·基础研究·

银杏叶提取物对半乳糖致痴呆大鼠海马

ＣＡ１区 Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５表达的影响邵丽 马鹏举 耿德勤 王暖 黄全胜 包静 纪爱玲

ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－６５５４．２０１１．１０．００７基金项目：江苏省高校重点实验室开放课题（ｋｊｓ０１０８４）作者单位：２２１００２徐州，徐州市第一人民医院神经内科（邵丽、王

暖）；江苏省语言与认知神经科学重点实验室，徐州师范大学语言研究

所（马鹏举）；徐州医学院附属医院神经内科（耿德勤）；江苏大学附属

徐州医院神经内科（黄全胜、包静、纪爱玲）

通信作者：邵丽，Ｅｍａｉｌ：ｓｈａｏｌｉ７９０７＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ

【摘要】 目的 观察银杏叶提取物（Ｅｘｔｒａｃｔｇｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａ，ＥＧｂ）对 Ｄ半乳糖（ＤＧａｌａｃｔｏｓｅ，ＤＧａｌ）致痴呆模型大鼠海马ＣＡ１区Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５（Ｃｙｓｔｅｉｎｙｌａｓｐａｒｔａｔｅｓｐｅｃｉｆｉｃｐｒｏｔｅａｓｅ）蛋白表达的影响，探讨ＥＧｂ改善认知能力的可能机制。方法 将４８只ＳＤ大鼠随机分为６组，腹腔注射 ＤＧａｌ建立痴呆模型，以不同剂量的ＥＧｂ进行干预。以ＴＵＮＥＬ染色观察海马ＣＡ１区神经元凋亡；以免疫组化和ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ法检测大鼠海马ＣＡ１区Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５表达。结果 半乳糖组较空白对照组海马ＣＡ１区ＴＵＮＥＬ阳性细胞［（３７．８±１．３）个，（０．８±０．２）个］及Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５［（３７．６±１．８）个，（６．２±１．３）个］表达明显增加（Ｐ＜０．０１）；ＥＧｂ中、高剂量组较半乳糖组海马ＣＡ１区 ＴＵＮＥＬ阳性细胞［（１７．６±０．９）个，（９．８±０．８）个，（３７．８±１．３）个］及Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５表达［（２８．６±１．３）个，（２５．０±１．６）个，（３７．６±１．８）个］不同程度降低（Ｐ＜０．０１）；治疗组ＴＵＮＥＬ阳性细胞及Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５蛋白表达较半乳糖组有所降低，但差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论ＥＧｂ能改善ＤＧａｌ致痴呆大鼠学习记忆能力，其作用机制可能与降低Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５活性，抑制海马ＣＡ１区神经元凋亡有关，且疗效与剂量有关。ＥＧｂ预防痴呆的效果比治疗效果更优。

【关键词】 老年性痴呆； 银杏叶提取物； Ｄ半乳糖； 大鼠； 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶

ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＥＧＢｏｎｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓＣＡ１ｒｅｇｉｏｎＣａｓｐａｓｅ９Ｐ３５ａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｄｅｍｅｎｔｉａｒａｔｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙＤｇａｌ ＳＨＡＯＬｉ，ＭＡＰｅｎｇｊｕ，ＧＥＮＧＤｅｑｉｎ，ＷＡＮＧＮｕａｎ，ＨＵＡＮＧＱＵＡＮｓｈｅｎｇ，ＢＡＯＪｉｎｇ，ＪＩＡｉｌｉｎｇ．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｕｒｏｌｏｇｙ，ＸｕｚｈｏｕＦｉｒｓｔＰｅｏｐｌｅ’ｓＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｘｕｚｈｏｕ２２１００２，Ｃｈｉｎａ

