biological efficiency and nutritional value of pleurotus ostreatus cultivated on spent beer grain

8
Biological eciency and nutritional value of Pleurotus ostreatus cultivated on spent beer grain Dianxia Wang * , Akiyoshi Sakoda, Motoyuki Suzuki Institute of Industrial Science, University of Tokyo, 7-22-1 Roppongi Minato-ku, Tokyo 106-8558, Japan Received 19 April 2000; received in revised form 8 November 2000; accepted 13 November 2000 Abstract Unpretreated spent beer grains were successfully used as a basic substrate material for the cultivation of Pleurotus ostreatus. The eects of spent grain types, additives, substrate moisture content, and substrate packing density on the yield and nutrition of fruit bodies were investigated. The cultivation results showed that few fruit bodies were formed on spent grain alone; however, a sig- ni®cantly high biological eciency 19.1%) was obtained with the addition of wheat bran to 45%). The chemical analysis of fruit bodies indicated that P. ostreatus cultivated on spent grain substrate had a higher nutritional value than those grown on other reported types of substrates. The total amino acid content in the fruit bodies was 347.5 mg/g dry matter, and the crude protein content was as high as 53.3% on a dry weight basis. It was also found that the cultivation of P. ostreatus increased the crude protein content, while it decreased the ratio of lignin to cellulose, of the spent grain substrate. Ó 2001 Elsevier Science Ltd. All rights reserved. Keywords: Pleurotus ostreatus; Spent beer grain; Cultivation; Biological eciency; Nutrition 1. Introduction Pleurotus ostreatus is a prospective source of valuable food protein, and an organism with the ability to eec- tively bioconvert various lignocellulosic materials Zadrazil and Dube, 1992). In general, sawdust supple- mented with wheat bran or rice bran is used in the commercial cultivation of P. ostreatus in Japan. How- ever, the low availability of sawdust used for mushroom cultivation has in recent years become a serious prob- lem. This shortage of sawdust has led to a continuing search for an alternative raw material which could serve as the substrate for mushroom cultivation Yamashita et al., 1983; Shiratori et al., 1980; Terashita and Kono, 1984). With this view, we turned our attention to spent grain by-product of beer brewing. In Japan, about one million tons of spent beer grain are discharged every year, of which about 95% is used for cattle feed, while disposal of the remaining 5% results in environmental problems, especially for local beer breweries. As is known, the spent grain is rich in lignocelluloses and protein, as well as having a particularly high moisture content. In addition, the physical properties of spent grain, such as particle size, volume weight, speci®c density, porosity, and water-holding capacity, are conducive to its use as a basic substrate material for mushroom cultivation Levanon, 1988). Another ad- vantage is that the spent grain is available at low or no cost throughout the year not only from large factories but also from a large number of local breweries. The present investigation was undertaken with the aim of determining the feasibility of utilizing the lignocellulosic by-product of spent beer grain as a substrate for cultivation of the oyster mushroom, P. ostreatus, and evaluating the nutrition of the fruit bodies of P. ostreatus grown on spent grain substrate. Our interest lay not only in the search for a raw ma- terial to serve as substrate for mushroom cultivation, but also in the bioconversion of the substrate and the biodegradation of lignocelluloses in the substrate, and the reuse of the spent substrate. Thus, the present study is the ®rst part of our series of work focusing on the optimization of the utilization of spent beer grain by using mushrooms. Bioresource Technology 78 2001) 293±300 * Corresponding author. Tel.: +81-3-3402-6231 ext. 2413; fax: +81-3- 3408-0593. E-mail address: [email protected] D. Wang). 0960-8524/01/$ - see front matter Ó 2001 Elsevier Science Ltd. All rights reserved. PII: S 0 9 6 0 - 8 5 2 4 0 1 ) 0 0 0 0 2 - 5

Upload: dianxia-wang

Post on 05-Jul-2016

212 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

���������� ������ �� �������� ��� � �� ��������� ��������� �������� � ���� ���� ����

������ ��� �� �������� ������� ����� �� � � ��

�������� � �������� �������� ���������� � ������ ������ �������� ��������� ����� �� �!""!� #��

������� !" ����� #$$$% �������� � ������� ���& ' (���&��� #$$$% �������� !) (���&��� #$$$

��������

*���������� ���� ���� ����� +��� � ������ ��� ��� �� � ����� � ������� &������� ��� ��� � �������� �� ��������� ��������, -��

�.���� �� ���� ���� ������ ���������� � ������� &���� �� ������ �� � ������� ������ ������ � ��� ����� �� ������ �� �� ��

������ +��� �����������, -�� � �������� ��� ��� ���+�� ���� ��+ �� �� ������ +��� ���&�� � ���� ���� ����% ��+����� � ���/

�0����� ���� ���������� ������ 1!",!23 +�� ������� +��� ��� ������� �� +���� ��� �� 14523, -�� ���&���� ������� �� �� ��

������ �������� ���� �$ �������� � �������� � ���� ���� � ������� ��� � ������ �������� ��� � ��� ����� ���+ � �����

�������� ����� �� � ��������, -�� ����� �&�� ���� ����� � ��� �� �� ������ +�� )46,5 &�7� ��� &������ �� ��� �� �� ������

����� +�� �� ���� �� 5),)2 � � ��� +����� �����, 8� +�� ���� �� � ���� ��� � �������� �� �$ �������� �������� ��� �� �� ������

������ +���� �� ��������� ��� ����� �� ���� �� ���� ����� �� ��� ���� ���� � �������, � #$$! 9������� ������ :��, ��� ������

��������,

%��&����' ��������� ��������% ���� ���� ����% ; ��������% ���������� ������% ( ������

