biologie celulara - sortarea celulelor
DESCRIPTION
Biocel - medicinaTRANSCRIPT
Lucrare practica nr. 6
Sortarea celulelor
Culturi celulare
Criofracturare
Tehnici de fracturare
Centrifugare
Biologie
Celulara si
Moleculara
SORTAREA CELULELOR PRIN CITOMETRIE DE FLUX
Citometria de flux permite determinarea simultană a
mai multor parametri fizici și chimici caracteristici unei
singure celule aflate în mișcare într-un curent lichid.
CE ESTE CITOMETRIA DE FLUX?
ETAPE
1. Prepararea suspensiei de celule
2. Marcarea celulelor - suspensia de celule este pusă în contact cu un set de anticorpi monoclonali marcați cu anumite substante fluorescente.
3. Suspensia trece printr-un dispozitiv de reglare a fluxului, respectiv camera de curgere, care determină o aliniere a celulelor într-un curent unicelular.
4. Inserția celulelor cu un fascicul laser, ce se soldeaza cu dispersia luminii și emisia de fluorescență.
SORTAREA CELULELOR PRIN CITOMETRIE DE FLUX
5. Folosirea unui sistem de detecție ce analizează semnalele rezultate, obținându-se date despre dimensiunile și complexitatea structurală a celulei și respectiv despre prezența unor structuri antigenice corespondente anticorpilor marcați.
6. Curentul fluid este fragmentat în picături, ce conțin celule, prin aplicarea energiei sonice la nivelul camerei de curgere.
7. Îndeplinirea de către celulă a unor condiții predefinite, prin programare, determinând plasarea unei sarcini electrice, pe picătura care o conține.
8. Picăturile încărcate electric sunt deflectate într-un câmp electrostatic.
SORTAREA CELULELOR PRIN CITOMETRIE DE FLUX
SORTAREA CELULELOR PRIN CITOMETRIE DE FLUX
SORTAREA CELULELOR PRIN CITOMETRIE DE FLUX
Principiul general al
unui flux-citometru
(după C.Voiculescul)
Un citometru de flux oferă posibilitatea de a sorta
din totalul celulelor din probă, o populație de interes.
Procedura presupune instalarea unor eprubete
pentru colectarea celulelor dorite; activarea unui meniu
de sortare din cadrul etapei de achiziție a programului;
alegerea modului de sortare, a numărului de celule dorite
și identificarea populației prin intermediul unei așa
numite “porți logice”.
SORTAREA CELULELOR PRIN CITOMETRIE DE FLUX
SORTAREA CELULELOR PRIN CITOMETRIE DE FLUX
Principiul sortării celulelor ( după C.Voiculescu, 1996)
Sunt in principal trei moduri de sortare:
SORTAREA CELULELOR PRIN CITOMETRIE DE FLUX
Aplicațiile metodei sunt în:
imunodiagnostic și în monitorizarea unor afecțiuni, ca boli de
autoagresiune sau imunodeficiențe (HIV/SIDA, neoplazii);
dimensiune, structura interna a celulei
continutul de AND
continutul de ARN
analiza si sortarea cromozomilor
extensia si localizarea proteinelor
antigene de suprafata, intracelulare si nucleare
viabilitatea celulara
în imunologia experimentală (cercetări cu celule sortate)
studierea gestației fiziologice
SORTAREA CELULELOR PRIN CITOMETRIE DE FLUX
Citometrul Becton Dickinson FACS Canto II cu 3 lasere,folosit pentru analiza multiparametrică (8 culori) a celulelor de interes
SORTAREA CELULELOR PRIN CITOMETRIE DE FLUX
Citometrie in flux cu laser
semiconductor combinata cu tehnica de
colorare citochimica, tehnica impedantei
si colorimetrie ecologica non-cianidca
Transfer: 60 probe/oraSange intreg, sange prediluat
Are o capacitate de stocare de 100000 rezultate ale pacientilor, incluzand diagrama de dispersie, histograma si informatiile pacientilor.
O varietate de formate de printare pot fi preprogramate.
Formatele definite de utilizator sunt de asemenea disponibile
Prelevarea automata cuplata cu pozitii de acces de urgenta (4 tipuri de tuburi sunt accesibile)
SORTAREA CELULELOR PRIN CITOMETRIE DE FLUX
Citometria in flux (FC) este o alta tehnica de sortare a spermatozoizilor. Foloseste substante fluorescente pentru a ilumina spermatozoizii ce contin cromozomi X. Aceasta substanta fluorescenta adera de materialul genetic din spermatozoizi.
Deoarece spermatozoizii ce contin cromozomi X au mai mult material genetic, acestia vor colecta mai multa substanta fluorescenta decat spermatozoizii ce contin cromozomi Y. Un aparat laser este folosit apoi, pentru a separa cele doua tipuri de spermatozoizi. Spermatozoizii cu cromozomi apropiati, sunt folositi apoi in IUI (Inseminarea artificiala intrauterina) sau FIV.
Rata de succes a citometriei in flux este mare: exista 60–70% sanse sa concepi un copil de sexul dorit.
Citometria in flux – fertilizare in vitro
SORTAREA CELULELOR PRIN CITOMETRIE DE FLUX
Fragment histologic de polip adenomatos colonic vilos
Fragment histologic al polipului adenomatos colonic vilos malignizat
cu zone de displazie severă
SORTAREA CELULELOR PRIN CITOMETRIE DE FLUX
Fragment histologic de polip adenomatos colonic vilos
Fragment histologic al polipului adenomatos colonic vilos malignizat
cu zone de displazie severă
SORTAREA CELULELOR PRIN CITOMETRIE DE FLUX
Fragment histologic de polip adenomatos mixt tubulo-vilos
Fragment histologic al polipului adenomatos mixt tubulo-vilos
malignizat
Fragment histologic de polip adenomatos mixt tubulo-vilos
Fragment histologic al polipului adenomatos mixt tubulo-vilos
malignizat
Vă mulțumim pentru atenție!
Proiect realizat de :
Bodnar Ana-Maria
Boriceanu Andreea-Nicoleta
Facultatea de Medicină , specializarea Medicină
Anul 1, Grupa 1