【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｅｘｔｒａｃｔｇｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａ（ＥＧｂ）ｏｎｌｅａｒｎｉｎｇｍｅｍｏｒｙａｂｉｌｉｔｙａｎｄｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓＣＡ１ｒｅｇｉｏｎＣａｓｐａｓｅ９Ｐ３５ａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｄｅｍｅｎｔｉａｒａｔｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙＤｇａｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ４８ｒａｔｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｓｉｘｇｒｏｕｐｓ．ＴｈｅｄｅｍｅｎｔｉａｍｏｄｅｌｗｅｒｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｂｙｉｎｊｅｃｔｉｎｇｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｌｙｗｉｔｈｔｈｅＤｇａｌａｎｄｅａｃｈＥＧｂｇｒｏｕｐｗａｓｉｎｊｅｃｔｅｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｏｓｅｓｏｆＥＧｂｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ．ＴＵＮＥＬｍｅｔｈｏｄｗａｓｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｃｔａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｎｅｕｒｏｎｓｉｎｔｈｅＣＡ１ｒｅｇｉｏｎ．ＩｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＣａｓｐａｓｅ９Ｐ３５ｉｎｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓＣＡ１ｒｅｇｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｎｏｒｍａｌｇｒｏｕｐ，ＴＵＮＥＬｐｏｓｉｔｉｖｅｎｅｕｒｏｎｓ（（３７．８±１．３），（０．８±０．２））ａｎｄｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＣａｓｐａｓｅ９Ｐ３５（（３７．６±１．８），（６．２±１．３））ｈａｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｉｎｃｒｅａｓｅｉｎｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌＣＡ１ｓｕｂｆｉｅｌｄｏｆＤｇａｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０１）．ＣｏｎｔｒａｓｔｔｏＤＧａｌｇｒｏｕｐ，ＴＵＮＥＬｐｏｓｉｔｉｖｅｎｅｕｒｏｎｓ（（１７．６±０．９），（９．８±０．８），（３７．８±１．３））ａｎｄｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＣａｓｐａｓｅ９Ｐ３５（（２８．６±１．３），（２５．０±１．６），（３７．６±１．８））ｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｅｃｒｅａｓｅｄｉｎＥＧｂＭａｎｄＥＧｂＨｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０１）．ＷｈｉｌｅＴＵＮＥＬｐｏｓｉｔｉｖｅｎｅｕｒｏｎｓａｎｄｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＣａｓｐａｓｅ９Ｐ３５ｈａｄｎｏｔｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｉｎｔｈｅｔｈｅｒａｐｙｇｒｏｕｐｔｈａｎＤＧａｌｇｒｏｕｐ（Ｐ＞０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＥＧｂｃａｎｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅｃｏｇｎｉｔｉｖｅｌｅｖｅｌｏｆｔｈｅｄｅｍｅｎｔｉａｒａｔｓ．ＯｎｅｏｆｔｈｅｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｍａｙｂｅｔｏｄｅｃｒｅａｓｅｔｈｅｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓＣＡ１ｒｅｇｉｏｎＣａｓｐａｓｅ９Ｐ３５ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｔｈｅｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐｗａｓｍｏｒｅｅｆｆｅｃｔｉｖｅｔｈａｎｔｈｅｔｈｅｒａｐｙｇｒｏｕｐ．

【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】 Ｄｅｍｅｎｔｉａ； Ｅｘｔｒａｃｔｇｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａ； ＤＧａｌ； Ｒａｔ； Ｃａｓｐａｓｅ

随着老龄化程度日益加深，老年性痴呆正在成为

影响老年人生活质量的重大社会和医学问题，从中医

药探索本病的防治方法和药物具有重要现实意义［１］。

有研究认为痴呆发病中的神经元死亡过程主要是调

亡，主要由半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶即 Ｃａｓｐａｓｅ家族执行，Ｃａｓｐａｓｅ９是细胞凋亡线粒体通路的重要启动

酶。体外细胞培养研究证实，ＥＧｂ可阻断 β淀粉样蛋白所致的细胞凋亡，认为可能具有抗凋亡的作用［２４］。

ＥＧｂ是否能通过降低 Ｃａｓｐａｓｅ活性实现脑保护目前报道并不多，本实验观察了ＥＧｂ对痴呆大鼠海马ＣＡ１区ＴＵＮＥＬ神经元凋亡及 Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５活性的影响，旨在对探讨痴呆发病机制和 ＥＧｂ治疗痴呆的作用机制及其临床应用提供实验依据。

材料与方法

一、材料

１．实验动物及分组：ＳＤ大鼠４８只雌雄各半，徐州医学院实验动物中心提供，实验前体质量为 ２５０～３００ｇ，标准环境饲养。采用 Ｙ型迷宫测试，筛选反应迅速、活泼的４８只大鼠，称量后按随机数目表分成６