� ���� ������

��������� �������� �� � ����������� �� ��� �� ��� �������� ������� �� � ������& +��� ��� ������� �� �.��/������ ��������� ����� � �������� ����� &��������1<������� �� � ��� !""#3, 8 ������� ��+� �� � ����/&���� +��� +���� ��� �� ���� ��� �� ��� � �����&&������ � �������� �� �$ �������� � =���, >�+/����� ��� ��+ ������������ �� ��+� �� ��� ��� & �����&� �������� ��� � ����� ����� ����&� � ����� � ����/��&, -��� �������� �� ��+� �� ��� ��� �� � ���� �������� ��� � ���������� ��+ &������� +���� �� �� ������� ��� � ������� ��� & �����& � �������� 1?�&�������� ��,� !"')% ��������� �� ��,� !"'$% -�������� �� @���!"'43,���� ���� ���+� +� � ��� � � ������� �� ����

���� ��/���� �� �� ���� ���+��, 8 =���� ��� � ��&����� ��� �� ���� ���� ���� ��� ���������� ���������� �� +���� ��� � "52 �� ��� ��� ������ ����� +������������ �� ��� ��&���� 52 ��� ��� � �����&����������&�� ���������� ��� ����� ���� ���+�����, �� ��

��+� ��� ���� ���� �� ���� � �������� ����� ��������� �� +��� �� ����� � ������ ����� ���� &���� �������, 8 �������� ��� �������� ���������� �� ��������� � �� �� �������� ����� ��� &� +������ �����0�������� ��������� �� +����/������ ��������� ������ ���� �� ��� �� �� � ����� � ������� &������� ���& �����& � �������� 1:����� !"''3, ������ ��/������ �� ���� ��� ���� ���� �� ��������� �� ��+ ��� ���� ���� ��� � ��� ���� �� ��� ���& �������������� � � ���� ���& � ����� &��� �� ��������+�����,-�� ������ ����������� +�� ������� +��� ���

��& �� �����&��� ��� ����������� �� ������� ����������� ����� ��/���� �� �� ���� ���� ���� �� �� ������� ��� � �������� �� ��� ������ & �����&��$ ��������� �� ���� ���� ��� ������ �� ��� �� �������� �� �$ �������� ���+ � ���� ���� � �������,A � ������� ��� �� ��� � ��� ������ ��� � ��+ &�/������ �� ����� �� � ������� ��� & �����& � ���������� � ���� � ��� ����������� �� ��� � ������� �� ���������������� �� �������� ����� � ��� � �������� ����� �� �� �� ��� ���� � �������, -� �� ��� �������� �� �� ��� 0��� ���� �� � � ������ �� +��� ��� ��� ���� ����&������ �� ��� ��������� �� ���� ���� ������ ��� & �����&�,

������� ��� -�������� 6' 1#$$!3 #")B)$$

�;���������� � ����, -��,C D'!/)/)4$#/E#)! ���, #4!)% ���C D'!/)/

)4$'/$5"),

(�)�� ������' ������F���, /�����,��,G� 1�, ���3,

$"E$/'5#47$!7H / ��� ���� &����� � #$$! 9������� ������ :��, ��� ������ ��������,

I88C � $ " E $ / ' 5 # 4 1 $ ! 3 $ $ $ $ # / 5

� ����� �

�$�$ ������� �� ����������

�$�$�$ �������-�� ��+� �� ���+ �� �$ �������� ���� )" 1���� J

;�&���3 +�� ��� � ���� �� ��, ���� ���� ���� +��������� ���& ����� ���+���� K��� , -���� ����� ������ ����� �&�� �� �� �� ; +��� ���, -�������&���� ��&�������� ��� ������ � -���� !, ����� �������� ���� ��� ���� �� A���� 1� ��/���� �� �� ���� �� ���� ����3 ��� �� ��������� +��� ������� ���&���� J ;�&���,

�$�$�$ ��*����� ���������L� � ��� �� �� � �������� +��� �������� �� �����+�,

1!3 9.��� �� ��� ����� �� � ����&��C +���� ��� +������� �� ���� ���� �� ������ ���& $2 �� 5$2 � � ���+����� �����, ���� ���� � �� +���� ��� +��� �&/������ �� ���&���� �� ���� ���� �� ��������� ������/������, 1#3 9.��� �� �������� �����C +���� ���� ���� ������� ���� �� A���� +��� ������ ������������� �� �������� �� � ����� �� 5$C5$ � � ��� +����� �����, �������� � +�� ��� �� � ���&��� �� ���� ����, 1)3 9.����� � ������� &���� ��C ��� &���� �� ����� �� ��� � �/������ +�� ��G ���� �� 4)B652, ���� ���� ; +�������� +���� ��� 15$C5$ � � ��� +����� �����3 +�� ����� ��� � �������, 143 9.��� �� � ������� ������ ������C��� �.��� �� ������ ������ +�� �����&��� �� 0������� �������� � ������� ��� ������� �� ������ ���������� 4#B"E � ��� !$$ &�, -�� � ������� �� ���� ���� ;� ����&���� +��� +���� ��� �� ��+� �� � � ����� ��E5C!$C#5 1� � ��� +����� �����3 +�� ���, -�� ��+� ��� ����&���� +��� +���� ��� �� � ����� �� 5$C5$ 1� ���� +����� �����3 +�� ��� �� � ������ � ������� � ������� � �� � ���������,8� ��� �� �� ������ � � ���� �� +�� � ����& �����/

��� �� ��� ���� ���� ����� �� �� �� ; � ��� �����������&���� ���� ��� ��&� ���� �� ����� ���� ������ �� �� �� ������� ���������� � � ������� � ������ � �� ��� ���� ��� ����� �� �� ��� ���+���, 8 �����+����� ��� ����� ���� ����� �� �� �� ; +��� ����/������� ��������� +�� +� �������� ��� � ��������� 1!3�1#3� 1)3 �� 143� ������������, 8 �������� ���� ��� &����G������ �� ��� ������ �� �� +�� �� �� 0� � � �������& & �������� ��� � ������ ���� ���� � � ������������ ��� ����������� �� ������� ���� ���� ���� �

������ �� � & �����& � �������� �� +�� ��������� ����&��� ������ ����&���� �� �� �� ������� ���& � ��� ������&�� �� �����,

