budapesti mŰszaki És gazdasÁgtudomÁnyi egyetem
DESCRIPTION
BUDAPESTI MŰSZAKI ÉS GAZDASÁGTUDOMÁNYI EGYETEM. Diasztereomerek elválasztása normálfázisú folyadékkromatográfiával. Készítette: Oláh Erzsébet Témavezető: Dr. Fekete Jenő. Tesztvegyület: β - cipermetrin. Chrysanthemum cinerarisaefolium virágból vonják ki. - PowerPoint PPT PresentationTRANSCRIPT
BUDAPESTI MŰSZAKI ÉS GAZDASÁGTUDOMÁNYI EGYETEM
Diasztereomerek elválasztása normálfázisú folyadékkromatográfiával
Készítette: Oláh Erzsébet
Témavezető: Dr. Fekete Jenő
Tesztvegyület: β-cipermetrin
• Chrysanthemum cinerarisaefolium virágból vonják ki
• Piretroidok:ciklopropán vázat tartalmazó karbonsavak különböző észterei
• -cipermetrin 3 sztereocentrumot tartalmaz
Fordított fázisú folyadékkromatográfiás mérések
Purospher RP18-as kolonna
Acetonitril: víz 70: 30
Chromsil C30-as kolonna
Acetonitril: víz 70: 30
Normál fázisú folyadékkromatográfiás folyadékkromatográfiás mérésekmérések
Vizsgált állófázisok:
Szilikagél állófázisok:
• felületen szabad -OH csoportok
• mechanikailag stabil
• vízre érzékeny
• Pl.:Silica1, Silica2, Nova Pak Silica, Purospher Star
Aluminium-oxid állófázisok:
• gyengébb adszorpciós kölcsönhatás, mint a szilikagélek esetén
• alakszelektivitás
• vízre érzékeny
• Pl.: Alumina, Aluspher
Kémiailag módosított állófázisok
• a szilanol csoportokat poláris végcsoporttal rendelkező vegyületekkel módosítják
• a töltet kevesebb aktív helyet tartalmaz
• Pl.: Nitril
Normál fázisú folyadékkromatográfiás mérések
Vizsgált mozgófázisok
• Oldószer elegyet használunk
• Az elegy fő alkotója egy apoláris vegyület, valamint mellék alkotóként poláris modifikátort tartalmaz
• A poláris anyag megkötődik az állófázis felületén, ezáltal csökkenti a mérendő anyag retencióját
Az elválasztást jellemző mennyiségek:
Visszatartási tényező:
M
MR
t
ttk
Csúcsfelbontás:
12
122ww
ttR RRS
Visszatartási tényező vizsgálata oldószer k(1) k(2) k(3) k(4)
Novapak
20%DKM 7,82 8,70 11,52 12,86
0,5 % EtAc 7,58 9,25 11,39 13,51
2,5% TBME 2,00 2,49 2,86 3,44
4% DiPe 2,49 3,04 3,60 4,27
2% ACN 2,20 2,60 2,71 3,07
2,7% ACN 2,02 2,37 2,54 2,83
Purospher Star
0,5% EtAc 7,65 8,73 11,46 13,05
2,5% TBME 1,89 2,26 2,70 3,18
4% DiPe 2,62 3,02 3,86 4,45
2% ACN 2,46 2,87 3,04 3,41
2,7% ACN 2,36 2,74 2,93 3,25
Silica1 2,5% TBME 2,64 3,15 3,70 4,38
Silica2
2,5% TBME 2,39 2,86 3,39 3,99
4% DiPe 2,81 3,28 4,10 4,77
2% ACN 3,70 4,34 4,59 5,14
2,7% ACN 3,21 3,79 4,12 4,61
Alumina 20%DKM 2,53 3,30 4,24 5,03
Aluspher 20%DKM 5,89 8,27 10,78 12,85
Nitril 2,7% ACN 2,53 2,97 3,16 3,54
Visszatartási tényező vizsgálata oldószer k(1) k(2) k(3) k(4)
Novapak
20%DKM 7,82 8,70 11,52 12,86
0,5 % EtAc 7,58 9,25 11,39 13,51
2,5% TBME 2,00 2,49 2,86 3,44
4% DiPe 2,49 3,04 3,60 4,27
2% ACN 2,20 2,60 2,71 3,07
2,7% ACN 2,02 2,37 2,54 2,83
Purospher Star
0,5% EtAc 7,65 8,73 11,46 13,05
2,5% TBME 1,89 2,26 2,70 3,18
4% DiPe 2,62 3,02 3,86 4,45
2% ACN 2,46 2,87 3,04 3,41
2,7% ACN 2,36 2,74 2,93 3,25
Silica1 2,5% TBME 2,64 3,15 3,70 4,38
Silica2
2,5% TBME 2,39 2,86 3,39 3,99
4% DiPe 2,81 3,28 4,10 4,77
2% ACN 3,70 4,34 4,59 5,14
2,7% ACN 3,21 3,79 4,12 4,61
Alumina 20%DKM 2,53 3,30 4,24 5,03
Aluspher 20%DKM 5,89 8,27 10,78 12,85
Nitril 2,7% ACN 2,53 2,97 3,16 3,54
Normál fázisú folyadékkromatográfiás mérések eredményei I.
