TITLU:

Elaborarea tehnologiilor de reproducere pentru speciile de pesti rare, periclitate sau amenintate cu disparitia

Etapa IX Transferul tehnologic al tehnologiilor de reproducere artificiala. Diseminarea materialului de populare obtinut DOCUMENTAIE DE TRANSFER TEHNOLOGIC A TEHNOLOGIEI DE REPRODUCERE ARTIFICIAL A SPECIEI ESOX LUCIUS TIUCA PREZENTAREA TEHNOLOGIEI 1.1. Obiect

Tehnologia elaborat vizeaz reproducerea controlat a speciei Esox lucius in vederea refacerii populatiilor naturale si introducerii i extinderii ei, n acvacultur. 1.2. Domeniul de aplicare

Potentialii beneficiari ai tehnologiei de reproducere sunt agentii economici care au ca obiect principal de activitate pescuitul si acvacultura. Tehnologia de reproducere artificiala devine aplicabila in momentul in care exista baza logistica necesara desfasurarii intregului flux tehnologic si se are in vedere urmatoarele : - Loturi de reproducatori masculi si femele care s constituie baza biologic pentru realizarea reproducerii i obinerea descendenelor de diferite vrste; - Bazine pentru parcarea, prematurarea si maturarea reproducatorilor nainte i dup stimulare hormonala ; - Statie de reproducere artificiala cu toate dotarile necesare : module parcare reproductori, platform pentru fecundare, aparate de incubatie caracteristice fiecarei specii, cazi si bazine de cresterea puilor in primele faze de dezvoltare postembrionara, minilaborator. 1.3. Cerinte de mediu inconjurator Tehnologiile elaborate nu prezinta elemente poluante pentru mediu. Substantele folosite sunt omologate si acceptate in UE si nu afecteaza materialul biologic si nici parametrii chimici ai apei. Apa tehnologica rezultata se incadreaza in parametrii Ord. 161 / 2006 . Riscul evadarii materialului biologic este exclus, sistemul tehnologic fiind prevzut cu elemente de siguranta, site la incintele de incubatie si la conductele de evacuare a apei tehnologice.

1

2. CONDIII TEHNICE DE APLICARE A TEHNOLOGIEI 2.1 Sistem tehnologic pentru reproducerea artificial a speciei Esox lucius Reproducerea artificial a speciei Esox lucius se poate realiza n orice ferm, pepinier piscicol, care ntrunete urmtoarele condiii : - alimentarea s se fac dintr-o surs de ap care are un debit permanent i relativ constant i care este ferit de orice surs de poluare; - temperatura apei s se menin la valori constante n perioada de reproducere, pentru a asigura desfurarea n condiii optime a procesului tehnologic; - apa s prezinte caracteristici fizico-chimice ale unei ape bune din punct de vedere piscicol. Pentru desfurarea operaiunilor de reproducere artificial la tiuc i alte specii de peti, sistemul tehnologic de reproducere artificial cuprinde urmtorele construcii,instalaii i dotri : bazine de prematurare, bazine de maturare, staie de incubaie, platform pentru realizarea lucrrilor de colectare a produselor sexuale i a fecundrii, minilaborator pentru monitorizarea parametrilor fizico chimici i biologic ai apei, n perioada de dezvoltare embrionar i postembrionar, realizarea tratamentelor i de supraveghere a procesului de incubare i de dezvoltare postembrionar, bazin i sistem de alimentare cu ap a staiei de incubaie i de cretere n perioada de dezvoltare postembrionar a descendenelor. Aceste construcii se recomand a fi amplasate ct mai aproape una de alta, pentru a permite desfurarea rapid a lucrrilor. Sistemului tehnologic de reproducere artificial se va dimensiona n funcie de capacitatea de producie stabilit de utilizator i va asigura prin capacitatea sa reproducerea a minim 50 de familii pentru a asigura meninerea i conservarea biodiversitii genetice a speciei. Bazinele de prematurare (Fig. nr.1 ) sunt destinate parcrii reproductorilor de tiuc n perioada noiembrie martie respectiv, dup pescuitul i selecia din toamn, pn la nceperea lucrrilor de reproducere. Sunt bazine de pmnt, realizate n sptur, au de regul form dreptunghiular, suprafa cuprins ntre 1000 -2000 mp, maximum 3000 mp; adncimea este de 2,0m i debitul de alimentare este de 3-5 l/sec/ha. Adncimea de 2 m este absolut necesar pentru realizarea unui regim termic ct mai constant, deoarece bazinele cu adncime mic sunt expuse variaiilor de temperatur, care influeneaz negativ maturarea gonadelor . Alimentarea i evacuarea apei se realizeaz prin instalaii hidrotehnice denumite tehnologic cugri de alimentare, respectiv de evacuare. Instalaiile de alimentare i de evacuare se dimensioneaz astfel nct inundarea i vidarea s se poat face n circa 3 ore.

2

Fig. nr 1 Bazine de prematurare Sunt construcii de beton cu trei perei (Fig. nr.2), partea de deschidere fiind la cel de evacuare ctre bazin, iar la cel de alimentare ctre canalul de alimentare. Toate instalaiile vor fi prevzute cu dou rnduri de nie, pentru blocarea apei cu vanei i pentru montarea grtarelor sau sitelor n vederea filtrrii apei, cu scopul de a nu ptrunde alte specii slbatice i de a evita evadarea petilor din bazin. Clugrul este compus din: a) corpul vertical al clugrului; b) corpul orizontal al clugrului.

Fig. nr. 2 Clugr de evacuare Corpul vertical este compus din trei perei, (cu nlimea funcie de nalimea bazinului), radier i fundaia corpului. n interiorul corpului vertical, n afar de vanete, se mai gsesc site, instalate n nie proprii sau deasupra vanetelor,

3

depind nivelul de reinere a apei. Corpul vertical este acoperit cu un capac. Accesul la corpul vertical este asigurat, de o pasarel din beton armat. Corpul orizontal este compus dintr-o conduct din beton armat cu diametru variabil n funcie de volumul de ap tranzitat. Aceast conduct este aezat pe un postament din beton i face legtura ntre bazin i canalul de evacuare sau alimentare dup cum se observa n fig.3. Funciile clugrului sunt urmtoarele : regleaz i menine nivelul constant al apei; elimin n mod automat surplusul de ap; evacueaz apa din zona de fund; golete bazinul.

Fig. Nr. 3. Clugr n funciune 1 corpul barajului ; 2 coronament ; 3 pasarel ; 4 grtar ; 5 vanet ; 6 gur de fund ; 7 tub din beton ; 8 arip aval ; 9 canal de evacuare ; 10 fundaia corpului orizontal ; 11 fundaia corpului vertical ; 12 piloi din lemn Reinerea i reglarea nivelului de ap se realizeaz prin instalarea vanetelor, acestea scondu-se sau adugndu-se n funcie de cerinele tehnologice. Eliminarea surplusului de ap se face peste vanete, sub forma unei lame deversante. Evacuarea apei de fund se face prin admisia n corpul vertical a apei din zona fundului, prin gura amplasat n peretele frontal, la cota radierului. Cnd peretele vertical frontal lipsete, apa ptrunde ntre cele dou rnduri de vanete prin partea inferioar a primului rnd de vanete.

4

Golirea bazinului se face prin scoaterea treptat a vanetelor, sau a tuturor deodat i, n acest caz, corpul orizontal funcioneaz ca o conduct cu scurgere forat. Pentru a asigura golirea heleteului, clugrul se amplaseaz la cota cea mai joas. Pmntul pe care se construiesc bazinele s fie de natur argilo-lutos, aceasta nsemnnd un bun teren pentru practicarea pisciculturii i capacitatea de a reine apa n bazin cu rezisten la splare. Bazinele de maturare folosite la parcarea reproductorilor dup administrarea injeciei hipofizare, sunt construite din pmnt realizate n debleu i au suprafa de 20-30 mp i adncimea de 1m.(Fig.nr.1) Au alimentare cu ap permanent. Caracteristic este sistemul de alimentare i de evacuare a apei, modificat n vederea protejrii reproductorilor i anume : gura de alimentare este prevzut cu un manon de prelat lung de 1,2 1,5m, cu rol de a prelungi n interiorul bazinului punctul de alimentare , evitnd astfel traumatizarea reproductorilor. Gura de evacuare are tubul orizontal amplasat cu 10 15 cm sub cota canalului colector, la o distan de circa 50 cm n interiorul bazinului, fa de baza taluzului. Deasupra acestei guri, pe fundul canalului colector, se fixeaz un grtar orizontal, format din vergele metalice aezate la distane de 3 4 cm. Gurile de alimentare i evacuare sunt astfel dimensionate nct bazinul s poat fi inundat i vidat n 20 30 minute. Intr-un bazin de maturare se introduc 15 20 reproductori.

Fig.nr.4 Bazine de maturare

5

Staia de incubaie va fi astfel construit nct s poat asigura o temperatur constant i s poat fi adaptat i utilizat la reproducerea mai multor specii de peti Dimensiunile construciei sunt determinate de numrul i tipul incubatoarelor si de dimensiunea bazinelor folosite la creterea larvelor . Lungimea obinuit a salii de incubaie este de 40 - 50 m i limea de 10-12 m. minilaborator prevzut cu microscop, lup binocular, cntar electronic, aparate de msur i control al parametrilor chimici i biologici ai apei, de asemenea, inventarul specific reproducerii artificiale (sticlrie de laborator, seringi, tifon, finet, vase de colectare a produselor seminale, recipienti din plastic de diverse dimensiuni, etc.); platforma pentru efectuarea lucrrilor de colectare a produselor sexuale i a fecundaiei prevzut cu mese pentru aezarea vaselor n care se repartizeaz icrele pentru fecundaie, cntarul electronic i alt rnd de mese, aezate n lungul instalaiilor de alimentare cu ap care sunt folosite ca suport pentru vasele de prelucrare a produselor sexuale; aparate de incubaie adaptate n funcie de caracteristicile bioreproductive ale fiecrei specii i tipului de pont. Module pentru parcare, maturare reproductori; Bazine pentru parcare i cretere larve . Sistem de alimentare, distribuie, reglare i evacuare a apei tehnologice. Magazie pentru depozitarea temporar a diverselor materiale i instrumente auxiliare

-

-

6

Fig. nr. 5

Vedere de amsamblu a staiei de incubaie

7

2.1.1. Descrierea i realizarea instalaiei de incubarea a icrelor de tiuc Instalaia de incubare a icrelor de tiuc are ca scop realizarea unor condiii optime pentru incubarea acestora i creterea larvelor n perioada de dezvoltare postembrionar. Prin tehnologia elaborat n cadrul proiectului s-a realizat un sistem de incubare total diferit de tehnologia clasic, care prevede utilizarea incubatoarelor Nucet i Zug- Weiss , mult mai simplu, mai eficient i mai aproape de condiiile reproducerii naturale. Sistemul const din dou bazine din beton, amplasate ntr-o staie pilot prevzut cu reea de conducte pentru alimentare, distribuie i evacuare a apei tehnologice, platform de porionare, fecundare icre, rame suport pentru incubaia icrelor,module pentru tratamente antifungice ale icrelor . Bazinele au un volum util de 120 mc i dimensiunile de 30x4x1,2 m.(Fig. nr. 6) Sunt alimentate cu ap de helesteu, prin conducte laterale cu diametrul de 100 mm, pe care sunt montai cte 7 robinei. Debitul maxim asigurat de cei 7 robineti de pe fiecare conduct este de cca 70 l/min, debitele de lucru fiind n general mai mici (50 l/min). La fiecare gur de alimentare s-a ataat un filtru tip manon, din esatur de nytal cu latura ochiului de 0,5 mm, pentru a mpiedica ptrunderea n bazine a insectelor acvatice, lipitorilor sau altor duntori. Bazinele sunt prevzute cu vane de fund pentru evacuarea apei, cuplate cu un sistem de prea-plin, care asigur un nivel constant. Vana i sistemul de prea-plin sunt amplasate ntr-o incint filtranta (suprafaa de cca 1 m2), cu pereii din esatur de nytal cu latura de 0,5 mm, pentru a mpiedica evadarea larvelor.

