capacitacion 5800
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Interpretación de Histogramas y Dispersogramas hematológicos en analizadores 5 diferenciales (a ver... quien se cree el cuento de las "6" estirpes?).TRANSCRIPT
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Lic. TM Javier Quiroz Castillo Aplicaciones / Marketing
ANALISIS E INTERPRETACIÓN DE LAS ALARMAS, DISPERSOGRAMAS E HISTOGRAMAS Analizador Hematológico BC-5800
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Familia de Productos Mindray
2
Oficinas Shenzhen,
P.R.China Ingresos:
547.5 Mill. USD (2008) Empleados:
5580 Posicionamiento de Mercado: Mayor compañía China en Desarrollo Médico; Global No.3 en Monitoreo de Pacientes
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Familia de Analizadores Hematológicos
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Imagen del BC-58005 diferenciales, 29 parametros
Hasta 90 muestras por hora
Laser scatter + Chemical dye +
Flow cytometry technology
Canal independiente y método optico
para la medición de Basófilos
Powerful capability to flag abnormal cells
Optional autoloader, barcode scanner
Large TFT touch screen
Large storage capacity: up to 40,000 samples
Recommended or customizable decision rules
for re-exam abnormal samples
Support uni- or bi-directional LIS
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PLT
Eos
Lymph
Mono
Neutro
Baso
RBC
Estudio de Células Sanguíneas
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Secuencia normal de Tamaño
Después de los Lisantes
Tecnología 3 diff?
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Cinco grupos Leucocitarios
Lymphocyte 25 ~ 30%Monocyte 3 ~ 8 %
Neutrophil 50 ~70%
Basophil 0 ~ 1 %
Eosinophil 0.5 ~3%
Tecnología 5 diff?
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Estructura simple y diferente tamaño Estructura compleja y tamaño medio
Gran núcleo que ocupa casi toda la célula
Más citoplasma que el linfocito
Gránulos pequeños, núcleo multilobular
Gránulos grandes y oscuros; núcleo lobulado
Gránulos grandes rojo/naranja; núcleo púrpura bilobulado
Similitudes y diferencias
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Existen 5 diferentes tipos de Leucocitos ( WBC)
Lymphocyte Monocyte Neutrophil Eosinophil Basophil
Tamaño pequeño, gran núcleo con relación a citoplasma, el mayor constituyente del sistema inmune.
Grande, citoplasma sin gránulos, interviene en la ingestión de partículas extrañas, como bacterias o parásitos.
Gránulos en citoplasma de color rosado, marcador de etapa aguda de la inflamación.
Gránulos de color naranja, gruesos , relacionados con infecciones parasitarias.
Menos común de todos, gránulos de color azul oscuro, relacionados con infecciones micóticas.
Granulocitos
LYM MON NEU EOS BAS
Diferenciación de Leucocitos5 Diff.
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ED
B
CATa
mañ
o
Complejidad, gránularidad (vacuolas, artefactos)
WBC: White Blood CellCombinación de Tamaño y Complejidad
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¿Cómo Diferenciar los Diferentes Tipos de Leucocitos?
Utilizando sus diferentes características, TAMAÑO Y COMPLEJIDAD CELULAR
Para eso utilizaremos cuatro tecnologías combinadas:Citometría de FlujoDispersión de Laser Tinción CitoquímicaImpedancia Eléctrica
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Tecnología Avanzada
Dispersión de laser
Citometría de flujo
Tinción citoquímica
WBC 5-diff technology
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Celulas inyectadas en una cámara de flujo que esta localizado en el paso óptico de una fuente de luz, usualmente un laser.
La cámara de flujo contiene un líquido que fluye rapidamente : el fluido envolvente que lleva la muestra a alta velocidad por el paso de luz.
Las células mantienen su orientación y posición en el fluido debido a que obedecen las característricas del flujo laminar y atraviesan en fila de uno el paso óptico.
WBC TecnologíaCitometría de Flujo
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La dispersión de Luz ocurre cuando la partícula reflacta la luz que incide sobre ella, esto depende de las características físicas de la partícula.