·４８８· 中华行为医学与脑科学杂志２０１１年１０月第２０卷第１０期　ＣｈｉｎＪＢｅｈａｖＭｅｄ＆ＢｒａｉｎＳｃｉ，Ｏｃｔｏｂｅｒ２０１１，Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．１０

组：空白对照组，半乳糖组，银杏叶低、中、高组（作为

预防组），治疗组。

２．主要试剂和仪器：Ｄ半乳糖（上海恒信化学试剂公司），ＴＵＮＥＬ试剂盒及 ＳＡＢＣ试剂盒购自 Ｂｏｓｔｅｒ公司，Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５多克隆抗体（一抗）购自ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司，银杏叶提取物（含总黄酮醇苷１．６８ｍｇ，银杏内酯０．２８ｍｇ）由扬子江制药公司惠赠。日本产ＯｌｙｍｐｕｓＰＭＣＢ２０显微照相系统，垂直电泳仪，转膜电泳仪。

二、方法

１．模型制作：半乳糖组腹腔注射８周Ｄｇａｌ１００ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１（生理盐水配制），ＥＧＢＬ，ＥＧＢＭ，ＥＧＢＨ腹腔注射８周等量 Ｄｇａｌ及低、中、高剂量 ＥＧｂ（０．８７５ｍｇ／ｋｇ，１．７５ｍｇ／ｋｇ，３．５ｍｇ／ｋｇ）（按所含黄酮计算，生理盐水配制），治疗组腹腔注射 ８周 Ｄｇａｌ后再注射ＥＧｂ２周，空白对照组注射等量生理盐水。２．ＴＵＮＥＬ染色：按试剂盒说明书进行染色与检

测，以４００倍显微镜计数一个视野内的阳性细胞数，每张切片随机取海马ＣＡ１区５个不重叠的视野进行ＴＵＮＥＬ阳性细胞（个／视野），结果取５个视野的平均值。３．Ｃａｓｐａｓｅ９免疫组化：第１０周各组中一半的大鼠

取脑，参照本实验室常规方法［５］进行免疫组化测定。

４．ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ法检测 Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５活性：第 １０周各组另一半大鼠处死，断头取海马，在匀浆机中制备

海马组织匀浆。具体步骤参照本实验室常规方法［５］。

５．统计学方法：所有数据均以均数±标准差表示，用ＳＰＳＳ１１．５软件处理，多个组比较采用单因素方差分析。

结 果

一、各组大鼠海马ＣＡ１区ＴＵＮＥＬ阳性细胞数比较空白对照组海马ＣＡ１区可见很少 ＴＵＮＥＬ阳性细

胞；与对照组相比，半乳糖组海马 ＣＡ１区可见较多的ＴＵＮＥＬ阳性细胞，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。ＴＵＮＥＬ阳性细胞胞核着色呈棕褐色或棕黄色，可见胞核形态皱缩，呈不规则形，圆形、三角形或弯月形，可见

凋亡小体。与半乳糖组相比，ＥＧｂ各剂量组、治疗组ＴＵＮＥＬ阳性细胞不同程度减少，其中 ＥＧｂ中、高剂量组差异均有统计学意义（Ｐ＜０．０１），ＥＧｂ低剂量组及治疗组差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。见表１。

表１ 各组大鼠海马ＣＡ１区ＴＵＮＥＬ阳性细胞数比较（ｘ±ｓ，每组ｎ＝４，个／视野）

组别 ＴＵＮＥＬ阳性细胞数

空白对照组 ０．８±０．２半乳糖组 ３７．８±１．３ａ

ＥＧｂ低剂量组 ３５．４±１．７ａｂ

ＥＧｂ中剂量组 １７．６±０．９ａｂ

ＥＧｂ高剂量组 ９．８±０．８ａｂ

治疗组 ３６．０±１．６ａ

注：与空白对照组相比，ａＰ＜０．０１；与半乳糖组相比，ｂＰ＜０．０１

二、各组大鼠海马 ＣＡ１区 Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５阳性神经元数目

Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５主要着色于胞核周围，呈棕黄色。对照组海马 ＣＡ１区可见较少的 Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５阳性神经元；与对照组相比，半乳糖组可见较多的 Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５阳性神经元，差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。与半乳糖组相比，ＥＧｂ各剂量组，治疗组Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５阳性表达有不同程度的降低，ＥＧｂ低剂量组差异有显著性（Ｐ＜０．０５），ＥＧｂ中、高剂量组差异均有显著性（Ｐ＜０．０１），治疗组差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。见表２。