Fig.nr. 6 Bazin pentru incubarea icrelor de tiuc Sursa de ap pentru alimentarea staiei de incubaie,este un helesteu cu suprafaa de 1 ha i adncimea de 1,5 2 m. Nu se recomand bazine mai mici,

8

pentru a evita fluctuaiile de temperatur. nainte de a intra n sala de incubaie, la punctul de priz, apa trece prin filtru ( fig. 7 i 8 ), care are rolul de a opri ptrunderea organismelor zooplanctonice (n special ciclopi, care atac icrele). Acest filtru poate avea forma cilindric sau paralelipipedic. Filtrul este fixat pe un cadru metalic, cu perei dubli. Peretele exterior este format dintr-o sit mai rar i rezistent (nytal cu ochiuri de 0,5 mm, iar cea din interior este cu ochiuri mai mici 0,250 mm). Dimensionarea filtrelor a fost realizat astfel nct s asigure un debit de lucru de 15 l / sec. Admisia apei n staia de incubaie se realizeaz printr-o conduct metalic cu diametrul de 500 mm. Reglarea debitului se face prin intermediul unei vane. La intrarea n staie, conducta se ramific, pentru a realiza alimentarea independent a celor dou bazine, n dou brae paralele, cu diametrul de 100mm, pe care sunt montai cte 7 robinei.

Fig. 7 i 8 diferite filtre din bazinul decantor

-

rame suport pentru incubaia icrelor de tiuc (Fig.nr. 9). Acest tip de rama, este asemanator unei cutii deschise n partea de sus, avnd dimensiunile de 34 x 40 cm, marginile de 5 6 cm, din lemn de brad. Pe latura lung prezint o fanta cu dimensiunile de 10-15 cm, care permite eliminarea surplusului de spermatozoizi si evadarea larvelor dup eclozare, n bazin, unde vor incepe ciclul de cretere. Fundul cutiei este din plasa de nytal prinsa in partea de jos, pe care se intind icrele dup fecundare. Aceast ram, permite realizarea incubrii i creterii larvelor n acelai bazin, eliminnd operaiunea de prelevare, transvazare i parcare larve manipulri care duceau la pierderi nsemnate. n acelai timp, acest sistem de incubaie ofer posibilitatea supravegherii directe i nlturrii icrelor moarte, faciliteaz realizarea tratamentelor antifungice i asigur micarea uoar i permanent ,sub

9

influena curentului pe suprafaa apei apropiindu-se foarte mult de condiiile din mediul natural.

Fig. nr. 9 Rame suport pentru incubaia icrelor de tiuc

- module pentru tratamente antifungice ale icrelor sunt cazi realizate din polistiren armat cu fibr de sticl care au o form trapezoidal i un volum de cca. 700 l . nlimea coloanei de ap este de 30 de cm. Alimentarea cu ap se realizeaz direct din bazinul de cretere prin intermediul unui furtun, iar evacuarea prin intermediul unei evi PVC. Czile asigur tratamentul simultan a 5 rame cu icre.3. DESCRIEREA TEHNOLOGIEI Tehnologia de reproducere artificial i cretere a speciei Esox lucius presupune parcurgerea urmtoarelor faze: Asigurarea loturilor de reproductori evaluarea caracterelor fenotipice i determinarea sexului; parcarea, prematurarea reproductorilor evaluarea strii reproductive; stimularea maturrii celulelor sexuale; colectarea produselor sexuale; fecundarea; incubarea produselor sexuale n incinte special amenajate; creterea larvelor pn la atingerea caracterelor fenotipice asemntoare adulilor ambalarea i transportul puilor Schema cadru a tehnologiei de obinere a descendenilor speciei Esox lucius este prezentat n figura nr.

10

Schema fluxului tehnologic de obinere prin reproducere artificial a larvelor de tiucAsigurarea loturilor de reproductori

Evaluarea preliminar a reproductorilor Evaluarea caracterelor fenotipice Aprecierea strii fiziologice i de ntreinere Parcare reproductori Bazine din pmnt 2000-3000 mp Condiii de parcare Debit de alimentare de 3-5 l/s/ha Nivel de oxigen nu mai mic de 5 mg/l

Evaluarea strii reproductive

Stimulare hormonal Injectare cu hormon sintetic

Maturare Bazine de pmnt de 20-30 mp. Debit de alimentare 8-10 l/s/ha

Femele Prin masare uoar

Prelevare produse sexuale

Masculi Prelevare cu seringa prevzut cu tub tygon sau sacrificare

Fecundare Cu sperm proaspt prin metoda uscat . 5ml sperm la 1 l icre.

Incubare

Incubare Bazine speciale sau incubatoare tip Nucet

Tratamente icre embrionate

Eclozare

Cretere larve

Ambalare

11

Asigurarea lotului de reproducatori. Avnd n faptul c tiuca se reproduce primvara devreme, cnd temperatura apei este de 8-100C reproducatorii sunt separati pe sexe si se parcheaza in bazinele de prematurare la pescuitul din toamn, astfel c perioada de ienare, coincide cu cea de prematurare. Pescuitul se executa cu multa grija, stiuca fiind o specie sensibil la cele mai mici traumatisme. n bazinele de prematurare, unde apa are circuit continuu si sunt create condiii optime de temperatura si oxigen, reproductorii sunt hrnii cu pete mrunt, fr valoare economic, asigurndu-se cca. 3kg peste pentru un kg de tiuc. Densitatea de populare n bazinele de prematurare este de500-600 ex /ha. Evaluarea preliminar a reproductorilor Reproductorii de tiuc vor fi examinai imediat dup pescuit pentru evaluarea caracterelor fenotipice i determinarea sexului. Sunt selecionai reproductori cu lungimea de 50 -60 cm i greutatea de 1,5-2,0 kg. Nu se admit exemplare lovite sau afectate de boli parazitare sau infecioase. Determinarea sexului n aceast perioad se realizeaz dup caracterele de dimorfism sexual. Primul indiciu al maturrii sexuale este erupia nupial la masculi i anume, masculii maturi au capul i uneori corpul ntreg acoperit de butoni nupiali. Femelele sunt n general de talie mai mare dect masculii de aceeai vrsta, au abdomenul mai proeminent, iar orificiul genital este inflamat i zona moale la palpare. Maturarea reproductorilor La sfritul iernii - de regul la nceputul lunii martie, cnd temperatura apei atinge 5-6 0C, reproductorii sunt transferai n bazinele de maturare separai pe sexe, n care se asigur curent continuu de ap. Separarea femelelor si masculilor pe sexe se face cu mare grija, n loturi ct mai omogene si sunt mentinuti n bazinele de maturare, pentru stabilirea momentului optim de prelevare a icrelor. Pentru a determina desvrirea maturrii gonadelor i declanarea ovulaiei i a spermiaiei este necesar ca temperatura n heleteele de maturare s se menin constant la valoarea necesar perioadei de reproducere ( 12-13 0 C). Scderea sau creterea brusc a temperaturii n afara limitelor optime poate compromite definitiv maturarea femelelor. ntr-un bazin de maturare se introduc , n general, 15 -20 femele, de la care se obin n medie 300.000 de icre. Reproductorii vor fi observai i controlai cu atenie pentru a surprinde momentul n care ncep s se reproduc n mod natural. Este posibil ca unele femele s elimine icre, fr s fi e stimulate hormonal. Stimularea hormonal Pentru stimularea hormonal se va folosi extract de hipofiz de crap. Cantitatea de hormon injectat va depinde strict de greutatea reproductorului, greutate ce

12

trebuie stabilit prin cntrire pentru fiecare exemplar n parte. Pe baza greutii petelui se va calcula doza ce urmeaz s fie administrat. Femelele sunt stimulate cu 3,5-4 mg/kg corp, in functie de gradul de maturare, iar pentru masculi se administreaza 1,52 mg/kg corp. Injeciile hormonale se vor administra cu o sering de 1,0-3,0 cm3 cu ace de calibru 23 - 25, lungi de 3,2 cm cu butuc din material plastic transparent. Injectrile trebuie efectuate n regiunile mai dense ale muchiului dorsal la o distan de aproximativ o treime din lungimea corpului pornind de la cap. Acul seringii se va introduce sub un unghi de 450 . La retragerea acului se va aeza un deget al operatorului pe neptur, timp de cteva secunde pentru a preveni contrapresiunea ce ar expulza soluia injectat. Locul injectrii este apoi uor masat. Injectrile se pot efectua fie prin ridicare parial din ap a reproductorului, fie prin sub ap n momentul n care reproductorii stau pasivi n targa de prelat. Dupa injectare, femelele sunt supravegheate cca. 72 de ore. Dupa aceasta perioada femelele se matureaz si pot ceda cu usurinta produsele sexuale. Cantitatea de sperm pe care o cedeaza masculii este foarte mica, chiar si dup stimulare hormonala si din aceasta cauza pentru fecundarea unei portii de icre sunt necesari 5-7 masculi, pentru a garanta obtinerea unui procent de fecundare ridicat. Atat in cazul metodei de obtinere a icrelor cu stimulare hormonala, cat si fara stimulare hormonala, din cauza nesincronizrii maturarii gonadelor mascule si femele, la masculi maturarea elementelor sexuale se face la inceputul perioadei de reproducere cand temperatura apei este de 4-5o C, iar icrele sunt prelevate de la femele de obicei la 9 10 - 12o C, apare necesitatea de sacrificare a ctorva masculi pentru extragerea testiculelor. Testiculele se zdrobesc pe o sita de nytal in vederea eliberarii spermatozoizilor din tesutul seminal, operatiune executata deasupra icrelor portionate in prealabil. Colectarea icrelor si fecundarea artificiala. Colectarea icrelor se face de la femele perfect mature din punct de vedere sexual. In momentul recoltrii icrelor, pestele se imobilizeaza, infsurandu-se cu un servet de tifon in jurul capului si a cozii, se tine de cap cu mana stnga, cu coada in jos, astfel ca in timpul mulgerii, icrele sa se scurga in vasul pregatit. (Fig.nr. 10)

Fig. nr.10 Colectarea icrelor de tiuc

13

Se maseaza usor abdomenul in directie longitudinala, de sus in jos, in lungul liniei axiale a abdomenului, impingandu-se icrele catre orificiul genital. De la fiecare femela se colecteaza o singura portie de icre; exemplarele a caror gonade sunt bine dezvoltate elimina usor si, in general , intreaga cantitate de icre din ovar: icrele remanente sunt in numar redus. Odata cu icrele se elimina si lichidul ovarian care contine gomesul , foarte necesar in procesul de fecundare, si care se colecteaza in acelasi vas cu icrele. La fel se procedeaz si cu masculii. Sperma se mulge direct peste icre sau se pipeteaza (folosind acelasi tip de pipet ca si la fecundarea crapului), dupa care se toarna peste icre. (Fig. nr. 11)

Fig. nr.11 Colectarea spermei n cristalizoare Incubarea pe rame, in bazinul de crestere postembrionara. Fa de tehnologia clasic n care icrele de tiuc erau supuse operaiunii de descleiere i incubate n incubatoare Zug- Weiss, la CCDP Nucet, s-a elaborat o metoda mai eficienta de incubare a icrelor, pe rame, in bazinele n care are loc si dezvoltarea postembrionara dupa perioada de incubatie. ( Fig. nr. 12). S-a folosit un tip original de rama (realizat la CCDP Nucet). Acest tip de rama, asemanator unei cutii deschise cu dimensiunile de 34 x 40 cm, marginile din lemn de brad de 5 6 cm, cu o fanta pe una din laturi, iar plasa de nytal pe care se intind icrele este prinsa in partea de jos. Fanta de pe latura ramei este foarte eficienta in urmatoarele doua cazuri : - dupa intinderea icrelor pe rama, cand surplusul de spermatozoizi si masa testiculara trebuie indepartate ; - dupa eclozare, cand larvele devin mobile, au posibilitatea sa paraseasca incinta de incubare (rama), fara alte interventii, marind astfel procentul de viabilitate al larvelor eclozate.

