C O C C I D I O S I S I N T E S T I N A L

PARASITOS EMERGENTES

Hospital Infantil de México Federico GómezUniversidad Nacional Autónoma de MéxicoDra. Rosamaría Bernal Redondo

Coccidiasintestinales

Cryptosporidiumhominis

C. parvum

Cyclospora cayetanensis

Isosporabelli

DINAMICA DE TRANSMISION

MEDIOAMBIENTE

PARASITO HUESPED

Coccidias intestinalesApicomplexa

Anillos Polares

Microtúbulos

Roptrias (Factor Estimulador de Penetración)

Retículo Endoplásmico

Esporozoíto y Merozoíto

Micropilo

Núcleo Mitocondria

Membrarna subpedicular

Conoíde

Micronemas

METABOLISMO

• anaerobio • glucolisis• sin ciclo de pentosas• carbohidratos• amilopeptina• ácidos grasos• sin fosforilación oxidativa• sintetiza poliamidas• AMPc, CaM

No construye:• azúcares• amino-ácidos• nucleótidos

Convierte nucleósidos a nucleótidosMitocondria atípicaNutrientes del huéspedIntracelular y extracitoplasmático

GENOTIPIFICACION

Genotipo 1 Antroponótico sólo humano C. hominisGenotipo 2 ZoonóticoBovino, Ovino y PorcinoC. parvum

TRANSMISION FECAL-ORAL

MALOS HABITOS HIGIENICOSDEFICIENCIAS SANITARIASCONTACTO CON ANIMALESALMEJAS, OSTION, MEJILLÓN

ALIMENTOS:COSECHA – CONSUMOFresas, lechuga, albahacaResistente a cloro

TRANSMISION PERSONA - PERSONA

GUARDERIAS

NOSOCOMIAL

C. hominis y C. parvum

Cyclospora cayetanensis

Ortega Y. CDC ATLANTA 2000

Ciclo de vida C. cayetanensis

Ortega Y. CDC ATLANTA 2000

Esquizogonia intracelularintracitoplasmáticaGametogonia intracelularEsporogonia fuera del huésped

Exquistacióninterna

Ooquiste noesporulado

cigoto

CICLO BIOLOGICO DE Isospora belli

esquizogonia

gametogonia

esporogoniaooquiste

esporozoíto

Enterocito

huésped

♀

♂

Moléculas asociadas a patógenos (PMP)Receptores de reconocimiento (TLR2 – TLR4)β defensina humana-2 (HBD-2)NF-λB (factor de transcripción) Inhiben la apoptosis (6-48 hrs)

CITOCINAS:Interferon - γ 1L-4 1L-8, Prostaglandinas, Oxido nítricoTNF-α (f. de necrosis tumoral), TGF-β (factor de crecimiento)Actuan sobre Cel. cebadas, PMN, linfocitos, NKiller y liberan mediadores pro-inflamatorios

Respuesta Innata

Célula presentadora de AgLinfocitos T (respuesta celular)Cél citotóxicas (Tc) Th 1Cél. cooperadoras Th 2Cél. T CD4+ (lámina propria)

Incremento de cél T que inducen atrofia e hiperplasiaOoquistes en nódulos linfáticos mesentéricos y en cél. MLinfocitos B (respuesta humoral) Anticuerpos IgG, IgM, IgA e IgE locales. IgA secretora bloquea la penetración

Respuesta Adaptativa

PATOGENIA

Tubo Digestivo (FARINGE-RECTO) Epitelio BronquialAdhesión, Invasión, Ruptura

de células epitelialesAtrofia y destruye microvellosidades Conducto biliar (colecistitis)

Altera permeabilidad, diminuyela absorción de agua, electrolitos, aumento de la secreción Ocasiona diarrea acuosa Infiltrado inflamatorio Hiperplasia de criptas

Inmunocomprometidos:Diarrea voluminosa, malestar general, pérdida de peso y aguaDolor abdominal, náusea, vómito, fiebre y asteniaEvacuaciones 20/24 horas. Deshidratación, choque hipovolémicoy muerte. <200 CD4+ situación grave

C L I N I C A

Inmunocompetentes:Diarrea acuosa y agudaDeshidratación leveSe autolimita

Diagnostico EtiologicoOoquistes C. hominis y

C. parvumExámen directo teñido con azul de Löeffler con un aumento de

40x.