�$�$+$ ,���������-�� &���� �� ����� �� ��� � ������� +�� ��G ���� ��

E52 1 ���� �����+��� ������3 �� ��� �������� � �������+�� 0���� � !4$ &� ����� ������� 1+��� � +��� ����� ��4,# �& � ���&����3 �� � ������ ������ �� E$ � ��� ������� ��� !$$ &� ��� &� 1 ���� �����+��� ������3,-�� ������� +��� � �������� �� !#!�; ��� #$ &�, -��������� � �������� +��� ��� ����� �� �������� ������+ � ��� � ����� �� � ������� +��� � +����� ���/������ �� ��� � '2� �� ��� ������� +��� �� &� &����, 9��� � ������� ������� +�� ������� � � � �� ������������, ���+ � +�� ������� �� #$�; ��6$2 ,>, ��� ��� � ����� +����, L� ���0����� ���������� #B) +���� �� !4� #�; �� "$� 52 ,>, ������������� ��� �� �� ������ �� ��� ���� � �������� +�������� ��� +����� �����&����� �� ���&���� �������,

�$�$ -������� )��.���

�$�$�$ /���� *��� ���������0�)�� ��)��������$ -�� �����&��� ������� +��

������� � � �������� �� ��� &������ ��������� ��A�; 1!""$3, -���� ������ +�� �����&��� �� @G��/����M� &�����, -�� ������ E,#5 +�� ��� �� ���� ���� ����� �� ������ ����� 1;���� �� ����� !"6'3, ;� ����� +�� �����&��� ��� ��� ���� ���������� &�����,;����������� ����� +�� ���� ����� �� ��.����� ������� �������������, -�� ����� ��� � +�� ����&��������� � ��� ����� �� �� �� ������� ���� �� �����/������� � ��� �� �� ���� ��� ��� ������� #,E#� ',)6��� 4,# ����7� �� ���� ��&����� ������������ 1;������ ����� !"6'3,

-)��� ����$ �&�� ����� +��� �����&��� ����� ���� ���� ����������� �� ��� ����� �� �� ������ ��� ��&�� ���� � ��/������� 1����� �� 9����� !""#%;�� �� !""63, ;������ +�� &��� ��� �� ������� ������ &������� +�� &��� ��� �� &������� � ��������� ������&�� ���� �������� �� #$2 >;� ������������ !5$�; ��� #$ �, -�� ��������� ������� +�� ��� �� ���A>�# ����������� 1L G����� �� ��,� !""53,

�������$ ;���� &� &����� &� &������� ��� ������ ��&���� +��� �����&��� �� ���&�� ���������������������&���� ����� &����������� �� ���������������� 1�,L,�,� !"'#3, 8�� � ����� ��&���� +�� �����/&��� ��� � !�!$/����������� ������������&�����&����� 1�,L,�,� !"'#3, ���� &� ������� & �� ������+��� ��������� ���& ����� ��&���� �� ����� ������ ���������&��� +��� � ���&�� ��������� ������������&/���� 1�,L,�,� !"'#3, I������� � +�� &��� ��� ����/��������&��������� ����� ������� ��� ����� ��&������ ��� +��� �&&�� & &��������� &������������� ����� ���� 1N G��� �� ��,� !"'6% �,L,�,� !"'#3,

-���� !

I����&��� ��&�������� �� ���� ���� ����� 12� ��� +����� �����3

����

����

;� ��

������

L�� ��� ;��� /

����

:���

� #)," E,' ),) !4,$ ",!

� #4,# E,! )," !5,' !$,'

; #6,5 B ),' !E," !E,)

#"4 1$ 2�� �� �$ 3 4���������� ���.������ �! 5����6 �7+8+��

9��)���$ -���&� �� ����O��� +��� �����&��� ��&��� �� >I:; �&������ � O ���&���� �������� ��������� ��������� �� ���������� �� ������������, ������������ +�� �����&��� �� &��� �� >I:; +��� � ����/������ �������� ����� ���� �����&��, (���� +�� &��/� ��� �� ��� &�������� &����� 1>,-,�,� !"'$3,

�$�$�$ ��*����� ������-�� ����� ������� ���� ����� �� ���� ������ �

���� ���� ����� ��+ � �������� �� ���� � ������� +�������&����, -���� ������ +�� �����&��� �� ��� �I����B9�&�� 1(��+���� ;�� *��3 ;>( ��������&���� #4$$/88, -�� ������ �� ���� ���� �� ���� +���������� �������� �� � &����� ��������� �� N������� K� ����� 1!"6$3, (�&���� ��� ������ �� ����/�������� 0��� 1��L3 �� ����/�������� ���� 1��:3+��� �������, -�� ���� ���� ����� +�� ���� ����� ����� ��.����� ���+�� ��L �� ��:, -�� ���� ��/��� +�� ���� �� �� ��� ��: �����, -�� � ������� �>+�� �����&��� ���& � ��&����� � � ������ �� 5 ��� � ������� � !$$ &� ��������� +���� ����� �� #5�;��������,

� ������� �� ���������

+$�$ 4�������� �:������ � ���� *�����

�$ �������� +�� � �������� � ����� � ���� ����� ��������, -�� 0��� O �� +�� ��������� � ��� � )5����� +���� ��� ����� O �� +�� ��������� � ��� � 45����, (� ����� O �� +�� �������, ���� ��� '$2 ����� ����� �� �� ���� +�� ��������� � ��� 0��� O ��� +������� �� �� ���� ������� � ��� ����� O �� +�� �� ��+��P ����� �� +��� �� � � �&����� �&� �,;��� �� ��, 1!"'!3 ��� ��0�� ��� ���& QQ����������

������MM �� ������� ��� ����� �� ����� �� �� ������ ���!$$ � ��� � �������� �� ��&� ����������� ���� ����������� ��0���� �� ���� ��� ��� P ����� �� ������ +���� ��� � ������� ��� & �����& � �������� 1���� �� ��,�!"'6% I�������� �� ����� !""63, 8 ��� ������+���� +� ������ �� ��0� ���������� ������ �� ������������ �� �������� �� ��� � ������� �� ��� &������ �� �� ������ �� �����+� 1������� �� ��,� !"'6% =+���� ��,� !""53C