表２ 各组大鼠海马ＣＡ１区Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５阳性神经元数比较（ｘ±ｓ，每组ｎ＝４，个／视野）

组别 Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５阳性神经元数

空白对照组 ６．２±１．３半乳糖组 ３７．６±１．８ａ

ＥＧｂ低剂量组 ３３．４±２．３ａｂ

ＥＧｂ中剂量组 ２８．６±１．３ａｃ

ＥＧｂ高剂量组 ２５．０±１．６ａｃ

治疗组 ３５．４±２．２ａ

注：与空白对照组相比，ａＰ＜０．０１；与半乳糖组相比，ｂＰ＜０．０５，ｃＰ＜０．０１

三、各组大鼠Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５活性比较在分子量３５ＫＤ附近，空白对照组海马 ＣＡ１区可

见较弱的Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５表达。与空白对照组相比，半乳糖组海马ＣＡ１区Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５表达明显增加，差异有显著性（Ｐ＜０．０１）。与半乳糖组相比，ＥＧｂ各剂量组及治疗组海马 ＣＡ１区 Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５表达不同程度减少，其中 ＥＧｂ中、高剂量组差异有显著性（Ｐ＜０．０１），ＥＧｂ低剂量组，治疗组差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。见图１。

与空白对照组相比，ａＰ＜０．０１；与半乳糖组相比，ｂＰ＜０．０１

图１ 各组大鼠海马ＣＡ１区Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５活性比较（ｎ＝４）

讨 论

凋亡是指机体在生理条件下受到刺激后，经过多

·５８８·中华行为医学与脑科学杂志２０１１年１０月第２０卷第１０期　ＣｈｉｎＪＢｅｈａｖＭｅｄ＆ＢｒａｉｎＳｃｉ，Ｏｃｔｏｂｅｒ２０１１，Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．１０

种信号传递导致细胞产生一系列生态和生化方面的改

变而引起细胞程序性死亡的过程，目前已知有三条主

要的细胞内信号转导通路来调控细胞凋亡：线粒体／细胞色素Ｃ通路、死亡受体通路和内质网通路［６］。通常

情况下，Ｃａｓｐａｓｅ家族成员在细胞中以无活性酶原形式存在，分子量在３０～５０ｋＤ之间，包括三个结构域：氨基端的原域（Ｐｒｏｄｏｍａｉｎ）、大亚单位（约２０ｋＤ）和小亚单位（约１０ｋＤ），在凋亡信号刺激下，其特异性天冬氨酸残基处被剪切后激活，活化型 Ｃａｓｐａｓｅ是由无活性的２个亚单位组成的四聚体。根据它们之间大小亚单位序列的同源性以及功能，可分为三组［７］：（１）细胞因子处理组：Ｃａｓｐａｓｅ１、４、５、１１、１２、１３和１４；（２）凋亡起始组：Ｃａｓｐａｓｅ２、８、９和１０；（３）凋亡效应组：Ｃａｓｐａｓｅ３、６和７。Ｃａｓｐａｓｅ９是线粒体凋亡途径的启动酶，介导细胞毒性的死亡信号。完整的Ｃａｓｐａｓｅ９为４６０００多肽，激活后裂解为 ３７０００的活性片段［８９］。

在线粒体凋亡通路中，凋亡分子细胞色素Ｃ（ｃｙｔｏｃｈｒｏｍＣ，ｃｙｔＣ）一旦释放即与细胞凋亡蛋白酶活化因子１（ａｐｏｐｔｏｔｉｃｐｒｏｔｅａｓｅａｃｔｉｖａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ１，Ａｐａｆ１）结合，在ｄＡＴＰ／ＡＴＰ存在条件下活化 Ｃａｓｐａｓｅ９，Ｃａｓｐａｓｅ９再激活 下 游 效 应 Ｃａｓｐａｓｅ （Ｃａｓｐａｓｅ３、Ｃａｓｐａｓｅ６ 或Ｃａｓｐａｓｅ７），诱导细胞凋亡［１０１１］。