14

Fig. nr. 12 Incubarea icrelor de tiuc pe rame, n bazine de beton Temperatura optima de incubatie este de 8-10C, dar procesul de embriogeneza se desfasoar normal si la 6-7C sau 12-13C. Temperaturile peste de peste 13oC determina dezvoltarea anormala a embrionilor, provocand perturbari in morfostructura lor si in ultima instanta moartea. Cresterea larvelor. In prima etap de dezvoltare larvele pot fi crescute in cadrul statiei de incubatie, in bazine speciale de dezvoltare postembrionara, cu urmatoarele dimensiuni : 30 x 4 x 1m. Bazinele sunt prevazute la evacuare cu o incinta filtranta pentru a impiedica evadarea larvelor sau puilor. Alimentarea cu apa se face gravitational, din bazinul decantor, unde sunt fixate filtre, la fiecare coloana ce alimenteaza statiile de reproducere. Caracteristici ale dezvoltrii embrionare i larvare. Dezvoltarea embrionar. Perioada embrionar la tiuc dureaz 10-12 zile, la temperatura de 8 13 C. La 10C dezvoltarea este de 110 grade zile De o deosebit nsemnatate pentru dezvoltarea normal a embrionilor (ca i a larvelor de altfel) este concentraia de oxigen. Pentru 1 kg de icre embrionate, incubate la 12C, nevoia de oxigen crete de la 6 mg/cm/ora (n stadiul de morul 4 celule) pn la 129 mg/cm/or (n stadiul cnd dezvoltarea embrionar se apropie de sfrit 80% din totalul dezvoltrii). La sfaritul perioadei de incubaie, necesarul de oxigen este de 20 de ori mai mare. In dependen cu mecanismul respiraiei, n decursul dezvoltrii embrionare la tiuca, s-au stabilit 7 etape caracteristice, n care se evideniaz rolul micrii embrionului n procesul respiraiei:

15

Intr-o prim etap, la scurt timp dup fecundare, n stadiul de morul, mecanismul respiraiei se desfasoar la nivel intracelular. Procesul ptrunderii oxigenului prin membrana oului i a lichidului perivitelin n interiorul oului are un caracter pasiv de difuziune. In etapa a II-a, naintea nceperii pigmentrii oului, respiraia nu mai este intracelular, schimbul de gaze fiind asigurat de centrii specializai. In etapa a III-a, caracterizat prin conturarea embrionului, odat cu formarea centrilor nervoi, care intervin n mecanismul respiraiei, are loc i o intensificare a schimbului de gaze.

Fig. nr. 13 Icr cu embrion de tiuc Creterea proceselor metabolice se accentueaz n urmtoarele etape, odat cu perfecionarea mecanismelor care rspund de efectuarea lor (apariia eritrocitelor, formarea branhiilor), ca i de vigoarea micrii embrionilor (fig.13). De aceea, n legtur cu etapizarea proceselor de respiraie i necesarul de oxigen trebuie reinut c, datorit nevoii foarte mici de oxigen la puin timp dup fecundaie, icrele pot fi transportate cu uurin, excluzndu-se pericolul asfixiei, dar sunt deosebit de sensibile n etapele urmtoare, cnd nu se recomand s mai fie transportate. Pe masura dezvoltrii embrionului i a creterii consumului de oxigen, orice intervenie n timpul incubaiei poate fi fatal, ca urmare a unei carene de oxigen din ap. Dezvoltarea larvar. Dup eclozare, ramele de incubaie sunt scoase din bazin pentru a fi curate de icrele moarte, ulterior se trec printr-o baie de formalin, punnd cam o treime din ele din nou pe suprafaa bazinului pentru a folosi de suport larvelor proaspt eclozate. Ramele rmn 7 10 zile pe suprafaa bazinului de dezvoltare embrionar, pn cnd, larvele se desprind i ncep s noate cu uurin n momentul cnd noat cu uurin i ncep s se hrneasc cu hran exogen pot fi pescuite, transportate i lansate n bazinele ce urmeaz a fi populate.

16

Studiind etapele de dezvoltare a larvelor i a puilor de tiuc se constat c la ecozare, larvele au 7,5 mm (fig.14). Sacul vitelin este aproape sferic, prezint numeroase picturi de grsime, iar cuta nottoare inconjur corpul, pornind din treimea anterioar a prii dorsale pn n partea posterioar a sacului vitelin. notatoarele pectorale sunt rudimentare, la nceputul formrii lor. Gura este nefuncional. Branhiile nu sunt formate, iar respiraia este asigurat de ctre o reea de vase sanguine a venei ventrale de pe sacul vitelin. Consumul de oxigen este n general redus comparativ cu etapele urmtoare: 0,7 0,8 mg O2/g larve. Larvele sunt foarte debile, stau pe fundul bazinelor sau usor agate pe diferite obiecte cu ajutorul substanei lipicioase secretat n aceast etap. Cnd sunt deranjate, noat greu, prin micri ondulatorii ale corpului. Sunt indiferente la lumin; nutriia este endogen.

Fig. 14 Larve de tiuc n diferite etape de dezvoltare. a) dup eclozare (L=7,5 mm) ; b) dup circa 10 zile de la eclozare (L = 12-13 mm) ; c) dup circa 30 de zile de la eclozare (L = 15-18 mm), Eclozare, ritmul de cretere este destul de rapid. La vrsta de 2 3 zile (la 1012C), lungimea este de 9 10 mm, capul este desprins de sacul vitelin, care, micorndu-se, devine oval. Numrul de miotoame este de 58 60. Membrana nottoare este continu. Pigmentaia devine mai accentuat, mai ales pe partea ventral a corpului. Gura se observ cu uurin, datorit micrii maxilarului inferior. Apare hemoglobina. Respiraia se face prin branhii, dar i direct, sanguin, iar consumul de oxigen este de 1,9 mg O2/ora/g larve. S-au format primordiile organelor liniei laterale. Bine conturate sunt nottoarele pectorale. n aceast etap, larvele se prind mai puternic de obiectele din ap, avnd, n general, o poziie vertical. Sunt mai active, dar notul este tot greoi, ajutndu-se i de pectorale. La vrsta de 10 zile, lungimea este de 12 -13 mm, (etapa a 3-a de dezvoltare), iar greutatea de 12 13 mg. In aceast etap, glandele lipicioase

17

sunt foarte reduse, vezica notatoare s-a umplut cu aer, iar membrana notatoare s-a ascuit n zona codal unde a inceput formarea tesutului mezenchimatos. Reeaua de vase de pe suprafaa sacului vitelin s-a redus i respiraia se face exclusiv prin branhii. Consumul de oxigen creste: 4 -5 mg/ora/g larve. S-au format canalele semicirculare. Larvele nu mai stau fixate, ci se pot menine n grosimea stratului de ap, miccndu-se cu mai multa uurin. Hrnirea este nca endogen. De reinut c pn la aceast etap, intestinul are forma unui tub drept (etapa unisegmentar liniar). La vrsta de 11 12 zile (L = 13 14 mm) ncepe hrnirea mixt (endogen exogen), cnd rezervele viteline sunt aproape complet consumate. Pe msura dezvoltrii, membrana notatoare se reduce, astfel ca la vrsta de 15 zile (L = 15 mm) se mai observ doar n dreptul notatoarelor, la care formarea esutului mezenchimatos este avansat. Codala a devenit heterocerc, corpul este aproape n ntregime acoperit cu pigmeni cafenii. Acum ncepe diferenierea segmentelor tubului digestiv (anterior, mediu i posterior). Hrana este exclusiv exogen. Larvele noat cu uurina, meninndu-se n straturile superficiale sau n grosimea stratului de ap, notnd vertical sau orizontal. La vrsta de 25 de zile (L = 20 29 mm), radiile notatoare sunt formate, pigmentaia corpului s-a accentuat, iar forma capului capt trsturile specifice adulilor, datorit prelungirii botului. Ctre sfrsitul acestei etape, cnd ncep s se contureze caracteristicile perioadei de pui, larvele ncep s devin ihtiofage (hrnindu-se cu larvele altor peti), dar hrana este preponderent zooplanctonic. Micarea lor este foarte rapid, noat cu uurin la diferite orizonturi, dar continu s rman nc la zona de mal, la adncimi mici, cu o bogat baz trofic. Perioada larvar ia sfrit la vrsta de 30-35 zile (L = 13 37 mm), cnd ncep s se formeze solzii, iar coloraia corpului, mai nchis pe partea dorsal, prezint mici pete de culoare mai deschis. Puii noat cu repeziciune n adncimea apei, n zonele de mal, devenind preponderent ihtiofagi, dar dac larvele altor peti lipsesc se hrnesc foarte bine i cu organisme din plancton i bentos. Hrana i relaiile trofice. Larvele de tiuc au o perioad destul de ndelungat de hranire cu vitelus (9 10 zile), la temperatura apei de 8 10C. La vrsta de 10 11 zile (L= 10-12 mm), larvele ncep s se hrneasc activ mai nti nutriia fiind mixt (endogen exogen), apoi, n urmtoarea etap (dup 2 - 3 zile), exclusiv exogen. n etapa nutriiei mixte, hrana exogen este alctuit ndeosebi din microzooplancton. n luna aprilie, larvele de 10 - 12 mm se hrnesc cu cladocere mici (Sida sp., Diaphanosoma sp., Euricercus sp., Daphnia sp., Cyclops). n etapa nutriiei mixte, ca i n urmatoarele 2 - 3 etape, pna la vrsta de 16 - 17 zile (L = 17-18 mm), larvele au o hran preponderent planctonic . Structura preponderent zooplanctonic a hranei nu se modific nici dup resorbia total a rezervelor viteline, continund pn la vrsta de 20-25 de zile (L = 20-25 mm), cnd n concordan cu modificrile morfologice generale se petrece o schimbare fundamental. Larvele de tiuc ncep s vneze larvele altor specii sau chiar larve mai mici de tiuc, devenind ihtiofage. La nceputul acestei etape, larvele altor peti constituie un component mai mult sau mai puin accidental. Partea principal a hranei o constituie nc organismele zooplanctonice,

18

dar i numeroase larve de insecte din bentos. Pe msura dezvoltrii ns, caracterul de ihtiofagie se accentueaz. Aceast etap, n care larvele i apoi puii de tiuc se hrnesc cu nevertebrate din biocenozele planctonice i bentonice i cu puii altor peti pe care am putea-o denumi etapa de tranzitie, dureaz un timp ndelungat. Chiar i puii n vrst de 7080 de zile (L = 20-45 mm) se mai hrnesc cu larve de chironomide. Dar, dac la vrsta de 20 zile, puii de peti constituie elemente accidentale, cladocere sau copepode sunt din ce n ce mai rare. Deosebit de important este faptul c, structura hranei larvelor i puilor de tiuc este determinat i de structura biocenozelor bazinelor n care se dezvolt, de componena calitativ i cantitativ a populaiilor planctonice i bentonice. De exemplu, analiznd coninutul gastrointestinal al larvelor de 18-20 mm (n etapa cnd hrana este preponderent zooplanctonic) s-au n exclusivitate larve de peti, ceea ce denot abundena acestora. Sau, situaia invers, puii de tiuc de 75-80 mm (varsta 80-90 zile), care de regul n aceast etap devin tipic ihtiofagi, se hrnesc i cu alte organisme (cladocere, dar indeosebi larve de chironomide), dac larvele de peti sunt mai rare n biotopul n care se dezvolt. Cu toate acestea, pe parcursul dezvoltrii, la tiuc, se deosebesc 3 etape caracteristice de hrnire: 1) larvele (de 10 12 mm) sunt preponderent fitoplanctonofage; 2) larvele (de 15 20 mm) sunt preponderent zooplanctonofage; 3) larvele i puii (de 30 -80 mm) sunt preponderent ihtiofagi. Trebuie reinut ca larvele i puii de tiuc nu pot fi hrnii cu hran artificial. De aceea, ntreg procesul de cretere n condiii artificiale trebuie subordonat acestui caracter. In acest sens, pentru creterea larvelor i a puiilor sunt indicate trei metode: - creterea larvelor timp de 3-4 sptmnii n czi sau bazine speciale de cretere, n care sunt hrnite cu plancton. - creterea n heleteie speciale de pmnt, bogate n plancton, pn la vrsta de 6-8 sptamni; - creterea n heleteie mari, alturi de alte specii (ca specie secundar) pn la vrsta de o var. n primul caz, incintele de cretere trebuie amplasate n apropierea unui bazin bogat n zooplancton sau n care s se fi fcut o cultur de zooplancton. De aici se colecteaz planctonul care se distribuie larvelor. n cazul c hrana nu este suficient, ncepe s se manifeste fenomenul de canibalism (ndeosebi la vrsta de 3 - 4 sptmni). La sfritul celor 4 sptamni, n astfel de condiii, lungimea larvelor este de 3 - 5 cm. Pentru creterea n heleteie speciale trebuie s se asigure, de asemenea, o hran abundena. n acest scop se vor folosi heleteie cu fundul plat, puin adnci, n care n prealabil s-au introdus ngrminte minerale i organice. Pot fi folosite i heleteiele de dezvoltare postembrionar a larvelor de crap. La sfritul lunii aprilie se populeaz cu 10.000 25.000 larve/ha, obinnduse o producie de 2.500 5.000 ex. de 6 - 8 sptmni, avnd lungimea de 9 - 10 cm i o greutate de 5 kg. Creterea n heleteie de crap a larvelor de tiuc ca specie secundar este destul de rentabil. Se populeaz heleteele cu crap de cel puin dou veri, iar larvele de tiuc se introduc n etapa nutriiei exogene. Se presupune c puii de