-Forward scatter (FS): Tamaño-Side scatter (SS): Complejidad
1 - 5°6 - 20°
WBC TecnologíaDispersión de Luz Laser
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1
3
2
1 Muestra
2 Laser
3 Lentes
5
4
Dispersión de Laser de Ángulo Múltiple
Dispersión de ángulo mayor (MAS)8~20
Granularidad (Complex)
Dispersión de ángulo Menor (LAS)2~5Volumen
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Teoría de Mie
• En células diferentes de diferente tamaño (Monoc. y Linf.)• El ángulo bajo las diferencia por tamaño
LAS
Laser
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Teoría de Mie
• En células diferentes pero del mismo tamaño (granulocitos)• Ángulo mayor refleja la complejidad celular
MAS
Laser
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RBC
OtrosWBC
EOS
LEO I LEO II
Cámara de diferencial
WBC TecnologíaTinción Química
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BASO
other WBC
RBC
WBC technologyChemical dye
BASO Channel
LBA
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WBC BAS%
BASO scattergramWBC/Baso
BAS# can be calculated according to BAS%
WBC total result is counted in BASO channel
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BAS% WBC BAS#
DIFF Bath BASO Bath
NEU% LYM% MON% EOS% * =
*
NEU# LYM# MON# EOS#
5 part resultFinally…
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DISPERSOGRAMA / SCATTERGRAMA
DEFINICIÓNGráfico estadístico que representa la distribución de dos variables en una muestra. Una variable se representa gráficamente en el eje vertical; la otra en el horizontal. Un dispersograma demuestra el grado o tendencia de presentación de las variables en relación mutua.
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INTERPRETACIÓN DEL DISPERSOGRAMA
Eos
Lymph
Mon
Ghost
Neu
FS : Frontal Scatter / Dispersión Frontal / Información sobre el Tamaño celularSS : Side Scatter / Dispersión Lateral / Información sobre Complejidad Celular
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Entendiendo el Dispersograma Normal
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Dispersograma de una muestra NORMAL
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Dispersograma de una muestra normal
Dispersograma BASO
1. The 4 parts except BASO should be close to the lower left corner.
2. The profile of lower part should be smooth, not cut by a straight line.
RBC Ghost
Mono
Lymph
Neu
Eos
Baso
4 Parts
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Estructura complejaEstructura simple
Pequeño
Estructura interna del Linfo es mas simple que la del EOS.
Neutro es complejo y grande
Mono es más grande que el Linfo
DIFF
Grande
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Estructura complejaEstructura simple
Grande
Pequeño
LymphNeutroEosMonoDisminuyen grandemente
Baso mantiene su mismo tamaño
BASO
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Dispersograma Anormal y Su Significado
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Neu
Eos
Lym
Mon
LIC
NRbc
ALY
Ghost
Left Shift
ALY
Muestras Anormales: Banderas
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Lymphocytosis Neutrophilia
Leucopoenia
Monocytosis
Eosinophilia
Dispersograma de una muestra ANORMAL
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Dispersograma de una muestra ANORMAL
ATL LIC
Lyse resistantLeft shift
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Dispersograma Anormal
Mov Izq.
LIC
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Dispersograma Anormal
ALY
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Ganancia inadecuada
Ganancia baja Ganancia alta
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Celda de flujo sucia o con coágulos
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ALARMA Señal por medio de la cual se informa sobre la presencia real o inminente de una amenaza, aviso de la probabilidad de que ocurra un suceso.
DEFINICIÓN
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SISTEMA DE ALARMAS
1.Límite
Excedido
3.Se Requiere
Confirmación Microscópica
2.Banderas
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¿Por qué se requiere confirmación microscópica?
En estado patológico las células alteran sus características celulares normales Tamaño : células activadas son mas grandesComplejidad : Células activadas desarrollan estructuras que normalmente no poseen. (granulaciones tóxicas, vacuolas)
RUO
Atypical Lymphocytes (#,%)
Large Immature Cell (#,%)
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Superposición de poblaciones
Como consecuencia de esto las células no se encontraran en las zonas donde normalmente se ubicaban. Y es posible que las poblaciones se superpongan no permitiendo asi una identificación definitiva.Las posibilidades son variadas
35 65
40 60
41 70
3565
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¿Por qué, en ocasiones, mi lámina no concuerda con el resultado del analizador?
• Diferencia de método, recordar que el analizador cuenta miles de células y el observador 100.
• Extensión de la muestra, de la aguja, o del tubo?
• Fragilidad de los eosinófilos• Técnica de lectura (incluyo
los extremos?)• Alteraciones debido a la
preparación del colorante.• Densidad de la muestra.• Velocidad del extendido.