Ｃｕｉ等［１２］研究发现长期注射 Ｄ半乳糖导致学习记忆障碍，细胞凋亡及海马区 Ｃａｓｐａｓｅ３表达增加，并推测Ｄ半乳糖通过 Ｃａｓｐａｓｅ介导的凋亡，诱导氧化应激等途径引起神经退行性变。有研究表明，细胞过度

凋亡可能参与阿尔茨海默病和衰老海马神经元退行性

变的过程［１３］。目前ＴＵＮＥＬ法被广泛应用于凋亡细胞的标记，本实验中，半乳糖组海马 ＣＡ１区可见较多ＴＵＮＥＬ阳性细胞，且Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５活性较对照组明显增加，差异有极显著性，表明在 Ｄ半乳糖致老年性痴呆大鼠中Ｄ半乳糖可引起海马ＣＡ１区神经元的凋亡，与Ｚｈａｎｇ［１４］的报道 ＤＧａｌ可诱导海马 ＣＡ１区 ＴＵＮＥＬ阳性细胞增加相一致。

大量临床前试验及研究都表明，ＥＧｂ可以改善轻、中度老年性痴呆患者认知功能障碍及行为异常，其作

用机制可能包括清除自由基，抗氧化，保护线粒体，抗

凋亡等［１５１７］。与半乳糖组相比，ＥＧｂ各剂量组及治疗组海马ＣＡ１区ＴＵＮＥＬ阳性细胞及 Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５阳性表达均有不同程度的降低，提示在 ＤＧａｌ致痴呆大鼠中ＥＧｂ能降低Ｃａｓｐａｓｅ９Ｐ３５活性，可以对抗长期注射ＤＧａｌ所致的细胞凋亡，从而改善痴呆大鼠的学习记忆障碍，且随剂量增加作用增强。尽管预防组和治疗

组在应用ＥＧｂ后在行为学指标上都较半乳糖组改善，但预防组效果更为明显，表明ＥＧｂ对痴呆预防作用更优，可能是因为已发生凋亡的细胞不可逆，为 ＥＧｂ用于临床预防痴呆提供了理论和实验依据。

参 考 文 献

［１］ 胡利，李映红，吴正治．楮实提取物改善老年性痴呆复合模型大鼠空间学习记忆能力及机制研究．中华行为医学与脑科学杂志，２０１０，１９：１００１１００４．

［２］ ＹａｏＺ，ＤｒｉｅｕＫ，ＰａｐａｄｏｐｏｕｌｏｓＶ．ＴｈｅＧｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａｅｘｔｒａｃｔＥＧｂ７６１ｒｅｓｃｕｅｓｔｈｅＰＣ１２ｎｅｕｒｏｎａｌｃｅｌｌｓｆｒｏｍｂｅｔａａｍｙｌｏｉｄｉｎｄｕｃｅｄｃｅｌｌｄｅａｔｈｂｙｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｆｂｅｔａａｍｙｌｏｉｄｄｅｒｉｖｅｄｄｉｆｆｕｓｉｂｌｅｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｌｉｇａｎｄｓ．ＢｒａｉｎＲｅｓ，２００１，８８９：１８１１９０．

［３］ ＢａｓｔｉａｎｅｔｔｏＳ，ＲａｍａｓｓａｍｙＣ，ＤｏｒｅＳ，ｅｔａｌ．ＴｈｅＧｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａｅｘｔｒａｃｔ（ＥＧｂ７６１）ｐｒｏｔｅｃｔｓｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｎｅｕｒｏｎｓａｇａｉｎｓｔｃｅｌｌｄｅａｔｈｉｎｄｕｃｅｄｂｙｂｅｔａａｍｙｌｏｉｄ．ＥｕｒＪＮｅｕｒｏｓｃｉ，２０００，１２：１８８２１８９０．

［４］ ＢａｓｔｉａｎｅｔｔｏＳ，ＺｈｅｎｇＷＨ，ＱｕｉｒｉｏｎＲ．ＴｈｅＧｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａｅｘｔｒａｃｔ（ＥＧｂ７６１）ｐｒｏｔｅｃｔｓａｎｄｒｅｓｃｕｅｓｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌｃｅｌｌｓａｇａｉｎｓｔｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｉｎｄｕｃｅｄｔｏｘｉｃｉｔｙｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔｏｆｉｔｓｆｌａｖｏｎｏｉｄｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅＣＪＮｅｕｒｏｃｈｅｍ，２０００，７４：２２６８２２７７．