���������� ��������� 2

������� �� ��� �� �� ������ ���������8����� +����� �� ��� � �������

� !$$2�

-�� ���������� �������� �� ��� �� �� ������ ���$ �������� ��������� ���& ����� � � �������� ����� ��� O �� ��� ���+ � -����� # �� ) �� L���, !B),9��� ��� � �� ��� ����� ���� +�� ��� ������� ���& �� �����������,

+$�$�$ (;��� � ����� ���� ������������ �� ��� ��� ��� ������ � -���� #� ��� ��.��/

��� �� ���� ���� ���� �� ��� � ��.����� � ����������������, ���� ���� � ���� ��� � ������ ���������������� ��� � ��� ��� ���� ���� � �� ;, -�� ���/������� ���+�� ���� ����� ��� ���� &���� ���& ������� �� &���� ����� ������ �� &���� �������� ����� ��������� �����, >�+����� ����� +�� � ������ �������/��� �� � ���+�� ��� ���������� ������ �� �����/&��� ��&�������� �� ���� ����� ���� � -���� !,;�&����� �� ��� ������ � ������� 1��+� �� � �/

���&���� +��� +���� ���3� +���� �� �������� ��� ���� ��&&������ � �������� �� �$ �������� � =������� � #B) ��&�� ���������� ������ +�� ������� ��� ����� ��� ���� ���� ��� ��+� ��, -��� &���� ����

-���� #

9.��� �� ���� ���� ���� � ���������� ������ 1�� O ��3

� �������� 15$C5$3 ���������� ������ 123

���� ���� � D +���� ��� !E,"

���� ���� � D +���� ��� !#,)

���� ���� ; D +���� ��� !!,#

��+� ��� D +���� ��� 5,'

�;����� � �������,

-���� )

9.��� �� ��������� � ���������� ������ 1�� O ��3

� �������� 15$C5$3 ���������� ������ 123

���� ���� � D +���� ��� !#,)

���� ���� � D ���� ��� !),#

���� ���� � D ��� ��� !#,"

���� ���� � D A���� #,)

L��, !, K������� �� ���������� ������ �� �$ �������� +��� ��.���

���������� �� +���� ��� �� ���� ���� �,

1$ 2�� �� �$ 3 4���������� ���.������ �! 5����6 �7+8+�� #"5

��� � � �� ��� ������� �� ��� ������ ������ �� �� ��������� ���� ��+ &���� ��� � ����� �� �������������+�� �������� ����� ����� � ���� �����,

+$�$�$ (;��� � ������� ����-���� ) ���+� ��� �.��� �� ��������� � ��� ����������

������, �� ��������� +���� ���� ���� ���� �� ������ ������ ��&������ �������� �� ��������� �� ��� �������� ��� ��� � �������� �� �$ ��������� +���� A����

���+�� ���� ������� �� �&����� ��� ���������� �� �������� ��� ���� � �����,

+$�$+$ (;��� � ������)����� ���� � &.�� *��-�� �.��� �� ��� ��������� �� +���� ��� � ����

���� � ������� � ���������� ������ �� ���+ � L��, !,-�� ���������� ������ �������� ������� +��� �������� � ��� ����� �� +���� ���� �� ������ �� ����������� ��������� �� ��� � 452 +��� � &���& &��� � �� !",!2, >�+����� ��+�� �� �� ������ +������&�� +�� ��� ���� ���� ���� +�� ��� �� � �/������, -��� &���� ���� ��� � � �� ���� �� ��+ &����/ ��� ������������� ��7�� ����&�� � ��� ���� ����,

+$�$<$ (;��� � ��*����� )������� ������� �� �������������8� ��� ��� ��+ ���� � ������� �� ���&����

��&����� �� ��� � �������� ��� � ������� &���� ������� �� ������ ������ ��� ��� ����� �+� �&������������� �.����� &������ ���+�� �� �� �� ���� ���&�/��� 1<������� �� �� ���� !"'!� !"'#% ���� !"'5%@ &��� �� ��,� !""E% N����� �� ��,� !"'53,L��, # ���+� ��� �������� �� ���������� ������ �

������� �� &���� �� ����� � ��� � �������, -�� ���/������� ������ ��� � �������� +��� ��� ������� ��&���� �� ����� �� ������ �� ��� � 6$2, -�� ���� ��&������ ������� +�� ���� ��� �� �� ������� +�� ���� ������� &���� �� ����� +�� �� 6$2, -���� ��� ���� ����� ���� ��� ����& & &���� �� ����� �� ��� �������� � ������� ��� ��� � �������� �� �$ �������� ����� � 6$2, -��� �� ��.���� ���& E52� +���� �� � ��� ��������� ��� � ��� � �������� �� �$ ��������, 8� �� ���� �������� ���� � ���� &���� �� ������� +��� �������� � ��� ���������� ������ �� �� �� �������� ������ !",!2,L��, ) ���+� ��� �.��� �� � ������� ������ ������ �

��� ���������� ������, -�� ����& & ��� � ��� ���/������� ������ +�� ������� �� � ������ ������ �� E$� � ������� ��� !$$ &� ��� &�, -��� �� � �����&�� +������ ��� � ��&&��� ��������,8 ��� ������ �� ��� ��� �.��� �� ���� ���� ���/

�����&��� � �� �� ����� �� +���� +����� +�� ��������������� 1��� ���� ��� �� ���+ � ���� �����3, -����� ��� ���+�� ���� ���������� ������ ��������� +������� ���� ���� +�� ���� +���� �� �������� �� ��&������� +��� ��� �� �� +����/����� ���� ����, -�������� &���� �� ���� �� ��� �> ��� � �� +����/��������� ���� +�� ����� �� ��� ����& & ��� � ��� �$ ��������� ���+��� �� ���� �� ��� +���� ��&���� ��&���&����� � ��� ���� ����� +���� �������� &����������+��, >�+����� ��������� ��� �� �� � ����� �&� ��� +���� �� ��� ������&� ��� ��� �� +����� +����� ��������� �� �� ���������� ���� ���� �� � �������, ������ ��� ��� �������� � ���� ����� +��� ������� �� ��� ���������� ���� ����,