19

tiuc vor gsi hrana i dup vrsta de dou luni (cnd devin ihtiofage), altfel creterea lor este nerentabil. n general, densitatea de populare este de 500 1.000 larve/ha, obinndu-se o producie de pui n primul an de 10 - 50 ex./ha, cu lungimea de 20 - 40 cm i greutatea de 200g. Ambalarea i transportul larvelor de tiuc Materialul biologic de populare n stadiu de pui predezvoltai, se transport n pungi de polietilen standard de 40 l, n care raportul ntre volumul de ap i volumul de oxigen este de 1/1. Densitatea puilor la o pung standard se stabilete funcie de durata transportului i temperatura aerului, conform tabelului de mai jos: Densitatea larvelor de tiuc la punga standard Temperatura 0 C 10 15 Lungime mm 15-20 20-30 15-20 20-30 Durata transportului 25 ore 50 ore 3000 2000 2000 1000 1500 1000 1000 500

10 ore 5000 4000 3000 2000

Transportul puilor n condiii optime se realizeaz cu maini izoterme dotate cu uniti de condiionare a temperaturii mediului incintei. n lipsa acestora transportul se poate realiza cu mijloace de transport obinuite cu respectarea urmtoarelor condiii: capacitatea mainii s fie corelat cu numrul pungilor ce urmeaz s fie transportate; incinta de transport s fie capitonat cu un numr suficient de materiale ( cartoane sau pturi ) care s mpiedice spargerea sacilor; s fie prevzut cu o rezerv de oxigen de minim 50l, rezerv dotat cu manometru i furtun i o rezerv de saci de 10% din numrul sacilor care se transport .

4. REGULI PENTRU VERIFICAREA TEHNOLOGIEI Sistemul tehnologic i tehnologia de reproducere artificial i cretere n perioada de dezvoltare posteembrionar a tiucii se va verifica n baza urmtoarei metodologii: Probe i verificri iniiale a instalaiei de alimentare a apei Verificarea modului de funcionare a instalaiilor de alimentare, distribuie i evacuare a apei, nu se admit pierderi de ap la etaneizrii, nu se admite

20

-

lipsa postamentului de protecie, nu se admite valori mai mari ale presiunii fa de valoarea de referin stabilit iniial; Verificarea etaneitii mbinrilor la instalaia de alimentare, nu se admit pierderi de ap la mbinri; Verificarea poziiei vanelor pe traseul de trecere a apei, nu se admit robinei nchii; Verificarea parametrilor chimici ai apei, nu se admite depirea valorii acestora fa de valorile prevzute prin Ord. 161/2006 - Ape de suprafa

Probe i verificri iniiale a modulelor specifice de reproducere i cretere - Verificarea etaneitii mbinrilor la instalaia de alimentare i evacuare a modulelor de reproducere i de cretere, nu se admit pierderi de ap; - Verificarea asigurrii meninerii nivelului constant de 1, 0 m i respectiv 0,8 m n cele dou tipuri de bazine, nu se admit nivele sub aceste valori; Verificri de lot A. Verificarea materialului de populare n momentul achiziiei - Verificarea densitii materialului n pungile standard de transport; nu se admite depirea normelor i condiiilor de transport prezentate; - Verificarea etaneitii pungilor de transport; nu se admit pungile care pierd ap sau oxigen; - Verificri n momentul populrii materialului piscicol - Verificarea valorii oxigenului dizolvat n ap din incinta de cretere; nu se admit valori mai mici de 7 mg/l - Verificarea temperaturii apei bazinului naintea deversrii materialului de populare; nu se admite deversarea direct a materialului n condiiile n care sunt nregistrate diferene ntre temperatura apei din punga de transport i apa bazinului; deversarea se va realiza dup o prealabil acomodare a materialului piscicol, la temperatura mediului acvatic; - Verificarea reactivitii materialului n momentul populrii; nu se admite ca la populare materialului piscicol s prezinte micri anormale, sau s intre n decubit lateral; C. Verificarea periodic a evoluiei materialului biologic. - Verificarea zilnic, pe ntreaga perioad de cretere a masei medii i lungimii totale a materialului piscicol; numrul minim de exemplare verificate - 15 ; - Verificarea permanent, pe ntreaga perioad de cretere, a strii sanitare a materialului piscicol;

5. METODE DE VERIFICARE Aparatura Pentru verificarea parametrilor chimici ai apei : - Oxigenometru;

21

- pH- metru; - Termometru; - Photometru - Balan analitic; Pentru verificri indicilor tehnologici ai materialului piscicol: - Ihtiometru; - Balan tehnic. Pentru verificarea strii sanitare a materialului piscicol: - Microscop cu putere de rezoluie de la cca 30 X la cca 1000X ( tip. ML 4M) Metode Metode chimice de determinare a calitii apei tehnologice Evaluarea valorilor parametrilor chimici ai apei tehnologice se efectueaz conform Ord. 161/2006: -oxigenul dizolvat se determin cu oxigenometru sau prin metoda Winkler, bazat pe oxidarea de ctre oxigenul molecular din ap, n mediu puternic alcalin, a hidroxidului de mangan bivalent la hidroxid de mangan trivalent, rezultatul fiind exprimat n mg/l; -pH-ul apei se determin n upH, utiliznd pH-metru cu afiare digital; -substana organic, clorurile (Cl-), azotaii (NO3-), azotiii (NO2-), amoniacul liber (NH3), ionul de amoniu (NH4+), alcalinitatea, dioxidul de carbon se apreciaz fotometric cu ajutorul reactivilor test Metode de determinare a strii sanitare a materialului piscicol Starea sanitar a materialului piscicol se evalueaz prin : - Examenul macroscopic pentru stabilirea diagnisticului acest examen este doar orientativ. Se examineaz cu ochiul liber sau cu lupa suprafaa corporal, ochii, branhiile, cavitatea intern. Prin acest examen pot fi decelate zonele modificate ca : necroze, chiti, hipo sau hipersecreii de mucus, hipertrofii sau atrofii ale organelor, modificri de culoare, parazii macroscopici. - Examenul microscopic are valoare de diagnostic. Probele se recolteaz direct din petele viu i constau din : - raclate, superficiale i profunde de pe suprafaa sau zona de examinat, de obicei branhii, tegument, mucoas intestinal ; raclatul se aeaz pe lam i se adaug o pictur de ap distilat peste care se preseaz lamela examinndu-se imediat la microscop ; - preparate strivite se execut din orice esut i const n strivirea unei mici poriuni din acesta ntre lam i lamel, astfel nct pelicula format s devin translucid i ct mai subire. Estimarea rezultatelor se efectueaz la nivel de cmp microscopic prin identificarea agenii etiologici. Metode de determinare a indicilor tehnologici la materialul piscicol - Mas medie - g / ex se determin gravimetric i const n cntrirea a cel puin a trei eantioane de cte 100 de indivizi, din valorile obinute calculndu-se valoarea medie ; - Spor individual de cretere g se determin gravimetric i const n cntrirea a cel puin trei eantioane de cte 15 indivizi n momentul

22

-

-

-

populrii, determinndu-se masa iniial, i a cel puin trei eantioane de cte 15 indivizi la finele perioadei de cretere, determinndu-se masa final, se aplic formula : (Wf Wi)/ N, unde - Wf, Wi masa medie final i iniial a lotului; N numrul de exemplare Rata zilnic a creterii - g/zi, se determin cu formula : (Wf Wi)/ T unde- Wf, Wi masa medie final i iniial a lotului T durata ciclului de cretere [zile] Rata specific de cretere - SGR - % zi se determin cu formula: SGR = (lnWf-lnWi)*100/T [%/zi], unde: Wf, Wi masa medie final i iniial a lotului T durata ciclului de cretere [zile] Procent de supravieuire - % - se determin cu formula: Nf/Ni x 100 unde : Nf i Ni numrul de exemplare iniial i final 6. MSURI DE TEHNICA SECURITII MUNCII

La punerea n funciune i exploatare a sistemului tehnologic Asamblarea instalaiilor, punerea n funciune i efectuarea probelor se va efectua numai de personalul calificat i instruit care s cunoasc bine construcia, tehnologia de lucru i funcionarea acestora ; Instalaiile se vor da n exploatare numai dup verificarea existenei i a corectei strngeri a tuturor organelor de asamblare demontabile; - Deservirea sistemului se va face numai de personal calificat i instruit care s cunoasc bine construcia, tehnologia de lucru i funcionarea sistemului; - Intreinerea i repararea sistemului se va face numai de personal calificat i instruit n acest scop. Se interzice persoanelor care deservesc sistemul s remedieze defeciunile acestuia. - naintea oricrei intervenii ( desfacere pentru curire, nlocuirea unor piese defecte, ntreinere sau reparaii) se va opri obligatoriu alimentarea cu ap a sistemului; - Operaiile de prelucrare a evilor (tiere, ndoire, fasonare etc.) vor fi executate pe bancul de lucru din ateliere. Se interzice executarea operaiilor de prelucrare a evilor pe schele de montaj, cu excepia ajustrii racordurilor ntre conducte, n vederea definitivrii poziiei de montaj; - Prelucrarea evilor i a prefabricatelor din materiale plastice se va efectua cu scule, dispozitive i utilaje n bun stare de funcionare i se vor respecta Normele specifice de securitate a muncii pentru prelucrarea cauciucului sintetic i a produselor macromoleculare; - Conductele vor fi fixate dup caz pe elemente de susinere ca: stelaje consolidate, console, supori etc. care s permit meninerea acestor conducte n poziia de pozare i vor fi consolidate cu brri demontabile sau alte tipuri de elemente de susinere. La aplicarea tehnologiei de reproducere artificial i cretere

23

-

La repartizarea personalului de lucru se va ine seama de aptitudini i de nivelul de cunotine profesionale ; Se va evita lucrul n asalt asigurndu-se necesarul de materii prime ; Personalul de deservire trebuie s poarte echipament de protecie : salopet, cizme de cauciuc ; Se va evita contactul epidermei cu substaner folosite la igenizarea incintelor de cretere ; La efectuarea analizelor chimice uzuale, determinarea oxigenului, pH ului se vor respecta Normele specifice de protecia muncii pentru laboratoarele de analize fizico chimice i mecanice Extras 36/1999

24

DOCUMENTAIE DE TRANSFER TEHNOLOGIC A TEHNOLOGIEI DE REPRODUCERE ARTIFICIAL A SPECIEI STIZOSTEDION LUCIOPERCA ALU PREZENTAREA TEHNOLOGIEI 1.3. Obiect

Tehnologia elaborat vizeaz reproducerea controlat a speciei Stizostedion lucioperca alu, n vederea refacerii populaiilor naturale i introducerii i extinderii ei n acvacultur. 1.4. Domeniul de aplicare

Potentialii beneficiari ai tehnologiei de reproducere sunt agentii economici care au ca obiect principal de activitate pescuitul si acvacultura. Tehnologia de reproducere controlat devine aplicabil in momentul in care exista baza logistica necesara desfasurarii intregului flux tehnologic si se are in vedere urmatoarele : - Loturi de reproducatori masculi si femele care s constituie baza biologic pentru realizarea reproducerii i obinerea descendenelor de diferite vrste; - Bazine pentru parcarea, prematurarea si maturarea reproducatorilor - Bazine de reproducere; - Statie de reproducere artificiala cu toate dotarile necesare : module parcare reproductori, platform pentru fecundare, aparate de incubatie caracteristice fiecarei specii, cazi si bazine de cresterea puilor in primele faze de dezvoltare postembrionara, minilaborator. 1.3. Cerinte de mediu inconjurator Tehnologia elaborate nu prezinta elemente poluante pentru mediu. Substantele folosite sunt omologate si acceptate in UE si nu afecteaza materialul biologic si nici parametrii chimici ai apei. Apa tehnologica rezultat se incadreaza in parametrii Ord. 161 / 2006 . Riscul evadarii materialului biologic este exclus, sistemul tehnologic fiind prevzut cu elemente de sigurant, site la incintele de incubatie si la conductele de evacuare a apei tehnologice. 2. CONDITII TEHNICE DE APLICARE A TEHNOLOGIEI 2.1 Sistem tehnologic pentru reproducerea artificial a speciei Stizostedion lucioperca alu n vederea reproducerii dirijat-artificial a alului, avnd n vedere particularitile reproductive ale speciei, trebuie s se asigure o baz tehnicomaterial specific i n concordan cu diferitele etape ale acestui proces.