Recordar que en raras ocasiones la lectura microscópica hecha por dos operadores diferentes coincide completamente
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HISTOGRAMAS, EL PRINCIPIO DE COULTER
Luego de producida la acción del lisante las células son medidas y contadas por el método de impedancia (recordar que por el principio de Coulter el número de pulsos producidos por el paso de una partícula con carga de una solución a otra conectas y unidas mediante un registrador de voltaje equivale al número de partículas que se desplazan de una solución a otra, y la duración del pulso es directamente proporcional al volumen de la partícula.)
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HISTOGRAMAS
En estadística, es la representación gráfica de una variable, en forma de barras, donde la altura de cada barra es proporcional a la frecuencia de los valores representados.
En el eje vertical se presentan las frecuencias.
En el eje horizontal se presentan los valores de las variables
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HISTOGRAMASEl histograma es un grafico construido mediante la representación de dos variables:
a.- Volumen de la partícula, en el eje X (Horizontal), en femtolitros
b.- Número de partículas, eje Y (Vertical)
El analizador presenta 3 histogramas
WBC, Baso
Glóbulos Rojos
Plaquetas
El analizador separa los pulsos en umbrales y canales.
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HISTOGRAMAS
Traducción de los pulsos en un Histograma
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HISTOGRAMAS
Curva de datos primarios
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HISTOGRAMA DE PLAQUETAS
Observe que la distribución de la población no es simétrica, esto es normal debido a que las plaquetas son restos celulares de forma y tamaño variable, una plaqueta joven es de mayor tamaño que una senescente, si bien el límite aceptado para una plaqueta normal son 12 fl. Eso quiere decir que el promedio de la población (el pico) debería encontrarse siempre al lado izquierdo de la flecha, como se observa en el gráfico.
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PDWMPV
PLTPCT =
* MPV
10000
PLT seriesHistogram
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HISTOGRAMA DE PLAQUETAS
Un gráfico que siga la línea roja debe interpretarse como posible agregación plaquetaria (el origen intra o extravascular de la misma no puede determinarse) o con un aumento en el número de plaquetas grandes, fragmentos celulares (membranas de glóbulos rojos)
Un gráfico que siga la línea verde debe interpretarse como interferencia producida por microcitosis marcada, glóbulos rojos de menos de 30 fl.(recordar que tanto plaquetas como glóbulos rojos se miden por impedancia en una misma cámara y de manera simultánea.)
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HISTOGRAMA DE PLAQUETAS
Una agregación plaquetaria lleva consigo una disminución en el número de plaquetas (2 o más plaquetas agregadas son contadas como una de mayor tamaño).
Por lo tanto cada vez que se encuentre una alteración en la forma del histograma de plaquetas, debe investigarse microscópicamente la muestra en busca de agregación plaquetaria.
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PLT seriesP-LCC/P-LCR
S2 representa el número de plaquetas grandes, y S1+S2 representa el recuento total de plaquetas
PLTP-LCC = * P-LCR
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P-LCC y P-LCR estan relacionados.
P-LCC Platelets-Large Cells CountP-LCR Platelets-Large Cells Ratio
PLTP-LCC = * P-LCR
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PLT: Platelet Clinical application
PLT P-LCR Clinical Cases
Normal (100-300*109/L) Normal (11-45%) ~
Increased platelet destruction
Reactive thrombocytosis
~ Thalassanemia
~ Platelet dysplasia
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HISTOGRAMA DE GLOBULOS ROJOS
El Histograma de Glóbulos Rojos se aprecia como una distribución cercana a la normal.
Observe la distribución casi simétrica de la población con el pico de la población cercana a los 87 fl. Observe además que existen hematíes debajo de los 50 fl. Y encima de los 100 fl.
El ancho de base de la campana representa el nivel de variabilidad de la población, (Anisocitosis/poiquilocitosis)
La posición de la campana sobre el eje horizontal representa la tendencia Micro, Normo o Macrocítica de la población.
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Case Presentation
Normal people, the RBC histogram shape is in perfect Gaussian distribution.
Dimorphologic RBC histogram, indicating anisocytosis. From a rectal cancer patient
Microcytosis, the RBC dominant peak moves to left. From a 34-year old outpatient.
Dimorphologic RBC histogram. From a recovery of Iron-deficiency anemia treatment patient.
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Sample Rotatory Valve
DIFF Channel
Flow
Cytom
etry
Laser S
catter
Sca
tterg
ram
RBCPLT
HGB
Colorim
etry
Impedance
LH Lyse
Aperture
BASO Channel
4 channels for BC-58005 reagents in 4 channel
LEO I
LEO II
LBA
HGB Channel
LH
Diluent
LYMMONNEUEOS
BASWBC
HGB
RBCPLT
RBC Channel