L��, ), K������� �� ���������� ������ �� �$ �������� +��� ������

������ �� � �������, � �������C ���� ���� ; D +���� ��� D ��+� ��

1E5C#5C!$ � � ��� +����� �����3,

L��, #, K������� �� ���������� ������ �� �$ �������� +��� &���� ��

����� �� � �������, � �������C ���� ���� ; D +���� ��� 15$C5$ � �

��� +����� �����3,

#"E 1$ 2�� �� �$ 3 4���������� ���.������ �! 5����6 �7+8+��

-�� ����� ��� ��� ������� ���� ���� ���� ���� �� ���� ��� ���� � ������� &�������� ��� � �������� �� �$ ���������, -�� ���� ���� ����� �������� ����� � ����/&����� ����� �� ��������� �� ��� &���� �� ����� �������� ������ �� � ������� �.����� ��� ���������� �/����� ����0�����, -�� ������� ���������� ������ ��!",!2 +�� ��� &���& & ��� � �� �$ �������� ���+ ������ � � �������� �������� �� ���, ����� � ��� ��� ����� ��� ������ �� ��� ��� ����& & �������� �� ��������/����� � ������� 1+�� +���� ��� �� ��� �� ���������3 &���� �� ��� �C &���� �� ����� 6$2%������ ������ $,E �7&�% �������� ����� 452,

+$�$ ,�)�������� � ���� *�����

-� ���� ��� ��� �������� ��� � �� �$ �������� � �/������� � ��� ���� ���� � �������� ��� �����&�����&�������� �&�� ������ ����&��� �� &����� ��/���� ��� �� ��� �� �� ������ +��� �������,-���� 4 ����� ��� �����&��� ��&�������� �� �� ��

������ ��������� ���& ����� � ����� �� ���� ����� ��������, L�� ��&������� ��� ����������� �������& ��� ������� -����� �� L��� ;�&������� � =�/�� 1�-L;� !"'#3 ��� ���� ��� ���, ;���������� ���/������� +��� �������� � ��� �� �� �������������������� �� ��� ����� � �� �� ������ � ��������� ��.���� � ��������� +���� ��� ��� ������ �� �� �������� ���+ � ��� ����� �� � �������� +��� P ��� ��&/����, -��� ������ �� � �����&�� +��� ��� ������� ���$ �������� � �������� � � �������� ��&����� �� ����+������ +����� �� ��� ������ �������� �� ;��� �� ��,1!"'!3, ��� ��&����� +��� ��� ���� ���& ��� ���/���� -����� �� L��� ;�&������� � =��� 1�-L;�!"'#3� ��������� ��� �� �� ������ �� �$ �������� ���+� ���� ���� � �������� ��� ������ ������ �� ��������� � � ��+�� ������������ �� ��� ������,�������� �� -���� 4� ��� � ����&������ +���

+���� ��� ��� � ������� �������� �� �&����� ��� ��/� & ����� �� ������ � �$ �������� ��� ��� ���� ����� ��� ���, ����� ��� ���� �� ���� ���� �.����� ��������� ������ ��� ��� �� ������ ������ ������+��� ��&���� � ���� ����� � �� � 1-���� !3, -������� ��� ���+ ���� �� ��� ��� �&� � � � ���� ��� �/

� �� �� ��� ������ �� ��� ������ � ��� � ������� �/O ���� ��� ������ ����� �� �� �� ������ 1 ����� �� ��,�!"''% ���&�� �� I���� � !"E5% -������ � !""E3,@��� �� N����� 1!"'43� N G��� �� ��, 1!"'63� ��;��� �� ��, 1!"'!3 �������� ������ ������ �� ���������� ������� ���� #E,"B)6,#2� #E,EB)5,52� �� #E,EB)5,E2� ����� � ����� �� �� ������ � �������� � ����� ����� �� � ��������, >�+����� ��� ������ ����� ���$ �������� ���+ � ��� ����/����/����� � ��������+�� 4!,5B5),)2 +��� ��� ������� ��� � ������� ���&��� � ������� �� ���� ���� � +��� +���� ��� 15$C5$ �� ��� +����� �����3 � ��� ������ ������&�� ��������,8� �� ����� � ���� ��� �� �� ���� ���� �������� ��������� ����� �� �� �� ������,-�� �������� �� �� �� ������ ����� � �� �� ������

+��� ��� ����� +���� ��� �� ���� ���� � �� ���+ �L��, 4, -�� ������ ����� +�� 4),!B5#,!2 +�� ����&� � �� +���� ��� +�� #$,$B5$,$2� +��� ��� ���������� � �� 5#,!2 �������� �� ��� � )52 ���,-�� �&�� ���� ���0�� �� �$ �������� � �������� � �

���� ���� � ������� 1���� ���� � � ����&���� +���+���� ��� 5$C5$ � � ��� +����� �����3 +�� �����&���1-���� 53, -�� �� �� ������ ��������� ���& ��� �������� � ������� ������� ��� ��� �������� �&�� ������+���� ��&������ )E,52 �� ��� ����� �&�� ���� �����,-�� ������ �� ����� �&�� ����� �� ����� ���������&�� ����� +��� )46,5 �� !#E,6 &�7� �� ��� &������������������, -�� 0��� �� � &�G�� ��&����� +��� ����/�������� �&�� ������ �� ��&�� ����� �������� ����������� �� ������� +���� ��&������ 4$,52 �� �������� �&�� �����, -�� ��� ����� ��&����� +��� ��/������ �&�� ������ �� ���� ������ �� ������ +������&������ #$,$2 �� ����� �&�� ������ +���� ��� � �� �/������� �&�� ����� ������� �� &������ +��� ������ �&� �,-� ���� ��� ��� ������ P ����� �� �$ �������� � ���/