25

Sistemului tehnologic se va dimensiona n funcie de capacitatea de producie stabilit de utilizator i va asigura prin capacitatea sa, reproducerea a minim 50 de familii pentru a asigura meninerea i conservarea biodiversitii genetice a speciei. n corelaie cu capacitatea de incubare sistemul tehnologic va fi constituit dintr-un, ansamblu de bazine de pmnt : bazine de iernat, bazine de parcarematurare, bazine de reproducere dirijat, module de parcare i de maturare a reproductorilor, module de incubare a icrelor embrionate i de parcarea a larvelor cu urmtoarele caracteristici tehnice: Bazinele de iernat Sunt bazine de pmnt, realizate n sptur, au de regul form dreptunghiular, suprafa cuprins ntre 1000 -2000 mp, maximum 3000 mp; adncimea este de cca. 2,0m i debitul de alimentare este de 3-5 l/sec/ha. Instalaiile de alimentare i de evacuare se dimensioneaz astfel nct inundarea i vidarea s se poat face n circa 3 ore. Odat cu popularea reproductorilor n bazinele de iernat se populeaz i material piscicol puin valoros, de talie mai mic, pentru a constitui hrana alului pn primvara, cnd se face separarea pe sexe a reproductorilor. Bazine de parcare - maturare. Sunt bazine mici, n care reproductorii de alu sunt meninui dup pescuitul de selecie din primvar, pn cnd temperatura apei atinge valori optime de reproducere (12-14oC). Aceste bazine au urmtoarele dimensiuni : (10 15) x (3 4) x (0,75 1) m i sunt amenajate din pmnt, cu alimentare i evacuare continu. Bazinele de reproducere. Sunt bazine cu suprafee mici (0.25 0,5 ha), cu alimentare i evacuare a apei permanent, cu fundul tare i adncimea apei de 0.70 0,9 m, mai rar pn la 1 1,2 m. n aceste bazine se fixeaz saltelele (cuiburile) pe care reproductorii urmeaz s depun. Saltelele de reproducere sunt confecionate din rame de lemn ptrate, cu laturile de 1,0 x 1,0 m, pe care se prinde o sit de nytal. Pe nytal sunt prinse mustile de salcie din loc n loc. Saltelele astfel confecionate se fixeaz direct pe fundul bazinului (fig. nr. 1).

Fig. nr. 1 Saltea pentru reproducerea alului

26

Fig. nr.2. Instalarea saltelelor de reproducere dirijat a alului

Fixarea saltelelor n bazinul de reproducere se face la 2-3 m de mal (pentru a putea observa momentul depunerii) iar distana ntre ele pe latura bazinului de 8-10 m (fig.2). 2.1.1 Descrierea i realizarea instalaiei de incubare a icrelor de alu Instalaia de incubare a icrelor de alu are ca scop realizarea condiiilor de optime de incubare a acestora. Se asigur alimentarea, meninerea unui nivel optim, tratarea icrelor i evacuarea apei individualizat din fiecare incubator Componena instalaiei Instalaia se compune din urmtoarele subansamble: a) Ansamblu pregtire incubaie; b)instalaie de alimentare incubatoare; c)incubator ; d)suport incubatoare; e)instalaie de evacuare.

Descrierea i realizarea instalaieia) Ansamblu pregtire incubaie Este constituit din: instalaie de alimentare cu ap tehnologic; tvi pentru fecundare ; rame suport pentru icre; plaform suport. Instalaia de alimentare cu ap tehnologic const dintr- o conduct metalic cu diametrul de 100 mm, racordat la conducta care alimenteaz staia de

27

incubaie, pe care sunt montai robinei la distante de 1,0 m, prin intermediul unor evi cu diametrul de 25mm. Tvile pentru ntinderea icrelor pe rame dup fecundare, sunt confecionate din tabl galvanizat i au dimensiunile de 180 x 67 x 6,5 cm. Avnd n vedere c alaul este o specie care, n mediul natural, depune icrele pe pietre i pe vegetaie acestea fiind lipicioase, pentru incubarea artificial se folosesc rame suport. Ramele suport sunt confecionate dintr-un cadru metalic din srm de inox cu dimetrul de 3 mm, pe care se fixeaz o pnz de nytal. Ramele sunt dreptunghiulare cu dimensiunile de de 50,0 cm lungime i 30,0 lime. n incubator se fixeaz pe suportul special, pe lungime, avnd la capete nite prelungiri n unghi drept , care ptrund n fanta suportului i le menin astfel n poziie vertical. Platforma suport este o construcie din profile metalice cu picioare din eav ptrat. Pe picioarele suportului sunt montate prin sudur rigle din profil L 40x20x2,5 pe care sunt aezate blaturile din lemn.

Fig. nr. 2 Ansamblu pregtire incubaie

b)Instalaia de alimentare Instalaia de alimentare este destinat alimentrii individuale a celor 40 de incubatore dispuse pe dou rnduri. Instalaia de alimentare se realizeaz de la o surs unic printr-o conduct metalic cu diametrul de 500 mm. Reglarea debitului se face prin intermediul unei vane. La intrarea n staie, conducta se ramific, pentru a realiza alimentarea independent a celor dou rnduri de incubatoare, n dou brae paralele, cu diametrul de 100mm, pe care sunt montai robinei care permite alimentarea optim a fiecrui incubator. Ptrunderea apei spre robinete se face printr-un inel asigurndu-se uniformitatea curgerii apei prin robinete. Alimentarea cu ap a incubatoarelor se realizeaz prin lateral, pe deasupra incubatorului, prin conducte metalice cu 25mm, n form curbat la captul superior, (n form de pip), iar reglarea debitului, prin intermediul unor robinete. La captul superior al evii de alimentare

28

se ataeaz, prin intermediul unui furtun, o eav metalic n form de T , latura lung orizontal fiind prevzut cu numeroase orificii de 2mm, care asigur distribuia apei pe ntreaga suprafa a incubatorului i oxigenarea suplimentar a apei tehnologice. Debitul de lucru n perioada de incubaie este 5-6 l / min. b)Incubator tip Nucet utilizat la incubarea icrelor de alu Incubatorul tip Nucet, este realizat dintr-o cutie metalic, cu dimensiunile 60 x 60 x 55 cm, n care se introduce un juvelnic confecionat din sit de Nytal cu ochiuri de 200 , dimensiunile 52 x 52 x 46 cm; juvelnicul este susinut de un stelaj metalic din fier beton 4mm, cu dimensiunile 56 x 56 x 55. Incubatorul mai este echipat cu un suport pentru fixarea ramelor reprezentat de un cadru metalic ptrat, cu latura de 51 cm. Pe dou dintre laturile opuse ale acestui suport sunt realizate fante cu deschiderea de 5mm, la distan de 2 cm, pe care sunt aezate ramele cu icre. Incubatorul are un volum de 180 l ap i o capacitate maxim de incubare de 1,5 kg icre. Evacuarea apei din incubator se realizeaz prin intermediul unui tu de evacuare cu 50 mm, situat pe latura opus alimentrii , n partea superioar. c)Suportul incubatoarelor este o construcie din profile metalice cu picioare din eav ptrat. Pe picioarele suportului sunt sudate lonjerone confecionate din eav ptrat pe care sunt montate prin sudur rigle din profil L 40x20x2,5 pe care sunt dispuse incubatoarele. d) Instalaia de evacuare Asigur evacuarea apei reziduale utilizat n procesul tehnologic. Instalaia este confecionat din tubulatur din PVC mbinat cu adeziv Codex i este construit din 2 jgheaburi nclinate care colecteaz apa evacuat din incubatoare, fixate pe cadrul instalaiei prin intermediul unor coliere.

29

Fig. nr 3. Incinte de incubare a icrelor de alu Tip Nucet

2.1.2 Descriere i realizarea modulului de parcare a reproductorilorModulul de parcare a reproductorilor este utilizat pentru reproductorii aflai n perioada de dinaintea depunerii pontei .

Componena unitii de parcare a reproductorilor.Modulul se compune din urmtoarele subansamble principale: a) Bazin paralelipipedic cu volumul util de 4,0 mc b) Instalaie evacuare i reglare a nivelului apei c) Instalaie de alimentare

Descrierea i realizarea unitii de parcare a reproductorilor Bazinul este de form paralelipipedic cu dimensiunile de 2 x2 x 1, 2 m i este confecionat din prelat plastifiat. Este asamblat prin lipire prin nclzire local i cu adeziv. Bazinul este montat pe un cadru din eav metalic cu 50, alctuit din 8 elemente cu lungimea de 2, 0 m care constituie partea superioar i inferioar a bazinului i alte 12 elemente pe prtile laterale la distane de 1, 0 m unul de altul, mbinate prin sudur, care asigur forma si rezistena bazinului. Att la partea superioar ct i la cea inferioar sunt lipite benzi suplimentare, care dubleaz peretele bazinului, prevzute cu orificii prin care trece

30

cte o frnghie de relon cu 12 mm care asigur prinderea bazinului de structura metalic. n lateralul bazinului, n partea opus alimentrii, este practicat un orificiu prelungit cu un cilindru de prelat cu diametrul de 100 mm, prin care trec elementele instalaiei de evacuare. nlimea bazinului este de 1,2 m. Montarea bazinului se realizeaz astfel : pe o platform plan i fr asperiti se aeaz plci din polistiren expandat cu grosimea de 20 mm care asigur protecia acestuia de eventuale agri, nepri sau deteriorri. Se asambleaz structura de susinere a acestuia i se prinde bazinul de prelat, cu ajutorul frnghiei de relon. Se monteaz n orificiul lateral al bazinului instalaia de scurgere i se fixeaz furtunul flexibil n inel pentru asigurarea nivelului dorit. Pe marginea superioar a bazinului, opus gurii de evacuare se fixeaz eava de alimentare n unghi de 45 0 fa de peretele bazinului.

Fig.nr. 4. Modulul de parcare a reproductorilor Instalaia de evacuare i reglare a nivelului apei din unitatea de parcare a reproductorilor are ca scop evacuarea apei uzate i reglarea nivelului tehnologic necesar al acesteia n bazin. Instalaia este alctuit dintr-un alimentrii un orificiu de scurgere cu diametrul de 100 mm. n acest orificiu se plaseaz o tubulatur ce va asigura preluarea surplusului de ap din incint realiznd n acest fel circulaia apei. Etanarea gurii de scurgere se asigur prin intermediul unui inel O Pentru suplimentarea etanrii se poate utiliza un adeziv sau mastic pe baz de silicon. Tubulatura de evacuare este executat din PVC flexibil avnd diametrul de 100 mm, mbinat cu adeziv de tip Codez.

31

Sistemul de reglare a nivelului apei n bazin este asigurat prin poziionarea tubului flexibil la nivelul dorit. Tubul flexibil este stabilizat de un inel prins de structura metalic a bazinului. Nivelul maxim al apei din bazin poate fi de aproximativ 1,0 m. Instalaia de alimentare cu ap a bazinului de parcare a reproductorilor de alu asigur un debit de ap de 35 l/min. Instalaia este construit din eav de PVC de 1 3/4II i un robinet. eava este poziionat la un unghi de 45 0 fa de peretele bazinului de parcare.

