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Biología Forense
Laboratorio de Genética Forense Departamento de Toxicología y Legislación Sanitaria. Facultad de Medicina. Universidad Complutense de Madrid (UCM)
Dra. Ana María López Parra
Biología Forense Ventajas del análisis de ADN
1. Aumenta la probabilidad de discriminación:
El resultado de un análisis genético permite
EXCLUSIÓN INCLUSIÓN NO EXCLUSIÓN
¿Con que poder de discriminación?
Biología Forense Kits comerciales
*Población caucasoide
Nombre Marca Fecha STR Loci *Poder de Discriminación
TH01, TPOX, CSF1PO monoplexes
Promega Feb 1993 TH01, TPOX, CSF1PO 1:410 AmpFlSTR® Blue Applied
Biosystems Oct 1996 D3S1358, VWA, FGA 1:5000
AmpFlSTR® Green I Applied Biosystems
Jan 1997 Amelogenin, TH01, TPOX, CSF1PO 1:410 CTTv Promega Jan 1997 CSF1PO, TPOX, TH01, VWA (vWF) 1:6600 FFFL Promega Jan 1997 F13A1, FES/FPS, F13B, LPL 1:1500 GammaSTR Promega Jan 1997 D16S539, D13S317, D7S820, D5S818 1:1.8x104
PowerPlex™ (version 1.1 and 1.2 later)
Promega Jan 1997 CSF1PO, TPOX, TH01, VWA, D16S539, D13S317, D7S820, D5S818 1:1.2x108
AmpFlSTR® Profiler™ Applied Biosystems
May 1997 D3S1358, VWA, FGA, Amelogenin, TH01, TPOX, CSF1PO, D5S818, D13S317, D7S820 1:3.6x109
AmpFlSTR® Profiler Plus™ Applied Biosystems
Dec 1997 D3S1358, VWA, FGA, Amelogenin, D8S1179, D21S11, D18S51, D5S818, D13S317, D7S820 1:9.6x1010
AmpFlSTR® COfiler™ Applied Biosystems
May 1998 D3S1358, D16S539, Amelogenin, TH01, TPOX, CSF1PO, D7S820 1:8.4x105
AmpFlSTR® SGM Plus™ Applied Biosystems
Feb 1999 D3S1358, VWA, D16S539, D2S1338, Amelogenin, D8S1179, D21S11, D18S51, D19S433, TH01, FGA 1:3.3x1012
PowerPlex™ 2.1 Promega Jun 1999 D3S1358, TH01, D21S11, D18S51, VWA, D8S1179, TPOX, FGA, Penta E 1:8.5x1010
PowerPlex™ 16 Promega May 2000 CSF1PO, FGA, TPOX, TH01, VWA, D3S1358, D5S818, D7S820, D8S1179, D13S317, D16S539, D18S51, D21S11, Penta D, Penta E, amelogenin
1:1.8x1017
AmpFlSTR® Identifiler™ Applied Biosystems
May 2001 CSF1PO, FGA, TPOX, TH01, VWA, D3S1358, D5S818, D7S820, D8S1179, D13S317, D16S539, D18S51, D21S11, D19S433, D2S1338, amelogenin
1:2.1x1017
1:410
1:2.1x1017
Biología Forense
2. Estudio de todo tipo de indicios biológicos e indicios mínimos
Ventajas del análisis de ADN
Biología Forense
3. Análisis de muestras antiguas y degradas, y mezclas
Ventajas del análisis de ADN
Biología Forense
4. Estudio de indicios genéticos atípicos
Ventajas del análisis de ADN
Biología Forense
5. Creación de bases de datos
Bases públicas con interés criminal y/o investigación científica.
Ventajas del análisis de ADN
EDNAP mtDNA
Population Database
Biología Forense
Muestra obtenida en prueba paternidad /
escena del crimen
Extracción de ADN
Cuantificación de ADN
Análisis de marcadores genéticos
Obtención del perfil genético de la muestra
Comparación del perfil de la muestra con el resultado de
otras muestras Si coincide, comparación del perfil
con base de datos poblacional
Generación de Informe del caso con probabilidad de coincidencia al azar
Procesamiento de muestras de ADN
Biología Forense
Indicios Biológicos
“ Toda sustancia líquida o sólida que provenga directamente del cuerpo humano o que haya estado en contacto con el mismo, y en cuya superficie o interior pueda haber restos de
células”
Biología Forense Tipos de indicios
Sangre Semen Pelo Saliva Orina Fluido vaginal Diente Restos óseos Células y Tejidos Liquido amniótico
Biología Forense
Tipos de evidencias
Preservativos Chicles, colillas Sobres y sellos Armas blancas Llaves, monedas,
joyas Piedras, ramas, hojas Billetes, papeles Ropa
Biología Forense
Tipos de indicios biológicos:
Indicios dubitados:
-Recogidas en el lugar de los hechos -Recogidas en el cuerpo de la víctima
Indicios indubitados o de referencia:
-Personas vivas -Personas transfundidas -Cadáveres en buen estado de conservación -Cadáveres carbonizados -Cadáveres en avanzado estado de putrefacción -Cadáveres embalsamados
Biología Forense
“Normas para la preparación y remisión de muestras objeto de análisis por el Instituto
Nacional de Toxicología”
BOE nº 308 de 23/12/96
B.O.E. DEL 19 DE MAYO DE 2010 8030 ORDEN JUS/1291/2010, de 13 de mayo, por la que se aprueban
las normas para la preparación y remisión de muestras objeto de análisis por el Instituto Nacional de Toxicología y Ciencias Forenses.