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［６］ 王海英，张秋玲，李金国，等．电针对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑细胞凋亡及神经功能恢复的影响．中华行为医学与脑科学杂志，２０１０，１９：５１０５１２．

［７］ ＷｏｌｆＢＢ，ＧｒｅｅｎＤＲ．Ｓｕｉｃｉｄａｌｔｅｎｄｅｎｃｉｅｓ：ａｐｏｐｔｏｔｉｃｃｅｌｌｄｅａｔｈｂｙｃａｓｐａｓｅｆａｍｉｌｙｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ．ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ，１９９９，２７４：２００４９２００５２．

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［１１］李天富，罗玉敏，吕传真．细胞凋亡与ｃａｓｐａｓｅ机制的调控．中国临床神经科学，２００３，１１：３１３３１５．

［１２］ＣｕｉＸ，ＺｕｏＰ，ＺｈａｎｇＱ，ｅｔａｌ．ＣｈｒｏｎｉｃｓｙｓｔｅｍｉｃＤｇａｌａｃｔｏｓｅｅｘｐｏｓｕｒｅｉｎｄｕｃｅｓｍｅｍｏｒｙｌｏｓｓ，ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，ａｎｄｏｘｉｄａｔｉｖｅｄａｍａｇｅｉｎｍｉｃｅ：ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＲａｌｐｈａｌｉｐｏｉｃａｃｉｄ．ＪＮｅｕｒｏｓｃｉＲｅｓ，２００６，８３：１５８４１５９０．

［１３］许浩，胡祥友，秦松，等．阿尔茨海默病脑海马凋亡神经元发生率增高．中国神经科学杂志，２００２，１８：４６２４６５．

［１４］ＺｈａｎｇＱ，ＬｉＸ，ＣｕｉＸ，ｅｔａｌ．Ｄｇａｌａｃｔｏｓｅｉｎｊｕｒｅｄｎｅｕｒｏｇｅｎｅｓｉｓｉｎｔｈｅｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｏｆａｄｕｌｔｍｉｃｅ．ＮｅｕｒｏｌＲｅｓ，２００５，２７：５５２５５６．

［１５］ＮａｐｒｙｅｙｅｎｋｏＯ，ＢｏｒｚｅｎｋｏＩ，ＧＩＮＤＥＭＮＰＳｔｕｄｙＧｒｏｕｐ．Ｇｉｎｋｇｏｂｉｌｏｂａｓｐｅｃｉａｌｅｘｔｒａｃｔｉｎｄｅｍｅｎｔｉａｗｉｔｈｎｕｅｒｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃｆｅａｔｕｒｅｓ．Ａｒａｎｄｏｍｉｓｅｄ，ｐｌａｃｅｂｏｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ，ｄｏｕｂｌｅｂｌｉｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｔｒｉａｌ．Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌｆｏｒｓｃｈｕｎｇ，２００７，５７：４１１．

［１６］ＭｕｌｌｅｒＷＥ，ＣｈａｔｔｅｒｊｅｅＳＳ．ＣｏｇｎｉｔｉｖｅａｎｄｏｔｈｅｒｂｅｈａｖｉｏｒａｌｅｆｆｅｃｔｏｆＥＧｂ７６１ｉｎａｎｉｍａｌｍｏｄｅｌｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ，２００３，３６：２４３１．

［１７］ＺｈｏｕＬＪ，ＺｈｕＸＺ．ＲｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎｓｐｅｃｉｅｓｉｎｄｕｃｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎＰＣ１２ＣｅｌｌｓａｎｄｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＢｉｌｏｂａｌｉｄｅ．ＪＰｈａｒｍａｃｏｌＥｘｐＴｈｅｒ，２０００，２９３：９８２．

（收稿日期：２０１１－０４－１９）（本文编辑：冯学泉）

·６８８· 中华行为医学与脑科学杂志２０１１年１０月第２０卷第１０期　ＣｈｉｎＪＢｅｈａｖＭｅｄ＆ＢｒａｉｎＳｃｉ，Ｏｃｔｏｂｅｒ２０１１，Ｖｏｌ．２０，Ｎｏ．１０