3. DESCRIEREA TEHNOLOGIEI alul este o specie a crei reproducere controlat este foarte dficil din cauza sensibilitii deosebite la manipulari i traumatisme, care duce la nregistrarea unor procente de mortalitate a reproductorilor de pn la 50%. n cadrul proiectului au fost elaborate dou tehnologii : - tehnologia dirijat artificial n care reproductorii n stadiul avansat de maturare sunt introdui n bazine de reproducere pentru depunerea icrelor pe saltele , dup care acestea sunt recoltate i incubate n staie, n incubatoarele Nucet. Prezint avantajul c reproductorii nu sunt stresai, prin manipulri suplimentare i traumatizai, n momentul recoltrii produselor sexuale, pierderile de sunt minime, dar i dezavantajul c se obin cantiti mici de icre, procente de embrionare reduse, iar embrionii sunt expui atacurilor diverilor duntori. -tehnologia artificial, n care dup evaluarea stadiului de dezvoltare al gonadelor, reproductorii sunt parcai n staia de incubaie, stimulai hormonal i obinerea produselor sexuale, fecundarea i incubaia se realizeaz n condiii controlate n totalitate. Prezint avantajul c pot fi utilizai reproductori femele cu gonade n stadiu mediu de maturare, dnd posibilitatea folosirii mai multor reproductori, procesul de recoltare a produselor sexuale, incubare i dezvoltare embrionar sunt controlate n totalitate ducnd la creterea eficienei reproducerii i la obinerea unei descendene mai numeroase. Tehnologia de reproducere dirijat - artificial i cretere a larvelor speciei Stizostedion lucioperca presupune parcurgerea urmtoarelor faze: Asigurarea loturilor de reproductori evaluarea caracterelor fenotipice i determinarea sexului; parcarea, prematurarea reproductorilor evaluarea strii reproductive; introducerea n bazine de reproducere; depunerea pontei; prelevarea saltelelor; incubarea produselor sexuale n incinte special amenajate; ambalarea i transportul puilor Tehnologia de reproducere artificial i cretere a larvelor Stizostedion lucioperca presupune parcurgerea urmtoarelor faze: Asigurarea loturilor de reproductori evaluarea caracterelor fenotipice i determinarea sexului; speciei

32

parcarea, prematurarea reproductorilor maturarea reproductorilor evaluarea strii reproductive; stimularea maturrii celulelor sexuale; colectarea produselor sexuale; fecundarea; incubarea produselor sexuale n incinte special amenajate; ambalarea i transportul puilor

Primele patru etape respectiv: asigurarea loturilor de reproductori, evaluarea caracterelor fenotipice i determinarea sexului;parcarea, prematurarea reproductorilor i evaluarea strii reproductive, sunt comune i se desfoar identic n ambele tehnologii. Dup evaluarea strii reproductive , femelele aflate n stadiu avansat de maturare (IV) sunt selecioanate i introduse n bazinele de reproducere dirijat, pentru depunerea icrelor pe saltele, iar cele aflate n stadiul III sunt introduse n madulele de maturare din staia de incubaie, pentru a fi stimulate hormonal. Asigurarea lotului de reproducatori. Reproductorii de alau necesari staiilor de producere i cretere a puilor provin att din mediul natural, prin capturarea acestora primvara devreme, ct i din loturi constituite i crescute n acest scop n fermele piscicole. Capturarea se va realiza cu unelte care s nu provoace rniri sau traumatisme, alul fiind deosebit de sensibil la cele mai mici lovituri, manipularea lui la scoaterea din vre, nvoade, prostovoale, trebuie s se fac cu mare grij. Transportul de la locul de capturare, la staiile de reproducere artificial, se realizeaz n hidrobioane, apa trebuie s fie limpede i bine aerat (se folosesc instalaii de oxigen), iar temperatura s fie de 7 8oC. In vasele de transport se adaug o soluie anti stress Propiscin n cocentraie de 0,02 ml/ l Evaluarea preliminar a reproductorilor Reproductorii de alu vor fi examinai imediat dup pescuit pentru evaluarea caracterelor fenotipice i determinarea sexului. Sunt selecionai reproductori cu lungimea de 30 -50 cm i greutatea de 1,0-3,0 kg. Reproductorii trebuie s prezinte integritate corporal, caliti biologice i o stare fiziologic bun. Nu se admit exemplare lovite sau afectate de boli parazitare sau infecioase. Determinarea sexului n aceast perioad se realizeaz dup caracterele morfologice de dimorfism sexual. Femelele sunt n general de talie mai mare dect masculii de aceeai vrsta, au abdomenul mai proeminent, iar orificiul genital este inflamat i zona moale la palpare. Maturarea reproductorilor n luna martie, cnd temperatura apei se situeaz, n mod constant n jurul valorii de 7-8 0C, reproductorii de alu sunt pescuii din bazinele de iernare i sunt transferai n bazinele de maturare separai pe sexe, n care se asigur curent continuu de ap. Separarea femelelor si masculilor pe sexe se face cu mare grija, n loturi ct mai omogene si sunt mentinuti n bazinele de maturare, pentru

33

stabilirea momentului optim de prelevare a icrelor. ntr-un bazin de maturare se introduc , n general, 30-40 de reproductori. Reproductorii sunt inui n aceste bazine pn n momentul n care apa atinge Dup acest interval temperatura optim pentru reproducere 10-120C. reproductorii vor fi evaluai sub aspectul strii de maturare a gonadei. Evaluarea strii reproductive Metoda de evaluare att a stadiului de maturare ct i a coeficientului de polaritate presupune colectarea a minimum 5 ovocite din partea posterioar a ovarului prin practicarea unei puncii. Ovocitele colectate se vor fierbe ntre 5 i 10 minute pentru fixarea poziiei nucleului i apoi se vor rci prin aezarea vasului ntr-o incint cu ghea. Pentru a determina poziia nucleului sau vezicii germinative, ovocitul se va seciona exact de-a lungul axei polului animal-vegetal. Dup aceast operaiune poziia nucleului va fi observat i evaluat . Pentru stabilirea coeficientului de polaritate la aceeai prob la care s-a determinat stadiul de maturare se msoar la stereomicroscop distana de la partea superioar a veziculei germinative (A) la polul animal i distana de la polul vegetal la cel animal (B) (Figura. nr.5 ). Coeficientul de polaritate se calculeaz folosind formula c =

A unde B

c - coeficient de polarizare A distana de la vezicula germinal la polul animal B - distana de la polul animal la polul vegetal Pentru determinarea cu acuratee a coeficientului de polarizare sunt necesare efectuarea mai multor msurtori stabilindu-se o medie. Valori mici ale coeficientului indic un grad mare de polarizare al ovocitului deci un stadiu IV de maturare avansat. Schema de evaluare a coeficientului de polarizare a ovocitei. Fig. nr. 5

Introducerea n bazinele de reproducere;

34

Dup evaluarea strii reproductive femelele care sunt n stadiul avansat de maturare sunt selecionate i introduse n bazinul de reproducere, n care sunt fixate saltele. De asemenea, sunt lansai n bazin i masculii care la o masare uoar a abdomenului apar cteva picturi de sperm. ntr-un bazin de un hectar se lanseaz 10-12 femele i tot atia masculi. Lotul trebuie s fie ct mai omogen alegndu-se reproductori de talie apropiat. In 10 24 de ore se formeaz deja perechile de reproductori n bazin, i se poate observa dup mal, prezena lor deasupra saltelelor, acest lucru fiind un indiciu c se apropie momentul depunerii pontei.

Fig nr. 6 Mascul i femel de alu, n stadiu avansat de matuare Depunerea pontei are loc n primele ore ale dimineilor nsorite. Dimineaa i seara se face rondul bazinului pentru a observa saltelele pe care a fost depus ponta. Stabilirea momentului de depunere a icrelor se face de pe mal, prin urmrirea perechilor de reproductori, care stau deasupra cuiburilor de pe saltele. Cuiburile pe care sunt icre se pot observa cu uurin prin transparena apei, fiind instalate aproape de mal, la adncimi de 70-80 cm. n plus, masculii continu s stea pe saltea, sau n apropierea ei, pentru a pzi ponta de eventualii duntori. Cuiburile cu icre, se scot din bazinul de reproducere pe mal, se desprind cu atenie de pe saltele i se transport n trgi cu ap n staia de reproducere (fig. 7). Este foarte important ca icrele s fie recoltate ct mai repede dup depunere, astfel nct s se evite atacul ciupercilor i al duntorilor din bazin . De asemenea, operatia de scoatere din ap a saltelelor , desprinderea cuiburilor i transportul lor n staie n vederea introducerii n incubatoare, trebuie s se realizeze n linite pentru a nu stresa reproductorii care nu au depus nc ponta i cu mare atenie icrele fiind foarte sensibile.

35

Fig. 7 Desprinderea cuiburilor cu icre de alu Incubarea icrelor de alu. Cuiburile de alu se pun cu grij n juvelnicele de nytal din incubatoarele Nucet i se asigur alimentarea cu ap permanent , la un debit de 8l/min. n funcie de stadiul de dezvoltare embrionar, la 12 - 24 de ore dup introducerea la incubaie, se face tratamentul icrelor cu formalin (concentraie2 ml : 1 l ap), timp de expunere 10 - 15 minute (n funcie de temperatura apei). Operaiunea se repet la 12 ore, pn cnd, coada embrionului nconjoar aproape n ntregime sacul vitelin, i se observ pulsaiile inimii.

Fig. nr. 8 Icre embrionate de alau lipite pe musti de salcie La temperaturi ale apei n jur de 10oC, dezvoltarea embrionar dureaz 11-12 zile, iar la 15 16oC, 5 - 7 zile. Procentul de embrionare este n jur de 60 - 75%, iar cel de eclozare de peste 50%. Dup eclozare, se scot mustile de salcie din juvelnice . Avnd n vedere c larvele de alu sunt sensibile i noat greoi din cauza sacului vitelin voluminos, se introduc 2 3 rame curate pentru ca larvele de alu s se sprijine i s se odihneasc.

36

Schema cadru a tehnologiei de obinere prin reproducere artificial a descendenilor speciei Stizostedion lucioperca este prezentat n figura nr 9 Fig nr. 9

Schema fluxului tehnologic de obinere prin reproducere artificial a larvelor de aluCaptura reproductorilor Din mediul natural. Asigurarea loturilor de reproductori

Evaluarea preliminar a reproductorilor Aprecierea strii fiziologice i de ntreinere

Parcare reproductori Bazine din pmnt 2000-3000 mp

Condiii de parcare Debit de alimentare de 3-5 l/s/ha Nivel de oxigen nu mai mic de 5 mg/l

Testarea opional a reproductorilor Evaluarea stadiului de maturare a gonadelor

Stimulare hormonal Injectare cu extract hipofizar

Maturare Module de maturare Debit de alimentare 8-10 l/s/ha

Femele Prin masare uoar

Prelevare produse sexuale

Masculi Prelevare cu seringa prevzut cu tub tygon sau sacrificare

Fecundare Cu sperm proaspt prin metoda uscat . 5ml sperm la 1 l icre.

