検討から臨床研究へスムースに移行できるよう、基礎研究からGMP/GCTPに準拠した製品までシームレスに展開し、TR（translational research）研究者・企業の皆様を応援しています。

Stem Cell engineering workflow

本カタログでは、目的細胞ごとにお勧めの製品群をご紹介しております。 以下のワークフローで、テクノロジー、目的細胞ごとに最適な製品群が掲載されているページ数をご参照ください。

各製品の詳細は、弊社ホームページをご覧ください ▼ www.miltenyibiotec.co.jp

Clin

icaal

RRees

earccc

h サンプル調製　P2 細胞分離　P3 細胞培養　P4 フローサイトメトリー　P4

gentleMACS Dissociator autoMACS® Pro Separator StemMACS 製品 フローサイトメーター

多彩な組織分散キット■皮膚 ...............................................P2■胚葉体 ...........................................P7■脂肪、臍帯 .................................P10■心臓、骨格筋 .............................P11

豊富なマイクロビーズ■ES/iPS細胞 ...............................P5～7■造血幹細胞 .....................................P9■間葉系幹細胞 .............................. P10■組織幹細胞 .................................. P11

■Xeno Free 培地 ...................P6, 9, 10

■阻害物質 ............................................P6

■合成 mRNA .......................................P7

分化誘導因子■サイトカイン&グロースファクター .....P8

■低分子化合物 ...................................P8

■MACSQuant® Analyzer 10 ..........P4

■MACSQuant® VYB ..........................P4

■MACSQuant® X ...............................P4

多彩な抗体■MACS Marker Screen ...................P4

■Live Cell Stain 抗体 ........................P6

加工

線維芽細胞目的細胞ニューロン等

皮膚採取分散

生体外 (ex vivo)での細胞調製

リプログラミング分化誘導 リプログラミング分化誘導

iPS細胞

線維芽細胞目的細胞ニューロン等

iPS細胞

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実績あるMACS®細胞分離テクノロジーを基盤として、細胞調製の自動化を実現した完全閉鎖式自動細胞調製装置：CliniMACS Prodigy® に加えて 

MACS®GMP 製品 および CryoMACS製品 など、臨床応用を目的とした様々なアプリケーションに必須となる安定した細胞調製を可能とするツールを

取り揃えています。臨床試験へ向けた製品群にご興味のある方は、MACSGMP@miltenyibiotec.jp までお問い合わせ下さい。

臨床試験のための製品群

完全閉鎖式自動細胞調製装置■CliniMACS Prodigy®

フローサイトメーター / セルソーター■MACSQuant® Tyto™

■GMP グレード蛍光抗体

GMPグレード製品■サイトカイン& グロースファクター■無血清培地■細胞培養バッグ■凍結保存用DMSO