PARASITOLOGICO

Ooquistes 4 – 6 µm

Soluciones con densidad(δ) >1.0ZnS04 δ - 1.18° y 1.19° bauméIdentificación de ooquistesSeco debil (10x)Seco fuerte (40X)Método cualitativo Faust, 1954Modificada por la NCCLSMétodo cuantitativo Ferreira 57

Coproparasitoscópicos (CPS)concentración por flotación

Técnica de Faust

Coproparasitoscópicos (CPS)concentración por flotaciónFerreira 1:10

T I N C I Ó N DE KINYOUN

Preparación permanente• Elaboración de frotis• Fijar con calor• Fijar con metanol• Tinción de Kinyoun:• Fucsina básica, H2SO4 yverde brillante• Lavar con agua corriente• Observación 100x con aceite de inmersión• Montaje en resina

Ooquistes 4 – 6 µm

METODO DE CONATIN

Ooquiste de Cryptosporidium sp. con CONATIN, se observan los cuatro esporozoítos de 4.6 a 4.8 µm de largo por 0.7 a 0.9

µm en la parte más ancha.

CONCENTRACIONTécnica de RitchieACLARAMIENTOIncubación con NaOH 0.1NTINCION - Kinyoun

Ramírez & Bernal Parasitología 1988;1:14

OOQUISTE DE C. hominis y C. parvum

ESPOROBLASTO

ESPOROZOITOS

ESPOROQUISTE

OOQUISTEESPORULADO

OOQUISTE NOESPORULADO EN HECES

4-6 µm

2 a 4 hrs

132 ooquistes inician unainfección. Viables a 4 °C y22 °C, soportan -20 °C

PARED 0.04 µm

cuerpo residual

OOQUISTE DE C. hominis y C. parvum

Pared del Ooquiste 0.04 µmrica en uniones disulfuro Capa Externa de 5 nm

material filamentoso yglicoproteínas ácidas

Zona de separación de 5 nm

Capa central rígida 10 nmelectrodensa lipídica yglicoproteíca, ácido-alcoholresistente

Capa Interna de 20 nmglicoproteíca, rigidez y elasticidadOoquiste Esporulado

Del Coco y colab, 2009

línea desutura

Cyclospora cayetanensisO o q u i s t e s

Examen Directo

Ooquiste 8 a 10 µm.

Técnica de

Kinyoun

Cyclospora cayetanensisPRUEBAS ESPECIALES

Esporulación in vitrodicromato de K 2.5%

Autofluorescencia Luz Ultravioleta 365 nm

Reducción de D-xilosa y Vitamina B12Grasa en heces

Ooquiste de Cyclospora cayetanensis

OOQUISTE

ESPOROZOITO

ESPOROQUISTE

8 – 10 Micrometros Pocos ooquistesen heces

Ooquiste de Isospora belli

Ooquiste 20 – 30 µm

Ooquiste inmaduro con un esporoblasto

Ooquiste maduro con dos esporoquistes

Esporoquistes con cuatro esporozoitos cada uno (tetrazoico)

Ooquiste 20 – 30 µm

esporoquiste

esporozoíto

AutofluorescenciaCristales de Charcot-Leyden

INMUNOFLUORESCENCIA

• Anticuerpos marcados con fluoresceína

• Luz ultravioleta (495 nm)• Cualitativa y cuantitativa

INMUNODIAGNOSTICO

E L I S ACAPTURA DE ANTÍGENO

•Anticuerpos marcados con enzimas

•Fosfatasa alcalina (405 nm) Peroxidasa (450 nm)

•Sistemas de amplificación (Biotina/estreptoavidina)

•Cuantitativo UDO

Correa,D. Técnicas modernas en Inmunología. 2000

DIAGNOSTICOMOLECULAR

INDICACIONDISPONIBILIDAD

PRODUCTO BIOLOGICOMETODOLOGIA

PCR Dx en lab. clínicoRFLP (polimorfismo de

la longitud de los fragmentosde restricción ) para

diferenciar especie y genotipificación

GRACIASRabel, 1982