Incubare Incubare Incubatoare tip Nucet

Tratamente icre embrionate

Eclozare larve

Parcare

Ambalare

37

Stimularea hormonal La stabilirea dozelor se au n vedere urmtorii factori : - temperatura apei; - stadiul de maturare al reproductorilor, - tipul de substane homonale utilizate. Pentru stimularea hormonal a alului se va folosi extract de hipofiz de crap. Cantitatea de hormon injectat va depinde de greutatea reproductorului, greutate ce trebuie stabilit prin cntrire pentru fiecare exemplar n parte. Pe baza greutii petelui se va calcula doza ce urmeaz s fie administrat. Femelele sunt stimulate cu 5-15 mg/kg corp, in functie de gradul de maturare, iar pentru masculi se administreaza 35 mg/kg corp. Injeciile hormonale se vor administra cu o sering de 1,0-3,0 cm3 cu ace de calibru 23 - 25, lungi de 3,2 cm cu butuc din material plastic transparent. Injecia se efectueaz fie n muchiul dorsal , fie la baza nottoarei pectorale. Injectrile se pot efectua prin ridicare parial din ap a reproductorului, fie sub ap n momentul n care reproductorii stau pasivi n targa de prelat. Dupa injectare, reproductorii separai pe sexe, sunt introdui n czi, pentru maturare, n staia de incubaie. n perioada de maturare temperatura optim este de 14-160C, iar cantitatea de oxigen dizolvat de minim 6 mg /l. Ovulaia se poate produce dup cca. 48 de ore dup administrarea injeciei. Colectarea icrelor si fecundarea artificial. Colectarea icrelor se face de la femele perfect mature din punct de vedere sexual. In momentul recoltrii icrelor, pestele se imobilizeaza, infsurandu-se cu un servet de tifon in jurul capului si a cozii, se tine de cap cu mna stnga, cu coada in jos, astfel ca in timpul mulgerii, icrele sa se scurg n vasul pregtit. (Fig.nr. 9)

Fig. nr.9 Colectarea icrelor de alu

38

Se maseaz uor abdomenul in directie longitudinala, de sus in jos, in lungul liniei axiale a abdomenului, impingandu-se icrele catre orificiul genital. De la fiecare femela se colecteaza o singura portie de icre; exemplarele a caror gonade sunt bine dezvoltate elimina usor si, in general , intreaga cantitate de icre din ovar: icrele remanente sunt in numar redus. De la o femel de alu se recolteaz o cantitate de icre cuprins ntre 150 i 200 ml. La fel se procedeaz si cu masculii. Sperma se mulge direct peste icre sau se recolteaz cu ajutorul unei seringi prevzut cu tub tygon de 5-6 cm. Tubul se introduce ncet n orificiul urogenital. La exemplarele la care spermiaia este complet, sperma ncepe s urce n sering n momentul retragerii pistonului. Fecundarea Icrele colectate de la o singur femel se fecundeaz separat cu amestec de sperm provenit de la 5-6 masculi. Cantitatea de sperm folosit este de 2ml pentru o porie de 200 ml icre. Fecundarea se realizeaz prin metoda uscat, sperma distribuindu-se uniform, n masa icrelor. Amestecul este omogenizat, dup care se adaug lichidul fecundant . Fig. nr. 10

Fig. nr.10 Fecundarea icrelor de alu

Timpul de fecundare este de 3 -5 minute. Este necesar ca pe parcursul acestei perioade s se intervin de una, dou ori pentru agitarea uoar a icrelor. n acelai timp sunt pregtite tvile pentru fecundare , n care se aeaz ramele suport de nytal Dup scurgerea celor trei minute, timp n care mobilitatea spermatozoizilor scade, i cnd procesul de fecundare se consider ncheiat, icrele sunt dispersate pe ramele suport din nytal. Avnd n vedere c icrele de alu sunt lipicioase , vor adera pe pnza de nytal. La dispersia acestora pe rame, trebuie s se acorde o atenie deosebit astfel nct, acestea s nu se aglomereze, pentru a permite

39

oxigenarea uniform. Ramele cu icre sunt lsate n tvi cca 5 minute, pentru fixarea definitiv a icrelor pe pnza de nytal. Incubarea icrelor. Incubarea icrelor va ncepe odat cu introducerea i fixarea ramelor n incubatorul Nucet. Durata perioadei de incubaie este variabil n funcie de temperatura medie zilnic : 11 zile la 13C, 4-5 zile la temperaturi de 14-15 C Pentru alu temperatura optim de incubaie este de 150 C. Durata medie a embriogenezei la aceste valori ale temperaturii apei este n jur de 5 - 6 zile. Aceste temperaturi ofer bune condiii de dezvoltare embrionar i nu nlesnesc dezvoltarea fungilor. Pe durata embriogenezei debitul de alimentarea al incintelor de incubaie se va corela cu necesitile fiziologice ale embrionului n diferitele lui stadii de dezvoltare. Debitul de alimentare al incubatoarelor pn la faza de gastrulaie a icrei va fi reglat de aa manier nct s creeze unui curent de ap care s nu produc deslipirea icrelor de pe rame (3- 4 l/min). Dup gastrulaie, incubatorul se alimenteaz cu un volum de ap mai mare (5 7 l/min.) Un factor important ce trebuie asigurat i controlat pe perioada de dezvoltare embrionar este consumul de oxigen care pe perioada embriogenezei crete pe msura dezvoltrii embrionului. Pe parcursul embriogenezei nivelul oxigenului n incintele de incubare va fi meninut la valori de minim 5 6 mg/l. Controlul fungilor pe perioada incubaiei se va realiza prin mbierea icrelor, cu soluie de formalin, timp de 15 minute. Primul tratament se va realiza la 24 de ore de la fecundare , iar urmtoarele la intervale de 12 ore pn n momentul apariiei veziculelor optice. Pe perioada incubaiei se va stabili supravieuirea n diferite faze ale dezvoltrii embrionare. Procentul de fecundare se va stabili la cca. 48 de ore de la fecundare, ceea ce corespunde stadiului de gastrul. Pentru determinarea procentului de fecundare icrele din incubator se examineaz fiecare ram stabilindu-se prin metoda caroiajelor, prin numrare direct, numrul de icre normale. Dup eclozare, ramele se scot din incubator, iar larvele sunt inute n incubatoare, pn n momentul resorbiei sacului vitelin. Caracteristici ale dezvoltrii embrionare si larvare Avnd n vedere faptul c, alul este o speciei foarte sensibil n primele etape de dezvoltare, reuita reproducerii concretizat n procentul de viabilitate a larvelor depinde n mare msur de cunoatere particularitilor de dezvoltare embrionar i larvar n vederea stabilirii interveniilor tehnologice adecvate. Dezvoltarea embrionar. Durata procesului de dezvoltare embrionar este influenat de temperatura apei n care are loc incubaia: 11 zile la 13C , 4-5 zile la 15 16C La puin timp dup fecundare, diametrul icrei variaz ntre 1,2 si 1,4 mm. Dup 48 ore, n condiiile dezvoltrii embrionare la 15-16C, embrionul se fl n stadiu de gastrul. Dup 72 de ore se observ formarea corpului embrionului (la

40

care se disting 21 de miomere) i care nconjoar pe jumatate sacul vitelin; ochii sunt puin pigmentai, se observ inima i circulaia sanguin. Dupa 5 zile se constat o cretere vizibil a embrionului. Corpul nconjur aproape o dat i jumtate sacul vitelin; se observ circa 34 de miomere. Ochii sunt pigmentai, au culoarea cafenie. Se disting primordiile orificiului nazal, inima i circulaia sanguin. Din timp n timp, embrionul se zvrcolete n interiorul icrei. Dup 7 zile, n preajma eclozrii, embrionul nconjoar de dou ori sacul vitelin. Ochii sunt puternic pigmentai. In zona capului, pe sacul vitelin i mai puin pe restul corpului, se observ mici cromatofori cafenii. Se mai observ tubul digestiv, inima i sngele de culoare roz i cuta notatoare. Dac pe parcursul dezvoltrii embrionare intervine o schimbare brusc a condiiilor de mediu, embrionii pot muri n proporie de 90%. Efectul este cu att mai puternic cu ct embrionii se afl ntr-un stadiu naintat de dezvoltare. Incubandu-se icre fecundate la 12-13C, timp de 3 zile (s-a depasit stadiul de gastrul, obsevnd nceputul formrii corpului embrionului), care apoi au fost introduse n acvarii, la temperatura de 22-23C, s-a observat o accelerare a dezvoltrii embrionare. Dup circa 10 ore de la incubaie, n noile condiii, embrionul era format, nconjurnd mai mult de jumtate din sacul vitelin i se puteau numra aproximativ 20-21 de miomere. Ochii erau formai, fr a fi pigmentai. A doua zi, adic la 24 ore dup ce icrele au fost introduse n acvarii (la aproximativ 5 zile de la fecundaie), 95% din embrioni au eclozat (fig. 11). Eclozarea a avut loc n stadiul n care embrionii nconjurau aproape n intregime sacul vitelin, ochii erau foarte puin pigmentai, iar sacul vitelin i corpul lipsite de pigmeni; deci, o dezvoltare embrionar incomplet. Larvele nu au supravieuit mai mult de 10 zile, cu toate c au avut condiii bune de mediu.

Fig.nr.1 Icr inainte de eclozare Dar nu numai variaiile de temperatur, ci i insuficiena concentraiei de oxigen afecteaz dezvoltarea embrionar. Dac n perioada de embriogenez (ncepnd din stadiul de gastrul) se provoac o caren progresiv a concentraiei

41

de oxigen din ap, se obin embrioni cu importante fenomene de degenerescen (acefalie, microcefalie, ciclopie, deformarea coloanei vertebrale) Dezvoltarea larvar. Larvele de alu sunt deosebit de sensibile la variaiile conditiilor de mediu i supravieuiesc ntr-un procent mic. Prin creterea experimental a larvelor n condiii artificiale, s-a dovedit c cerinele ecologice ale acestora sunt deosebit de specializate i lipsa unui singur element din complexul de factori mediali necesari unei dezvoltri normale afecteaz fundamental vitalitatea larvelor. La scurt timp dup eclozare (1-2 ore), larvele au 3,90-4,10 mm lungime, corpul este transparent, alburiu glbui, cu mici cromatofori negri, alctuit din 3941 miomere. Gura are aspectul unei fante. Ochii sunt pigmentai, culoarea - cafeniu nchis, aproape neagr. Sacul vitelin este oval i prezint o pictur de grsime. Pe partea dorsal, ncepnd din prima jumtate a corpului, se observ cuta notatoare, care se prelungete pe partea ventral, pn n dreptul sacului vitelin. nnottoarele pectorale sunt membranoase. Prin transparen se observ intestinul, care este foarte subire. Larvele noat greoi i au tendina de a se lsa pe fundul juvelnicului, apoi se ridic n orizontul superficial printr-un not sacadat. Uneori ajung pe fundul apei doar pentru o clip, continund s noate cu mici pauze. La vrsta de 3 zile, lungimea larvelor este de 5 5,25 mm, sacul vitelin este nc prezent, dar cu dimensiuni reduse fa de etapa precedent. Se observ mugurii branhiali (fr a fi acoperit de opercul), iar gura este funcional. Pigmentaia de pe partea ventral a corpului se accentueaz. Prin transparena corpului, pe material viu, se observ creierul i primordia coloanei vertebrale. Se pot numra 45 - 46 de miomere, iar intestinul se poate distinge. Larvele noat cu uurin, dar au nc tendina de a se scufunda. De la varsta de 7 - 8 zile se constat un ritm de cretere mai lent, la 9 zile, lungimea este doar de 6,5 - 7 mm, deci o cretere de 2 mm n 4 zile. Larvele sunt transperante, n schimb pigmentaia s-a extins i n zona dorsal a corpului. Nu se mai observ rmie ale sacului vitelin i nici picturi de grsime. Membrana nottoare este prezent i ncep s se formeze radiile nottoarelor dorsale, anala i caudala. Gura este bine dezvoltat i mobil. Intestinul este evident curbat ventral n zona formrii stomacului, iar prin transparen se observ mici striaii n peretele intestinal. Aceasta este etapa de trecere la hrnirea activ, deoarece au fost gsite primele organisme n coninutul gastrointestinal. La vrsta de 15 - 16 zile, larvele au 10 - 12 mm. Corpul este mai puin transparent, glbui. Petele pigmentare cafenii acoper aproape toat suprafaa corpului. Mai prezint nc membrana notatoare, care este ns sensibil redus, fiind mai dezvoltat n zona nottoarelor dorsale i caudale, unde au nceput s se observe primordiile radiilor. Gura, ventral, este bine dezvoltat, iar pe maxilarul inferior (privit la binocular) se observ mici dini, la nceputul formrii lor. Intestinul se caracterizeaz prin accentuarea curburii. Larvele not cu uurin, cantonnduse n zonele cu adncimi mici i cu vegetaie acvatic bogat n baz trofic. La vrsta de 26 - 30 de zile, larvele se gsesc n etapa de trecere la perioada de pui, predominnd caracteristicile acesteia din urm perioade. Lungimea este de 20 - 23 mm, corpul este netransparent, iar pigmentaia mai dens pe partea dorsal