����� � ��� ���� ���� � �������� ��� ��������� ������� �&�� ����� � �� �� ������ 1-��7;I3 +�� ���/� ����� �� ��&����� +��� ����� ���� ����� ���& ����������������M ��� ��� 1=+�� �� ��,� !""5% @��� ��N������ !"'43 1-���� E3, -�� �� �� ������ ����� ������� �&�� ����� ����� �� �$ �������� ���+ � �������� � ������� +��� !," �� #,$B#,) ��&��� �������������

-���� 4

I����&��� ��&������� �� �$ �������� ���+ � ��.���� � �������� 12� ��� +����� �����3�

� �������� 15$C5$3 ;� �� ������ L�� ;����������� ��� 9���� ��� � 1����7!$$ �3

�.�� &���

�N� D +���� ��� 4E,) 4,4 4#,$ 6,) ))$,)

�N� D +���� ��� 5),) 4,) )5,6 E,6 )#5,E

�N� D ���� ��� 4!,5 4,E 45,5 ',4 ))',)

�N� D ��� ��� 44,! 4,6 44,5 E,6 )4!,'

�� ������

�-L;� )4,4 ),! 54,# ',) )4),6

� �N� �� �N� ������ ���� ����� � �� �� ������������,����� ���& �-L; 1!"'#3� ��+� ��/����� � �������,

1$ 2�� �� �$ 3 4���������� ���.������ �! 5����6 �7+8+�� #"6

�� ���� �� ����� � �������� � ����� ����+ � �������1@��� �� N������ !"'43 �� ���� +���� � �������1=+�� �� ��,� !""53, �$ �������� ���+ � ���� ����� ������� ���� ���+�� � ������ ����� �� -��7;I,-��������� �� ��� ��� �&� � � � ���� ��� P ����� �������� �������� ���� �$ �������� ���+ � ���� ����� ������� +�� � ���� ������ ���� ���, -�� ���� �&������ ����� � �$ �������� ���+ � ���� ���� &������ ������ ��� �� ��� ������ �&� �� �� ������ ���&�� ����� � ���� � ������� 1@���&����/(����� �� ��,�

!"EE% L G����� �� ��,� !""5% ����� �� ��,� !"''% ���&���� I���� � !"E5% -������ � !""E3,-�� ����&� ������ �� �$ �������� ���+ � ����

���� ��� ������ � -���� 6, -���&� �� ����O��� +����� ��+ ������� �� ������ ������ �������� ���� +�� ����������, 8 �������� ��� ���� ����� +�� ��&����/������ ����, ��� ��&����� +��� ��� ��� �� P ����� ����� ��� ����&� ������ � �$ �������� � �������� ����� ���� +��� ��+�� ��� ����� ���� � ��� �������-����� �� L��� ;�&������� � =��� 1�-L;� !"'#3%��+����� ���� +��� ����������� ������ ��� ����� ��/������ �� ;��� �� ��, 1!"'!3,-�� &����� ��&����� ���� � -���� ' ���+��

���� ������� & �� �������� � +��� ��� &�� ������/ ��� �� ��� � �$ �������� ���+ � ���� ����, -������� �� ����� �� ��� &����� +�� P ��� ��&���� �� �������� �� ��� ������� -����� �� L��� ;�&������� �=��� 1�-L;� !"'#3 1-���� '3 �� �������� �� ;����� ��, 1!"'!3% ��+����� �� +�� ��.���� ���& ���� ��=+�� �� ��, 1!""53 +�� �������� ���� �������� � ��

-���� 6

K���&� ����� �� �$ �������� 1&�7!$$ � ��� &�����3

K���&�� -��� +���� �-L;�

-���&�� !,"! 4,!6

���O��� ),E# 4,!6

�������� ���� (�� (�

(���� "$,$ !!!,5

� ���� ���� � D +���� ���� 5$C5$ � � ��� +����� �����,����� ���& �-L; 1!"'#3,�(� B �� ��������,

-���� '

������ ����� �� �$ �������� 1&�7!$$ � ��� &�����3

������� -��� +���� �-L;�

(� #!," 64

I !E46,E !$E!

L� 6,! 6,'

;� (� ),"

@ #!6!,4 #6#$

�� !'!," !5E

; #,5 !,E

< !),6 !$,'

� !,E !,5

� ���� ���� � D +���� ���� 5$C5$ � � ��� +����� �����,����� ���& �-L; 1!"'#3,

-���� 5

�&�� ���� ��&������� �� �$ �������� 1���� ���� � D +���� ����

5$C5$� ��� +����� �����3

�&�� ����� &�7� ��� +�����

�������� ���� )!,4

-������� !6,!

����� !',!

N� ��&�� ���� 5),)

N����� !6,!

����� #',E

K����� #!,$

;������ ),'

��������� ),'

8���� ���� !E,#

:� ���� #5,6

-������ !),)

I���������� !5,#

:����� ##,"

>������� !#,4

������ #6,E

-��������� 4,'

I����� !5,#

-���� �������� �&�� ����� !#E,6

-���� �&�� ����� )46,5

� -�� �������� �&�� �����,

L��, 4, K������� �� �� �� ������ ����� � �$ �������� +��� �/

������� ��������� �� +���� ��� �� ���� ���� �,

-���� E

;�&������ �� �� �� ������ �� ����� �&�� ����� 12� ��� +�����

�����3�

���� ���& ;� �� ������ -�� -��7;I 123

-��� +���� 5),) )4,' E5,#

@���� #6,4 !5,) 5E,$

=+��� #6,4 !6,5 E4,4

�;IC �� �� ������% -��C ����� �&�� �����,� ���� ���� � D +���� ���� 5$C5$ � � ��� +����� �����,�@��� �� N����� 1!"'43,� =+�� �� ��, 1!""53,