Biología Forense
Grupo Español y Portugués de la Sociedad Internacional de
Genética Forense (GEP-ISFG)
• Universidad de Valencia. • Jefatura de Investigación y
Criminalística, Dirección General de la Guardia Civil, Madrid.
• Universidad de Granada. • Instituto Nacional de Toxicología y
Ciencias Forenses, Sevilla • Comisaría General de Policía
Científica, Madrid. • Instituto Nacional de Toxicología y
Ciencias Forenses, Madrid.
Biología Forense
En la hoja de custodia debe aparecer:
- Nombre o identificación y firma de la/s persona/s responsable/s de la entrega de las muestras. - Nombre o identificación y firma de la/s persona/s responsable/s de la recogida de las muestras. -Fecha y hora de la recogida. -Condiciones de almacenaje de las muestras hasta su envío al laboratorio.
Cadena de custodia Documento escrito donde queda reflejada la gestión de
la muestra desde su toma hasta su destrucción o devolución.
Biología Forense
ADN CELULAR
ADN MITOCONDRIAL ADN NUCLEAR
COPIA ÚNICA (70%)
Codificante 10% No codificante
60%
REPETITIVO (30%)
No codificante 20%
Codificante 10%
DNA repetido disperso
DNA repetido agrupado
(DNA satélite)
Minisatélites (20-70bp)
Microsatélites (2-4bp)
Exones
Reguladores
Intrones DNA intergénico
Repeticiones en tándem Repeticiones dispersas
Organización del genoma
Biología Forense Tipos de variación genética
7 repeticiones
8 repeticiones
CTA
Short Tandem Repeats
Biología Forense
• Variaciones de secuencia de ADN en una sola base • Para que la variación sea considerada un SNP debe
darse en, al menos, un 1% de la población
Tipos de variación genética
SNPs (Single Nucleotide Polymorphism)
Biología Forense
Tipos de polimorfismos de ADN
• Polimorfismos nucleares autosómicos • Cromosoma Y • Cromosoma X • ADN mitocondrial
Biología Forense ADN NUCLEAR
Marcadores autosómicos - Copia doble
Herencia paterna y materna
r Poco abundante en muestras críticas / arqueológicas / antropológicas
* Relaciones familiares (paternidad y maternidad)
* Casos forenses
* Identificación de desaparecidos
CSF1PO
D5S818
D21S11
TH01
TPOX
D13S317
D7S820
D16S539 D18S51
D8S1179 D3S1358 FGA VWA
AMEL AMEL
Biología Forense Mini STRs
Biología Forense
10-15 18-15
10-15 10-18 15-18 10-18
Marcadores autosómicos
Biología Forense
Herencia del cromosoma Y
Biología Forense
- Copia única
Regiones no recombinantes
Herencia exclusivamente paterna
Secuencia total ADN ~60 Mb
r Poco abundante en muestras críticas
- Gran interés en investigaciones forenses
98% crímenes violentos cometidos por hombres
CROMOSOMA Y
Biología Forense Herencia del cromosoma X
Biología Forense
Herencia del ADN mitocondrial
Biología Forense ADN MITOCONDRIAL
- Abundancia
Por célula: 1000-10000 copias mtADN
vs 2 copias nADN
- Copia única
no recombina
herencia exclusivamente materna
- Útil para la reconstrucción del pasado reciente de las poblaciones humanas µ región control=2’06 10-6 - 4’14 10-6
r Resolución más baja que marcadores nucleares
Biología Forense
ACCGCTATGT ATTTCGTACA TTACTGCCAG CCACCATGAA TATTGTACGG TACCATAAAT 16090 16100 16110 16120 16130 16140
rCRS
ACCGCTATGT ATCTCGTACA TTACTGCCAG CCACCATGAA TATTGTACAG TACCATAAAT Q
K ACCGCTATGT ATCTCGTACA TTACTGCCAG CCACCATGAA TATTGTACAG TACCATAAAT
Muestra Q 16093C 16129A
Muestra K 16093C 16129A
Adapted from Figure 10.8, J.M. Butler (2005) Forensic DNA Typing, 2nd Edition © 2005 Elsevier Academic Press
Diferencias respecto a la Secuencia de referencia
16093 16129
Biología Forense
Haplotipo: Conjunto de alelos de diferentes marcadores que definen a un individuo (Huella genética o DNA fingerprint) Ejemplo: Marcadores nucleares D3S1358 D8S1179 D5S818 HUMVWA D21S11 D13S317
10-12 15-21 7-9 8-8 10-15 8-12
Ejemplo: Cromosoma Y DYS388 DYS389I DYS389II DYS390
12 10 26 14
Ejemplo: Región Hipervariable I de mtDNA
16069A, 16126C, 16261T
Identificación personal por ADN
Biología Forense Bases de datos de interés poblacional o forense - STRs autosómicos:
- Y- STRs:
- ADN mitocondrial:
EDNAP mtDNA
Population Database
Otros…
Biología Forense Low-Level DNA (LL-DNA)
• <100 pg ADN genómico (~15-17 copias diploides de ADN nuclear)
• Normalmente se requiere 150-250 pg
Allele imbalance Allele dropout
Biología Forense
AIM (Ancestry Informative Markers)
Biología Forense
Physical trait Markers
Biología Forense Estudio de indicios genéticos atípicos