42

a corpului. Lipsete cuta notatoare, iar notatoarele sunt formate toate. Inoat cu repeziciune, cantonndu-se la adancimi mai mari, dar tot n apropierea malului. La 45 de zile, lungimea variaz ntre 38 - 40 mm; au corpul acoperit cu solzi, iar coloritul i forma corpului sunt asemntoare adulilor. Inoat cu repeziciune, fiind cantonate att la adncimi mici (n zona ntinsurilor), ct i la adncimi mari, dar n zone bogate n organisme planctonice i bentonice. Dezvoltarea tubului digestiv n primele etape i rolul su n supravieuirea larvelor. Procentul cel mai mare de mortalitate la larvele de alu se nregistreaz dup consumarea rezervelor viteline, n etapa de trecere la hrnirea exogen i supravietuiesc numai acei indivizi care s-au adaptat la hrana exclusiv exogen. n msura n care tubul digestiv se dezvolt normal, avnd capacitatea de a digera hrana exogen, larvele depesc etapa critic. n etapa de trecere la nutriia mixt, secreiile gastrice apar ca o consecin a unor excitaii mai ndelungate a peretelui intestinal de ctre organismele ptrunse n intestin. Din observaiile noastre rezult c, n aceast etap, algele, rotiferele sau naupliile din intestin nu sunt digerate, chiar dac se gsesc n partea terminal, a intestinului n momentul eliminrii lor. Din punct de vedere morfologic, tubul digestiv este drept, cu o deschidere foarte mic a lumenului, iar peretele intern al intestinului este cptuit cu un strat de celule cilindrice care formeaz mici pliuri. La vrsta de 8-9 zile (L = 7 mm), n bioecologia larvelor se petrec schimbri importante. Rezervele viteline sunt total consumate, hrnirea se efectueaz doar cu organisme din mediul extern. Tractusul digestiv are tot form de tub drept (3,5 mm lungime), dar n partea anterioar se observ o uoar curbur vertical. Aceasta marcheaz nceputul formrii segmentelor, aa cum au fost descrise la crap (B r e z e a n u, 1972 a), cu diferena c n partea anterioar a segemntului anterior se va forma stomacul. Hrnirea este intens, baza trofic fiind alctuit n principal din zooplancton. La vrsta de 20 - 25 de zile (L= 17 - 19 mm, ) la nivelul segmentului mediu al intestinului, imediat dup esofag, ncepe s se formeze stomacul. La nceput se observ o usoar dilatare a segmentului anterior, care apoi se dezvolt, nscriind o cretere ctre partea posterioar. La vrsta de 27 - 30 de zile (L= 22-25 mm), stomacul apare ca un organ bine individualizat, n prelungirea segmentului esofagian, ca un sacule oval, formnd ramura descendent (cardial), cu orificiul de intrare cardia. n partea anterioar comunic cu intestinul prin orificiul piloric, formnd ramura ascendent sau piloric. Tot aici se formeaza apendici pilorici (mai nti 2 - 3, apoi la vrsta de 45 - 50 de zile - 5 - 7). Epiteliul peretelui intern formeaz numeroase pliuri dispuse n zigzag, foarte elastice, stomacul putndu-i mri capacitatea de 2 - 3 ori. La exemplarele de 25 - 30 mm, stomacul lipsit de hran are 3-4 mm lungime i 1 - 2 mm grosime, iar la cele cu stomacul foarte plin dimensiunile se dubleaz. n epiteliul mucoasei stomacale se gsesc numeroase celule cu rol glandular, secretnd fie mucilagii, fie fermeni (pepsina este caracteristic pentru rpitori). Coninutul stomacal macerat este evacuat n intestin, acelai coninut gsindu-se i n apendicii pilorici. Cu totul deosebit este dezvoltarea tubului digestiv la larvele care nu s-au adaptat la hrnirea exogen. Astfel, chiar la vrsta de 15 - 16 zile, larvele care supravieuiesc au intestinul tot n form de tub drept, cu un lumen foarte mic, lipsit de pliurile peretelui intern. Cele cteva rotifere sau cladocere din coninutul

43

gastrointestinal dovedesc c larvele au o nutriie anormal. Atrofia intestinului se poate datora unor cauze de natur intern (motenirea unor anomalii din stadiile anterioare de dezvoltare care au ajuns la o stare acut) sau de natur extern (lipsa hranei adecvate n etapa de trecere la nutriia mixt). Hrana i relaiile trofice ale larvelor i puilor. Important la alu este c n etapa de trecere de la nutriia endogen la cea exogen, spectrul ecologic al larvelor este foarte limitat, cerinele organismului fa de condiiile de mediu fiind deosebit de specifice, iar asimilarea lor foarte anevoioas. Aceast hipersensibilitate explic ntr-o anumit msur supravieuirea sczut a larvelor; este ceea ce se inelege prin perioada critic. Trebuie subliniat c dezvoltarea general a larvelor, modul de hrnire, componena calitativ i cantitativ a organismelor nutritive sunt fundamental influenate i de biotopul n care vieuiesc. Observnd larve vii la microscop se constat c n etapa nutriiei endogene, maxilarul inferior este imobil, gura nu execut micri de nghiire, iar intestinul este foarte subire, ca un tub, astupat. Pentru a se hrni este necesar ca mai nti gura s devin funcional. n prima etap, ptrunderea hranei este ntmpltoare i nici fenomenul de digestie nu are loc. n ziua a 3 - a sau a 4 - a de via, algele unicelulare sau rotiferele foarte mici care se gsesc n intestin nu sunt digerate, chiar dac se gsesc n partea posterioar a intestinului n momentul eliminrii lor. Aceasta pseudohrnire exogen dureaz pn la vrsta de 5 zile, timp n care se dezvolt i se perfecioneaz att aparatul bucal, ct i restul segmentelor tubului digestiv. n aceast etap, n coninutul gastrointestinal au fost identificate speciile: Oscilatoria sp., Euglena oxiuri, Closterium sp., Cosmarium sp., Pediastrum duplex, Gomphonema sp. De la vrsta de 6 zile (L= 5,5 6 mm), n coninutul gastrointestinal al larvelor s-au identificat alge (Oscilatoria sp., Merismopedia punctata, Euglena oxiuri, Cosmarium sp., Pediastrum sp., Navicula sp.,) rotifere (Brachionus urceolaris, Br. caliciflorus, Br. angularis, Lecane hamata, L. luna), nauplii i ou de rotifere. n aceast etap, larvele mai au rezerve viteline, astfel nct nutriia este mixt (endogen exogen), dar judecnd dup numrul i aspectul organismelor din intestin, ele sunt adaptate la nutriia exogen. La vrsta de 9 zile ( L = 6 - 6,75 mm), hrana este fitoplanctonic zooplanctonic, cu o uoara dominan a zooplanctonului, iar rezervele viteline sunt complet consumate. La vrsta de 15 - 16 zile (L= 10 - 12 mm), algele i chiar rotiferele sunt din ce n ce mai puin consumate. Dei numeric se intlnesc pn la 10-12 exemplare din fiecare grup, gravimetric sunt nensemnate, masa principal a coninutului gastrointestinal fiind acum alctuit ndeosebi din cladocere (pn la 9 exemplare) i nauplii (1 - 5 exemplare). Nutriia devine mai consistent datorit insi naturii organismelor ingerate, mai bogate n elemente nutritive. Interesant de semnalat c dintre cladocere, specia frecvent n coninutul intestinal este Simocephalus sp., i nu Moina sp. abundent n plancton. La vrsta de 23 - 25 de zile (L = 17 - 19 mm) hrana este alctuit n principal din copepode (n diferite stadii de dezvoltare) i cladocere. Acest fapt demonstreaz o evident electivitate. Se poate spune c, dac la nceputul

44

nutriiei exogene larvele trec printr-o etapa a nutriiei cu alge i rotifere, acum au o etap a nutriiei cu cladocere i copepode. Hrnirea intens cu copepode i cladocere este concomitent cu transformrile morfologice care marcheaz etapa de trecere ctre perioada de pui. Etapa nutriiei planctonice a larvelor de alu este destul de indelungat (20 40 zile), fapt ce subliniaz posibilitatea i utilitatea creterii larvelor de alu n heleteiele de cretere a crapului. Pe msur ce larvele cresc (L =19 - 20 mm), pe msur ce caracterele morfologice se modific, devenind din ce n ce mai specifice perioadei de pui, hrnirea se schimb. Organismele cele mai frecvente din coninutul gastrointestinal sunt acum formele mai mari de cladocere i copepode ( Daphnia longispina, Bosmina sp., Leptodora chindti, Cyclops strenus, Canthocaptus staphilinus, Heterocope caspia, Euritemora velox, Acanthocyclops viridis, Nitocrella hibernica, Olicamptus mohamed). Asistm la o schimbare a bazei trofice. n aceast etap, cnd larvele prefer formele planctonice mari, se ntrevede caracterul de rpitor al alului. O schimbare evident n modul de hrnire i n componena hranei se observ la vrsta de 24 - 26 de zile (L = 21 - 23 mm), cnd caracterele morfologice specifice perioadei de pui sunt evidente (forma corpului asemntoare adultilor, solzi, colorit specific). Acum nu se mai hrnesc cu organisme planctonice mici si mijlocii (dei acestea nu lipsesc din hran), iar principalul component devin mizidele (Limnomisia benedeni), care alctuiesc 60 - 70% din hran. n coninutul gastrointestinal al larvelor de 30-34 mm se pot gsi 5 - 6 miside. Aceasta etap am putea s-o denumim etapa nutriiei cu mizide. Odata cu creterea, caracterul de rpitor se accentueaz, fapt ce determin i modificarea hranei. La vrsta de 35 - 40 de zile (L = 27 - 30 mm), cnd larvele au trecut n perioada de pui, alul ncepe sa devin ihtiofag. Un factor important este c n primele etape de dezvoltare, larvele de alu utilizeaz aceeai baz trofic ale bazinelor pot fi crescute n aceleai heleteie cu crapul. Mentionm ns, c puii de crap, de exemplu, trebuie s fie mai n vrst, pentru a nu fi consumai de ctre puii de alu. Rezumnd cele consemnate putem sublinia c, n funcie de predominana unor grupe de organisme, n hrana larvelor i a puilor se pot deosebi mai multe etape: 1) etapa de hrnire cu alge i rotifere (pn la vrsta de 10 - 11 zile); 2) etapa de hrnire cu cladocere i copepode (pn la vrsta de 23 - 25 de zile); 3) etapa de hrnire cu mizide i larve de peti (pn la vrsta de 50 - 60 zile). n ultima etap, puii de alu devin rpitori, accentundu-se tendina de ihtiofagie. Ambalarea i transportul larvelor de alu Materialul biologic de populare n stadiul de larv n vrst de 7-8 zile, se transport n pungi de polietilen standard de 40 l, n care raportul ntre volumul de ap i volumul de oxigen este de 1/1. Densitatea larvelor la o pung standard se stabilete funcie de durata transportului i de temperatura aerului, conform tabelului de mai jos: Densitatea larvelor de alu la punga standard

45

Temperatura 0 C 10 15

Lungime mm 5-7

Durata transportului 10 ore 25 ore 150.000 100.000 100.000 70.000

Transportul puilor n condiii optime se realizeaz cu maini izoterme dotate cu uniti de condiionare a temperaturii mediului incintei. n lipsa acestora transportul se poate realiza cu mijloace de transport obinuite cu respectarea urmtoarelor condiii: capacitatea mainii s fie corelat cu numrul pungilor ce urmeaz s fie transportate; incinta de transport s fie capitonat cu un numr suficient de materiale ( cartoane sau pturi ) care s mpiedice spargerea sacilor; s fie prevzut cu o rezerv de oxigen de minim 50l, rezerv dotat cu manometru i furtun i o rezerv de saci de 10% din numrul sacilor care se transport .

4. REGULI PENTRU VERIFICAREA TEHNOLOGIEI Sistemul tehnologic i tehnologia de reproducere artificial i cretere n perioada de dezvoltare posteembrionar a alului se va verifica n baza urmtoarei metodologii: Probe i verificri iniiale a instalaiei de alimentare a apei Verificarea modului de funcionare a instalaiilor de alimentare, distribuie i evacuare a apei, nu se admit pierderi de ap la etaneizrii, nu se admite lipsa postamentului de protecie, nu se admite valori mai m