Carlos Quesada-Gómez

Facultad de Microbiología

Universidad de Costa Rica

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Tipos de prueba Ventajas Desventajas

Detección

de toxinas

Inmunoensayos

enzimáticos

(EIA)

• Detecta A o A/B

• Rápido

Baja sensibilidad

65-94%

Citotoxicidad en

cultivo celular

Especificidad y senbilidad para

C. difficile

70-100%

-Experiencia

--Cara

-24-48 horas

ID

bacteria

Glutamato

deshidrogenasa

Rápido y sensible

No específico

Requiere confirmación

de toxinas

PCR Rápidos y sensibles

Presencia de genes de toxinas

-Caro

Cultivo de

heces

Permite tener el aislamiento para

estudios posteriores

Vigilancia epidemiológica

-Experiencia

-Resultados 1 a 2

semanas

2

3

Shock con alcohol

Inocular en medio 2 -3días selectivo (CCFA)

Inocular en medio enriquecimiento (FAB) 7 días

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•Proteosa peptona

•Fosfato disódico

•Cloruro de Sodio

•Císteína

•Fosfato monopotásico

•Sulfato de Magnesio

•Agar

•Fructosa

•Rojo Neutro

•cicloserina

•Cefoxitina

•Taurocolato (TCCFA)

Cicloserina-Cefoxitina-Fructuosa Agar (CCFA)

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•Peptona proteasa

•Dihidrógeno fosfato de sodio

•Potasio dihidrógeno fosfato

•Sulfato de magnesio

•Cloruro de sodio

•Cisteína

•Fructosa

•Sangre

•Agar

•Norfloxacina

•Moxalactam

C. difficile-Moxalactam-Norfloxacina (CDMN)

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•Patentado

•Casa comercial bioMeriuex

•Inoculación directa y crecimiento

en 24 horas

ChromID C. difficile agar

7

•Brucella Agar

•Sangre lisada de cabello

•Vitamina K

BAK

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CCFA

BAK

Identificación presuntiva

Identificación definitiva

PSA

Pruebas moleculares (tipificación)

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Tinción de Gram

Aglutinación en látex

Detección de proteína de

superficie (GDH)

Falsos positivos:

C. innocuum

C. bifermentas

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PCR convencional

Gen tpi – triosa fosfato isomerasa

exclusiva de C. difficile

tcdA, tcdB, tcdC

1 y 20: Marcadores de PM Controles 3 : Tox A-, B+ 4 Y 11: NAP1 10: C. difficile ATCC NAP2

tpi

tcdC del

tcdB

tcdA

cdtB

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Ensayo de neutralización en células También se puede realizar a la muestra de heces

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CSLI (EUA) – EUCAST (Europea)

Puntos de corte para definir R, I, S

Cepa control – ATCC 700057

Clindamicina Levofloxacina

Metronidazol Piperacilina

Vancomicina Ticarcilina Moxifloxacina Tigeciclina

Las pruebas para C. difficile o sus toxinas se deben realizar solamente en heces diarreicas.

Prueba de pacientes asintomáticos no es clínicamente útil y no se recomienda. Solo para investigación epidemiológica.

Cultivo de heces con la confirmación de la toxigenicidad (“cultivo toxígeno") proporciona el estándar contra el cual otros resultados de las pruebas clínicas deben compararse.

Cohen SH, et al. Infect Control Hosp Epidemiol. 2010;31(5):431-455.

EIA es un buen método alternativo para el diagnóstico clínico rápido.

Combinar dos pruebas, puede ayudar a superar la baja sensibilidad de la prueba de la toxina.

Las pruebas de PCR convencional no es recomendado para las pruebas de rutina.

Se recomienda al menos una repetición de la prueba de detección de toxinas durante el mismo episodio de diarrea.

Cohen SH, et al. Infect Control Hosp Epidemiol. 2010;31(5):431-455.

Para uso clínico la prueba en dos etapas: EIA de

GDH + toxinas o citotoxicidad + cultivo

Estándar de oro es el cultivo de heces seguido

por ensayo de “cultivo toxigénico”

La toxina es muy inestable, se degrada a

temperatura ambiente, y no detectables en las 2-

4 horas (falsos negativos)

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Definición de caso

Clínico: presencia de diarrea y

Laboratorio: Un resultado de la prueba de heces positivo para

toxigénicas C. difficile o sus toxinas o colonoscópicos /

hallazgos histopatológicos que demuestran evidencia de

´pseudomembranas

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SHEA- ADSA, 2010