1,5<Rs<2
Silica 1 Silica 2 Novapak
Rs(1-2) Rs(2-3) Rs(3-4) Rs(1-2) Rs(2-3) Rs(3-4) Rs(1-2) Rs(2-3) Rs(3-4)
20% DM
1,56 4,35 1,83
0,5% EtAc
2,5% TBME
2,08 1,73 1,79 1,95 1,82 1,93 2,45 1,61 2,24
4% DiPE
1,75 2,59 1,85
2,7% ACN
3,47 1,56 2,7
Normál fázisú folyadékkromatográfiás mérések eredményei II.
2< RS
Alumina Novapak Purospher Star
Rs(1-2) Rs(2-3) Rs(3-4) Rs(1-2) Rs(2-3) Rs(3-4) Rs(1-2) Rs(2-3) Rs(3-4)
20% DM
6,09 5,04 4,88
0,5% EtAc
3,31 3,43 2,84 3,19 6,6 3,18
2,5% TBME
2,79 3,24 3,09
4% DiPE 2,49 2,23 2,4 2,67 5 3,11
2,7% ACN
Mérési eredmények
Csúcsfelbontás alakulása:
1 2 3
2,7% ACN
0,5% EtAC
2,5% TBME
0
1
2
3
4
5
Rs
Novapak oszlop vizsgálata
2,7% ACN
4% DiPe
0,5% EtAC
20% DCM
2,5% TBME
Acetonitril eltérő viselkedésének magyarázata
Kromatogramok
a) 2,7% acetonitrilb) 4% diizopropil-éterc) 0,5% etil-acetátd) 20% diklór-metáne) 2,5% terc-butil-metil-
éterf) 0,625% dioxán
β-cipermetrin kimutatása vízből
• Vízminta vétele
• A vízmintákhoz metil-alkoholt adtunk (10%-os metanol tartalom)
• β-cipermetrint addícionáltattunk a mintákhoz
• Az oldatokat durva szűrőn átszűrtük
• C18-as Sep-Pakokon átszívattuk a vizet
• 20 percen át levegőt szivattunk keresztül a Sep-Pakon
• Diklór-metánnal leoldottuk a β-cipermetrint
• Novapak oszlopon 4% di-izopropil-éterrrel mértünk
Kalibráció készítése
2.csúcs kalibrációs egyenese y = 12803x + 3226,1
R2 = 0,9914
0
10000
20000
30000
40000
50000
60000
0 1 2 3 4 5
c (ppm)
Are
a (m V
*s)
Kalibráció készítése
4.csúcs kalibrációs egyenesey = 13052x + 4920,3
R2 = 0,9927
0100002000030000400005000060000700008000090000
0 1 2 3 4 5 6 7
c (ppm)
Are
a (m
V*s
)
A víz szilárd szennyezőin történő adszorpció vizsgálata
minta: Kalibrációból számolt
koncentráció 2.csúcs (ppm)
koncentráció 4.csúcs (ppm)
csúcsterület 2. csúcs
csúcsterület 4. csúcs
2. csúcs 4.csúcs
0,1994 0,2991 36679 35962 0,0261 0,0238
0,3988 0,5983 42865 38919 0,0310 0,0260
1,9800 2,9700 129522 158382 0,0986 0,1176
β-cipermetrin addíció előtt szűrt mintákkal kapott eredmények
β-cipermetrin addíció után szűrt mintákkal kapott eredmények
minta: Kalibrációból számolt
koncentráció 2.csúcs (ppm)
koncentráció 4.csúcs (ppm)
csúcsterület 2. csúcs
csúcsterület 4. csúcs
2. csúcs 4.csúcs
0,043 0,064 3518 7349 0,0002 0,0019
0,1994 0,2991 27516 26972 0,0190 0,0169
0,3988 0,5983 29262 37927 0,0203 0,0253
Értékelés
• Adott műszerek érzékenysége laborról-laborra változik.
• Vizsgáló szervezetek bevezették az AL-t (action limit)
• Bizonyos anyagok esetén nem lehetséges mennyiségi meghatározást végezni
• Cipermetrin oldhatóságára vonatkozó irodalmi adatok nincsenek ( benz(a)pirin lgP= 6,48; cipermetrin lgP= 6,09)
Összefoglalva az Összefoglalva az elmondottakat:elmondottakat:
• Normál fázisú folyadékkromatográfiás oszlopok közül a Novapak Silica oszlop Normál fázisú folyadékkromatográfiás oszlopok közül a Novapak Silica oszlop bizonyult a legjobbnakbizonyult a legjobbnak
• Az acetonitril másképp viselkedik, mint a többi poláris modifikátor. (Más Az acetonitril másképp viselkedik, mint a többi poláris modifikátor. (Más poruskitöltés)poruskitöltés)
• Legjobb felbontást a di-izopropil-éterrel lehet elérni (mind visszatartás, Legjobb felbontást a di-izopropil-éterrel lehet elérni (mind visszatartás, mind Rmind Rss értékek szempontjából) értékek szempontjából)
• Diasztereomerek elválasztása fordított fázisú folyadékkromatográfiával nem megoldható
• Sikerült kifejleszteni egy módszert, ami vízmintákból Sikerült kifejleszteni egy módszert, ami vízmintákból ββ-cipermetrin -cipermetrin kvantitatív meghatározására szolgálkvantitatív meghatározására szolgál
Köszönöm a figyelmet!