#"' 1$ 2�� �� �$ 3 4���������� ���.������ �! 5����6 �7+8+��

&����� & +��� ��� &�� ������ ��� �� ��� � ����� �$��������� �����+�� �� ��� �� ���� &, -�� �������� ��&����� ����� � �$ �������� ���+ � ��.���� � �/������� &���� ��O��� ��� �������� � ��� &����� �������� ��� � ��������, � ������ ����� �� � ��������� &�����&���� �� ����� ��� ��� �$ �������� �� ����� ����&����� �� ��� � �������,

+$+$ ������� �� ��������������� �� ��*����� *� ��� ����������� �� ��� .�����

-�� ��&�������� �� � �������� �� ���� ����� � �/���&���� +��� +���� ��� ������ �� ����� � ���������� �$ �������� +��� �����&��� �� ��� ���+ � -����", ��� ��������� ��� �� ��� ��������� +���� � ����� ������� � ��� ��� +����� ���� �� � ������� ���� �� � �� ����� ���� +�� �� ���+ ��� 0�� P ����� �� ��� ����� �������, -�� ��� ��� ���+ ���� ��� �� �� ������ � ���� �������� �������� � ��� ��� ������� �� �$ ��������� ��������, -�� ��� & ����� �� ������ � ���� � �/������ �� �� ��� �� ��� �� �� ��� &�������� �������� �����+�� &����� & �� ��� � ������� ����&����� ���;A# �� >#A 1<������� �� � ��� !""#3,8 ������ �� ��� ����B����B���� ��&����� � ���

���� � �������� ���� ��� ���& ���� ������ ������������ ���� �� ���� ���� ������ ��������� +���� �������� �� ���� �� ���� ���� ��������� +�� ��&�����+��� ��� ��+ � ��������, -�� ���� ���� ����� � ����� ������� +�� ��� � �+��� ��� ����� �� ���� � ��+� ������� ��� ��� ����� �� ���� �����, >�+����� ����������� �&� � �� ���� ����� ��� � �������� ���$ �������� ������ ����0����� +��� ��� ���� ��������, -�� ���� ������ � ���� � �������� +��� #,$#�!,55� �� !,$E ��&�� �� & �� �� ����� � ��+ � ����������� ���� ����� �� �� �� ;� ������������, ;����������� +����� ���� �� ��� � ������� � ��� ��� � �������� ���$ �������� 1��� � 5$2 ��� &�����3� ���� ���� +����&��� �/ ������� �� �$ ��������� �� ���������� ���� ���� � ��������� +���� ���� +�� �������� ���$ �������� ������ ��� ��� ���� ���� �, -�� ���� ������� ���� � ���� ���� � +�� ��&��� �� ������� ���$ �������� &���� ���� ��� � � �� ����� ���� �� ��;/�� ���� ������ �� �� �������� �� ��� &������ ���$ ��������� � ���� ���� �, -��� &���� �� �� �� ���&�� ������ ��� ��� ������ ���������� ������ ��/����� ���& ���� ���� � 1������ ),!3, ���� ���������� �� �� ����� ����,

� �����������

8 � &&���� ���������� ���� ���� ���� +�� � �/����� ��� ��� �� � ����� � ������� &������� ��� ��� � �/������� �� �$ ��������, ����� ���� ���� ���� �� ������ ������ �������� �� ��������� �� ��� ���� �����+���� A���� ���+�� ���� ������� �� �&����� ��� ������/���� �� ���� ���� ��� ��� � ��������, -�� ����& &� ������� &���� �� ����� +�� ��� � 6$2� �� �������& & � ������� ������ ������ +�� ��� � E$ � ���!$$ &�, -�� �� �� ������ �� �$ �������� ���+ � �������� � ������� ��� ������ ���������� ������� �������&�� ���� ������ �� ������ �� �� ������ �������� ����� � �������� � ����� �������� � ��������, 8�������� ��� � �������� �� �$ �������� �������� ��������� ������ +���� �� ��������� ��� ����� �� ���� ������ ����� � ��� � ��������,-�� �> ��� �� ���� &���� �� ������ �� ��������

����&����� �� ��� ���� ���� &��� �� �������� �� �� ����������� �� � & �����& � �������, -�� ����� ���������� ��� ���� ���� �� � & �����& � ������� �� �������� ���� �� ��������� �� ��+ �� � ���� ���� ��� � ������� �� ��� ���& ����� ��������� � � ���� ���& � ����� &��� �� ����� ���+�����,

����������

�A�;� !""$, A���� ������� �� �������� !4�� ��, ���������� ��

A���� ��������� ;��&����� ��������� �;,

�������� ,� ����� �,� �������� K,�,� !"'6, ���������� ������ ��

������� ��� � �� ��������� �=����=� � �������� � ��.���� ����/

+�����, ����, ������ !"� #)"B#55,

;���� �,-,� :� � A,�,� ;��� @,?,� !"'!, -�� � �������� ��

�������� ��� � �� ��������� �=����=�, 9 ����� =, ����,

���������, ���������, !#� 5'BE#,

;�� �� I,;,/@,� !""6, ;��&���� ���� ���� �� ��&� ������ ��+

������ & �����& &������ ���� ��� � � �&����� � �� �� ���& ���

&��� +����, L��� ;��&, E$ 1!3� E!BE5,

;����� 9,K,� ����� �,� !"6', ( ������� ��� �, 8C ;���� �,-,� >�����

�,�, 19��,3� -�� ������� �� ; �������� �� 9����� � �����&�,

�����&�� I����� (�+ ?���� ��, !)6B!E',

������ 9,� 9����� �,� !""#, �&�� ���� �� ����� ������ ����� ��

��� ������ & �����& ,��.������ ��*���� 1/����3, =, ���, L���

�����, E$� )))B))6,

���&��� =,� I���� � (,� !"E5, (������ ��&�� �� �� &��� ����������

�&�� ����� � � �������� & �����&� �� � ��&�����, � �����&

���, E� !")B#$#,

L G������ �,� @�� ��� �,� ������� ?,� � ������� -,� !""5, (������ ��

������ �������� ������� ��� ��&� ��&&� ������ & �����&�,

=, L��� ���, E$� !$45B!$46,

-���� "

;� �� ������ �� �������� ����� � � �������� ������ ��� ����� 1�3 �� ����� ������� 1�3 12� ��� +����� �����3

� ������� 15$C5$� ��� +����� �����3 ;� �� ������ ;��� ���� :��� :���7���� ����

� � � � � � � �

���� ���� � D +���� ��� !",# ##,' ",! !",# E,# !#,5 $,E' $,E5

���� ���� � D +���� ��� !",6 ##,) !$,# #$,4 6,! !!,$ $,6$ $,54

���� ���� ; D +���� ��� #$,' #),E !$,6 #$," ",' !$,4 $,"# $,5$

1$ 2�� �� �$ 3 4���������� ���.������ �! 5����6 �7+8+�� #""

N������ >,�,� ������ �,� @���� I,� !"'5, 9���� �� �������

�����& ��� ��� ���� ���� �� ���������, � �����& (�+������� ���

��� -������ 5� !EB#$,

N������ >,@,� K� ������ I,=,� !"6$, L����� 0��� �������, �����,

>���, )6"� !B!",

N G���� �,�,� �������� ,� ����� �,� K�� ����� I,� !"'6, ����� �����

���&������ �� ���.��) )��= ����� �� ��� ���� ���� ��

��������� � ��������, =, L��&��, -�����, E5� !$!B!$5,

>,-,�,� !"'$, >����� -����� ������, (��� ?�� ��� ���� -����,

=+��� 9,�,� ������ �,�,� ����� >,�,� !""5, �����/�����

���&������ �� ����� �� ��� +����� ��� ���� ���� �� ���������

� ��������, ����, ������&, ���������, 5$� 6!B6',

@���� I,� N������ >,�,� !"'4, ��������� & �����& B � �� ��� ��

���� ������, � �����& (�+������� ��� ��� -������ 4 1)3� "B!5,

@���&����/(������ 9,� �������� =,>,� ����&����� ;,�,� !"EE,

;���� � �&�� ���� �� ��� � ��� � �������� & �����&�

������ � ������ �� �� �O ���� ����� � ����&������ �� ���

��&���� � ��� ��� ���+�� �����, =, �����, L��� ;��&, !4� E))B

E)E,

@ &���� �,� �������� ;,�,� K�����+���� �,� !""E, � ��� ���� ����

Q��&���M ���& ����� � ������� ���&������ ��� & �����& � �����/

���, ������, ����, ����, #5 1!3� !!"B!##,

:����� �,� !"'', ;��&���� �� �������� ����&����� � ��������

������ +����� ��� & �����& ���� ����, ����, ������ #E� )4!B

)4',

�,L,�,� !"'#, ������� �� L��� �������, (���� ���� �� @����

N������ -����,

����� �,� K�� ����� I,� ����&�� �,� !"'6, ; �������� �� ���������

�=����=� � ��.���� +�����, ����, ������ ##� #4!B#5$,

I��������� �,� ����� �,� !""6, �� ���� � � ��������� ����������

������ �� ���&���� ������� �� ��������� �=����=�

1L ,3 �8(N9 � ��.���� ���/+�����, ���� ���������, !6 1#3�

!$6B!##,

������ �,� �� ����� �,� I�������� ;,� ������ ;,� ������� :,� !"'',

8O ��� �� ������ �� ��� � ���+�� �� ,��������� �������� ��

� ��� & ����� �� ������ �� �������� � � &����� &, -���,

��, �����, ���, "$ 1#3� !'!B!'5,

���� 8,�,� !"'5, ���������� ������0����� �� ���� +��� �� �����/

����� ���&������ +��� ��� +����/��� � � � �������� ���)�������,

����, 9����, ���������, 5$ 1!3� !))B!)",

���������� -,� @���&���� ?,� � ������ �,� A��& ��� <,� !"'$, �� ����

� ��+� ��B����� �� &���� &���� ��� 9������� 1/�))����

��������3 � �������� � ������ � �� �� �����&, � ��, (���� K��,

J A��&, ;���� 9��, ���, =��� !� 56BE),

�-L;� !"'#, ������� -����� �� L��� ;�&������� � =���� 4��

������� ��, ��� ���� ;� ���� ������ �� -�������� ������

=���,

-��������� -,� @��� �,� !"'4, *��������� �� �� ������ +����� ��� ���

� �������� �� ��������� ��������, ��&, L��, ���, @��� *��, !6�

!!)B!#$,

-������ � @,@,� !""E, 9.��� �� ����� ��� � ������� � ��������

��� � �� ��������� �������� ��$ ����)*����,, (��� � 4$ 1#3� �,6"B

'),

?�&������� 8,� ����� -,� 8��� @,� ?���� �,� !"'), *��������� �� =��M�/

����� � ��� ��� � ������ ��+ ����� �� ���� � ���� ���

� �������� �� ������ & �����& 1��������� �������� 1=��P, �� L�3,

R ��,3, (���� ���� �� @���� N�������� )$ 1!#3� E")BE"6,

<�������� L,� �� ���� >,� !"'!, 8���������� �� �������� ����&�����

�&������ ��� ��� ����� ����� ���&������ �� ����+ �� +���� ���

� ��, 9 ����� =, ����, ���������, ���������, !!� !')B!'',

<�������� L,� �� ���� >,� !"'#, ����� ����� ���&������ �� �������/

� ���� ������� ���� ����� �� +��� ���������.�) ������������)

(��, �� 1��.�)���� �>����� 1@����,3, 9 ����� =, ����, �����/

����, ���������, !E� 45B5!,

<�������� L,� � ��� >,;,� !""#, -�� ������ & �����&, 8&�������

�� ���������, � �����& ��, ! 1!3� #5B)#,

)$$ 1$ 2�� �� �$ 3 4���������� ���.������ �! 5����6 �7+8+��